Sunteți pe pagina 1din 18

METODE NECONVENIONALE DE

CREARE A VARIABILITII LA
PLANTELE CULTIVATE I LA VIA DE
VIE
Variabilitate somaclonal. Cauze i frecvena de
apariie
Cultura de esuturi constituie o metod rapid i sigur de
nmulire asexuat a plantelor.
n prezent, multe specii ornamentale, lemnoase i plante de
cultur sunt micropropagate in vitro i comercializate.
Micropropagarea prin culturi de esuturi a revitalizat anumite
sectoare ale industriei plantelor ornamentale i a facilitat
introducerea rapid de noi cultivare deoarece multe dintre
acestea prezint fenomenul de variaie somaclonal.
Regenerarea plantelor din celule cultivate in vitro este un
proces asexuat, care implic numai diviziuni celulare
mitotice. Procesul de regenerare a neoplantulelor poate fi
considerat ca fiind sinonim cu clonarea intrucat se poate
presupune c toate plantele regenerate din celulele unei
plante mam sunt clone.
Variabilitate somaclonal.
Cauze i frecvena de apariie
Via de vie este una dintre
Cercetatorii, SCOWCROFT (1985) si
principalele culturi horticole
SKIRVIN (1994), studiind variabilitatea rspndite n toat lumea.
somaclonal, afirm c uniformitatea Multe cultivare aparinnd
clonal este recunoscut mai degrab ca unui numr mic de specii
o excepie, dect ca o regul. ale genului Vitis au fost
Variabilitatea somaclonal este comercializate n ultimele
neuniformitatea care apare ntre plantele secole, dar industria
necesit noi cultivare cu
regenerate prin cultura de esuturi.
grad mrit de rezisten i
Variaia poate fi preexistent sau poate fi productivitate.
indus. Metodele tradiionale de
Asupra populaia n care variabilitatea ameliorare sunt limitate din
cauza duratei lungi a unei
natural este asociat cu cultura de
generaii i a naturii extrem
esuturi se poate aciona cu o anumit de heterozigote a acestei
presiune de selecie pentru a izola clone. culturi.
Variabilitate somaclonal.
Cauze i frecvena de apariie

Valoarea variabilitii care Dezvoltarea metodelor


poate fi ateptat variaz cu: biotehnologice, la plante, a dus la
clona, utilizarea tehnicilor in vitro n
vrsta culturii, scopul ameliorrii culturilor.
utilizarea agenilor mutageni, Variabilitatea somaclonal
aplicarea unei anumite presiuni (LARKIN i SCOWCROFT, 1988)
de selecie n culturile de este considerat o surs de
suspensii celulare,
obinere de noi genotipuri de
cultura de calus
plante n ameliorare
sau condiiile de stres, ca de
Perfecionarea tehnicilor, la nivel
pild concentraia de sare,
erbicide, microorganisme sau alte de culturi de esuturi, au deschis
bioproduse i metabolii specifici noi posibiliti pentru aplicaii n
ai acestora(SKIRVIN, 1994). viticultur .
Tipuri de variabilitate
somaclonal
Variabilitatea somaclonal
Cnd nu se cunoate natura
poate fi rezultatul
variaiei, dac este genetic
variabilitii genetice sau epigenetic, se accept
preexistente n plante, folosirea termenului de
ct i ca o consecin a variaie.
variaiei indus n timpul Termenii variaie genetic
culturilor de esuturi. i mutantse utilizeaz
Exist dou tipuri de pentru desemnarea variaiei
variabilitate somaclonal: care se transmite sexuat
variabilitatea ereditar, conform legilor ereditii
genetic(mutaional) sau se menine timp de mai
i variabilitatea multe generaii obinute
epigenetic (de expresie). prin multiplicare vegetativ.
variabilitatea epigenetic (de expresie).

Plantele cu variaii epigenetice revin n timp, de cele mai


multe ori, la fenotipul parental.
Vigoarea de scurt durat (temporar) a fost exploatat
n culturile de esuturi pentru producerea de plante
tinere viguroase care s fie transplantate uor, s
creasc rapid i s devin stabile (SWARTZ i colab.,
1981).
Fenomenul de piticire este probabil epigenetic i poate fi
datorat regulatorilor de cretere din mediul de cultur.
Multe plante pitice revin ns la creterea normal dup
unul sau doi ani de vegetaie normal n ser sau cmp.
variabilitatea epigenetic
(de expresie) obtinuta prin Astfel, plantele regenerate din
antere prin embriogenez
culturile de antere somatic, din hibridul interspecific
Gloryvine (Vitis vinifera x Vitis
La rupestris), au prezentat anomalii
via de vie, variabilitatea
de dezvoltare (piticire, albinism),
caracterelor i instabilitatea variaii ale formei frunzei, ale
genetic a plantelor regenerate din sinusului peiolar i ale numrului
antere a fost adesea semnalat i la de lobi foliari, caractere care s-au
plantele pe rdcini proprii dovedit a fi tranzitorii..
transplantate n cmp. De asemenea, unele plantele
obinute din embrioni somatici au
prezentat tipuri diferite de floare,
fiind hermafrodite, n timp ce
Gloryvine este un genotip cu flori
funcional mascule (POPESCU i
TEODORESCU, 2004).
Factorii care influeneaz spectrul i amplitudinea variabilitii
somaclonale

Sursa explantului: La speciile de Vitis, culturi embriogene i regenerri de


plante s-au obinut din numeroase tipuri de explante, cum ar fi:
antere,
fragmente foliare,
ovule,
embrioni zigotici
explante de crcel, etc.
Sunt ns i genotipuri de vi de vie la care s-a reuit regenerarea prin
embriogenez somatic numai prin utilizarea unui anumit tip de explant
(POPESCU i TEODORESCU, 2004).
Ex: Embriogeneza somatic a fost observat la calusul iniiat din explante de
crcel la Vitis vinifera L. cultivarele Thompson, Somaka i Tas-e-Gomesh, pe
un mediu Emershad i Ramming suplimentat cu 1 mM 6 benzilaminopurin.
n a treia i a patra subcultur pe acelai mediu s-a obinut un procent sczut
de lstari. Lstarii aprui au dat natere ulterior la plntue ntregi pe un
mediu lichid de nrdcinare care coninea 1 mM acid 3 indolil acetic. Este
dezbtut posibila utilizare a crceilor ca noi explante pentru embriogeneza
somatic la via de vie. (SALUNKHE, RAO, 1999).
Factorii care influeneaz spectrul i amplitudinea variabilitii
somaclonale

Sursa explantului
La via de vie, cercettorii chinezi ZOU i LI (1981), citai de POPESCU i
TEODORESCU (2004), au fost singurii care au raportat regenerarea de
plante haploide (n = 19) din cultura de antere a soiul Triumph. Dup doi ani
de la plantarea n cmp, autorii au semnalat faptul c plantele au prezentat
un aspect morfoanatomic normal, specific soiului de origine, iar numrul de
cromozomi determinat a fost 2n = 38.
ntr-un alt studiu s-a artat c anterele de Vitis latifolia L. (via slbatic)
cultivate pe un mediu Nitsch i Nitsch suplimentat cu 20 mM 2,4-D i 9 mM
BAP au produs calus dup 4-6 sptmni. Plantele regenerate au avut
grade diferite de ploidie fa de 2n = 38 i n = 19 (SALUNKHE, 1999).
Cultura in vitro de antere i polen ofer posibilitatea manipulrii gradului
de ploidie la plantele regenerate prin androgenez sau embriogenez.
Factorii care influeneaz spectrul i amplitudinea variabilitii
somaclonale
Genotipul
Influeneaz att capacitatea de regenerare in vitro ct i amplitudinea variaiei somaclonale.
La via de vie, rezultatele obinute n experimentele efectuate cu genotipuri aparinnd diferitelor specii
de Vitis, experimente care au vizat regenerarea de plante din cultura in vitro de antere, indic faptul c
genotipul joac un rol determinant n exprimarea rspunsului embriogenic.
RAJASEKARAN i MULLINS (1979), citai de POPESCU i TEODORESCU, 2004, arat c exist
diferene mari ntre specii, soiuri i hibrizi ai genului Vitis, n ceea ce privete capacitatea de calusare
i de difereniere a embrionilor somatici din anterele cultivate in vitro.
Speciile Vitis rupestris i Vitis longii sunt creditate cu cea mai ridicat capacitate embriogen,
fiind urmate de Vitis labrusca i Vitis champinii. Diferene mari au fost semnalate i ntre
genotipurile aparinnd aceleai specii. Astfel, cercetrile au demonstrat c inducerea formrii de
calus din antere a fost posibil numai la trei din 26 de genotipuri testate.
De asemenea, se apreciaz c la Vitis vinifera, specia cea mai important din genul Vitis, potenialul
de embriogenez, respectiv cel de regenerare de plante din antere este foarte sczut i limitat la un
numr mic de genotipuri, incluznd soiurile Gamay, Cabernet Sauvignon, Pinot Noir, Chardonnay,
Mission, Valerien, Coarn neagr selecionat, Siegfried Rebe FS4 (POPESCU i
TEODORESCU, 2004).
Factorii care influeneaz spectrul i amplitudinea variabilitii
somaclonale

Durata timpului de cultur in vitro


La via de vie, prin cercetrile ntreprinse de
PAMFIL (1996) la 10 clone de Cabernet Sauvignon
de provenien diferit cultivate n cmp, n condiii
identice, timp de 3 ani i in vitro de peste 2 ani, sa
dus la evidenierea unui polimorfism evident la
clona CS21 Australia, micropropagat in vitro.
Evidenierea polimorfismului sugereaz
existena unei variabiliti somaclonale care se
datoreaz, cel mai probabil, micropropagrii prea
ndelungate, respectiv 14 subculturi n decursul a
peste doi ani (PAMFIL, 1996).
Plante de vi de vie obinute din segmente nodale pe
mediul de cultur MS 2,5 mg/l BAP, la opt sptmni de
la inoculare
Neoplantule de vi de vie formate pe mediul
MS + 0,5 mg/l TDZ,
dup opt sptmni de cultur in vitro
Factorii care influeneaz spectrul i amplitudinea variabilitii
somaclonale

Condiiile de cultur
Acestea conduc la aberaii genomice n celulele plantelor i animalelor cultivate in
vitro, i apar, cel mai adesea, cnd acestea sunt scoase de sub influena controlului
exercitat de organismul ntreg i sunt plasate n condiii nenaturale.
Cnd o plant este excizat i rnit n vederea transferului n cultura in vitro,
sistemele de control care regleaz ntreaga plant sunt ntrerupte.
De exemplu, n planta ntreaga calusul este rspunsul la rnire i rareori
dobndete un nivel de organizare celular suficient pentru a produce lstari sau
rdcini.
n culturile de esuturi, calusul este frecvent o faz comun prin care trec prile
excizate din plant, nainte de organizarea meristematic care poate produce
rdcini, lstari sau ambele. Regulatorii de cretere sau ali stimuli in vitro mediaz
aceste evenimente, de aceea nu este surprinztoare apariia de lstari adventivi cu
fenotipuri anormale.
Riesling italian

Feteasc regal

Cabernet Sauvignon

Neoplantule obinute din segmente


nodale la soiurile de vi de vie
Cabernet Sauvignon, Riesling italian
i Feteasc regal micropropagate
prin lstrire axilar
Factorii care influeneaz spectrul i amplitudinea variabilitii
somaclonale
Mutageneza in vitro
Includerea, n mediul de cultur, a agenilor mutageni poate induce, n celulele plantelor
superioare cultivate in vitro un spectru larg de mutaii biochimice i metabolice.
Astfel se pot obine mutante rezistente la diferite substane chimice sau antimetabolii ca i
la diverse condiii nefavorabile de mediu.
n vederea inducerii de mutaii in vitro la via de vie s-au utilizat radiaiile gamma 5-100 Gy.
n urma iradierii, s-a constatat o cretere a frecvenei de apariie a plantelor tetraploide din
calus primar (7%) i din cel embriogenic (7,6%), depistndu-se totodat i plante
aneuploide (KUKSOVA, 1997).
Inducerea embriogenezei somatice, combinat cu iradierea cu raze gamma, duce la apariia
variabilitii somaclonale la via de vie i n mod deosebit la apariia tetraploizilor. Dac
aceast metod este acceptat de amelioratori, ea va constitui o alternativ a procesului
clasic de producere a tetraploizilor de vi de vie (KUKSOVA, 1997).
Factorii care influeneaz spectrul i amplitudinea variabilitii
somaclonale

Transformarea genetic
La via de vie, cu toate c s-au nregistrat progrese privind
aplicarea metodelor de inginerie genetic prin transfer de gene
exist unele cultivare recalcitrante la transformarea genetic
(MULLINS i colab., 1990). Unele cercetri arat faptul c la Vitis
vinifera transformarea genetic mediat de unele specii din genul
Agrobacterium cum ar fi Agrobacterium tumefaciens,
Agrobacterium rhizogenes sau Agrobacterium vitis se realizeaz
cu dificultate. Dintre factorii implicai n transformarea genetic se
pot aminti: sua bacterian, mediul de cultur utilizat pentru
meninerea calusului embriogen i genotipul cultivarului de vi de
vie (TORREGROSA i colab., 2002).
La via de vie, un rol important n reuita transformrii genetice l
are identificarea unor protocoale privind selecia potenialelor
plante transformate genetic prin intermediul bacteriilor din genul
Agrobacterium (PEROS i colab., 1998, BORNHOFF i colab., 2000).
Factorii care influeneaz spectrul i amplitudinea variabilitii
somaclonale

Transformarea genetic
Plantele transgenice au fost regenerate in vitro prin organogenez i
embriogenez.
Studii mai recente arat faptul c la unele specii de vi de vie s-au
nregistrat progrese privind transformarea genetic a culturilor in
vitro de embrioni somatici folosind co-cultivarea cu Agrobacterium
sp.
Astfel, plante transgenice au fost obinute la:
Vitis rupestris, soiul St. George,
la Vitis rotundifolia, soiurile Alachua i Carlos,
la Vitis vinifera, soiurile Cabernet Franc, Chardonnay, Merlot, Pinot
Noir, Sauvignon Blanc etc.,
precum i la unii hibrizi (DHEKNEY i colab., 2007).

S-ar putea să vă placă și