VALIDACIN DEL PROCESO DE ESTERILIZACIN A

VAPOR DE SOLUCIONES PARENTERALES DE GRAN

VOLUMEN
Elena Trifonova Arkadievna, Martha Zoe Lemus Rodrguez
Empresa Laboratorio Farmacutico "Oriente"

Las condiciones especficas de aplicacin de un producto medicamentoso estril exigen el

aseguramiento de su calidad al mximo. Por ello la validacin de procesos para productos estriles
ha recibido ms atencin y consumido ms esfuerzos que cualquier otro aspecto de la produccin
farmacutica durante los pasados 20 aos, y este nfasis continua hoy.
En la tecnologa de soluciones parenterales el proceso de esterilizacin es la etapa de mayor
importancia, y debido a su complejidad la validacin prospectiva de este proceso se convierte en
obligacin de fabricante farmacutico.
El presente trabajo expone los resultados del estudio de validacin del proceso de esterilizacin
a vapor, empleado en la fabricacin de soluciones parenterales de gran volumen que se realiza en
la Empresa Laboratorio Farmacutico "Oriente".
Palabras claves: soluciones parenterales, esterilizacin.
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The specific conditions for the institution of a sterile medication require utmost quality security.
That is why, over the last 2 decades up to the present day, the validation of the processes for sterile
products has got much more attention and has taken more efforts than any other aspect of the
pharmaceutic industry.
Within the parenteral solutions technology the sterilization process is the stage of greatest
importance. In addition, the prospective validation of this process becomes an obligation for the
pharmaceutic manufacturer due to its complexity.
In the present report, the outcomes of the validation study of the steam-sterilization process used
in the manufacture of the parenteral solutions of great volume made by the "Oriente" Pharmaceutic
Laboratory Enterprise are shown.
Key words: parenteral solutions, sterilization.

Introduccin El proceso de esterilizacin depende de la

En la tecnologa de soluciones parenterales la
etapa de esterilizacin es determinante, ya que
realizada incorrectamente no slo inutilizara el
esfuerzo de todas las etapas anteriores del proce-
so, sino ocasionara graves perjuicios a la salud de
los consumidores. Con fines de prevenir estos
daos el fabricante farmacutico de productos
sujetos a esterilizacin final debe prestar atencin
especial a esta etapa del proceso productivo.
Esterilizacin es el proceso destinado a produ-
cir el estado de esterilidad. El concepto tradicio-
nal de estado de esterilidad es la absoluta destruc-
cin o eliminacin de los microorganismos viables.
Con el mtodo de esterilizacin final de productos
parenterales, en particular, empleando vapor a
presin, la probabilidad de no ms de una unidad
no estril por milln /1,2/ realmente se logra.
eficacia del equipo y de las limitaciones que son
propias de cada producto y es necesario un com-
promiso entre estos factores para llevar a cabo
esterilizacin requerida, es decir, el proceso de
esterilizacin es caracterstico de cada autoclave,
envase y producto. El criterio de aceptacin para
la esterilidad en las farmacopeas reconocidas
/1,2/ est basado en un ensayo destructivo sobre
una muestra seleccionada, demostrndose de este
modo, que todas las unidades que forman parte
del lote son estriles a base de probabilidad esta-
dstica. Esta probabilidad depende del grado de
exposicin del material, el tipo, la cantidad y la
resistencia de los microorganismos presentes y el
nivel alcanzado de destruccin en el proceso de
esterilizacin. La comprensin de los procesos de
letalidad y los extensos registros histricos reali-
zados permitieron establecer los requisitos que ha

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de cumplir el fabricante farmacutico durante el
proceso de esterilizacin. Las autoridades
regulatorias /3/ prescriben las especificaciones
para el equipamiento y el proceso. La complejidad
del proceso de esterilizacin hace evidente la
necesidad de un chequeo minucioso de todos los
componentes involucrados en ste. De aqu pue-
de deducirse que la introduccin por la Adminis-
tracin de Drogas y Alimentos de Estados Unidos
(FDA) desde hace 20 aos del concepto de vali-
dacin de procesos en la tecnologa de parenterales
tuvo sus antecedentes en el proceso de esteriliza-
cin.
El objetivo de la validacin de los procesos de
esterilizacin es garantizar la aplicacin del efec-
to letal preestablecido a todas las unidades some-
tidas a un determinado ciclo, asegurando que
dicho efecto se aplique de modo constante a todas
y cada una de las cargas de producto que se
procesen. Esto permite, marcadamente, mejorar
la calidad y reducir los defectos. Por tanto, el
cuestionamiento de la efectividad del costo de
validacin no procede para el caso de esteriliza-
cin, ya que es evidente lo valioso de su contribu-
cin a los usuarios de productos farmacuticos.
El programa de validacin en sus principios
generales es comn para cualquier proceso o
equipo, y est dirigido a la recopilacin de los
documentos que confirman la correspondencia
entre el desenvolvimiento previsto y real de stos.
Las consecuencias de este programa son la con-
feccin del monitoreo peridico para el proceso
productivo y los planes de mantenimiento para el
equipo /4/. En particular, la validacin del proceso
de esterilizacin comprende la certificacin de las
partes mecnicas y la calificacin de los instru-
mentos de medicin del equipo contra patrones de
temperatura y presin de exactitud conocida; la
seleccin de bioindicadores apropiados; el estudio
de distribucin del calor en la cmara del esteri-
lizador y la localizacin de los puntos de mayor
riesgo, puntos fros, en vaco y con la carga
especifica ; la determinacin de penetracin del
calor dentro de la unidad en el punto fro; la
determinacin de la magnitud del valor F o (efecto
de tiempo/temperatura o equivalente total a tiem-
po neto a temperatura 121 C) y por ultimo, confir-
macin de la reproducibilidad del proceso. /5/
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En el presente trabajo se exponen los resulta-
dos de la validacin del proceso de esterilizacin
de soluciones parenterales de gran volumen
(SPGV) realizada en las autoclaves horizontales,
a vapor saturado presurizado, que componen esta
lnea de produccin en la Planta de Soluciones
Parenterales de la Empresa Laboratorio Farma-
cutico "Oriente" .
Mtodos y materiales
Cada uno de los equipos instalados, de fabrica-
cin italiana posee una cmara de doble puerta,
construida de acero inoxidable y de forma rectan-
gular con las esquinas redondeadas, cuyo volu-
men es de 10,73 m3 , siendo el largo de la cmara
de 7,4 m y la capacidad de carga 2 560 frascos de
1 000 mL o 4 000 frascos de 500 mL , posicionados
sobre 8 carros de 5 bandejas (niveles) cada uno.
Est provisto de una camiseta para la circulacin
de vapor , as como dispositivos de seguridad que
impiden la apertura de las puertas cuando existe
presin en la cmara. El aire es evacuado de la
cmara mediante succin con una bomba de
vaco. Posee trampas de vapor en las lneas de
descarga de la cmara y la camiseta, y la entrada
de vapor se realiza por la parte superior de la
cmara, opuesta a la descarga.
La temperatura y la presin son controladas
automticamente, adems de poseer indicadores
de presin y termmetro de mercurio en vidrio, as
como registrador de temperatura en una carta
grfica . En la fase de enfriamiento se mantiene
la presin mediante inyeccin de aire comprimido
filtrado por un filtro esterilizante. El agua usada
para el enfriamiento es destilada y apirognica, o
sea, estril prcticamente, y el equipo cuenta con
controladores de nivel que impiden que la misma
en ningn momento se ponga en contacto con los
contenedores ubicados en el nivel ms bajo. Po-
see respiradero, as como vlvulas de drenaje
para descarga de emergencia manual. /6, 7/
El ciclo de esterilizacin en este equipo
(figura 1, curva punteada ) se realiza segn el
programador cclico con que el mismo cuenta y
est dividido en siete fases: vaco, precalentamiento
del material, esterilizacin, preenfriamiento, en-
friamiento con agua, descarga y fin de ciclo.
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Pared del envase
Temperatura C
Calentamiento
Fig. 1 Ciclo de esterilizacin.
El tiempo total es de 90 min aproximadamente,
siendo lo ms significativo en el mismo la fase de
esterilizacin, cuyo tiempo de duracin se deter-
mina a partir del tiempo en que el bulbo del
termmetro manomtrico ubicado en el fondo de
la cmara alcanza la temperatura prefijada segn
los parmetros establecidos.
Est demostrado que el calor hmedo a tempe-
ratura de 121 C aplicado durante 8 min produce
el efecto de esterilidad /1,2,5/. La ventaja del
empleo de vapor saturado para la esterilizacin de
las soluciones acuosas en contenedores de vidrio
consiste en su mayor capacidad trmica compa-
rada con el calor seco, ya que en el punto de
condensacin se libera una cantidad de energa
igual al calor de vaporizacin. A la temperatura de
121 C son 542 caloras por cada gramo. En el
caso de aire caliente es solamente 1 calora por
gramo por cada grado centgrado de enfriamiento,
o sea, que el vapor calienta mucho ms rpido que
el aire caliente. El aire caliente a 121 C producir
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Autoclave
Solucin
Exposicin Enfriamiento
Tiempo
el mismo efecto que produce el vapor a esta
temperatura mediante 60 h de exposicin /5/. Es
inconveniente la prolongacin innecesaria de un
ciclo de esterilizacin, ya que esto resta produc-
tividad y posibilita interacciones indeseables entre
producto y material de envase.
La uniformidad en la distribucin del calor en
la cmara de la autoclave depende fundamental-
mente, del grado de evacuacin del aire de la
misma, ya que por ser ste ms denso que el vapor
resulta desplazado, en nuestro caso, hacia el
fondo de la cmara. El aire atrapado dentro de la
cmara forma bolsas y se calienta a la tempera-
tura del vapor, pero no posee las mismas caracte-
rsticas de transferencia de calor de ste. Otros
factores determinantes son el tamao y configu-
racin de la carga, que pueden dificultar la circu-
lacin adecuada, obstaculizando el desplazamien-
to del aire /5,6/. El estudio de la distribucin y
penetracin del calor se llev a cabo con el
empleo de un termmetro registrador de 6 sondas
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o termorresistencias, marca ISI, fabricacin ita-
liana, calibrado y verificado en su exactitud por el
Laboratorio de Instrumentacin y Control del
Instituto Superior Politcnico "Julio Antonio Me-
lla" (ISPJAM), con un intervalo de tiempo entre
mediciones de 1 min, lo que facilita el clculo del
parmetro F o .
Este estudio se realiz en dos etapas: en vaco
y con los tamaos y configuraciones de la carga
que contempla el plan de produccin de la empre-
sa.
Para el estudio de la distribucin de calor en la
cmara se ubicaron en cada carro las sondas en
puntos determinados al azar por la configuracin
de un tringulo con el vrtice hacia arriba, de
modo que el mayor nmero de puntos de medicin
se ubic en la zona de mayor riesgo -fondo de la
cmara-, y la misma se sonde en varios planos
horizontales y verticales en toda su capacidad. Se
realizaron tres rplicas de cada punto con la
cmara vaca (sin contenedores) y con lotes de
frascos por 500 mL, con el fin de identificar los
puntos fros de la cmara.
El estudio de penetracin de calor se realiz
ubicando las sondas a tres niveles de cada tipo de
frascos conteniendo la solucin ms viscosa para
producir (dextrosa 30 %), replicndose tambin
tres veces en cada punto de medicin. Identifica-
do el punto ms fro del frasco de cada clase se
pas a una segunda etapa de este estudio con la
cmara cargada. Esta etapa consisti en ubicar
las sondas en los puntos fros del interior de
frascos conteniendo solucin y stos en los puntos
fros de la cmara, localizados anteriormente. En
esta etapa se evalu el efecto tiempo/temperatu-
ra, calculando el F o a base de mediciones de
temperatura.
Por ltimo, establecidos los parmetros de
proceso (tiempo, temperatura y presin) se ubica-
ron los bioindicadores seleccionados en los puntos
fros localizados en el estudio anterior, realizndo-
se un nmero de corridas adecuado para obtener
la confirmacin de la reproducibilidad de la data.
El bioindicador empleado con la premisa de un
llenado asptico y una mnima carga microbiana
es el microorganismo de mayor resistencia trmi-
ca, el cual se elabora a base de la espora bacilo
sterotermofilo (Bacillus stearothermofilus) .
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La validacin del proceso de esterilizacin y su
equipo correspondiente se acomete por un grupo
de especialistas formado por: mecnico, tecnlo-
go, microbilogo, especialista en control autom-
tico y fabricante.
Resultados y discusin
La construccin del equipo validado, modelo
DLOV -PV de la firma italiana F. de LAMAS,
est avalada por actas de pruebas hidrulicas, de
soldadura y hermeticidad a presin. Durante la
primera etapa del estudio acometido se verific el
funcionamiento y concordancia del diseo del
equipo con lo establecido en los lineamientos de
Buenas Prcticas de Fabricacin (BPF) emitidas
por la FDA, as como los medios de control con
especial atencin al termmetro de mercurio,
manmetro, registrador grfico de temperatura-
presin- tiempo. Se confeccion adems, la lista
de piezas de repuesto y la frecuencia de los
mantenimientos.
Mediante el sondeo de temperatura se deter-
min la ubicacin de los puntos ms fros, hallados
en el fondo de la cmara y los puntos ms calien-
tes, encontrados en el tope y la variacin, que
debe ser de no ms de 1,50 C /3/, con respecto
a la temperatura programada entre los puntos
sondeados, siendo la mxima diferencia detecta-
da de 0,8 C como promedio en las corridas
realizadas.
Paralelamente se determin la correlacin pre-
sin/ temperatura de esterilizacin, establecin-
dose 1,15 bar y 126 C como los parmetros
ptimos para el proceso.
Se confirm la diferencia entre ciclo de este-
rilizacin en vaco y con la cmara cargada,
presentndose variaciones en el tiempo necesario
para que la temperatura programada alcance su
valor, figura 1, curvas discontinua y punteada, y
no se detect diferencia significativa entre los dos
niveles, mitad superior e inferior de la solucin de
mayor viscosidad para procesar (dextrosa 30 %),
en el estudio de penetracin realizado, as como se
determin que la temperatura para mantener por
el controlador automtico, considerando la
termolabilidad del producto durante la fase de
exposicin al calor es de 124 C.
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 Tabla 1
El efecto tiempo/temperatura (valor F) calculado para los puntos ms fros hallados
Corrida Puntos ms fros (fondo de la cmara)
1 28,8 31,4 19,9
2 20,1 32,3 28,3
3 17,8 23,1 19,0
4 25,7 26,0 27,4
5 25,9 26,9 25,9

Tabla 2
Frecuencia de valores F calculados
Rango
<8 8-15 15-20 >20
Localizacin

Fondo 0 0 3 12

Tabla 3
Resultados de monitoreo con bioindicadores
Tipo de carga
500 mL 1 000 mL
Respuesta de bioindicador
Negativo 27 65
Positivo 0 0

El efecto tiempo / temperatura (valor F o ) se tiempo programado de 20 min en doce de las

calcul sobre la base del sondeo de temperatura
en los puntos ms fros con mediciones a intervalo
de 1 min. La frmula empleada es
F=t 10T-121/10 ,
donde:
t : intervalo de tiempo entre mediciones;
T: temperatura medida /5/.
Las mediciones se realizaron a un tiempo de
esterilizacin de 20 min en cinco corridas. La data
obtenida se proces en computadora, arrojando
los resultados que se presentan en la tabla 1, los
que se clasificaron por su frecuencia en la tabla 2.
Como se aprecia en esta tabla el F 0 alcanza el
quince mediciones realizadas, encontrndose , no
obstante, las otras tres dentro del rango ms
cercano de 15 a 20 min y ninguna es menor de
8 min, valor mnimo establecido /2, 3, 5, 9, 11/ para
el factor de letalidad.
Los resultados de las corridas con bioindica-
dores para ambos tipos de carga estn sumarizados
en la tabla 3. Debe ser tomado en consideracin
que los resultados obtenidos tambin dependen en
gran medida de mantener baja carga microbiana
en el producto para esterilizar durante todo el
proceso de fabricacin, as como no dejar trans-
currir ms de 8 h entre la adicin de principio
activo y la entrada del ltimo carro al equipo

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esterilizador, o sea, cumplir los lineamientos de las
BPF de parenterales al efecto.
Conclusiones
1. Sobre la base del estudio realizado y los resul-
tados obtenidos en la validacin del proceso de
esterilizacin durante la puesta en marcha de
la Planta de Soluciones Parenterales de Gran
Volumen se considera que el proceso de este-
rilizacin realizado en la autoclave DLOV-PV
es confiable.
2. Ampliando el margen de seguridad para el
proceso se establecieron los siguientes
parmetros conjugados con la susceptibilidad
de los productos por procesar para programar
en los dispositivos de control del proceso de
esterilizacin realizado en el equipo validado:
TRP (controlador de temperatura y presin)-
124 C; el tiempo de exposicin- 30 min; la
presin de vapor saturado- 1,15 bar y grado de
evacuacin de aire de la cmara -0,8 bar.
3. Se estableci la frecuencia de monitoreo del
proceso de esterilizacin con bioindicadores
seleccionados del modo siguiente: en cada
corrida del equipo, introducidos en los frascos
situados en los puntos ms fros hallados, y
semestralmente realizar el biosondeo de la
cmara en su totalidad.
4. Realizar las verificaciones de los instrumentos
de medicin y control cada tres meses contra
un patrn de exactitud reconocida por el orga-
nismo autorizado.
5. Efectuar el estudio de validacin cada vez que
se introduce un cambio, sea de diseo de
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equipo, de los parmetros de proceso o de
configuracin y tamao de la carga para pro-
cesar.
Bibliografa
1. The United States Pharmacopeia, edic. XXII,
USA, United States Pharmacopeial Convention,
1990, pgs 1483-1706.
2. T h e B r i t i s h P h a r m a c o p e i a , L o n d o n H e r
Majesty's Stationery Office, 1988, A-210.
3. FDA Current Good Manufacturing Practice
(CGMP) Regulation, Federal Register, vol. 43,
nm. 190, Sept. 29, 1978, Part. 212 CGMP in the
Manufacture Processing, Packing or Holding
of Large Volume Parenterals for Human Use.
4. Drugs and Pharmaceutical Sciences, vol. XXIII,
Pharmaceutical Process Validation , ed. by
Loffus, B.T. y Nash, R.A., 2nd edition,USA,
1984, pgs. 41-49.
5. Lachman, I.; Lieberman, H.A.; Kanig J.L.,The
Theory and Practice of Industrial Pharmacy,
2nd edition, Filadelfia, 1986, pgs. 619-625.
6. Operation Instruction Autoclave Type: DLOV,
Ing. F. de Lama and C., sp. a, Pavia, Italia, 1986.
7. Descripcin tcnica e instrucciones para la
explotacin del equipo autoclave, tipo DLOV-
PV de esterilizacin a vapor, Empresa Labora-
torio Farmacutico "Oriente".
8. Myers,R.B., Practical System for Validating Heat
Sterilization Processes, Journal of the Parenteral
Drug Association, vol.32, nm. 5, 1978.
9. Trifonova, E.; Lemus, Z., Validacin de autocla-
ve de esterilizacin a vapor para frascos de
SPGV, IV Jornada Cientfico-Tcnica, Empresa
Laboratorio Farmacutico "Oriente", 1988.
10. Iturralde, J. P., "Procesos de esterilizacin (IV),
Esterilizacin por calor (2)", en Industria Farma-
cutica Investigacin y Tecnologa, vol. VII,
nm. 6, Nov.-Dic., 1992, pgs. 89-92.
TECNOLOGA QUMICA Vol. XIX, No. 3, 1999