Universidad Autnoma de Zacatecas

Km 6 Carretera Zacatecas-Guadalajara s/n. Ejido la Escondida, C.P.

98160, Zacatecas Zac
Coraima Monserrath Castorena Del Ro, Cinthya De vila Rodrguez,
Diana Ibeth Herrera Jara
Unidad Acadmica de Ciencias Qumicas
Qumico Farmacutico Bilogo
8 D
SESIN # 8

Diferencial de leucocitos

SESIN # 9

PRCTICA #10: Alteraciones morfolgicas de los leucocitos.

Identificacin de clulas LE
OBJETIVO:

Realizar diferencial de leucocitos en muestras (laminillas) con alteraciones

morfolgicas nucleares y citoplasmticas e identificar clulas LE.

INTRODUCCIN Higashi. En los pacientes con

enfermedades infecciosas e
Se producen alteraciones en el inflamatorias, el conteo leucocitario
nmero y las funciones de los generalmente sirve como til gua
leucocitos en una amplia variedad de sobre la gravedad del proceso
afecciones hematolgicas, patolgico.
infecciosas, inflamatorias, metablicas
y neoplsicas. Como los leucocitos Pueden identificarse cinco tipos de
resultan afectados en tantas leucocitos circulantes por su
enfermedades, la evaluacin rutinaria morfologa en los frotis sanguneos:
de laboratorio de muchos pacientes se neutrfilos, linfocitos, monocitos,
inicia con la determinacin del conteo eosinfilos y basfilos. Se acepta
leucocitario y el examen de un frotis generalmente que estos tipos de
sanguneo coloreado con Wright. Con leucocitos, junto con los eritrocitos y
base en el estudio clnico y estos plaquetas, derivan de una clula
estudios sanguneos, pueden hacerse madre pluripotente comn. Sin
o sospecharse fuertemente ciertos embargo, despus de este origen
diagnsticos, como leucemia, comn, mecanismos reguladores
agranulocitosis, mononucleosis independientes gobiernan la
infecciosa, y el sndrome de Chdiak- produccin, distribucin y
funcionamiento de cada tipo de Linfocitosis (incremento
leucocito. absoluto en el nmero de
linfocitos > 4.000 x 109/L)
Por simplicidad, con frecuencia se Infecciones vrales
hacen inferencias acerca de la Tosferina
presencia o gravedad de una Mononucleosis
enfermedad a partir del conteo Leucemia linfoctica
leucocitario total y la frmula
leucocitaria diferencial expresada Monocitosis (incremento absoluto del
como porcentaje. nmero de monocitos > 800 x 109/L )
Causas:
Los valores de los leucocitos
presentan variaciones fisiolgicas con Brucelosis
la edad, el nio en trminos generales, Tuberculosis
posee ms linfocitos que el adulto
Leucemia monoctica
normal y alrededor de los 10 aos
Fiebre tifoidea
comienza a estabilizarse en los
valores normales del adulto. El Enfermedad de Hodgkin
anciano presenta un recuento de
leucocitos entre 3.1 8.5 x 109/L y el Eosinoflia (incremento absoluto del
recuento diferencial tiene una media nmero de eosinfilos > 400 x 109/L )
de 65 +/- 10% de polimorfos nucleares Causas:
y linfocitos de 30 +/- 9%. En el
embarazo y sobre todo en el ltimo Alergias y reacciones
trimestre, la leucocitosis puede llegar alergnicas
a 15 x 109/L, con un aumento de Fiebre escarlatina
polimorfos nucleares y bandas Infecciones parasitarias
neutrfilas. Leucemia eosinoflica

En estados de enfermedad un tipo de

clula blanca en particular puede
mostrar un incremento absoluto en la
sangre como se presenta a
continuacin.
ALTERACIONES CUANTITATIVAS
Neutrofilia (incremento absoluto en el
nmero de neutrfilos > 7.5 x 109/L)
Causas:
Apendicitis
Infecciones bacterianas
Leucemia mieloide
Basofilia (incremento absoluto del
nmero de monocitos>100 x 109/L)
Causas:
Leucemia mieloide crnica
Mieloesclerosis
Policitemia rubra vera
Neutropenia (disminucin del nmero
absoluto de neutrfilos < 2.5 x 109/L )
Causas:
Anemia aplstica
Enfermedad infiltrativa de la
mdula sea
Anemia megaloblstica
 Alcoholismo ALTERACIONES
Infeccin severa CITOPLASMTICAS

Linfocitopenia (disminucin del Sndrome de Chdiak

nmero absoluto de linfocitos < 1.5 x
109/L)
Causas:
Falla cardiaca congestiva
Etapas avanzadas de SIDA
Algunas formas de enfermedad
de Hodgkin
Despus de la administracin
de esteroides.
Higashi.
Anomala de Alder Reilly.
Anomala de May Hegglin.
Cuerpos de Dhle
Granulaciones Txicas.
Cuerpos de Auer.
ALTERACIONES NUCLEARES
Anomala de Pelger Het.
Macropolicitos.

Monocitopenia (disminucin del LINFOCITO ATPICO

nmero absoluto de monocitos < 3.0 x
109/L)
Causas:
Pacientes con corticoterapia
crnica
Leucemia de clulas peludas
Anemia aplstica
Enfermedades infiltrativas de la
mdula sea
Eosinopenia (disminucin del nmero
absoluto de eosinfilos < 10 x 109/L )
Causas:
Se denomina linfocito atpico aquella
clula que sufre transformaciones
qumicas y morfolgicas, motivadas
por respuesta al estmulo antignico.
Se puede decir que todos los cambios
cualitativos que sufre la clula, se
deben a la linfotransformacin,
mecanismo que adems explica la
teora de que los pequeos linfocitos
pueden actuar como clulas
germinativas multipotenciales en el
compartimiento de clulas
germinativas en la mdula sea.

Infecciones agudas Las primeras variaciones ocurren en el

Choque traumtico ncleo:
Anemia aplstica

Basopenia (disminucin del nmero Aumenta de tamao

absoluto de basfilos < 10 x 109/L ) Su patrn cromatnico pasa de
Causas: paquicromtico (denso) a
leptocromtico (laxo).
Reacciones alrgicas Puede haber presencia de nuclolos
Generalmente es excntrico y con
Hipertiroidismo
alteracin en la condensacin de la
Infarto del miocardio
cromatina.
Luego cambia el citoplasma el cual se agranulocitosis, sobreexposicin a
hace ms abundante, intensamente radiaciones ionizantes.
basfilo, vacuolado y con pequeas
protuciones. A veces presentan halo
perinuclear.
CLULAS LE
Los linfocitos atpicos son clulas
caractersticamente encontradas en la Las clulas LE son
mononucleosis infecciosa pero polimorfonucleares (PMN) que han
pueden presentarse en una variedad fagocitado material nuclear, el cual
de situaciones: se va a observar como vacuolas
homogneas en la periferia.
Reacciones a infecciones vricas:
mononucleosis infecciosa, hepatitis
vrica aguda, herpes zoster - herpes
MATERIAL Y REACTIVOS:
simple, neumonitis vrica, sarampin,
rubola. 4 laminillas preparadas ( 3 de
Reacciones a infecciones no vricas: ellas preparadas por el
tuberculosis, sfilis, difteria, malaria, docente y la restante
escarlatina, tifus. Reacciones a preparada la sesin anterior)
drogas: intoxicacin por plomo,
2 microscopios
intoxicacin por barbitricos.
Aceite de inmersin
Reacciones a situaciones varias:
despus de ciruga a corazn abierto, METODOLOGIA
despus de transfusiones sanguneas,
pnfigo vulgar, colitis ulcerosa,
Observar laminillas Realizar
preparadas diferencial de
cada laminilla
RESULTADOS
Paciente: Cinthya de vila Rodrguez
Edad: 21 aos
Sexo: Femenino
Dr: A quien corresponda
LAMINILLAS DE LA SESIN ANTERIOR

100 Clulas Laminilla #1 Laminilla #2 Valor de

contadas referencia

Linfocitos 20% 35% 20-50%

Monocitos 4% 4% 4-8%
Eosinfilos 2% 2% 0-6%
Basfilos 3% 0% 0-2%
N. segmentados 64% 56% 55-65%
N. banda 7% 3% 0-5%
Neutrfilos 71% 59% 20-70%
totales
*PRESENCIA DE LINFOCITOS ATIPICOS (FIG 1) EN AMBAS LAMINILLAS ( EN
LA LAMINILLA 1) 13 DE LOS 20 LINFOCITOS SON ATIPICOS. EN LA LAMINILLA
2) 18 DE LOS 35 LINFOCITOS SON ATIPICOS)

ALTERACIONES DE LEUCOCITOS
100 Clulas Laminilla #1 Laminilla #2 Laminilla Valor de
contadas (Eosinofilia) (Eosinofilia) #3 referencia

Linfocitos 20% 15% 36% 20-50%

Monocitos 3% 2% 6% 4-8%
Eosinfilos 47% 62% 4% 0-6%
Basfilos 3% 2% 1% 0-2%
N. segmentados 17% 18% 35% 55-65%
N. bandas 10% 1% 18% 0-5
Neutrfilos 27% 19% 53% 40-70%
totales
*PRESENCIA DE LINFOCITOS ATIPICOS EN LA LAMINILLA 3 ( 19 DE LOS 36
LINFOCITOS SON ATIPICOS)
En las siguientes imgenes se
observan los linfocitos atpicos asi
como las limillas con eosinofilia
FIG. 1 Linfocito atpico. se ve claramente la
alteracin morfolgica caracterstica de estos.
FIG. 2 Laminilla con presencia de eosinofilia
(aumento de eosinofilos)
INTERPRETACIN
1.- En las laminillas de la sesin
anterior se puede ver que los valores
estn dentro de los valores referencia,
sin en la laminilla 1 nos podemos
percatar que existe un ligero aumento
en las bandas, asi mismo el numero
de neutrfilos totales tambin se ve
ligeramebte aumentado y para poder
descartar que se trate de una
bandemia o neutropenia se requieren
los valores absolutos.
A pesar de que los valores estn
dentro del rango en amabas laminillas,
se observa presencia significativa de
linfocitos atpicos, los cuales son
clulas que han sufrido sufre
transformaciones qumicas y
morfolgicas, motivadas por
respuesta al estmulo antignico.
Se sabe que la paciente tiene
monocucleosis la cual es una de las
causas a la cual se asocia la presencia
de los linfocitos atpicos.
2-. En las laminillas de las alteraciones
de leucocitos tanto en la laminilla 1
como en la 3 se observa claramente
el aumento de Eosinofilos por lo que
se dice que en estas dos muestras se
tiene una eosinofilia la cual se puede
deber a:
Alergias y reacciones
alergnicas
Fiebre escarlatina
Infecciones parasitarias
Leucemia eosinoflica
De las causas citadas anteriormente la
mas comn es la infeccin parasitaria.
En la laminilla 3 podemos observar de
igual manera que el conteo arroja
valores altos para los neutrfilos en
banda y una ligera disminucin en los
segmentados, sin embargo lo mas
notable es la presencia de linfocitos
atpicos en la muestra y como ya se
menciono estos aparecen cuando se a
presentado un estimulo antignico.
Cuestionario: nucleo irregular generalmente
lobulado, presencia de
1. cul es la funcin de las Bastones de Auer en gran
clulas LE? cantidad (en empalizada).
Las clulas LE son Asociada a la translocacin
polimorfonucleares (PMN) que t(15,17) la cual es de buen
han fagocitado material pronstico. Posee una variante
nuclear, el cual se observa Hipogranular donde se
como vacuolas homogneas en observan promielocitos sin
la periferia. Adems de la m- grnulos y sin bastones de
dula sea y la sangre perifrica, Auer.
las clulas LE se han descrito
en lquido sinovial, pleural, 3. Qu patologas se relacionan
pericrdico y cefalorraqudeo. con la presencia de leucocitos
Producen numerosos auto- hipersegmentados en sangre
anticuerpos dirigidos perifrica?
contra antgenos celulares, La anomala de Pelger-Huet,
cuyo resultado final son sin repercusin funcional,
lesiones inflamatorias de corresponde a una
mltiples rganos y sistemas. hiposegmentacin del ncleo
en dos lbulos.
2. En qu patologas se En la hipersegmentacin
encuentran los bastones de constitucional de Undritz se
Auer y cul es el pronstico de observan ms de cinco lbulos
estas? en la mayora de los
M0: Leucemia Mieloide Aguda polinucleares.
Indiferenciada: son clulas muy En el curso de los trastornos
inmaduras las cuales no hereditarios de la vitamina B12
expresan morfolgicamente o de los folatos, los neutrfilos
ningn elemento que las polinucleares pueden ser
clasifique como Mieloide hipersegmentados o ms
(grnulos citoplasmticos, frecuentemente encintados (en
Bastones de Auer) y solo se banda).
encuentran aqu debido a que
su Inmunofenotipo corresponde
al de la estirpe mieloide (CD 4. Investiga un mtodo para
13+, CD33+). Blastos: identificacin de las clulas LE.:
citoplasma agranular, ncleo
con cromatina laxa con 1-2 Anlisis para el lupus
nuclolos eritematoso o examen de
clulas de lupus eritematoso es
M3: Leucemia Mieloide Aguda un anlisis de sangre que mide
Promielocitica: en esta la presencia de un tipo especial
leucemia se observan blastos y de clulas que se encuentran
promielocitos en alta cantidad principalmente en pacientes
los cuales presentan un que padecen lupus
citoplasma hipergranular,
eritematoso. Existen 2 recojer el producto en untubo
metodos:
A) Metodo sin cogulo:
1- Sacar sangre al paciente, y
colocar en frasquito con las
perlasque posean 1 gota de
heparina.2- Dejarlo rotar en el
agitador por 30 minutos, o bien
agitarvigorosamente por 5 a 10
minutos para generar la lisis
deleucocitos.3- Llevar la
muestra a estufa de 37 C entre
1 a 4 horas, para darletiempo a
los leucocitos enteros a
fagocitar los restos de
loslisados y que decanten los
globulos del plasma.4- Con la
jeringa de aguja larga aspirar la
capa de leucocitos, en
lainterface plasma-globulos
rojos y descargar dentro de 2 a
4tubos de macrohematocrito.5-
Centrifugar a muy baja
velocidad (500-1000 rpm), por
5minutos.6- Aspirar
nuevamente con la jeringa la
capa de leucocitosde lostubos,
y descargar en los portas, y
realizar los extendido
conextensor.7- Colorear por el
metodo de May Grunwald -
Giemsa y ver conobjetivo de
inmersion.
B) Mtodo con cogulo:
1- Se sacan unos 5 a 10 ml de
sangre y se la deja coagular
durante2 horas a 37 C.2-
Centrifufar a 3500 rpm por 10
minutos.3- Eliminar el suero y
depositar el coagulo sobre
varias capas degasa, y stas
sobre un embudo.4- Aplastar el
coagulo con una varilla y
de ensayo.5- Pasar el liquido
obtenido a un tubo de
macrohematocrito con la
jeringa con aguja larga, y
centrifugar 15minutos a 2000
rpm.6- Usando la misma
jeringa, eliminar primero el
suero, y luegotomar la capa de
leucocitos y depositar en portas
para hacerextendidos.7-
Colorear por el metodo de May
Grunwald - Giemsa y ver
conobjetivo de inmersin.
5. qu mtodo de tincin se
utiliza para la observacin de
clulas deLE?
La tincin de May Grnwald-
Giemsa (MGG) es una tcnica
de tincin derivada del mtodo
de Romanowsky que se utiliza
principalmente para el coloreo
de muestras de frotis
sanguneos o extendidos de
mdula sea. Como el resto de
las coloraciones basadas en la
tcnica de Romanowsky, la
tcnica MGG permite
diferenciar cualitativa y
cuantitativamente los
principales elementos formes
de la sangre. Como su nombre
lo indica, la tcnica combina las
tcnicas de coloracin
desarrolladas por May-
Grnwald y Giemsa. Estas
tcnicas a su vez se basan en
el empleo de dos soluciones
colorantes:
La solucin de May-Grnwald,
que contiene el colorante
ninico eosina y el colorante
catinico azul de metileno
ambos disueltos en metanol
La solucin de Giemsa, que
contiene eosina, azul de
metileno y una serie de
productos de la oxidacin de
este ltimo tales como el azur
A, el azur B, el violeta de metilo
y el azul de metilo.
Todos estos colorantes se
encuentran en estado no
ionizado mientras se mantienen
en solucin de alcohol metlico,
pero al aadir agua se ionizan y
se unen selectivamente a los
constituyentes celulares
precipitando como sales
insolubles.
Los componentes celulares de
naturaleza aninica (cida) se
unen selectivamente a los
tintes catinicos tindose en
variados tonos de azul. Estos
componentes son llamados
basfilos: (ADN, mitocondrias,
ribosomas y citoplasma de
clulas ricas en ARN).
Los componentes celulares de
naturaleza catinica (bsicos)
se unen selectivamente al tinte
cido eosina, tindose en
variados tonos de naranja y
rojo. A estos elementos se los
denomina acidfilos o manifestaciones
eosinfilos. Este es el caso de
la hemoglobina, y de las
protenas contenidas en las
granulaciones de los
granulocitos eosinfilos.
Los componentes celulares que
tienen afinidad por ambos tipos
de colorantes se denominan
neutrfilos y se tien en
variados tonos de violeta.
Discusin:
En la prctica se hizo una observacin
de diversas laminillas en las cuales, se
realiz el conteo e identificacin
celular, 2 de las laminillas presentaban
notablemente la presencia de una
eosinofilia, mientras que las otras 3
presentaban la presencia
considerable de linfocitos atpicos. en
el caso de las laminillas observadas
fue fcil la identificacin de la
alteracin, sin embargo debemos de
tener muy en cuenta que no en todas
las muestras ser igual y debemos de
tener mucho cuidado al momento de
hacer la diferencial ya qye podemos
dar resultados errneos, asi mismo se
debe de tomar en cuenta el historial
clnico del paciente para poder hace la
interpretacin correcta de los
resultados, y proceder a realizar
algunos estudios mas especializados
para poder dar un diagnnostico fiable
al paciente.
Conclusin:
El lupus eritematoso sistmico es una
de las enfermedades autoinmunitarias
con mayor repercusin en todo el
mundo, por la variedad de
clnicas y el
compromiso de grupos
multidisciplinarios para su atencin y
tratamiento. Respecto a la prctica se
concluy con la observacin de las
laminillas un aumento de eosinfilos
que corresponden a una eosinofilia
relacionada con alguna posible
inflamacin.
Bibliografa: Dr. Camilo Fernndez Espina.
Anomalas morfolgicas de los
Versin en ingls revisada por: leucocitos en el nio O.
Todd Gersten, MD, Fenneteau. Acta bioqum. cln.
Hematology/Oncology, Florida latinoam. v.43 n.4 La Plata
Cancer Specialists & Research oct./dic. 2009. Asociacin
Institute, Wellington, FL. Espaola de Farmacuticos
Review provided by VeriMed Analistas Modesto La fuente, 3
Healthcare Network. Also - 28010 Madrid.
reviewed by David Zieve, MD, Manual de tcnicas de
MHA, Isla Ogilvie, PhD, and the laboratorio en hematologa -
A.D.A.M. Editorial team. Joan LlusVives i
Corrons,Josep Llus Aguilar
Bascompte- 3ra
edicion,ao2006. editorial
Masson