UNELLEZ-VIPI

PROGRAMA: CS. DE LA EDUCACIN

SUBPROGRAMA: BIOLOGIA
SUBPROYECTO: MICROBIOLOGA

PRACTICA DE LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

MTODOS DE CULTIVO Y COLORACIN DE MICROORGANISMOS

Introduccin
Las bacterias deben ser cultivadas en medios de cultivos en laboratorio para caracterizar su
crecimiento, hacer su identificacin y determinar sus actividades metablicas. Un medio de cultivo
es una solucin acuosa o semislida que contiene todos los compuestos necesarios para el
crecimiento de los microorganismos. Es importante que la inoculacin de los microorganismos en
los medios de cultivo siempre se realice en una zona asptica (cerca del mechero o campana de
flujo laminar), condiciones que limitan la presencia de microorganismos indeseables o
contaminantes.
Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microorganismos a partir de
muestras biolgicas complejas (suelo, agua, alimentos, secreciones o lquidos biolgicos, etc.) en
las que hay una gran diversidad microbiana. En ocasiones, se pueden agregar a los medio de
cultivos componentes como: sangre, colorantes, indicadores, etc., para distinguir especies
bacterianas diferentes por la forma en que metabolizan los sustratos que se manifiestan por los
cambios en la apariencia o modificacin del pH del medio de cultivo. Estos medios de cultivos se
conocen como medios diferenciales y son de gran utilidad para la caracterizacin e identificacin
de las especies bacterianas.

Objetivos
Adiestrar al estudiante en las tcnicas de coloracin que permitan visualizar la morfologa
bacteriana, as como los diferentes medios de cultivos y tcnicas de siembra de microorganismos.

Normas del Laboratorio

Es obligatorio el uso de bata de laboratorio, zapatos cerrados y cabello recogido.
No consumir alimentos ni bebidas dentro del laboratorio.
Usar guantes cuando se manipulen las muestras o reactivos.
Evitar la acumulacin de materiales que no sean necesarios para la prctica en la mesa de
trabajo (bolsos, libros, etc.). Realizar las actividades de manera ordenara y en silencio.
No se admitirn visitas personales ni salidas mientras se est realizando la prctica de
laboratorio.
Antes y despus de cada prctica cada estudiante deber limpiar y ordenar su rea de
trabajo.
Materias que deben llevar los estudiantes
Por grupo de prctica:
(1) Papel absorbente o servilletas
(1) Desinfectante
(1) Jabn lquido
Individual:
Practica de laboratorio (gua)
Marcador permanente
Guantes
Bata de laboratorio

ACTIVIDAD 1. (Primer da)

1. Ubicarse en un rea de trabajo con cada los materiales a utilizar en grupos de 2 personas.
2. Identificar una placa de Petri con: fecha, nombres y tipo de muestra a sembrar.
3. Tomar la muestra del lquido o secrecin (segn le sea indicado por el profesor) para su
posterior siembra.
4. Con el mechero a un lado, proceder a realizar la siembra de la muestra en estudio en el
agar. Estar atento a las indicaciones del profesor.
5. Una vez sembrada la placa de Petri debe ser cerrada y guardada para su incubacin.

ACTIVIDAD 2. (Segundo da)

1. Revisar el medio de cultivo y anotar las observaciones.
2. En caso de haber crecimiento microbiano proceder a realizar la coloracin de Gram
3. Luego de tener lista la coloracin proceder a observar en el microscopio el germen aislado
para su identificacin.
4. Anotar los hallazgos y realizar el reporte de resultados.

Tincin de Gram
1. Se extiende la muestra recogida en una lmina portaobjetos, y se deja secar al aire.
1 Se fija el extendido flameando la lmina en el mechero, as las bacterias quedan pegadas en
la superficie.
1 Se aade cristal violeta de manera tal que cubra todo el extendido, dejar actuar durante 1
minuto.
1 Se lava la lmina coloreada con agua.
1 Se aade lugol cubriendo todo el extendido y se deja actuar por 1 minuto.
1 Se lava con agua nuevamente.
2 Se realizan un lavado rpido con alcohol-acetona con la lmina inclinada para que este
corra.
3 Se lava con agua.
4 Se aade la safranina cubriendo todo el extendido y se deja actuar por 1 min.
5 Se lava la lmina por ltima vez con agua y se deja secar.

REPORTE DE RESULTADOS
TIPO DE MUESTRA
TIPO DE AGAR (sangre-chocolate-nutritivo)
TIPO DE SIEMBRA (estriacin simple, por
agotamiento)
 HUBO CRECIMIENTO (si-no)
FORMA (cocos, bacilos)
AGRUPAMIENTO (aislados, en pares,
cadenas, racimos)
AUMENTO DEL MICROSCOPIO (10x-40x)
COLORACION DE GRAM (positivo-negativo)

CONCLUSIN: