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El contenido total de protenas en los alimentos est conformado por una mezcla
compleja de protenas. Estas existen en una combinacin con carbohidratos o
lpidos, que puede ser fsica o qumica. Actualmente todos los mtodos para
determinar el contenido protico total de los alimentos son de naturaleza emprica.
Un mtodo absoluto es el aislamiento y pesado directo de la protena pero dicho
mtodo se utiliza slo a veces en investigaciones bioqumicas debido a que es
dificultoso y poco prctico
DIGESTIN
catalizadores
NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN
TITULACIN
REACTIVOS
Reactivos preparados:
Es aconsejable la utilizacin de
reactivos ya preparados,
especialmente el HCl (o H2SO4)
de valoracin. Cualquier error en
su preparacin puede afectar
directamente al resultado de la determinacin.
PROCEDIMIENTO
REPARACIN DE LA MUESTRA
1. Triturar, homogeneizar y mezclar la muestra.
2. Pesar entre 1 y 2 gramos de muestra.
3. En muestras con contenidos de nitrgeno muy pequeo, tomar la
muestra suficiente para que contenga como mnimo 5 mg de nitrgeno.
DIGESTIN
Aadir entre 10 y 15 ml (tubo macro) de H2SO4 96-98% y 1 tableta (8 gm) de
catalizador.
(Para el tubo micro, el mximo de H2SO4 es 5ml)
Montar un sistema para la extraccin de humos o scrubber con Na2CO3.
Realizar la digestin en tres pasos:
Queso o carne:
Paso1: 150C / 30 Paso 2: 270C / 30 Paso 3: 400C / 90
Cereales:
Paso1: 150C / 15 Paso 2: 300C / 15 Paso 3: 400C / 60
DILUCIN
Sacar los tubos muestra del bloque digestor y dejar enfriar a T ambiente.
(Puede forzarse sumergiendo los tubos, cautelosamente, en un poco de agua).
Aadir unos 25ml de agua destilada en cada tubo.
Aadir el agua despacio y moviendo el tubo sin dejar solidificar la muestra. Si es
necesario calentar ligeramente el tubo (por ej. introducindolo en el bloque
digestor todava caliente)
Dejar enfriar de nuevo hasta T ambiente.
Para evitar prdidas de nitrgeno y reacciones violentas no introducir el tubo
todava caliente al destilador.
DESTILACIN
Control Visual: Una vez se ha aadido el NaOH, la muestra debe tomar una
coloracin azulada, de no ser as, aadir ms NaOH.
VALORACIN Y CLCULO
Valorar el destilado con HCl H2SO4 hasta el cambio de color. (punto final: pH
4.65)
Moles de HCl = Moles de NH 3 = Moles de N en la muestra
Moles de H2SO4= 2Moles de NH 3 = 2Moles de N en la muestra
Realizar el clculo:
mg N = N x V x 14
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin
V = Volumen de cido consumido
14 = Peso atmico del nitrgeno.
Para pasar a contenido de protenas corregir por el factor adecuado segn la
naturaleza de la muestra. (6.25 por defecto)
Peridicamente realizar un ensayo en blanco y restarlo del resultado.
P1 (mg) = P0 x 0,212
Destilar aadiendo 25ml de NaOH
Una vez destilado y valorado obtenemos el nitrgeno (mg) detectado: P2
P2 = N x V x 14
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin (HCl 0.25)
V = Volumen de cido consumido
14 = Peso atmico del nitrgeno.
Calculamos la recuperacin:
R(%) = P2 / P1 *100
La recuperacin aceptable es entre 99.5 y 100.5 %.
0,1 40 ... 90 mg
Preparar la muestra:
Contenido de nitrgeno de una muestra de Acetanilida :
Frmula: C8H9NO
Peso molecular: 135.17
Factor: 14 / 135.17 = 0.1035
mg de Nitrgeno = 0.1035 * mg de Acetanilida
Pesar alrededor de 250mg de acetanilida. El peso exacto ser P0
La cantidad exacta de Nitrgeno es:
P1 (mg) = P0 x 0,1035
Digestin de la muestra:
Colocar la acetanilida en un tubo, aadir 10ml de cido sulfrico 98% y una
tableta de catalizador Kjeldahl.
Digerir a 400C durante 1h. (El resultado debe ser un lquido transparente con
coloracin azul.)
Dejar enfriar y aadir 25ml de agua destilada en cada tubo. Tomar precauciones
para evitar salpicaduras. La reaccin del agua sobre el cido sulfrico es
violenta.
Destilar:
Destilar aadiendo 75ml de NaOH. Utilizar HCI 0.25N para la valoracin.
Una vez destilado y valorado, obtenemos el nitrgeno (mg) detectado: P2
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin (HCl 0.25).
V = Volumen de cido consumido.
14 = Peso atmico del nitrgeno.
P2 = N x V x 14
Calculamos la recuperacin:
R(%) = P2 / P1 *100
FUENTES DE ERROR
Las principales fuentes de error son:
En el proceso de digestin:
1.- La inclusin de nitrgeno no protico (aunque la cantidad de este nitrgeno
suele ser despreciable comparada con la del nitrgeno protico);
2.- La prdida de nitrgeno durante la digestin. El exceso de sulfato de sodio o
potasio que se aade al cido para elevar el punto de ebullicin, puede producir
una descomposicin por calor y por lo tanto prdida de nitrgeno. Por otro lado, el
exceso de catalizador (de cobre generalmente) tambin puede producir prdidas
de nitrgeno
3.- La digestin incompleta de la muestra. Generalmente debida a falta de tiempo
de reaccin o falta de cido sulfrico.
Durante la destilacin:
1.- Neutralizacin incompleta de la mezcla digerida. Es necesario aadir suficiente
NaOH para neutralizar el exceso de cido sulfrico resultante de la digestin as
como transformar todo el amonio formado en la digestin en amonaco.
2.- Perdida de amonaco por fugas en el circuito de destilacin.
3.- Perdida de amoniaco por refrigeracin insuficiente en el condensador.