ESTRUCTURAS DEL EMBRIN

DE POLLO Y SUS VAS DE

INOCULACIN
OBJETIVOS

Adquirir el conocimiento para el correcto manejo de la

tcnica de inoculacin de embrin de pollo por las vas
ms utilizadas.

El alumno conocer las diversas partes del embrin de

pollo de 9 das de incubacin.
MTODOS DE CULTIVO

Son utilizados para reconocer las infecciones por virus

humanos pueden clasificarse en directos e indirectos
(reconocen la respuesta inmune:humoral o celular)

Directos Indirectos
Virus - Ag infeccioso Deteccin de anticuerpos especficos :
EIA (enzimoinmunoanalisis indirecto),
IFI(inmunofluorescencia indirecta),
WB(Western Blot)
Antgenos virales Tcnicas Produccin de anticuerpos in vitro.
inmunolgicas
IF, EIA,
Test de Aglutinacin.

Presencia de Ac. Nucleicos virales

PCR
SISTEMAS UTILIZADOS PARA PROPAGAR EL
VIRUS EN LABORATORIO

Inoculacin en los cultivos de clulas

Inoculacin animal

Inoculacin de huevos fecundados

 INOCULACIN ANIMAL

Tcnica ,poco empleada, cuando la replicacin

en otros sistemas no es posible.

Animales mas utilizados:

o Monos
o Cobayos
o Ratones lactantes
VAS DE INOCULACIN EN ANIMALES
DE EXPERIMENTACIN
Este mtodo depende de la sensibilidad del husped
respecto al virus as como la naturaleza de la prueba o
del experimentos.

Intravenosa

Intracerebral

Intraperitoneal

Otras: Intranasal, Intratraqueal, Intradrmica.

Vas Animal de Tipo de Utilidad Cantidad
experimentacin embrin de
inoculo.

Intravenosa. Aves. 10 a 15 Virus que 0.02-0.05

Conejos. das. ocasionan mL.
Caballos. cambios
hematolgicos
ej. leucemia.

Intraperitoneal. Ratones. El virus se duplica

Alternativamente en dentro del
conejos. embrin, libera lq
uidos: fuente de
virus.

Intracerebral. Embrin. 8 a 14 Virus que 0.01-0.02

Ratones. das. producen mL.
alteraciones
cerebrales: la
rabia, herpes.
INOCULACIN DE HUEVOS FECUNDADOS
(EMBRIONES)

Se puede inocular en varias cavidades de huevo,

los mas utilizados son: embriones de pollo de entre
5 y 14 das.

Los virus slo pueden reproducirse en

determinadas partes del embrin; por
consiguiente, se debe inyectar en la regin a
apropiada.
 VAS DE INOCULACIN DE HUEVOS
FECUNDADOS

Saco vitelino

Membrana corio alantoidea

Cavidad amnitica
Cavidad alantoidea
CLASIFICACIN rganos

Primarios. Tejidos
Clulas, tejidos
u rganos
tomados
Embriones
directamente
Cultivo de un animal
celular
Lneas celulares:
Clulas se
Secundarios. mantienen en
Se realizan a subcultivos
partir de los
primarios Cultivos continuos:
Las clulas han
logrado sobrevivir a
varios cultivos
El cultivo de clulas se fundamenta en que las clulas de cualquier rgano se pueden
cultivar "in vitro".

Colocar en un medio de
Tratar con cultivo con sales
Extraer rgano enzimas minerales, a.a., fuentes
de energa, vitaminas,
(tripsina).
antibiticos y suero.

Durante la incubacin, las Colocar en placas de

clulas sedimentan, se vidrio e incubar bajo
adhieren a la superficie y condiciones
comienzan a dividirse hasta apropiadas.
obtenerse una monocapa.
 Obtenida la Se aade el virus,
monocapa, las clulas se incuba bajo
no continan condiciones
dividindose debido a: apropiadas.
CULTIVO
"inhibicin por contacto". REPLICACION
PRIMARIO
VIRAL

Se mezclan con el
Se trata de nuevo con medio de cultivo a una
tripsina, rompen la unin concentracin
entre las clulas adecuada se coloca CULTIVO
desprendindolas del fondo en placas y se incuban SECUNDARIO
de la placa. bajo las mismas
condiciones
Es
relativamente
Mono capa: las clulas se Donde de nuevo las econmico ya
adherirn al sustrato e inician la
proliferacin.
clulas se dividen que se
Muchas lneas celulares son hasta obtener una sustituye el uso
anclaje dependientes, es decir no capa confluente. de los animales
inician la proliferacin hasta que y huevos.
se han adherido al sustrato.
 EFECTOS CITOPTICOS (ECP)

Son cambios visuales en el husped que se deben

a la infeccin viral.

Los efectos citopticos que se presentan son:

o Redondeamiento celular
o Sincitios
o Lisis
o Formacin de cuerpos de inclusin
o Hemadsorcin
 ECP. Descripcin Imagen

Sincitios Grupos de clulas fusionadas

apreciables como una masa
celular multinucleada.

Lisis Conclusin de alteraciones

celulares se producen
secuencial o simultaneo en la
clula infectada, liberando al
medio las nuevas partculas
virales.
Cuerpos de inclusin Anormalidades intracelulares,
grnulos, solo tienen lugar en la
clula infectada.

Hemadsorcin. Virus producen ECP al

multiplicarse, se agregan a
tejidos infectados una
suspensin de glbulos rojos de
cobayo o pollo.
 VIRUS (genero) Efecto Citoptico
Poliovirus Lisis celular
Papovavirus Cuerpos de inclusin acidfilos
en el ncleo

Adenovirus Cuerpos de inclusin basfilos en

el ncleo

Rhabdovirus Cuerpos de inclusin acidfilos

en el citoplasma

Citomegalovirus Cuerpos de inclusin acidfilos

en el ncleo y en el citoplasma

Virus del sarampin Sincitios

Poliomavirus Transformacin celular
HIV Sincitios/Destruccin de los
linfocitos T
 UTILIDAD

Se utiliza en la propagacin, titulacin e identificacin de virus,

as como en la preparacin de algunas vacunas virales.
 Deben ser obtenidos de aves vigorosas, sanas, libres de
infecciones bacterianas o virales

Se adquieren con facilidad.

Son baratos.

Tamao adecuado.

No se forman anticuerpos contra el virus inyectado

porque carecen de respuesta inmune
VARIABLES QUE SE DEBEN TOMAR EN CUENTA PARA LA
INOCULACIN DE LOS VIRUS EN EMBRIN DE POLLO

Embrin vivo libre de patgenos especficos

Cscara color blanca para fcil observacin
Temperatura de incubacin 39C
Tiempo de incubacin
Edad del embrin
Va de inoculacin
Volumen de inoculacin
Concentracin del virus a inocular
Humedad relativa de 60%
Concentracin de O2 de 2%
 OVOSCOPIO

Permite la visin del huevo en transparencia dentro

de la cascara, sin calentar el huevo , sirve para ver
el estado del embrin dentro del huevo.
 CRITERIOS PARA DEMOSTRAR LA VIABILIDAD
DEL EMBRIN.

Con la transiluminacin se presenta

formacin de venas presentes en la
membrana corioalantoidea.

Tambin se puede observar el

desplazamiento de un punto negro, (ojo).
 OTRAS FORMA DE SABER LA VIABILIDAD
DEL EMBRIN

El huevo se sumerge en agua

Si no flota est vivo

Si el huevo flota est muerto debido a la

produccin de gases de descomposicin.
 Las vas utilizadas para la inoculacin son:
Cavidad amnitica (7-15 das)

Cavidad alantoidea (9-12 das)

Membrana corioalantoidea (10-12 das)

Saco vitelino (5-8 das)

 Introducir la aguja del 22
Colocar el
Pinchar la membrana larga a travs de la
embrin en plano
por encima de la cmara de aire y
horizontal
cmara area depositar 0.1 ml del
colorante
Marcar un punto en Marcar un punto de
Inocular con aguja
la cima de la cmara inoculacin
del 22 0.1 ml del
de aire exactamente donde
colorante
se ve el embrin
Marcar la cmara de Inocular 0.1 ml del
Localizar una zona
aire y marcar un colorante con un
libre de vasos
punto en la cima aguja del 27 corta
 Se succiona aire Se inocula con una
Se perfora sobre la
para formar una aguja del 27 corta y se
cmara de aire y el
cmara de 1cm deposita 0.1 ml del
punto de inoculacin.
dimetro. colorante.

Se sella e
incuba.
 APLICACIN EN LAS AREAS
FRMACEUTICAS
BIOQUIMICA CLNICA FARMACIA INDUSTRIAL FARMACIA CLNICA

Produccin de vacunas Uso de virus para la

til para propagar virus (Ej. AH1N1) produccin de una
en el laboratorio protena de inters
Titulacin de Ac e
Diagnstico presuntivo y identificacin de virus Se realizan cultivos
confirmativo (Apoyo al celulares
diagnstico clnico o
serolgico)

Evaluado para
determinar su
capacidad
hemoaglutinante
(utilizando glbulos rojos
de pollo al 5%)
REFERENCIAS

Acton, Jean D. Virologia.1 ed. Editorial Interamericana:

Mexico.1977.
Herrera Uribe Libia. Procedimientos en virologa medica.
Editorial Universidad de Costa Rica: Costa Rica. 2004
Leslie Collier. Virologa Humana. Tercera Edicin. Corea.
1993. pp 259-267.
Koneman. Diagnstico microbiolgico. Tercera edicin.
Editorial Panamericana. Argentina. 1992. pp. 786-810.

Jawetz. Microbiologa mdica. Editorial el manual

moderno. Mxico 1996.