Manipulacin gentica.

La ingeniera gentica es la tecnologa del control y transferencia del ADN de un

organismo a otro, lo que posibilita la correccin de los defectos genticos y la creacin de
nuevas cepas (microorganismos), variedades de plantas y razas de animales para una
obtencin ms eficiente de sus productos.

Tcnicas
La ingeniera gentica incluye un conjunto de tcnicas biotecnolgicas, entre ellas
destacan:

Amplificacin del ADN

La secuenciacin del ADN;

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).

Plasmocitosis

Clonacin molecular

Mutacin excepcional

Transgnesis

Bloqueo gnico
La tecnologa del ADN recombinante
Artculo principal: ADN recombinante
 A. tumefaciens adhirindose a una clula de zanahoria.

La tecnologa del ADN recombinante consiste en aislar y manipular un fragmento de ADN

de un organismo para "recombinarlo" con el de otro organismo.
Generalmente se trata el ADN con una endonucleasa de restriccin que origina en este
caso un corte escalonado en las dos hebras dobles de ADN. Los extremos escalonados de
ambas hebras de ADN son complementarios, una condicin que deben de tener si se
quieren unir. Los dos ADNs as cortados se mezclan, se calientan y s enfran
suavemente. Sus extremos cohesivos se aparearn dando lugar a un nuevo ADN
recombinado, con uniones no covalentes. Las uniones covalentes se forman aadiendo
ADN ligasa y una fuente energtica para formar los enlaces.
Otra enzima clave para unir ADNs es la transferas a terminal, que puede adicionar muchos
residuos de desoxirribonucletidos sucesivos al extremo 3de las hebras del ADN. De este
modo pueden construirse colas de poli Guanina en los extremos 3 de una de las hebras
de ADN y colas de poli Citosina en los extremos de la otra cadena. Como estas colas son
complementarias, permitirn que los dos ADNs se unan por complementariedad.
Posteriormente, se forman los enlaces covalentes por la ADN ligasa.
El ADN recombinado se inserta en un ADN vector que acte como vehculo para
introducirlo en una clula hospedadora que lo replique, los vectores o transportadores ms
utilizados son los plsmidos y el ADN del fago lambda.
La secuenciacin del ADN
Artculo principal: Secuenciacin del ADN
Es un conjunto de tcnicas que permiten conocer el orden en que aparecen
los nucletidos en el ADN, que es la base de la informacin gentica de los organismos .
Esta tcnica tiene aplicaciones mdicas, como la bsqueda de algn polimorfismo
gentico que se asocie con una enfermedad; bsicas: comparar la historia evolutiva de un
organismo; o forenses.
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
Artculo principal: Reaccin en cadena de la polimerasa
La tcnica de la PCR aprovecha la actividad enzimtica por la que se replica el ADN en las
clulas para conseguir una gran cantidad de copias de ADN a partir de cantidades
pequeas. Se utiliza una polimerasa o una mezcla de varias que puedan resistir
temperaturas elevadas, siendo la ms comn la polimerasa taq.
La tcnica consiste en realizar varios ciclos de temperaturas elevadas para conseguir
la desnaturalizacin del ADN y temperaturas ms bajas para la amplificacin del ADN
desnaturalizado mediante la polimerasa.
Biotecnologa gentica
En la dcada de 1970 se abrieron nuevas perspectivas en el campo de
las biotecnologas gracias a la elaboracin de nuevas tcnicas que permiten llegar
directamente al material que est en el origen de todas las caractersticas y procesos
vitales, es decir, el ADN. Este conjunto de tcnicas moleculares de manipulacin gentica
recibe el nombre de ingeniera gentica.
Su objetivo es la manipulacin in Vitro del ADN, la introduccin de este ADN as modificado
en clulas vivas y la incorporacin del mismo como parte del material hereditario de dichas
clulas. De este modo, ADN de diversas procedencias, por ejemplo, la fraccin de ADN
humano que regula la sntesis de insulina, puede introducirse en bacterias de manera que
pasa a formar parte de su genoma y lograr as que la bacteria adquiera la capacidad de
elaborar insulina.
Terapia gentica
La terapia gentica consiste en sustituir o aadir, segn el caso, una copia normal de la
regin defectuosa del ADN para poder solucionar y restablecer la funcin alterada,
evitando el desarrollo de enfermedades de origen gentico, como por ejemplo la facultad
defensiva ante las enfermedades infecciosas. Las enfermedades con las que se ha
empezado a trabajar son, entre otras, la deficiencia de la enzima ADA (adenosina
desaminasa), conocida como la de los nios burbuja y la DMD o distrofia muscular de
Duchenne.
La posibilidad de curar las enfermedades genticas con un tratamiento especfico justifica
los esfuerzos que se estn realizando en este sentido.
Implicaciones ticas
La ingeniera gentica tiene aplicaciones en campos muy diversos; dos de los ms
importantes son la medicina y la creacin de nuevas especies o mejora de las existentes.
El progreso en estos mbitos puede aportar resultados capaces de aliviar algunos
problemas de gran importancia, pero no se debe olvidar que la explotacin comercial de
las tecnologas requeridas slo est al alcance de unas pocas empresas multinacionales.
Como era de esperar, la tradicional dependencia econmica de los pases
subdesarrollados tiene en la ingeniera gentica un nuevo elemento de desequilibrio. En
otro orden de cosas, la ingeniera gentica puede plantear graves problemas ticos. Hay
opiniones muy diversas sobre dnde han de situarse los lmites de manipulacin del
material que est en la base de todos los procesos vitales.
Al inicio de los experimentos del ADN recombinante, varios investigadores mostraron su
preocupacin por los riesgos que se pueden realizar con dichas tcnicas. En varios pases
se crearon comits para discutir el uso y la aplicacin de tcnicas de ingeniera gentica.

Ingeniera gentica en seres vivos

Ingeniera gentica en bacterias
Son los seres vivos ms utilizados en Ingeniera Gentica. La ms utilizada es la
Escherichia coli. Se usa prcticamente en todos los procesos de I.G.
Otra de las aplicaciones ms actuales que se han hecho, ha sido modificar genticamente
bacterias que vivan en el sistema digestivo del ser humano en un lapso mnimo de 6
meses a 1 ao, con el objetivo de disminuir el apetito. Esta investigacin se basa en N-acil-
fosfatidiletanolamina, y N-acil-etanolamina, encargadas de mandar seales al hipotlamo,
que es el encargado de la ingesta de alimentos.
Ingeniera gentica en levaduras y hongos
Son junto con las bacterias los sistemas ms utilizados. El Saccharomyces cerevisiae fue
el primer sistema eucariota secuenciado completamente. Otra levadura importante es P.
pastoris, utilizada para conseguir proinsulina en cultivo discontinuo y quitinasa en cultivo
continuo. En el campo de los hongos destaca por su labor mdica el Penicillium.
Otra aplicacin ha sido la levadura P. pastoris se ha usado para producir grandes
cantidades de protenas, gracias a que es capaz de crecer en los reactores hasta alcanzar
muy altas densidades celulares. Por ejemplo, se ha utilizado para producir quitinasa
humana en cultivo continuo (0,3 g/L/da) o proinsulina humana en un sistema discontinuo
(1,5 g/L).

Ratones knockout.

Ingeniera Gentica en animales

La manipulacin gentica de los animales persigue mltiples objetivos: aumentar el
rendimiento del ganado, producir animales con enfermedades humanas para la
investigacin, elaborar frmacos, etc.
Produccin animal por ingeniera gentica:
Peces transgnicos: las principales aplicaciones en animales se han realizado en peces,
debido a que la fecundacin es externa, lo cual permite la introduccin del gen en el cigoto
antes de que se unan el ncleo del espermatozoide y el del vulo. Se han producido
carpas transgnicas que crecen mucho ms rpido, debido a la incorporacin del gen de la
hormona del crecimiento de la trucha, y salmones transgnicos, que resisten mejor las
bajas temperaturas.
Ingeniera Gentica en plantas
Actualmente se han desarrollado plantas transgnicas de ms de cuarenta especies.
Mediante ingeniera gentica se han conseguido plantas resistentes a enfermedades
producidas por virus, bacterias o insectos. Estas plantas son capaces de producir
antibiticos, toxinas y otras sustancias que atacan a los microorganismos. Tambin se han
conseguido otro tipo de mejoras, como la produccin de distintas sustancias en los
alimentos que aumentan su calidad nutricional, mejorar las cualidades organolpticas de
un producto o que ciertas plantas sean ms resistentes a determinados factores
ambientales, como el fro.
Las tcnicas de ingeniera gentica tambin permiten el desarrollo de plantas que den
frutos de maduracin muy lenta. As, es posible recoger tomates maduros de la tomatera y
que lleguen al consumidor conservando intactos su sabor, olor, color y textura. La mejora
de la calidad de las semillas es tambin un objetivo.
Las aplicaciones farmacuticas son otro gran punto de inters. La biotecnologa permite
desarrollar plantas transgnicas que producen sustancias de inters farmacolgico, como
anticuerpos, ciertas protenas y hormonas, como la hormona del crecimiento.

APLICACIONES DE LA INGENIERA GENTICA

EN MEDICINA E INDUSTRIA FARMACUTICA
Obtencin de protenas de seres vivos
Una serie de hormonas como la insulina, la hormona del crecimiento, factores de
coagulacin, etc., tienen un inters mdico y comercial muy grande. Antes, la obtencin de
estas protenas se realizaba mediante su extraccin directa a partir de tejidos o fluidos
corporales. En la actualidad, gracias a la tecnologa del ADN recombinante, se clonan los
genes de ciertas protenas humanas en microorganismos adecuados para su fabricacin
comercial. Un ejemplo tpico es la produccin de insulina que se obtiene a partir de la
levadura Sacharomyces cerevisae, donde se copia el gen de la insulina en humanos.
Obtencin de vacunas recombinantes
El sistema tradicional de obtencin de vacunas a partir de microorganismos patgenos
inactivos, puede comportar un riesgo potencial. Muchas vacunas, como la de la hepatitis B,
se obtienen actualmente por ingeniera gentica. Como la mayora de los factores
antignicos son protenas lo que se hace es clonar el gen de la protena correspondiente.
Vacunas atenuadas: Se eliminan los genes de virulencia de un agente infeccioso para
provocar una respuesta inmune. El organismo modificado genticamente puede usarse
como lo que es llamado una vacuna viva sin que exista riesgo de que se revierta al tipo
virulento.
Actualmente se est ensayando una vacuna de cepas estables del Vibrio cholerae, ste se
encuentra desprovisto del gen que codifica para su enterotoxina, la cual provoca la
enfermedad. Otro ensayo existente ha sido en la Salmonella, donde se le han quitado
ciertos genes que aunque no son virulentos, convierten a la cepa en atenuada una vez
desaparecidos, es decir que disminuyen su virulencia 1, 000, 000 de veces. Su efectividad
ha logrado demostrarse en ovejas, bovinos, pollos y hasta en humanos recientemente
Vacunas de organismos recombinantes vivos: Para estas se utilizan microorganismos no
patgenos a los cuales se incorporan genes de agentes patgenos que codifican para los
antgenos que desencadenan la respuesta inmune. El virus vacunal tiene un genoma
amplio y secuenciado que permite acomodar varios genes forneos en su interior por lo
que es un vector recombinante muy utilizado. A partir de ste mtodo se ha logrado
desarrollar la vacuna contra la rabia insertando el genoma del virus, provocando la
respuesta inmune en el organismo del hospedador. De igual manera se han ensayado las
expresiones de genes que codifican para antgenos de virus de la hepatitis B, de la gripe y
del herpes simple. Con este mtodo, se podra lograr el desarrollo de vacunas que
inmunicen simultneamente para varias enfermedades, insertando en el virus
recombinante varios genes de distintos organismos patgenos a la vez.
Vacunas de subunidades: Para agentes infecciosos que no se pueden mantener en
cultivo, se aslan los genes que codifican para las protenas causantes de la respuesta.
Dichos genes se pueden clonar y expresar en un husped alternativo tales como bacterias,
levaduras o lneas celulares de mamferos. Luego de insertado el gen de inters, la
bacteria o levadura recombinante inicia con la produccin de subunidades de protenas en
grandes cantidades, mismas que son recolectadas y purificadas para utilizarlas como
vacunas. La vacuna contra la hepatitis B fue la primera puesta en el mercado y siendo
producida por este mtodo.
Vacunas de ADN: Consisten en plsmidos en los que se introduce tan slo una diminuta
cantidad del material gentico del patgeno contra el que se pretende luchar. Al inyectar el
plsmido en el msculo o la piel, ste penetra dentro de la clula y llega al ncleo,
comandando entonces la produccin de los antgenos del patgeno que desencadenarn
la respuesta inmune. As, se traslada la fbrica de la vacuna a los tejidos del husped. En
la actualidad se realizan ensayos de diversas vacunas de este tipo, algunos ejemplos son
la vacuna para la hepatitis B, para la malaria, para la gripe, para el herpes simple y para el
SIDA.
Diagnstico de enfermedades de origen gentico
Artculo principal: Diagnstico gentico preimplantacional
Conociendo la secuencia de nucletidos de un gen responsable de una cierta anomala, se
puede diagnosticar si este gen anmalo est presente en un determinado individuo.
Hasta ahora ha sido posible la localizacin de los genes responsables de la fibrosis
qustica, la distrofia muscular, la hemofilia o el Alzheimer. Para identificar estos genes se
usan sondas de ADN.
La clonacin de genes puede rendir dos tipos de productos: el DNA clonado, til como
reactivo especfico en ensayos de diagnstico por hibridacin o bien los productos
proteicos de los genes clonados (antgenos purificados para inmunodiagnstico en
produccin de vacunas).
Obtencin de anticuerpos monoclonales
Este proceso abre las puertas para luchar contra enfermedades como el cncer y
diagnosticarlo incluso antes de que aparezcan los primeros sntomas.
El interfern fue el primer medicamento producido por ingeniera gentica. Es utilizado
como medicamento complementario a la quimioterapia para la cura del cncer. Su
produccin era cara hasta 1980, pero genes de interfern fueron introducidos en bacterias
usando tecnologa de recombinacin del ADN permitiendo as el cultivo masivo y
purificacin de las emisiones bacterianas.