*La desintoxicacin biolgica de cascarilla de caf por hongos filamentosos

mediante un sistema de fermentacin de estado slido.

Resumen

Los estudios se llevaron a cabo en la desintoxicacin de la cscara del caf

en la fermentacin de estado slido usando tres diferentes cepas de
Rhizopus, Phanerochaete y cepas fngicas de Aspergillus Sp., fueron
seleccionados por su capacidad de crecer en un medio de agar de extracto
de cscara de caf. Usando R.arrizus LPB-79, se obtuvieron los mejores
resultados en la degradacin de taninos (65%) y cafena (87%) con pH 6,0 y
humedad 60% en 6 das. Cuando se utiliz p. chrysosporium BK, la
degradacin mxima de cafena y taninos fueron 70,8 y 45%,
respectivamente, con caf cscara con 65% de humedad y pH 5.5 en 14
das. La cepa de Aspergillus, aislada de la cscara del caf, mostr mejor
formacin de biomasa en medio de agar de extracto de cscara de caf.
Optimizacin de ensayos se realizaron mediante diseo factorial, y
experimentos de superficie de respuesta con Aspergillus sp. Las mejores
tarifas de desintoxicacin alcanzadas fueron 92% para la cafena y el 65%
de taninos. Los resultados mostraron buenas perspectivas de utilizando
estas cepas fngicas, en particular Aspergillus Sp., para la desintoxicacin
de la cscara del caf. 2000 Elsevier Science Inc. Todos los derechos
Reservados.

1. Introduccin

Brasil es el mayor productor de caf del mundo, aportando

aproximadamente el 25% de la produccin mundial. Durante 1999, su
produccin alcanz 2 millones de toneladas. Slo 6% de las cerezas de caf
(base de peso fresco) constituyen el parte produce caf molido; el 94%
restante es obtenidos como subproductos (agua y subproductos tales como
muclago, cscara, etcetera.) [1]. procesamiento de cerezas de caf por los
resultados del "proceso seco" en la cscara del caf como el principal
residuo en aproximadamente el 40% cantidad [2]. Aunque una pequea
cantidad de cscara de caf se utiliza como alimento para el ganado, o en
compost [3], lo hace no se encontr ninguna aplicacin adecuada. Sobre
todo se desecha por las unidades de procesamiento en los ros y lagos
situados cerca de la regiones de procesamiento de caf, que causa una
grave environ- preocupacin mental. En los ltimos aos ha habido una
tendencia creciente hacia la uso eficiente de los residuos agroindustriales
[4-6]. Varios procesos se han desarrollado que utiliza como materias primas
para la produccin de productos qumicos a granel y con valor agregado fino
productos como etanol, solo clula protena (SCP), champi-habitaciones,
enzimas, cidos orgnicos, aminocidos, biolgicamente metabolitos
secundarios activos, etc. [4.7 12]. Aplicacin de la residuos
agroindustriales en bioprocesos en una mano pro-sustratos alternativos de
vides y por otro lado ayuda a resolver problema de contaminacin, que de
otra manera su disposicin puede causar. Con el advenimiento de la
biotecnologa de innova-ciones, principalmente en el rea de tecnologa
enzimtica y fermentacin nology, han abierto muchos nuevos caminos.
Con su riqueza en hidratos de carbono, protenas, grasas y fibras, cscara
de caf parece ser un complemento til de la alimentacin para el ganado
ganado y otros substrato para la bioconversin procesos. Sin embargo,
presencia de antiphysiological y antinu-dades de factores tales como
cafena, taninos y polifenoles lo hace inadecuado para este tipo de
aplicaciones. Varios estudios se han realizado para evaluar la cscara del
caf de un punto de vista de nutricin animal. Baja ingesta, protena
digestibilidad y retencin de nitrgeno son factores lmite-Ing su uso
[13,14]. En consecuencia, la mayor parte de los restos de cscara no
utilizados o mal utilizados. Si los componentes txicos pueden ser
parcialmente removido por lo menos, abrira nuevas vas para su utilizacin.
Ha habido intentos para desintoxicar la cascarilla de caf por mtodos
fsicos, qumicos y microbianos [15 20]. Algunos de los mtodos fsicos y
qumicos lograron buenos resultados pero eran caras. Esto dio lugar a un
enfoque en microbiana mtodos. Fermentacin de estado slido (SSF) ha
sido frecuentemente utilizado para la desintoxicacin biolgica de la
utilizacin de pulpa de caf cepas fngicas [17.20-22]. El objetivo del
presente trabajo fue estudiar la desintoxicacin biolgica de cascarilla de
caf en estado slido fer-utilizando cepas de Rhizopus, Phanerochaete,
sensorio y Aspergillus sp.

2. materiales y mtodos

2.1. caf cscara

Cscara de caf se obtuvo de Cafe Damasco, Curitiba. Se sec en un horno

de aire a 55 C durante 48 h, molido manu-aliado y tamizado para obtener
las fracciones entre 0,8 2,0 mm tamao de partcula. Fue probada para pH,
humedad, azcares, cenizas, lpidos, fibras, nitrgeno, taninos y cafena.

2.2. microorganismos y medios de comunicacin

Un total de 14 cepas microbianas pertenecientes a Rhizopus sp. (11 cepas),

Phanerochaete SP (2 cepas) y Aspergillus SP. (una cepa, aislada de la
cscara de caf) se utilizaron en Este estudio. Las cepas de Rhizopus y
Phanerochaete sp. se mantuvieron en medio papa-dextrosa-Agar (PDA). La
cepa de Aspergillus SP se mantuvo en la cscara del caf medio de agar de
extracto (CHA), que fue preparado por el cocinero-Ing 100 g (peso seco.) de
cascarilla de caf en 1 l de agua destilada durante 1 hora a 100 C. La
solucin resultante se filtr entonces y despus de ajustar el pH como se
desee, se complement con agar bacteriolgico (20 g/l). El medio fue steril-
parte a 121 C por 20 min.

2.3. seleccin de cepas

Todas las cepas fueron seleccionadas por su capacidad para crecer Medio
CHA observando la tasa de propagacin micelial y produccin de biomasa.
Veinte mililitros de CHA me-dium fue llevado en cajas Petri (7,5 cm de
dimetro) que se inoculado en el centro y se incuba durante 5 das a 28, 32,
y 35 C para Aspergillus, Rhizopus y Phanerochaete las cepas,
respectivamente. Se midi el crecimiento micelial cada 2 h para las cepas
de Rhizopus y cada 12 h para Phanero-las cepas de Aspergillus y chaete. Se
midi la biomasa por la disolucin del agar y filtracin en filtro de pesada
papeles. Todos los experimentos se realizaron en tres sets.

2.4. preparacin del inculo

Esporas de las cajas Petri con crecimiento activo 10-culturas da de Rhizopus

y Phanerochaete en PDA medio se recolectaron en 50 ml de agua destilada
con un bucle de platino. Esporas de Aspergillus Sp., en CHA medio se
cosecharon por homogeneizacin con agua destilada agua (50 ml con cinco
gotas de Tween 80) y perlas de vidrio. Las esporas fueron contadas en una
celda de Neubauer.

2.5. fermentacin de estado slido (SSF)

Basado en los resultados de estudios de la proyeccin, tres cepas, es decir,

Rhizopus arrhizus LPB-79, Phanerochaete chryso-sporium BK y Aspergillus
Sp., fueron elegidos por SSF estudios. Cscara de caf fue utilizada como la
nica fuente de carbono y fuente de nitrgeno en SSF. SSF se llev a cabo
tomando sustrato de 20 g en matraces Erlenmeyer de 250 ml. Todos los
experimentos se realizaron con dos repeticiones.

2.6. SSF con r. arrhizus

La fermentacin se llev a cabo por inocular el sustrato (pH 6.0, ajustado

con el 3-N NaOH y humedad 70%) usando 1,25 3 107 esporas/g sustrato e
incubar a 32 C por 6 das. Se realizaron experimentos para optimizar la
inicial pH (5,5 6,5) y humedad (60-70%) del sustrato y adicin de solucin
nutritiva que contiene (g/l) 2 de KH2PO4, Na2HPO4 0.2, MnSO4 z 7H2O 0.5
[modificado de Soccol [23]]. se realizaron un total de 26 carreras.

2.7. SSF con p. chrysosporium

La fermentacin se llev a cabo por inocular el sustrato (pH 5.0, ajustado

con NaOH 3 N; humedad 70%) con 1,29 3 107 esporas/g sustrato e incubar
a 35 C por 14 das. Se realizaron experimentos para optimizar el pH inicial
(4.5 5.5) y humedad (60-70%) del sustrato y en el adicin de solucin
nutritiva. Este contenido (g/l) KH2PO4 1, Z de CaCl2 2H2O 0.7, MgSO4 7H2O
de z 3.5, z de FeSO4 7H2O 0.35, Z de ZnSO4 7H2O 0.23, MnSO4 z 5H2O
0,17 y z de CuSO4 5H2O 0.35 [24]. Se realizaron un total de 26 carreras.

2.8. SSF utilizando Aspergillus sp.

Los mejores resultados en el crecimiento en medio de la CHA y en el
estudios iniciales en SSF con cscara de caf se obtuvieron con Aspergillus
Sp., as que esto fue elegido para el diseo factorial estudios. El tamao de
inculo fue de 1,75 3 107 esporas/g sub -Strate.

2.9. factorial diseo 1

Un diseo factorial 23 0 basado en la superficie de respuesta con tres

factores experimentales en dos niveles y un medio punto fue utilizado para
optimizar el primer paso de las condiciones de pH y humedad del sustrato,
temperatura de fermentacin para alcanzar la mejor desintoxicacin (la
respuesta variable). La tabla 1 muestra real y cdigo experimental
variables. Se realizaron un total de 22 carreras.

2.10. factorial diseo 2

Para alcanzar los mejores parmetros para estudios cinticos, los segundo
diseo experimental fue de un 32 0 que implic la estudios sobre la
influencia del pH y la temperatura significativas mediante el anlisis del
primer diseo factorial ex- periments en tres niveles. La tabla 1 muestra la
real y codificados variables experimentales.

2.11. cintica de la degradacin de la cafena y los taninos del caf de la

cscara por Aspergillus sp.

Los parmetros utilizados en los estudios de cintica fueron: sub - Strate

humedad y pH 4.0 y el 65%, respectivamente, temper - temperatura 28 C y
el inculo tamao 1,75 3 107 esporas/g de substrato. Las muestras se
recogen cada 18 h y se analizaron para pH, cafena y taninos.

2.12. mtodos analticos

Anlisis de cafena, cenizas y lpidos se llevaron a cabo seguimiento Ing la

metodologa descrita por Instituto Adolpho Lutz [25]. taninos fueron
determinados por mtodo de Lowenthal [26] y protenas por el mtodo de
Stutzer [27] (total de protenas como N x 6.25 por mtodo de Kjeldahl).
Totales y azcares reductores fueron analizada por el mtodo de Somogyi
[28].

3.1. composicin qumica de la cscara del caf

Resultados de anlisis qumico demostraron el experimental muestra de

cscara de caf contena (% w/w): humedad, 11.98; lpidos 1,5; fibras 31.86;
ceniza de 6.03; azcares totales 26.5; protena (N total x 6,25) 6,8; protena
(Stutzer) 4.8; cafena 1.2; taninos y 9.3. La composicin qumica del caf la
cscara no ha sido extensamente estudiada en comparacin con el pulpa de
caf, aunque parece que tienen similitudes sus composiciones. Es
interesante notar una diferencia de ser-interpolacin de los valores
obtenidos para protenas (N total 3 6.25) determinada por el mtodo de
Kjeldahl y para protena verdadera determin por el mtodo de Stutzer,
posiblemente debido al ni-Trogen contenido en cafena y otros nitrogenados
compuestos presentes en la cscara de caf. El alto contenido de taninos
fue probablemente porque los granos de caf sol secado, que favoreci la
produccin de estos compuestos en la cscara de caf. Se ha reportado que
podra ser un diferencia en la composicin porcentual de los componentes,
de-pendiente en el modo de procesamiento y la eficiencia, cosecha vari -ETY
y cultivo de condiciones tales como tipo de suelo, etc. [29]. Compara el
contenido de nutrientes de la cscara de caf favor- hbilmente con otros
productos agrcolas tales como avena, arroz, harina de salvado de arroz y
salvado de trigo, que son cada vez ms se utiliza en la dieta del hombre
[30]; sin embargo, debido a la presencia de cafena y taninos, que no puede
competir con Estos residuos.

3.2. seleccin de cepas

Los resultados obtenidos en la produccin de biomasa para todos 14 cepas

fngicas se muestran en la tabla 2. La tasa de propagacin de Cepas de
Rhizopus entre 0,94 mm/h a 2,19 mm/h (datos no se muestra aqu). Se
encontr que las cepas de Rhizopus, que produce una mayor cantidad de
biomasa, correspondida a los que muestran mayor tasa de propagacin.
Entre los Phan-cepas de erochaete, p. chrysosporium BK demostr mejor
por-desempeo. Aunque mostr la cepa de Aspergillus Sp. tasa ms baja de
propagacin micelial (datos no mostrados aqu), su el crecimiento global fue
mejor entre todas las cepas probadas. Basado en la mejor produccin de
biomasa, tres cepas: r. arrhizus LPB - 79, p. chrysosporium BK, y fueron
elegidos el Aspergillus Sp. para estudios de fermentacin.

3.3. la SSF con r. arrhizus LPB-79

En SSF con r. arrhizus, se observ que la el pH fue el parmetro con mayor

influencia en el metabo-levantaron del molde (datos no mostrados aqu).
Humedad de sustrato en la gama experimental tuvo poca influencia sobre
detoxifica- Tion. Los mejores resultados en la degradacin de la cafena
(87%) y taninos (65%) se obtuvieron con pH 6,0 y humedad 60% por 6 das
(datos no mostrados aqu). Soccol [23], mientras que estudio de produccin
de cido fumrico de yuca los desechos, encontr que un pH de 6.0 es ms
adecuado para la actividad de esta cepa. Cscara de caf une una mayor
cantidad de humedad que los materiales con almidn y por lo tanto necesita
ms agua para permita que el nivel de agua necesaria para el molde
crecimiento. [21]. en el presente estudio, la suplementacin de la medio de
fermentacin con la solucin nutritiva no mostr cualquier influencia sobre
el ritmo de desintoxicacin de cafena o taninos, ni el mejor crecimiento de
la cultura fungicida (datos no se muestra aqu). Esto demostr que no era
necesario enriquecer el medio de cascarilla de caf con estos nutrientes.
Esto podra ser tal vez debido a que la cscara de caf contiene varios
minerales segn lo indicado por su contenido alto de ceniza. A la vista de los
resultados anteriores [31], que describe que la adicin de nitrgeno a un
medio de pulpa de caf interfiri con cafena metabolismo por la cultura
fungicida, nosotros no present ninguna fuente de nitrgeno adicional en el
medio

3.4. la SSF con p. chrysosporium BK

En SSF con p. chrysosporium, se encontr alhough el contenido de pH y

humedad afectado la tasa de degradacin de cafena y taninos, el pH tuvo
ms efecto (datos no mostrados aqu). Mejores resultados en la degradacin
de cafena (70,8%) y taninos (45%) se obtuvieron con sustrato con 65% de
humedad y pH 5.5 en 14 das. Jeffries et al [32] divulgado pH 5.5 como el
ptimo para la crecimiento de p. chrysosporium. La cultura, sin embargo,
tom un tiempo ms largo para alcanzar el mejor nivel de degradacin.
Flexible-mentacin del medio de fermentacin de nutrientes no mejorar los
resultados.

3.5. SSF utilizando Aspergillus sp

El primer paso de SSF utilizando Aspergillus SP para la desintoxicacin

humedad de la cscara del caf consisti en el uso de 23-0 diseo factorial
con tres factores estudiados: pH y humedad del sustrato y temperatura de
fermentacin. Resultados (Fig. 1) se sometieron a anlisis de varianza
(ANOVA, ver tabla 3) y la eliminacin no tuvieron efectos significativos; el
los datos obtenidos para la desintoxicacin de la cscara del caf
demostrada que los factores significativos en el nivel de confianza de 5%
fueron los pH del sustrato y la temperatura de fermentacin. El mejor pH y
temperatura fueron 4,5 y 26 C, respectivamente, resultando en un 89% de
cafena y el 56% de la degradacin taninos. En la segunda etapa de
optimizacin, slo dos factores variados: el pH del sustrato (3.0 5.0) y la
temperatura de fermentacin (26 30 C). Los resultados se presentaron a
ANOVA (ver tabla 4). Variacin del pH condujo a un aumento en la tasa de
degradacin a nivel de 5%. Figura 2 se muestra la superficie de respuesta
para la degradacin de la cafena y taninos en funcin del pH del sustrato y
temperatura de la fermentacin. Al parecer la variacin experimental tem-
rango de temperatura utilizado en este paso no caus una significativa
efecto sobre la tasa de degradacin, aunque los mejores resultados fueron
ob-conservarse a 28 C. El pH del substrato demostr su positivo influencia
en la degradacin de estos compuestos. Mejores resultados en la
degradacin de taninos (70%) y cafena (91%) se obtuvo a pH 4.0 y 28 C.

Estudios cinticos de SSF en las mejores condiciones de pH y temperatura

mostr que como el pH aumenta, la cafena y contenido de taninos
disminuida, posiblemente debido a la degradacin (Fig. 3). Hay algunos
informes que describen el metabolismo va de degradacin de la cafena por
bacterias y hongos culturas, con urea como producto final [33,34]. En
hongos metabolismo, los productos intermedios formados fueron
teobromina, paraxanthine y 3-metil xantina [34], que dif-diferentes de las de
fermentacin bacteriana [33]. En el presente estudios, SSF se caracteriz
por una fase de retraso de 18 h. Entonces el pH comienza a aumentar como
la degradacin de la cafena y comenzaron a taninos. Se observ que la tasa
de la degrada -cin de taninos fue ms lento que el de cafena. Despus de
54 h, el pH a 4.8 y la degradacin de la cafena y taninos fue 40% y 27%,
respectivamente. Despus de este perodo, el pH comenz a aumentar y
108 h fue 7.85. En este tiempo, la degradacin de taninos casi haba
parado, en alrededor del 65%. Sin embargo, la degradacin de la cafena
an contin-Ued hasta 144 h hasta un mximo de 92%. El pH disminuy a
7.3.

4. conclusiones

Todo que pertenece de 14 cepas de Rhizopus, Phanerochaete, y fueron

capaces de crecer en la cscara del caf Aspergillus Sp. medio de agar de
extracto, mostrando su resistencia a txicos fac-trminos de referencia
presentes en l. SSF, con tres cepas seleccionadas, mostradas mejor
crecimiento en medio de la CHA y mostr parcial degrada-cin de la cafena
y los taninos presentes en la cscara de caf. Estos experimentos se
realizaron sin nutrientes flexible-ments, demostrando que los
microorganismos eran capaces de utilizar los componentes presentan en la
cscara del caf s degradantes los componentes txicos de la cscara de
caf. La cepa de Aspergillus Sp., que mostr la mayor forma de
biomasa:cin en el medio CHA, dio lugar a la degradacin de la cafena del
92%, mostrando alta eficiencia. Los resultados demostraron el potencial de
la cepas fngicas para la desintoxicacin de la cscara del caf con el
objetivo de su uso en la alimentacin animal o como fermentacin sub-
Strate.

*La 'revolucin del Latte'? Regulacin de los mercados, y el consumo en la

cadena Global de caf

Resumen. El caf es un producto verdaderamente global y una

importante de divisas en muchos pases en desarrollo. La cadena global de
caf ha cambiado dramticamente como resultado de la desregulacin,
nuevos patrones de consumo y desarrollo estrategias corporativas. De una
competencia equilibrada entre productores y consumidores de los pases
dentro de la poltica de acuerdos internacionales del caf, energa las
relaciones cambiaron de puesto a la ventaja de las empresas
transnacionales. A relativamente estable institucional ambiente donde
proporciones de los ingresos generados se distribuyen entre productores y
pases consumidores se convirtieron en uno ms informal, inestable y
desigual. A travs de la Anlisis de la cadena de lentes de materias primas
globales, este documento examina cmo estas transformaciones afectan los
pases en desarrollo y qu instrumentos de poltica estn disponibles para
abordar la nueva de sequilibrios. 2002 Elsevier Science Ltd. Todos los
derechos reservados. @

*** http://www.botanical-online.com/propiedadescafe.htm