FIJACIN.

Su principal objetivo es conservar el detalle morfolgico de la clulas ene l estado lo

ms parecido posible a la clula en el tejido vivo. Esto se consigue con fijadores que
deshidratan las clulas, inactivan los enzimas autolticos, coagulan las protenas y
penetran en la membrana celular.

Es un paso indispensable si no queremos una extensin deteriorada u oxidada que no

tome bien los colorantes y que no permita una correcta lectura cuando se estudia al
microscopio.

La fijacin debe realizarse de inmediato a la toma y la extensin del material citolgico

cuando la preparacin est todava hmeda.

No existe el fijador perfecto, todos causan contraccin celular y cada uno acta con una
velocidad diferente.

REGLAS GENERALES EN EL EMPLEO DEL LIQUIDO FIJADOR:

Para evitar la autolisis, las piezas deben tallarse lo antes posible y no deben ser muy
gruesas ya que en este caso el fijador tardara mucho en penetrar en el centro de la pieza
por lo que es preferible que al tallarlo se hagan cortes con un grosor mximo de 5 mm.
0.5cm.

Si se va a fijar un rgano en bloque para preservar la arquitectura del rgano se deben

realizar incisiones, cortes, sobre su superficie y apertura de sus cavidades internas con el
fin de que el lquido fijador alcance lo ms rpidamente posible el interior del tejido.
Para conseguir una buena fijacin de rganos huecos stos deben ser rellenados con
lquido fijador y atados en sus extremos.

El volumen del fijador respecto al de la pieza, es un punto muy importante para

la fijacin, lo ideal es 1-20 como mnimo.
En la fijacin con lquido que pierden eficacia al utilizarlos hay que ser mucho
ms cuidadoso. Este es le caso del Formol que debe ser renovado cada cierto
tiempo en una misma fijacin, ya que pierde eficacia tambin hay que ser
precavidos en el resto de los fijadores porque generalmente todos los fijadores
con voltiles, por lo que nunca ser empleado el mismo fijador mas de una vez.
Para lograr una fijacin correcta el liquido tendr que estar en contacto con todas
las paredes del tejido, es por eso que no es conveniente meter en un mismo
 frasco varias piezas porque podran pagarse unas a otras y evitar la penetracin
del fijador.
Cada fijador tiene un tiempo de fijacin que va a depender de su capacidad de
penetracin y del tipo de tejido. Si este tiempo de fijacin se prolonga se
produce en endurecimientos en distintas estructuras del tejido. Solo se permitir
la permanencia de un tejido: en un fijador, si adems al tener esta propiedad es
un liquido conservante porque sino se corre el peligro de que bacterias aerobias
descompongan el tejido.
Durante la fijacin se producen accidentes que modifican el estado de la pieza,
los ms importantes son la Hinchazn y la retraccin de los tejidos as como la
alteracin en el color. Si por ejemplo: el acido actico produce hinchazn debido
a que deshace los enlaces formando molculas de agua que son absorbidas por la
pieza. Otros como el acido crmico, alcohol y acetona, realizan el efecto
contrario porque el fijador absorbe el agua del tejido por eso es importante que
la presin osmtica del liquido fijador sea equivalente a la del tejido y que la de
su pH se aproxime al pH fisiolgico salvo que nos interese que su composicin
sea acida. Este ltimo caso nos interesa para descalcificar.
Cada fijador tiene caractersticas negativas y positivas por tanto ninguno es el
mejor y para cada tipo de tejido ser conveniente usas uno u otro. Los fijadores
puros no suelen usarse porque sern buenos fijadores de algunas estructuras pero
estropearan otras. Por ello lo que ms se usan sern las mezclas de varios
fijadores que permiten un campo de trabajo ms amplio.

TIPOS DE FIJADORES.

Fijadores alcohlicos: son la mayora de los fijadores usados en citologa, actan

deshidratando las clulas y coagulando las protenas, su mayor ventaja es que
son fijadores rpidos y su desventaja es que son voltiles e inflamables.

Los ms usados son:

Etanol 96 %: es el fijador de eleccin cuando la tincin posterior es la de Papanicolau.

Produce resultados muy satisfactorios.

La extensin se pone en un bao de etanol al 96 % durante 15 - 20 minutos aunque

puede conservarse indefinidamente siempre que el bao este tapado en el frigorfico.
Se le puede aadir cido actico al 25 % con lo que se lisan los hemates, por ello en
las preparaciones en que se sospecha existencia es una buena solucin para evitar la
dificultad que representara una existencia masiva de hemates recubriendo a los
elementos celulares motivo de estudio. Esta mezcla no debe realizarse en casos en que
se desee realizar una valoracin citolgica hormonal ya que se produce una falsa
eosinoflia que puede llevar a confusin al realizar el recuento para el ndice de
eosinoflia.

Metanol al 100 %.

Propanol e isopropanol al 90 %.

Mezcla de alcohol - ter a partes iguales: da unos excelentes resultados sobre todo tipo
de materiales pero en la actualidad est en desuso por las peligrosas caractersticas
fsico - qumicas del ter que es muy inflamable y voltil.

Lquido de Carnoy: formado por etlico puro, cloroformo y cido actico.

Citospray: es un fijador en forma de aerosol. Es un producto comercial que
contiene una mezcla de alcohol isoproplico y una materia plstica, el
polietilglicol, protectora de la desecacin.

Con este spray se pulveriza toda la superficie del porta de forma rpida y sencilla, se
debe aplicar a 25 - 30 cm. de distancia de la muestra. Se aplica al material citolgico
inmediatamente despus de su extensin en el porta.

Es muy usado por su simplicidad y buenos resultados, se recomienda sobre todo cuando
las extensiones deben ser enviadas a otros laboratorios para su tincin (extensiones
ginecolgicas, cepillados orofaringeos, esofgicos, bronquiales...). Por el contrario debe
evitarse su uso en extendidos de materiales lquidos realizados en el propio laboratorio y
en los hemticos para no provocar agrupamientos de los hemates.

Antes de teir debe extraerse el citospray mediante pases sucesivos de 5 - 10 minutos

cada uno por etanol al 96 %.

Alternativamente y dado que el lquido del aerosol es soluble en agua, al extensin

puede ser teida inmediatamente despus de rociarla, con lo que se acorta el tiempo
total del proceso.
El secado al aire sin fijar se emplea cuando se van a realizar ciertas tinciones como por
ejemplo la de May Crundwald Giemnsa, con esta tincin no se ve bien la cromatina
nuclear y se usa en citologas hematolgicas.

Fijadores

Para preservar muestras ginecolgicas :

Alcohol al 95%- ter.

Alcohol 95% en atomizador o citospray.

Metanol al 100%

Propanol 80%

Isopropanol 80%

Pre-fijador para muestras de lquidos corporales:

alcohol 50%.

Para las PAAF se pueden utilizar:

Alcohol 95%

Formalina buferada al 10%

Secado al aire.

Solucin de formalina buferada neutral:

Formalina 37-40%100ml

Agua 900ml

Fosfato de sodio

monobsico . 4 g

Fosfato de sodio

bibsico 6.5 g.
 Solucin de Bouin

Solucin acuosa de

cido pcrico 1.2 %50ml

Formol 37-40% 250ml

Acido actico glacial

50ml

Fijador de Carnoy

-Etanol 95% 60 ml

-Cloroformo 30 ml

-Acido actico

glacial 10 ml

(en este fijador la muestra no debe permanecer ms de 15 min)

Vapor de formalina: este fijador hemolisa los glbulo rojos y encoge las clulas

Fijador cido Pcrico

-Acido pcrico 1.3 g

-Alcohol etlico 70% 1000ml

MTODOS DE FIJACIN
La fijacin inmediata de los frotis facilita su correcta interpretacin. Las dos formas ms
comnmente usadas son:

Lquidos fijadores (alcohol de 95) y en el mercado Carbowax (polietilenglicol)

Spray
 1. Fijacin hmeda: Sumergir inmediatamente las muestras citolgicas en alcohol
etlico, o equivalentes, por un tiempo mnimo de 15 minutos, otros autores
consideran 30 minutos el adecuado previo al proceso de coloracin. Es el
mtodo ms utilizado y recomendado, por su estabilidad y por no causar
alteraciones fsicas ni qumicas en las clulas. Si se quiere re-usar el fijador, ste
debe ser filtrado.
2. Fijacin hmeda y posterior secado al aire: se colocan las placas en el fijador
(alcohol etlico al 95% - 96%) y despus de 15 minutos se sacan y se dejan secar
al aire para transportarlas al laboratorio donde se deben colocar nuevamente en
el alcohol fijador para el proceso de coloracin.
3. Atomizador (Cito-spray): contiene polmeros o plsticos solubles en agua, se
debe utilizar dejando una distancia aproximada de 15 25 cm. entre la lmina y
el atomizador, esparciendo en forma uniforme el fijador, evitando dejar una
pelcula gruesa sobre la misma. Posteriormente, dejar secar al medio ambiente
unos 10 minutos. Este tipo de fijador debe eliminarse totalmente con agua o
alcohol al 95% antes de efectuar la coloracin, ya que reduce la capacidad de
tincin de los ncleos
4. Secado al aire: consiste en dejar secar al aire los extendidos; como consecuencia
se produce la remocin de agua y oxidacin de las clulas; una vez coloreados
los extendidos, se observa un aumento del ndice eosinfilo y lisis celular. La
rehidratacin se realiza sumergindolo en solucin acuosa con glicerina por 3
minutos seguida por dos lavados con alcohol etlico al 95% y siguiendo la
coloracin de rutina. No es recomendable utilizar este mtodo.

Comentarios:

Un buen fijador, conserva la tensin superficial de las clulas, preserva fielmente

los componentes celulares penetra al interior de las clulas e incrementa la
capacidad de tincin, de tal especialmente los detalles cromatnicos. Su accin
debe ser inmediata y causar mnima alteracin fsica y qumica.
La fijacin debe ser inmediata con el fin de inactivar enzimas autolticas, evitar
la oxidacin, alteraciones morfolgicas y cambios en la tincin celular.
La fijacin como tal, ocurre en los primeros 2 3 minutos, el resto del tiempo
aumenta la adhesin del material al portaobjeto.
Las clulas en el proceso de fijacin obtienen la capacidad para teirse una vez
que se ha realizado la desnaturalizacin y deshidratacin de la porcin gel del
citoplasma. Por medio de la ruptura de enlaces hidrgeno, salinos y de otros
 tipos, se forma una malla que tiende a englobar los componentes de la clula. En
el citoplasma fluido hay una mezcla de solucin verdadera y coloidal de sales,
protenas, carbohidratos, lpidos, cidos orgnicos y enzimas.
La concentracin de alcohol debe estar entre 80% - 100%; concentraciones
inferiores producen lisis celular en los extendidos crvico-vaginales.
Concentraciones menores del 80% se utilizan solamente en muestras de fluidos
orgnicos con aumento de protenas
La rehidratacin en solucin acuosa con glicerina puede ser usado en el caso de
frotis mal fijados por otros mtodos. Las clulas escamosas aparecen
restauradas, pero las de tipo secretoria frecuentemente sufren dao irreparable.
Una fijacin prolongada de varios das o semanas, no altera el preparado.
Procurar que el Spray sea de gotas suaves y parejas. El vehculo del spray puede
congelar y daar las clulas. Es importante respetar la distancia: muy cerca se
corre el riesgo de desalojar las clulas del portaobjeto, lejos no tenemos la
seguridad de la fijacin.
No hay evidencias de que los fijadores en spray sean dainos, pero tampoco lo
contrario, de modo que se debe proteger a la paciente y al profesional usando
campanas o capuchas.
Secado al aire: produce lisis celular, no hay diferenciacin en la coloracin
citoplasmtica, y los ncleos toman color plido.

Fijadores especiales

Solucin de formalina buferada neutral:

Formalina 37-40%100ml

Agua 900ml

Fosfato de sodio

monobsico . 4 g

Fosfato de sodio

bibsico 6.5 g.

Solucin de Bouin
 Solucin acuosa de

cido pcrico 1.2 %50ml

Formol 37-40% 250ml

Acido actico glacial

50ml

Fijador de Carnoy

-Etanol 95% 60 ml

-Cloroformo 30 ml

-Acido actico

glacial 10 ml

(en este fijador la muestra no debe permanecer ms de 15 min)

Vapor de formalina: este fijador hemolisa los glbulo rojos y encoge las clulas

Fijador cido Pcrico

-Acido pcrico 1.3 g

-Alcohol etlico 70% 1000ml

ANEXOS