BIOTEHNOLOGIA INSEMINRII ARTIFICIALE LA TAURINE

Metode de recoltare a spermei la taur

Recoltarea spermei este operaia care are ca scop obinerea spermei de la

reproductor cu ajutorul unei aparaturi adecvate sau prin alte procedee.
Exist mai multe metode de recoltare a spermei:
- cu vaginul artificial;
- electroejaculare;
- masajul ampulelor canalelor deferente i a veziculelor seminale.
a) Recoltarea spermei cu vaginul artificial
Este metoda cea mai utilizat la ora actual. Metoda are ca principiu de baz
crearea unor condiii asemntoare cu cele din vaginul natural, reuita recoltrii
depinznd de realizarea condiiilor de: temperatur, presiune i lubrifiere .
Prile componente ale vaginului artificial sunt: vaginul propriu-zis, cmaa
vaginal, inelele fixatoare, paharul collector.
- Vaginul propriu-zis (corpul), este constituit dintr-un tub cilindric rigid sau
semirigid, constituit dintr-un cauciuc pnzat, ebonit, material elastic, prevzut lateral cu
o montur metalic, ce strbate un orificiu prin care se introduce ap cald i aerul,
necesare realizrii temperaturii i presiunii interioare. Dimensiunile corpului vaginal
difer
de la un tip la altul, cele din ara noastr au lungimea de 50 cm i diametrul de 6,5 cm.
- Cmaa vaginal, este de form cilindric, asemntoare unui manon,
confecionat din cauciuc sau material plastic subire; la capete ea prezint o ngroare,
care permite rularea n momentul asamblrii ei pe corpul rigid. Lungimea sa este de 78
cm i limea de 7 cm.
- Inelele fixatoare, sunt din cauciuc, late de 2 cm, circumferina lor variind n
funcie de diametrul vaginului. Cu ele se fixeaz capetele cmii rsfrnte peste tub.
- Paharul colector, de sperm este confecionat din sticl cu perei dubli, se
fixeaz la unul din capetele vaginului.
209
Pregtirea vaginului pentru recoltare
Asamblarea vaginului se face prin introducerea cmii vaginale n lumenul
corpului vaginal i rsfrngerea ei peste capetele acestuia. ntre cele dou componente
se creeaz astfel un spaiu ce va fi umplut cu ap cald i aer. Pentru fixarea cmii
sefolosesc inele de cauciuc la ambele capete.
Cmaa vaginal trebuie moderat ntins, n aa fel nct s se creeze cute
longitudinale. Cutele helicoidale mpiedic intromisiunea i desfurarea corect a
reflexelor sexuale.
Splarea i dezinfectarea vaginului.

Splarea se face cu ajutorul unor perii cucoad lung, cu ap cldu, n care se

poate aduga o cantitate mic de sod i selimpezete cu ap curent. Sterilizarea
vaginului se face apoi prin autoclavare. n prezent, n centrele de reproducie fiecare
reproductor are dou vagine artificiale, care
dup sterilizare se pstreaz n dulapul de vagine, urmnd ca s se pregteasc
nainte de recoltare.
Introducerea apei calde i a aerului.
Prin orificiul tubului vaginal se introduceap cald la temperatura de 45-50 0C.
Vaginul se ine nclinat n aa fel nct s seintroduc cca. 200-250 ml de ap. Se
introduce apoi aerul realizndu-se astfeltemperatura i presiunea necesar. Dup
introducerea apei i a aerului este necesar cala nclinarea vaginului, la capetele sale s
se observe falduri n form de "H".
Lubrefierea. Cmaa vaginal se unge cu vaselin neutr, dar numai la captul
unde masculul introduce penisul, pe 1/3 din lungimea tubului. Ungerea se face cu
ajutorulunei baghete de sticl.
Fixarea paharului colector. La unul din capetele vaginului artificial se fixeaz
paharul colector, n care se scurge sperma.
Aprecierea temperaturii. Temperatura peretelui interior al vaginului se ia cu
termometru, ntre dou falduri formate de cmaa vaginal. Temperatura n interiorul
vaginului n momentul recoltrii trebuie s fie de 40-42 0C.
Recoltarea propriu-zis. Recoltarea se face ntr-o sal special amenajat, curat
i uscat. nainte de recoltare regiunea abdominal a taurului donator i partea
posterioar a manechinului vor fi splate, uscate i dezinfectate. Prul prepuial va fi
tiat scurt. Saltul n vederea recoltrii mai poate fi fcut pe o vac sau un manechin.
Cnd recoltarea spermei se face folosind ca suport o femel sau un taur,
operatorul se aeaz de obicei pe latura dreapt, innd cu mna dreapt vaginul
artificial, apropiat de crupa femelei i nclinat sub un unghi de 35-45 0 fa de coloana
vertebral. n momentul cnd taurul sare pe manechin, aplicarea vaginului se va face
atunci cnd penisul este la nceputul ereciei i taurul se mic spre nainte. Dirijarea
penisului spre orificiul vaginal se va face cu mna stng pe traversul furoului, fr a-l
strnge prea tare sau a-l brutaliza.
Dup efectuarea unor micri caracteristice, taurul ejaculeaz, actul ejaculrii
durnd doar cteva secunde. Dup ejaculare, vaginul se retrage uor de pe penis pe
msur ce masculul coboar jos de pe manechin. Pentru reuita ejaculrii este necesar
ca vaginul artificial s fie bine pregtit i s aib: temperatur, presiune i lubrifiere
apropiate de vaginul vacii n clduri.
Numrul ejaculatelor. Cea mai mare cantitate de sperm se obine prin
recoltarea a 4 ejaculate/sptmn, cte 2 ejaculate pe ziua de recoltare, cu o pauz
de3-4 zile. n ce privete frecvena recoltrii, aceasta depinde de ras, individ i
pregtirea sexual a reproductorul.
Insuccesele recoltrii. Greeli n pregtirea vaginului i anume:
- aezarea defectuoas a cmii vaginului (prea ntins, falduri n spiral etc.);
- temperatura prea ridicat sau prea sczut a vaginului artificial;
- presiunea prea slab sau prea mare n vagin n timpul recoltrii;
- poziia defectuoas a vaginului n timpul recoltrii etc.
b) Recoltarea spermei prin electroejaculare
Este o metod de ultim instan, indicat doar pentru taurii care i-au pierdut
reflexele sexuale, sau care prezint afeciuni ale membrelor sau podale, ce fac imposibil
saltul. Se execut de asemenea taurilor cu inhibiii ale reflexelor de mbriare i
ejaculare, celor lipsii de apetit sexual.
 Metoda const n excitarea electric a centrilor ejaculrii cu ajutorul unui aparat
electroejaculator. Aparatul este format dintr-o surs de curent (baterie) i un electrod.
nainte de elecroejaculare, taurul va fi pregtit prin vidarea materiilor fecale din
rect, prin splarea acestuia cu soluie 5% NaCl, care va facilita conductibilitatea
electric,splarea regiunii furoului cu o soluie de bicarbonat de sodiu, scurtarea prului
prepuial.
Se introduce electrodul n rect i se aplic la nceput 15-20 excitaii electrice
exercitate pe o durat de 2-3 secunde fiecare, cu pauze alternative de 60 secunde.
Intensitatea excitaiilor crete treptat de la cca. 100mA la 800-1500mA, mrind totodat
i durata de aplicare pn la 5-6 secunde. Ejacularea se produce la fiecare excitare,
obinndu-se la nceput secreiile glandelor anexe i apoi fraciunile cu
coninut n spermatozoizi. Durata total a recoltrii variaz de la 5-10 minute, cantitatea
de sperm obinut este relativ mai mare dect cea recoltat cu vaginul artificial,
datorit secreiilor abundente ale glandelor anexe. Ejacularea poate s se
produc fr erecie sau cu erecie parial.
c) Recoltarea spermei prin masajul ampulelor canalelor deferente i
a
veziculelor seminale
Aceast metod are aceleai indicaii ca i electroejacularea. Pregtirea
reproductorului pentru recoltare este asemntoare cu ceea ce se face n vederea
electroejaculrii; contenia taurului n stand sau travaliu, tierea perilor prepuiali, toaleta
furoului. Se ncearc vidarea vezicii urinare prin masaj transrectal, pentru a evita
amestecul spermei cu urina.
Se videaz ampula rectal i se trece apoi la identificarea veziculelor seminale i
ampulele canalelor deferente. Masajul se va efectua n direcie cranio-caudal pe o
distan de aproximativ 30 cm timp de 3-5 minute, dup care de obicei se produce
ejacularea. n timpul eliminrii spermei, testiculele sunt uor retrase spre inelul inghinal,
iar glandul iese parial din teaca furoului, fr ca penisul s intre n erecie.
Unii tauri nu rspund favorabil la aceast metod. n cazul c nu se obine
eliminarea spermei n 8-10 minute, se recomand s se renune la masaj i operaiunea
s fie reluat n ziua urmtoare.
Metoda este practic i avantajoas, nu necesit condiii speciale de recoltare
(aparatur, construcii, ambian), dar ea nu poate fi aplicat dect de cadre cu bune
cunotine n topografia practic a tractusului genital masculin.
Examinarea i aprecierea spermei la taur
Imediat dup recoltare se face aprecierea cantitativ i calitativ a spermei.
Aprecierea macroscopic, cu ochiul liber se refer la:
- volumul ejaculatului care este n medie de 3-5 ml cu variaii ntre 1-14 ml. Taurii
tineri ejaculeaz n general mai puin sperm;
- culoarea spermei la taur, alb-crem sau cu o nuan uor glbuie;
- consisten asemntoare smntnii;
- mirosul caracteristic de os fiert i ras sau de lapte;
- prezena impuritilor sau a altor modificri de culoare, miros, consisten.
Aceast apreciere macroscopic a spermei trebuie ntotdeauna completat cu
unele determinri de laborator: microscopice i biologice, care s-i permit s fie trecut
n fluxul tehnologic pentru diluare i conservare i anume:
- desimea spermei: pentru diluare s fie notat cu M (mijlocie);
- prezena sau absena valurilor spermatice;
- mobilitatea spermatozoizilor, cel puin 70% spermatozoizi mobili;
- concentraia: s fie cel puin 600 milioane spermatozoizi per ml;
- proporia spermatozoizilor normali s fie de cel puin 80%, iar formele patologice
de cel puin 3% spermatozoizi imaturi;
- rezistena la soluie de NaCl s fie de 5000.
Diluarea i conservarea spermei la taur
Diluarea i conservarea spermei la taur sunt operaii prin care se asigur
meninerea puterii fecundante a spermatozoizilor un timp variabil, n afara cilor
genitale.
La conservarea spermei se folosesc medii care conin soluii protectoare, nutritive,
neutralizante.
Pentru aceasta este nevoie n primul rnd de gsirea i aplicarea acelor metode,
care s permit reducerea ct mai complet, dar reversibil a metabolismului
spermatozoizilor. Aceasta se realizeaz prin oprirea sau reducerea temporar a
activitii metabolice prin aciunea temperaturii sczute, care pentru a putea fi suportat
de celula seminal are nevoie n prealabil de tratarea spermei cu soluii protectoare.
Diluarea spermei se face cu scopul de a fraciona ejaculatul, n vederea mririi
numrului de dozede inseminare a vacilor, de a asigura mediul nutritiv n vederea
conservrii.
Prin diluare, dintr-un singur ejaculat exist posibilitatea inseminrii a cca. 150-200
vaci.
Diluantul folosit trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii: s fie izotonic cu
sperma, s fie izotermic, s nu conin substane toxice pentru spermatozoizi, s aib
unpH favorabil meninerii viabilitii spermatozoizilor, s aib putere nutritiv mare.
Medii de diluie
Au fost fcute multe investigaii n sensul de a gsi medii de diluii care s
satisfac n ntregime cerinele ce se cer unui diluant bun.
Exist diluani pentru: conservarea spermei la temperatura camerei, conservarea
n stare de refrigerare, conservarea spermei prin congelare.
Dup compoziia chimic a diluanilor folosii n diluarea spermei, acetia se pot
grupa n 2 mari grupe i anume:
- diluani preparai pe baza substanelor chimice (citrai, fosfai, tartrai, sulfai etc.);
- diluani organici (lapte, hormoni, extracte tisulare etc.)
Diluani chimici
a) Diluani cu glbenu de ou. Ap distilat 100 ml, 2, 9 g citrat de sodiu + 2 H 2O,
glbenu de ou 20%.
Se prepar soluia salin din 29 g citrat de sodiu ntr-un litru de ap bidistilat, apoi
se sterilizeaz prin fierbere sau autoclavare. n ziua dilurii, spermei se adaug 20%
glbenu de ou proaspt. La ntregul diluant apoi se adaug antibiotice: 1000 U.I.
penicilin i 500-1000 gama-dihidrostreptomicin. Se pot folosi concentraii diferite de
citrat de sodiu 3,2-3,6% n loc de 2,9%.
b) Glbenu de ou, citrat cu glicerin. La diluantul cu glbenu de ou citrat se
adaug 2% glicerin pur. Dup 3 zile de conservare acest diluant prezint o fecundaie
mai bun dect a diluantului cu glbenu de ou citrat neglicerinat.
c) Diluantul TRIS cu glbenu de ou glicerinat, fructoz i acid citric
TRIS hidroximetil-aminomentan..................... 6,056 g
Acid citric..................................................3,0 g
Fructoz.......................................................2,50 g
Ap distilat................................................166,320g
Dup prepararea soluiei, aceasta se nclzete la 90 0C, apoi se rcete i se
mparte n dou jumti egale. naintea de folosirea uneia din pri se adaug 15,840 g
214
ap bidistilat, 25 g glbenu de ou proaspt, 0,1 g streptomicin i 100.000 U.I.
penicilin G. La cealalt parte a diluantului se adaug 19,68 g glicerin pro analisis, 25g
glbenu de ou proaspt, 0,1g streptomicin i 100.000 U.I. penicilina G., pH-ul trebuie
s fie ajustat la 6,85.
Diluant pe baz de lapte
n ultimul timp, aceti diluani prin calitile lor s-au rspndit foarte mult. Ei au
avantajul c sunt naturali, se prepar uor, ofer o protecie bun i favorizeaz o
fecunditate foarte bun.
a) Diluant omogenizat pe baz de lapte pasteurizat. Pentru acesta se folosete
lapte cu 3,5% grsime. Laptele se nclzete indirect ntr-o sticl cu perei dubli i apoi
se
fierbe timp de 20 minute. Se rcete i se filtreaz pentru a ndeprta proteinele
coagulate prin fierbere. Se adaug antibioticele obinuite: 500 U.I. penicilina G i 500
gama - streptomicin/ml diluant.
b) Diluant pe baz de lapte smntnit. Se prepar dup acelai procedeu descris
mai sus. Acesta are avantajul c lipsind globulele de grsime, este mai facil examenul
microscopic, al spermei, dar procentul de fecunditate este inferior.
c) Diluant pe baz de lapte praf. La un litru de ap bidistilat se adaug 100 g
lapte praf smntnit, apoi se fierbe la foc mic timp de 10 minute, ntr-un vas conic. Dup
rcire, se completeaz apa pierdut prin evaporare, se adaug apoi antibiotice, laptele
praf urmnd s fie folosit cel mult 7 zile de la deschiderea cutiei.
Ali diluani
n scop experimental i de cercetare, s-a ncercat diluarea spermei cu esut
embrionar preparat din embrion de pui, cu glbenu de ou, plasm sanguin, plasm
seminal, extract tiroidian etc.
Unele firme au preparat diferii diluani care au fost pui n comer ca de exemplu:
Laiciphos (preparat francez), Spermosol, Spermasol-M.Dilopten, Triladil (Germania),
Seminam i Neuseminam (Japonia), Caprogen (Noua Zeeland) etc.
a) Laiciphos este preparat din lapte ecremat, sterilizat, citratat i fosfatat cu adaos
de zaharuri i antibiotice;
b) Spermosol, preparat din citrat de sodiu, fosfat de potasiu i gelatin, la care se
adaug 10-30% glbenu de ou.
A. Diluarea i conservarea spermei prin refrigerare
La diluarea i conservarea spermei trebuie s se respecte anumite reguli, de care
depinde reuita procesului i anume:
- sticlria folosit s fie bine sterilizat;
- diluantul, sperma i sticlria s aib aceeai temperatur, pentru a se evita ocul
termic;
- cnd se efectueaz amestecul, ntotdeauna se va turna diluantul peste sperm.
Diluarea spermei refrigerate prezint dou etape: pregtirea diluantului i diluarea
propriu-zis.
1) Pregtirea diluantului. n 100 ml ap bidistilat se adaug substanele chimice
stabilite: citratul de sodiu, glucoza etc. conform reetei. Pentru aseptizare se adaug
cantitatea de antibiotice stabilit (1000 U.I. penicilin, 500 U.I. gama streptomicin).
Adugarea glbenuului de ou: oul se spal, se dezinfecteaz cu alcool, apoi se
sparge, separnd albuul de glbenu. Apoi glbenuul se pune pe o bucat de hrtie
de
filtru, prevzut cu un orificiu la mijloc. Se rostogolete glbenuul de cteva ori n jurul
orificiului, apoi hrtia se pliaz i coninutul se va scurge ntr-un pahar Berzelius sau
cilindru gradat, unde se afl soluia salin. Se omogenizeaz apoi coninutul pentru a
rezulta o suspensie foarte fin. O mic cantitate de diluant va fi introdus la termostat
pentru a ajunge la 370C, cea mai mare cantitate lsndu-se la temperatura de laborator.
2) Diluia. Ea se realizeaz n doi timpi i anume:
- n primul timp se realizeaz diluia iniial. Imediat dup recoltarea spermei i
preluarea probelor pentru efectuarea examenelor obligatorii, materialul seminal este
turnat n recipiente gradate cu perei dubli, peste care se adaug aceeai cantitate de
diluant la 370C. Dup o perioad de echilibrare de 20-30 minute la temperatura de
laborator, se nltur apa din sticla cu perei dubli i se trece la efectuarea diluiei finale.
Cantitatea de diluant, care se adaug n al doilea timp, se apreciaz n funcie de
gradul diluiei. Astfel, dac gradul diluiei este 1/5, se vor mai aduga 3 pri de diluant,
deoarece o parte a fost pus n diluia iniial. Aceast diluie se realizeaz la
temperatura de laborator 18-220C.
Sperma diluat se introduce n fiole mici (doze), trecute n cutii de bachelit i
pstrate la frigider la temperatura de 0-5 0C. De aici ele sunt expediate la punctele de
nsmnare n termos cu ghea.
B. Diluarea i conservarea spermei prin congelare
Consideraiile teoretice ce stau la baza congelrii sunt: adaosul de glicerin n
mediul de diluie al spermei, ce are ca efect protecia structurii spermatozoizilor. Efectul
protector al glicerinei s-ar prea c se realizeaz pe 2 ci i anume:
- prin modificarea cristalizrii lichidului seminal, ceea ce reduce traumele mecanice
pe care le sufer spermatozoidul n timpul cristalizrii;
- prin ptrunderea glicerinei n interiorul spermatozoidului i nlocuirea coninutului
n ap, care n cursul procesului de congelare n afara celulei mpreun cu ntreg
coninutul su de electrolii, anihilnd sau mcar reducnd n acest fel efectul duntor
al concentraiei intracelulare asupra spermatozoidului.
Concentraia de glicerin este n funcie de diluantul folosit, n glbenu de ou
citratat 7,5%, n lapte 7%, iar glicerina se adaug lent i fracionat n condiiile unei
temperaturi de +40C. Sperma va fi mai nti diluat cu un mediu srac sau lipsit de
glicerin pn la 1/2 din diluia final prevzut, apoi este rcit la +4 0C, dup care n
decurs de o or se adaug o parte de diluant egal cu un coninut de 14-15% glicerin.
nainte de congelare trebuie s se atepte cel puin 6-8 ore, perioad care constituie
echilibrarea obligatorie a spermei cu noul mediu de diluie.
Exist mai multe procedee de congelare a spermei:
- congelarea n paiete;
- congelarea n fiole;
- congelarea n granule (n pastile).
Redm pe scurt etapele principale ale congelrii spermei n paiete, procedeu care
este cel mai rspndit i la noi n ar.
Congelarea spermei n paiete a fost elaborat n 1965 n Frana de ctre Cassou
i Jourdain. Paieta are lungimea de 133 mm, din plastic, rezistent la variaii mari de
temperatur.
Exist 3 tipuri de paiete:
- paiete mari cu diametrul de 3,8-4,2 mm i capacitatea de 1,2 cm 3;
- paiete mijlocii cu diametru de 2,5-2,8 mm, capacitatea de 0,5 cm 3;
- paiete mici (fine) cu diametru de 1,7-2 mm i capacitatea de 0,25 cm 3.
n ara noastr sunt cunoscute numai paietele mijlocii i mici (fine).

Inocularea spermei la rumegtoarele mari

a) Depistarea femelelor n clduri

n vederea obinerii unei bune fecunditi este necesar descoperirea la timp a
femelelor n clduri
n condiiile creterii intensive, uneori n stabulaie permanent, depistarea
cldurilor dac nu este imposibil, n orice caz este greu de realizat. Cldurile sunt
apreciate de ctre practician prin modificrile organelor genitale; vulva, vestibulul
vaginal i vaginul. Cu o zi nainte de apariia cldurilor, ncep s fie congestionate i
edemaiate, labiile vulvare se ngroa. Caracteristic pentru faza de clduri este c
femelele accept saltul partenerelor, iar la nivelul comisurii vulvare se scurge un mucus
sticlos, filant. n primele ore ale cldurilor mucusul este abundent, filant, transparent i
lichid, lipindu-se de regiunea vulvar i fese. Odat cu avansarea cldurilor consistena
mucusului crete, ajungnd ca la mijlocul cldurilor s prezinte elasticitatea maxim.
Transrectal, coarnele uterine sunt erectile. Foliculul ovarian la nceputul cldurilor este
relativ mic, ca un smbure de cirea, proemin la suprafaa ovarului, dar nu se simte
fluctuaia.
La mijlocul cldurilor, foliculul ovarian este mult evoluat de mrimea aproape a
unei ciree cu pereii mai subiri, cu lichid sub tensiune, simindu-se i o uoar
fluctuaie.
n acest stadiu se poate executa nsmnarea (monta). Spre sfritul cldurilor,
foliculul de Graaf ajunge la un diametru de aproximativ 15-20 mm, cu pereii subiri i cu
fluctuaie evident, foliculul schimbndu-i forma la cea mai uoar apsare. Acest
stadiu este cel mai apropiat de ovulaie i cel mai favorabil pentru efectuarea inseminrii
artificiale.
b) Momentul optim al inseminrii la vac
Corobornd toate semnele cldurilor, psihice, fizice, morfofuncionale de
manifestarea acestora, pentru a avea un indice maxim de fecunditate,
inseminarea trebuie fcut cnd:
- femela accept salturile celorlalte femele din jur (dac exist);
- prezint vulva edemaiat i scurgerea la nivelul comisurii inferioare vulvare a
unui mucus filant transparent;
- prezint coarnele uterine erectile (cu tonus);
- prezint foliculul cu fluctuaie evident i sub tensiune.
c) Pregtirea instrumentarului
Instrumentarul pentru inseminare este n funcie de metoda ce se aplic: cu
speculum vaginal sau recto-vaginal i n funcie de prezentarea materialului seminal
(refrigerat, congelat n paiete, fiole sau granule).
Pentru inseminare cu speculum vaginal este necesar: sterilizarea speculumului;
sursa de lumin; pipet de sticl sau material plastic, o par (suzet) de cauciuc; lamp
frontal.
Pentru inseminarea la care materialul seminal este n paiete, avem nevoie de un
pistolet pentru inseminarea artificial, iar pentru cazurile n care sperma este n fiole, de
o pipet i o suzet din cauciuc.
d) Decongelarea i reanimarea spermatozoizilor
Sperma refrigerat. Pentru reanimarea spermatozoizilor se extrage doza de
inseminare din cutia de bachelit, care se afl n termosul de ghea i se las cteva
minute la temperatura camerei. Sperma nu va fi lsat la temperatura camerei mai mult
de 30 minute, pentru c scade mobilitatea i capacitatea fecundant peste aceast
durat.
Decongelarea. Aceasta se face n funcie de modul de congelare i ambalajul
spermei congelate, dar cu toate acestea exist i unele recomandri comune i anume:
- decongelarea s se fac ct mai repede;
- ntre momentul decongelrii i cel al inseminrii, temperatura spermei reanimate
trebuie s fie n continu cretere. Scderea temperaturii decongelante numai cu
cteva grade provoac o degradare a spermei. Cu ct intervalul ntre decongelare i
inseminare este mai scurt, cu att fecunditatea este mai bun, nu trebuie s treac mai
mult de 15 minute;
- instrumentarul de inseminare s aib cel puin aceeai temperatur ca i sperma
sau chiar ceva mai ridicat;
- extragerea dozelor trebuie fcut foarte rapid. Pentru decongelare este nevoie de
un termos cu baie marin de 36-400C i un termometru cu mercur.
n funcie de recipientul n care s-a fcut congelarea spermei, pentru reanimarea
prin decongelare a acesteia, este necesar s se procedeze de maniera urmtoare
(recipient, fiol):
- pregtirea unei bi marine la 38-390C;
- deschiderea containerului, ridicarea canistrei pn la gtul containerului,
extragerea fiolei, cufundarea ei n baia marin;
- reaezarea canistrei i nchiderea containerului;
- scoaterea, tergerea i uscarea fiolei;
- deschiderea fiolei prin tierea gtului acesteia;
- aspirarea spermei n pipet
Decongelarea materialului seminal stocat n paiete:
- pregtirea bii marine la 34-370C;
- deschiderea containerului, ridicarea canistrei pn la cel mult 3-4 cm sub nivelul
superior al containerului, scoaterea paietei, scuturarea ei de eventualele resturi de azot
i cufundarea n baia marin pentru decongelare; decongelarea dureaz 13 secunde
pentru paieta mijlocie i 8 secunde pentru paieta fin;
- reaezarea canistrei i astuparea containerului;
- nclzirea corpului metalic al pistolului, prin frecarea cu hrtie sau vat (att vara
ct i iarna);
- scoaterea paietei din baie, uscarea ei prin tergerea cu tifon sau prosop; rularea
ntre degetul arttor i cel gros a captului astupat cu dopul uzinal, pentru favorizarea
desprinderii i alunecrii sale n momentul inseminrii;
- transferarea bulei de aer ctre captul astupat cu un dop de laborator sau sudat
cu ultrasunete, prin lovirea uoar, repetat a corpului elastic al paietei; n acest timp,
paieta se ine n poziie vertical cu dopul uzinal n jos;
- introducerea paietei n pistoletul de inseminare, cu dopul uzinal n interiorul
corpului pistoletului;
- tierea vrfului paietei cu o seciune perfect perpendicular pe axul longitudinal, la
mijlocul bulei de aer;
- aplicarea peste vrful paietei a pipetei de plastic i asamblarea etan a acestora,
astfel nct sperma s nu refuleze;
- mpingerea uoar a pistolului, pn cnd la vrful pipetei de plastic apare o lentil
de sperm, semn c montarea pistoletului este corect.
223
S nu se decongeleze mai multe paiete n acelai timp, ci decongelarea s
precead fiecare inseminare. De la decongelare i pn la inseminare nu trebuie s
treac mai mult de 15 minute.
e) Controlul spermei conservate
Controlul spermei se face de regul prin examenul microscopic pentru observarea
mobilitii spermatozoizilor, de obicei din ultima fraciune de sperm, rmas prin
aderen n vrful pipetei de inoculare.
f) Inseminarea propriu-zis
Metod. Dup ce s-a fcut reanimarea, materialul seminal este aspirat n pipet
sau pistoletul de inseminare, iar operatorul se pregtete pentru inseminare.
Exist mai multe metode de inoculare a spermei i anume:
- metoda recto-cervical;
- inseminare cu speculum (aceste metode sunt cele mai utilizate);
- inseminare prin traciune i evidenierea exterioar a cervixului (metoda italian rar
folosit);
- inseminare vaginal prin control manual.
1. Metoda recto-cervical. Este metoda cea mai utilizat astzi. Operatorul dup
ce videaz cu mna dreapt ampula rectal de fecale, examineaz starea coarnelor
uterine i ovarele pentru a constata modificrile determinate de instalarea cldurilor i
dezvoltarea foliculului ovarian. Apoi retrage mna, efectueaz o toalet minim, iar cu
ajutorul degetul mare i index, ndeprteaz partea inferioar a labiilor vulvare pentru a
examina starea vestibulului i clitorisului, apoi cu mna stng introduce pipeta sau
pistoletul de jos n sus, dirijndu-le spre plafonul vestibulo-vaginal, pn ajunge n
fundul vaginului. Mna dreapt, cu mnua obstetrical este plasat din nou n rect,
fixeaz cervixul i cu degetul mic repereaz orificiul vaginal al cervixului (fig. 22). Cu
mna stng se dirijeaz vrful pipetei spre degetul mic, ncercnd prin micri uoare
s repereze orificiul cervical. Odat reperat ostiumul cervical, mna stng execut
uoare presiuni asupra pipetei, iar cu mna dreapt se fac micri, care faciliteaz
ptrunderea pipetei pn la nivelul corpului uterin, cnd simim vrful pipetei sau
pistolului prin traversul peretelui uterin. Ptruns fiind pipeta la nivelul uterin, cu mna
stng se apas pe suzet sau se apas pe piston pentru inocularea spermei. Este
indicat ca sperma s fie depus n apropierea deschiderii coarnelor uterine sau chiar la
nivelul marii curburi.
Avantajele metodei:
- ofer posibilitatea aprecierii strii uterine i a dezvoltrii foliculului ovarian;
- se depune mai profund doza de sperm;
- reduce pericolul rspndirii infeciilor genitale;
- folosete un instrumentar mai simplu, uor de manipulat.
Dezavantajele metodei:
- nu permite examenul mucoasei vestibulo-vaginale i a strii cervixului sau
descoperirea diverselor anomalii vagino-cervicale;
- necesit mai mult pricepere din partea operatorului.
2. Metoda cu speculum vaginal. Aceast metod const n introducerea pipetei
de inseminare n cervix dup o prealabil deschidere a conductului vestibulo-vaginal cu
ajutorul speculului vaginal.
Se face toaleta regiunii vulvare cu ap i spun sau practic se dezinfecteaz
numai cu un tampon de vat cu alcool. Speculumul vaginal dezinfectat, lubrefiat i
avnd temperatura apropiat de cea a corpului femelei, se introduce pe la nivelul
labiilor-vulvare, care vor fi uor ndeprtate de ctre operator i ajutor, pentru facilitarea
introducerii. Se introduce cu valvele nchise i I se d o nclinare de jos n sus cu marele
ax vertical. Speculumul ntmpin o rezisten la nivelul muchilor vestibulari, apoi el
ptrunde cu uurin, ndeprtnd pereii, cnd se aude un zgomot de aspiraie. Ajuns
la nivelul vaginului, se rotete cu 900, dup care se deschide. Cu ajutorul lmpii frontale
se examineaz starea mucoasei vaginale, a cervixului, ntredeschiderea sa i mucusul
sau eventualele anomalii. Cu mna dreapt se introduce pipeta sau pistoletul de
inseminare, prin tunelul realizat de speculum, pn n cervix, cutnd prin dirijarea
pipetei n toate sensurile, s ptrund ct mai profund n canalul cervical.
Apoi, depunerea spermei se realizeaz ca i la metoda de mai sus, prin apsarea
ntre degete a suzetei de cauciuc sau a pistonului pistoletului. Este de notat s nu se
elibereze presiunea de pe suzet sau de pe piston, pentru ca sperma s nu fie
reabsorbit.
Avantaje: este mai uor de executat pentru operator, se poate examina starea
mucoasei vaginale, se poate examina cervixul.
Dezavantaje: atunci cnd nu se respect, sterilizarea specumului i aducerea la
temperatura corpului, se pot transmite boli sau se declaneaz secreie de adrenalin
prin speculum rece, traumatisme etc., sperma se depune adeseori la nivelul cervixului.

Bibliografie: Curs fiziologia reproductiei, Ciupe

Simona
 Lucrari practice fiziologia reproductiei,
Ciupe Simona

BIOTEHNOLOGIA INSEMINRII ARTIFICIALE

LA TAURINE

Grofu Petrisor Alexandru

Grupa 6

Anul 4