Sunteți pe pagina 1din 7

Experiene pe preparat neuromuscular 7

EXPERIENE PE PREPARAT NEUROMUSCULAR


Dr. Metz Jlia, Dr. Szilgyi Tibor

PRINCIPII TEORETICE

Micarea este o manifestare elementar a vieii. Muchiul striat de tip scheletal asigur
micarea i/sau fixarea articulaiilor, dar acest tip de muchi gsim i la sfincterul extern al
anusului i a tractului urinar, la musculatura orofaringean i treimea superioar a
esofagului, la diafragm i la muchii mimici.
n mod normal muchiul striat scheletal nu are activitate spontan. Singura modalitate
de contracie fiziologic este prin activarea nervilor motorii periferici. Un motoneuron i
celulele musculare inervate de acesta constituie unitatea motorie. Celulele musculare din
cadrul unei uniti motorii se contract sincron.
Depolarizarea pn la prag a motoneuronului alfa din mduva spinrii declaneaz un
potenial de aciune, care se propag de-a lungul axonului spre periferie. Propagarea este
autoregenerativ, deci impulsul nervos nu este atenuat de-a lungul axonului. Transmisia
excitaiei de la motoneuron la celulele musculare are loc la jonciunea neuromuscular. n
terminaiile presinaptice ale axonului se gsesc multe vezicule cu coninut ridicat de
acetilcolin. Potenialul de aciune cauzeaz depolarizarea membranei, deschiderea
canalelor de calciu voltaj dependente i creterea concentraiei de calciu intracelular, care
cauzeaz eliberarea acetilcolinei din vezicule. Acest neurotransmitor traverseaz foarte
repede fanta sinaptic i se leag de receptorii postsinaptici de pe celula muscular. La
muchiul striat scheletal se gsesc receptori nicotinici ai acetilcolinei. Acest receptor este un
canal ionic dependent de liganzi. n cazul legrii acetilcolinei se deschide canalul i permite
curgerea unui curent cationic mixt (preponderent curent de Na+), care depolarizeaz
membrana. Cnd celula muscular ajunge la prag, se declaneaz potenialul de aciune,
deschiderea canalelor de calciu, intrarea calciului n citosol, creterea concentraiei de Ca2+
i contracia consecutiv a muchiului. Detaliile cuplrii electro-contractile este aceeai ca la
inim (cursul din primul semestru).
Contracia muchiului scheletal se poate declana experimental prin stimulare
electric. Pe baza celor prezentate mai sus, exist dou modaliti de stimulare:
stimulare direct, cnd electrodul este aezat direct pe muchi i cauzeaz
depolarizarea acestuia
stimulare indirect, cnd nervul periferic este excitat i impulsul nervos generat va
declana contracia.

Scopul acestei lucrri este studierea fenomenelor electrice i mecanice legate de


activitatea nervilor motorii i a muchiului striat scheletal.

PREGTIREA PREPARATULUI NEUROMUSCULAR IN VITRO

Dup anestezie i decapitare, broasca imobilizat, eviscerat, tiat n dou va fi


jupuit. Dup splarea planetei se taie longitudinal bontul coloanei vertebrale i se prepar
nervul sciatic pn la trecerea sa prin gaura obturat. Se taie apoi centura pelvian, avnd
grij ca nervul sciatic s nu fie lezat. ntre timp pentru mpiedicarea uscrii nervului udm
preparatul cu soluie Ringer. Dup tierea centurii pelviene se desface musculatura coapsei
cu ajutorul degetelor pe partea dorsal pn ce apare nervul ntre muchi. Continum apoi
prepararea nervului cu foarfeca pn ce ajungem la articulaia genunchiului, secionm
transversal muchii coapsei deasupra articulaiei, secionm i osul femurului lsnd un bont
de 2 cm. Introducem apoi un fir de a sub tendonul lui Achile, pe care l legm i l
secionm dedesubtul ligaturii i preparm muchiul pn la captul superior, apoi secionm
8 Lucrri practice de fiziologie

tibia. Preparatul neuromuscular este deci alctuit din bontul coloanei vertebrale, nervul
sciatic, bontul osului femur, articulaia genunchiului i muchiul gastrocnemian.

PREGTIREA PREPARATULUI NEUROMUSCULAR IN SITU

Dup anestezie i decapitare se imobilizeaz broasca prin distrugerea mduvei


spinrii. Se culc animalul pe abdomen i se face o incizie pe pielea gambei, se caut
tendonul lui Achile i se introduce un fir de a sub tendon. Se leag tendonul i se taie sub
ligatur. Se face apoi o incizie pe pielea coapsei, se caut nervul sciatic i se introduce sub
nerv o pereche de electrozi.

Excitarea preparatului se face cu curent electric (impulsuri rectangulare de curent, cu


intensitate i durat reglabil). Excitarea se poate face pe dou ci:
- excitarea direct: se aeaz o pereche de electrozi pe suprafaa muchiului,
- excitarea indirect: se aeaz o pereche de electrozi sub nervul sciatic.

Descriei fenomenele implicate n cazul stimulrii indirecte (direcia propagrii


potenialului de aciune, funcionarea jonciunii neuromusculare, rspunsul celulei
musculare, mecanisme intracelulare de semnalizare).

Rspunsul muchiului dat la excitarea electric unic (indiferent de calea


stimulrii: direct sau indirect) este o secus muscular cu form caracteristic. Ea se
compune din perioada de laten cu o durat de 0,005 - 0,01 sec (5 - 10 msec), care ncepe
din momentul aplicrii excitantului i se sfrete la nceputul contraciei (Figura 1).

Figura 1. Secusa muscular.

Explicai fenomenele care contribuie la perioada de laten.

Contracia este nregistrat ca o pant ascendent cu o durat de aprox. 0,04 sec (40
msec). Ea este urmat de poriunea descendent, produs de relaxarea muchiului. Acest
segment are durat de aprox. 0,05 sec (50 msec). Secusa muscular a unui muchi de
broasc la o temperatur de 20C are o durat total de 0,1 sec (100 msec). Durata secusei
depinde de temperatura la care se lucreaz, de starea actual a muchiului (n cazul oboselii
durata secusei este mai mare) i de dezvoltarea filogenetic a animalului (Figura 1).

Determinarea pragului de excitaie: se numete prag de excitaie intensitatea minim


a curentului, care produce o secus muscular.
Dup obinerea pragului de excitaie mrind treptat intensitatea curentului, obinem
rspunsuri din ce n ce mai ample, pn la atingerea unei valori maxime, dup care
amplitudinea curbelor rmne constant. Fenomenul poate fi explicat n felul urmtor: fibrele
care alctuiesc muchiul (respectiv nervul) au praguri de excitaie diferite. n cazul unui
Experiene pe preparat neuromuscular 9

curent slab am atins pragul numai la cteva fibre musculare, ca atare rspunsul va fi slab.
Mrind intensitatea curentului, atingem pragul la mai multe fibre, iar la o intensitate dat
toat fibrele se vor contracta simultan i secusa muscular va fi de amplitudine maximal
(Figura 2). Legea totul sau nimic care i-a dovedit valabilitatea pentru miocard, nu mai este
valabil la muchiul scheletic integral, fiind valabil la muchi numai pentru o singur fibr
muscular.

Figura 2. Determinarea pragului de excitaie.

Fenomenul de superpoziie: aplicnd dou excitani succesivi n cazul cnd intervalul


este mare, obinem dou secuse musculare. Dac scdem intervalul astfel ca aceasta s fie
mai mic de 0,1 sec, muchiul nc nu va fi complet relaxat dup primul excitant i ncepe o
secus nou, care se suprapune peste prima i vom nregistra o secus dublat cu un
aspect caracteristic (Figura 3).

Figura 3. Fenomenul de superpoziie.


10 Lucrri practice de fiziologie

Explicai, de ce contracia a doua are amplitudine mai mare.


Explicai de ce nu se poate obine superpoziie la miocard.

Tetanos incomplet i complet: excitnd preparatul neuromuscular cu stimuli repetai,


cu o frecven mare, nregistrm o contracie care nu mai este urmat de relaxarea
muchiului. Aceast form de contracie este denumit contracie tetanic sau tetanos
complet. Ea este forma obinuit, natural a contraciei musculare. n mod normal, n
organism micrile sunt nite contracii tetanice ale unitilor motorii (Figura 4).

Dac excitm preparatul cu o frecven nu prea mare, obinem un tetanos incomplet,


forma de contracie la care muchiul prezint i tendine de relaxare, dar relaxarea complet
nu poate s aib loc, fiindc urmeaz contracia urmtoare. Frecvena excitrii pentru
obinerea unui tetanos complet depinde de starea de excitabilitate a preparatului, de
temperatur i de intensitatea curentului aplicat. Amplitudinea contraciei tetanice creste cu
frecvena stimulrii pn la o valoare optim (Figura 4)

Figura 4. Tetanos incomplet i complet.

Studiul oboselii musculare: nregistrm o secus muscular, dup care stimulm


preparatul cu o frecven subtetanic. Dup un timp observm scderea amplitudinii
secuselor i alungirea duratei. Scderea amplitudinii se datoreaz relaxrii incomplete, iar
urmtoarea contracie pornete de la o stare semicontractat a muchiului (Figura 5).

Explicai fenomenele observate.

Dup terminarea demonstraiei se trece la analiza traseelor cu ajutorul sistemului


de calculatoare. Urmai indicaiile date de mai jos i completai Fia de lucru.
Experiene pe preparat neuromuscular 11

Figura 5. Studiul oboselii musculare.


12 Lucrri practice de fiziologie

INSTRUCIUNI PENTRU COMPLETAREA FIEI DE LUCRU

1. Determinai amplitudinea medie a secusei, perioada medie de laten, durata medie a


contraciei i a relaxrii!

Deschidei fiierul secusa.dat


File Open secusa.dat
Cutai pe traseu o secusa muscular
Folosii butoanele Next i Previous sau introducei momentul dorit n partea
dreapt a ecranului click Go
Calculai amplitudinea secusei fa de linia de baz.
Click Cursor measure poziionai cursorul citii poziia cursorului n
fereastra Measurement results
Msurai perioada de laten, durata contraciei i a relaxrii.
Click Cursor measure poziionai cursorul citii poziia cursorului n
fereastra Measurement results
Calculai media a cinci msurtori.
Putei folosi calculatorul din Windows
Start Programs Accessories Calculator

2. Determinai cea mai mare frecven de stimulare, la care nu se observ fenomenul de


superpoziie!

Deschidei fiierul superpos.dat.


File Open superpos.dat
Cutai secusele corespunztoare.
Folosii butoanele Next i Previous sau introducei momentul dorit n partea
dreapt a ecranului click Go
Calculai frecvena stimulrii.
Click Cursor measure msurai intervalul dintre cele dou poteniale de
aciune citii poziia cursorului n fereastra Measurement results calculai
frecvena stimulrii.

3. Determinai cea mai mic frecven de stimulare la care nu exist relaxare dup prima
contracie muscular!

Cutai secusele corespunztoare.


Folosii butoanele Next i Previous sau introducei momentul dorit n partea
dreapt a ecranului click Go
Calculai frecvena stimulrii.
Click Cursor measure msurai intervalul dintre cele dou poteniale de
aciune citii poziia cursorului n fereastra Measurement results calculai
frecvena stimulrii.

4. Determinai amplitudinea medie a secusei musculare!

Deschidei fiierul tetanus.dat


File Open tetanus.dat
Cutai pe traseu o secusa muscular
Folosii butoanele Next i Previous sau introducei momentul dorit n partea
dreapt a ecranului click Go
Calculai amplitudinea secusei fa de linia de baz.
Click Cursor measure poziionai cursorul citii poziia cursorului n
fereastra Measurement results
Experiene pe preparat neuromuscular 13

Calculai media a trei msurtori.

5. Determinai cum se modific amplitudinea contraciei tetanice n funcie de frecvena


stimulrii!

Cutai pe traseu un tetanos.


Folosii butoanele Next i Previous sau introducei momentul dorit n partea
dreapt a ecranului click Go
Msurai amplitudinea contraciei tetanice fa de linia de baz.
Click Cursor measure poziionai cursorul citii poziia cursorului n
fereastra Measurement results
Calculai frecvena stimulrii.
Click Cursor measure msurai intervalul dintre cele dou poteniale de
aciune citii poziia cursorului n fereastra Measurement results calculai
frecvena stimulrii.
Repetai msurtorile pentru mai multe contracii tetanice.

6. Reprezentai grafic amplitudinea relativ a contraciei fa de frecvena stimulrii.

7. Determinai amplitudinea medie a secusei musculare, durata medie de contracie i de


relaxare!

Deschidei fiierul oboseala.dat


File Open oboseala.dat
Cutai pe traseu o secusa muscular
Folosii butoanele Next i Previous sau introducei momentul dorit n partea
dreapt a ecranului click Go
Calculai amplitudinea secusei fa de linia de baz.
Click Cursor measure poziionai cursorul citii poziia cursorului n
fereastra Measurement results
Msurai durata contraciei i a relaxrii.
Click Cursor measure poziionai cursorul citii poziia cursorului n
fereastra Measurement results
Calculai media a trei msurtori.

8. Determinai cum se modific amplitudinea secusei, durata fazei de contracie i de


relaxare sub efectul oboselii musculare!

Cutai trei secuse musculare dup fiecare stimulare subtetanic.


Folosii butoanele Next i Previous sau introducei momentul dorit n partea
dreapt a ecranului click Go
Calculai amplitudinea secusei fa de linia de baz.
Click Cursor measure poziionai cursorul citii poziia cursorului n
fereastra Measurement results
Msurai durata contraciei i a relaxrii.
Click Cursor measure poziionai cursorul citii poziia cursorului n
fereastra Measurement results