TEHNICI AVANSATE DE

ANALIZ A ALIMENTELOR

Determinarea licopenului din tomate prin

metoda HPLC

Lazr Adela
SPCCPA, AN I

1
 CUPRINS

I.Introducere

I.1.Ce este licopenul?

I.2.Proprietile chimice i fizice ale licopenului

I.3.Rolul licopenului

I.4.Beneficiile licopenului

II.METODA DE LUCRU

II.1. Analiza HPLC a licopenului

II.1.1. Mod de lucru

Bibliografie

2
 I.Introducere

I.1.Ce este licopenul?

Licopenul este unul dintre cele mai importante i abundente carotenoide. Este
demonstrate faptul c acesta joac un rol foarte important n nutriia uman, n special
datorit capacitii sale antioxidante.
Licopenul este un colorant vegetal, solubil n grsimi, care d culoarea roie
pepenelui, roiilor i n cantitate mai sczut i altor fructe. Aparine familiei
carotenoidelor ca i -carotenul, substane pe care organismul omului nu le sintetizeaz.
Codul alimentar desemnat de ctre Uniunea European acestui colorant este E-160d.
Din punct de vedere chimic licopenul este un isomer aciclic de -caroten, fr
provitamina A, este un pigment natural de culoare roie, care este sintetizat doar de
plante i microorganisme.
Licopenul ofer culoarea roie tomatelor, caiselor, gaperfruitului roz, pepelui
verde i trandafirului. El se afl n cantitatea cea mai mare n tomate, peste 90 % din
totalul carotenoidelor, s-a constatat c 80% din licopenul din diet vine din consumul de
tomate i produse din tomate, cum ar fi sosul de roii, pasta de tomate si ketchup.

Lista alimentelor bogate n licopen Tabelul 1.

Aliment Cantitate Licopen(mg)
Past de tomate, conserve 1 can 75,4
Tomate piure, conserve 1 can 54,4
Sup de roii, conserve 1 can 26,4
Suc de legume cocktail, 1 can 23,3
conservat
Suc de tomate, conserve 1 can 22,0
Pepene verde crud 1/16 dintr-un pepene 13,0
Tomate crude 1 can 4,6
Ketchup 1 lingur 2,5
Graperfruit roz, crud graperfruit 1,7
Fasole conserve 1 can 1,3

3
 Licopenul, un fitonutrient carotenoid, este cel mai puternic antioxidant natural
prezent n multe fructe i vegetale (fructe i legume roii, unele alge i ciuperci). Sursa
principal de licopen este reprezentat de tomate i produsele procesate din tomate, care
aduc mai mult de 85% din doza necesar zilnic. Licopenul particip la un numr de
reacii chimice care previn degradarea biomoleculelor critice celulare (lipide, proteine i
ADN).

I.2.Proprietile chimice i fizice ale licopenului

Fig.1 Structura molecular a licopenului

Millardet a izolat pentru prima dat licopenul n anul 1876 i l-a numit
solanorubin. n anul 1903, Schunk l-a izolat n forma pur i a primit numele de licopen.
Culoarea substanei este rou-nchis; consistena este asemntoare cerei. Punctul de
topire este 168C. Licopenul sintetic este o pulbere cristalin de culoare roie pn la
violet.
Structural, licopenul este o hidrocarbur alifatic nesaturat, cu 13 duble legturi
dintre care 11 sunt conjugate. Nu prezint n structura chimic inelele beta-ionice care se
gsesc n structura retinolului i de aceea nu prezint activitatea specific a pro-vitaminei
A.

4
Fig 2. Structura chimic a licopenului

Formula chimic este C40H56, masa molecular este 536.9. Numrul Chemical
Abstract Service (CAS) este 502-65-8.

Licopenul natural conine izomerul all-trans-licopen n proporie de 94-96%.

Izomerii licopenului sunt mult mai polari n natur, mai solubili n uleiuri i ali solven i
de tipul hidrocarburilor; solubilizarea este eficient n soluii lipofile deoarece este mai
puin predispus la cristalizare.

Degradarea licopenului dat de izomerizare i oxidare afecteaz biodisponiblitatea

i scade funcionalitatea moleculei n beneficiul sntii. Parametrii fizico-chimici care
concur la degradarea licopenului sunt timpul, temperatura, mediul de reacie, condiiile
de mediu etc. Totui, cei mai importani factori care concur la degradarea licopenului
sunt cldura, lumina i oxigenul. Autooxidarea licopenului este ireversibil.

I.3.Rolul licopenului

Licopenul este o molecul cu un puternic efect antioxidant.

5
 Studiile in vitro au artat c efectul antioxidant al licopenului este de dou ori mai
mare dect al beta-carotenului i de zece ori mai mare dect al alfa-tocoferolului
(exprimat n neutralizarea radicalului de oxigen). n studiul lui Chasse GA i colaboratorii
(2001) s-a artat c izomerul cis al licopenului este mult mai stabil avnd un puternic
efect antioxidant comparativ cu all-trans-licopenul. Totui, semnificaia biologic a
izomerizrii licopenului nu este pe deplin neleas

Biosintez, absorbie i metabolism

Carotenoizii sunt sintetizai doar de ctre plante. Toi carotenoizii, inclusiv

licopenul, sunt sintetizai din precursorul isopentenil pirofosfat (IPP) care ia calea
acidului mevalonic (MVA) sub aciunea acetilcoenzimei A. Licopenul este precursorul
carotenoizilor ciclici.

Ca toi carotenoizii, i licopenul se absoarbe la nivelul celulelor mucoasei

duodenale, prin difuzie pasiv asemntor colesterolului i trigliceridelor. Licopenul din
chilomicronii din mucoasa celular, este secretat n sistemul limfatic i apoi n snge. Se
gsete n plasma uman ntre 0.2 1.0 mol/l. Sunt necesare mai multe studii pentru a
nelege metabolismul intracelular, biodisponibilitatea licopenului i dac produii de
oxidare se absorb i au efect biologic.

I.4.Beneficiile licopenului

Beneficiile pentru inim

Licopenul este un antioxidant puternic, care protejeaz mpotriva bolilor de inim,

reduce riscurile de snatate associate cu nivelul ridicat de colesterol. Dac este luat n
doz de 25 mg pe zi sau mai mult licopenul reduce colesterolul LDL cu 10 %.

6
 Licopenul ajut la tratarea i prevenirea bolilor de inim i reduce riscul de
formare a cheagurilor de snge.

Rol n tratamentul bolilor coronariene, diverse afeciuni osoase, alte

afeciuni.

Deoarece este un antioxidant puternic licopenul joac un rol important protector

mpotriva bolilor coronariene.

Efectele licopenului asupra osteoblastelor, osteoclastelor ce au fost raportate poate

fi de asemenea important n prevenirea osteoporozei.

Alte studii ncurajatoare au fost efectuate n scopul demonstrrii efectului benefic

al licopenului la pacienii cu HTA, infertilitatea masculin, boli neurodegenerative etc.

Beneficiile licopenului pentru tratarea rcelilor

Licopenul din pepenele verde poate amelioara simptomele de rceal, precum

astmul i infecii respiratorii.

Beneficiile licopenului anticancer

Dieta mediteranean, care este bogat n vegetale i fructe, inclusiv tomate

sugereaz a fi responsabil de incidena sczut a cancerelor n aceast regiune. Dei
asocierea cea mai puternic ntre licopen i cancer a fost descris pentru cancerul de
prostat, plmni i stomac, riscul altor tipuri de cancere (cancer de sn, cervical sau
uterin) de asemenea a fost sczut.

n ultimii ani literatura de specialitate a luat n considerare rolul licopenului att

n prevenire ct i tratamentul cancerului de prostat. Brbaii cu cancer de prostat
sunt din ce n ce mai mult ncurajai s consume ct mai multe tomate n beneficiul luptei
pe care o duc cu aceast boal.

7
 Colorant i aditiv alimentar.

Licopenul sintetic este propus a fi utilizat ca i colorant i aditiv alimentar n

diverse produse alimentare cum ar fi: produse de patiserie, cereale pentru micul dejun,
produse lactate inclusiv deserturi ngheate, apa mbuteliat, fructe i vegetale etc.
Licopenul de asemenea poate fi utilizat n comprimatele multivitamine i multiminerale
sau alte tipuri de suplimente nutritive. Utilizarea acestuia variaz de la 2 mg/l n sticlele
de ap la 130 mg/kg n cerealele pentru micul dejun. n general este propus a fi utilizat n
concentraii mici ca i colorant dect ca i aditiv alimentar.

Codul alimentar desemnat de ctre Uniunea European acestui colorant este E-

160d.

II.METODA DE LUCRU

HPLC este prescurtarea de la High Performance Liquid Chromatography

(Cromatografie lichid de nalt performan), metod de analiz calitativ utilizat n
biochimie i chimie analitic pentru separarea, identificarea i cuantificarea compuilor.
HPLC folosete o coloan ncrcat cu diferite materiale (faza staionar), o pomp ce
mpinge faza(ele) mobil(e) prin coloana i un detector care arat timpurile de retenie ale
moleculelor. Timpul de retenie depinde de interaciunea dintre faza staionar,
moleculele de analizat i solvenii utilizai.

Licopenul extras din tomate este produs dintr-o varietate de tomate cu un coninut
ridicat de licopen, n intervalul de 150-250 kg/ mg.

Extractul este produs prin strivirea roiilor n suc de roii crude, care este apoi
separate n ser i celuloz.

II.1. Analiza HPLC a licopenului

8
 Substane: hexan, metanol, acetona

II.1.1. Mod de lucru

Pregtirea probei:

5g de Proba

Omogenizare

Extracia 1( 50 ml hexan Se agit pentru 10 minute, apoi se centrifugheaz 3000

rpm, 10 min)

Se obine lichid i reziduu

Extracia 2

Evaporare( se adaug 1 ml de THF la reziduu, se dilueaz de 10 ori cu acetonitril)

HPLC

9
 Un amestec de solvent de aceton, etanol i hexan se adaug n eprubeta cu proba
de tomate i se mixeaz.
Soluia de extracie se pstreaz la temperature camerei timp de 30 minute i se
amestec la fiecare 10 minute.

Dup 30 de minute 1 ml de ap se adaug n soluie.

Tubul de test se centrifugheaz la 3000 rot/min timp de 10 minute, pentru a separa

soluia n straturi distincte polari i nepolari. Supernatantul stratul nepolar conine
licopen i se transfer ntr-un tub curat.

Solventul supernatant se evapor , i se adaug 1ml de methanol la extracia

uscata.

10 microlitri de soluie se injecteaz ntr-un sistem HPLC pentru determinarea

concentraiei de licopen.

Sistemul HPLC cu pompe este format dintr-un injector 715, un detector diod foto.

10
 Proba de analizat este introdus n volum mic n fluxul fazei mobile. Trecerea
analitului prin coloan este ncetinit de prezena unor interacii de natur chimic sau
fizic in faza staionar, acestea trecnd de a lungul coloanei. Totalul ncetinirilor depinde
de fiecare analit n parte, faza staionar i compoziia fazei mobile. Timpul la care un
analit specific elueaz (iese afar din coloan) este numit timp de retenie; timpul de
retenie sub condiii particulare este considerat o caracteristic unic de identificare a
analitului dat. Folosirea unei coloane ncrcat cu particule mici (care creeaz o presiune
de mpingere mai mare) crete viteza linear, acordnd compuilor timpul minim s
difuzeze prin coloan, conducnd astfel la o mbuntire a rezoluiei cromatogramei
rezultate. Solvenii comuni care se utilizeaz includ orice combinaie miscibil cu apa sau
lichide organice variate (de obicei metanol sau acetonitril). Apa poate conine soluii
tampon sau sruri care ajut la separarea componenilor de analizat sau componeni ca
acid trifloroacetic care acioneaz ca agent de mperechere ionic.

11
 Bibliografie

1. Valeria Laza, Palestrica of the third millennium Civilization

and Sport, Vol 15, Tomatoes and lycopene in the athletes diet, 2014
2. ***FAO Lycopene (synthetic) (CTA) 2006
http://www.fao.org/fileadmin/templates/agns/pdf/jecfa/cta/67/lycopene.
pdf

3. Collins JK, Perkins-Veazy P, Robert W, Lycopene: From Plants to

Human, 2006, 4(5), 1135-1144.

4. http://www.cromatec.com.br/aplicacoes/gl_sciences/hplc/GL_Analysis
_of_Lycopene_in_food_by_HPLC.pdf

5. Burghez I.R , Raduly M, Doncea S, Lycopene determination in

tomatoes by different spectral techniques( UV-VIS, FTIR i HPLC),
2011, vol. 6.

12
13