CI METABOLICE

Metabolismul este definit ca suma tuturor reaciilor enzimatice

din celula. El are urmtorele carateristici:
Are activitate orientat
Are o coordonare superioar
La el paticip sisteme multienzimatice
Asigur schimbul de materie i energie ntre celeule i mediu
Metabolismul ndeplinete patru funcii speciale:
1. Obinerea de energie chimic din molecule combustibil
2. Conversia substanelor nutritive n uniti constituente
proprii celulei
3. Asamblarea acestor uniti n proteine, ac.nucleici,lipide...
4. Formarea i degradarea biomoleculelor necesare
diferitelor funcii celulare specializate
 CI METABOLICE
Metabolismul se mparte n dou faze catabolism i anabolism
Catabolismul este faza degradativ a metabolismului, prin care
moleculele nutritive, relativ mari i complexe, provenite fie din
mediu, fie din rezervele nutritive sunt degradate n molecule mai
mici i mai simple; cu eliberare de energie, ea fiind conservat
n molecule de ATP, transportoare de energie.
Anabolismul este faza de biosintez, n care se sintetizeaza
componentele proprii celulei, pornind de la precursori simpli,
biosinteza necesit aport de energie, asigurat de ATP.
Catabolismul i anabolismul se desfoar simultan, dar se
regleaz independent.
Metabolismul se desfoar n trepte, prin muli intermediari
(metabolii), motiv pt.care se denumete metabolism
intermediar
 Sistemele multienzimatice
Enzimele funcioneaz de obicei secvenial, cataliznd reacii
consecutive, legate prin intermediari comuni, astfel nct
produsul primei enzime devine substrat pentru urmtoarea i
aa mai departe. Sistemele multienzimatice pot cuprinde ntre
2 i 20 de enzime care acioneaz consecutiv.
La sistemele multienzimatice se pot distinge trei nivele de
complexitate:
1. Sistemele cele mai simple, enzimele se afl n stare liber
n citoplasm, neasociate, intermediarii sunt molecule mici
i deci difuzeaz rapid
 Sistemele multienzimatice
2. Al doilea nivel presupune asocierea fizic a enzimelor i
funcioneaz mpreun n complexe multienzimatice.
Aranjarea enzimelor secveniale n complexe nedisociabile
care impiedic difuziunea substratului de la o enzim la alta
 Sistemele multienzimatice
3. Sistemele cele mai complicate sunt cele asociate cu
structuri supramoleculare mari (membrane, ribozomi). Cu
ct sistemul este mai complicat cu att este mai probabil ca
acesta s fie asociat cu o organit sau structur
intracelular
 Turnover-ul metabolic
Mult vreme s-a crezut c proteinele
esut
celulare rmn intacte i stabile pe Timpul de
njumtire
ntreaga durat de via a celulei. (zile)
Prin hrnirea unui lot de animale cu Ficat
Proteine totale 5-6
amino acizi marcai cu 15N i s-a Glicogen 0,5-1
urmrit rata de ncorporare n Fosfogliceride 1-2
Triacilgliceroli 1-2
proteinele din ficat. S-a constatat o Colesterol 5-7
rat mare de ncorporare cu toate c Proteine 5-6
mitocondriale
nivelul proteinelor hepatice este
Muchi
constant. S-a tras concluzia c Proteine totale 30
proteinele din celule se afl ntr-un Glicogen 0,5-1

echilibru dinamic, n care viteza de Creier

Triacilgliceride 10-15
sintez este perfect contrabalansat Fosfolipide 200
cu viteza de degradare Colesterol >100
 Principiile bioenergetice
Avnd n vedere importana Compus Energia
compuilor fosforilai n libera de
transferul energiei chimice n hidroliz
celul, iat relaiile energetice Fosfoenolpiruvat -61,9 KJ/mol
1,3-Difosfoglicerat -49,4 KJ/mol
dintre acestia. Acetil fosfat -43,1 KJ/mol
Relaia de transfer a gruparii Fosfocreatina -42,3 KJ/mol
fosfat de la o molecul donor PPi -33,5 KJ/mol

la ap ATP ( AMP+PPi) -32,2 KJ/mol

ATP (ADP+Pi) -30,5 KJ/mol
G-1-P -20,9 KJ/mol
-2 -2
R O P O 3 + HOH R OH + HO PO 3 F-6-P -15,9 KJ/mol
G-6-P -13,8 KJ/mol
Glicerol-3-P -9,2 KJ/mol
 Principiile bioenergetice
Principalele procese de sintez a ATP sunt:
1. Fosforilarea la nivel de substrat
2. Fosforilarea oxidativ
3. Sinteza de ADP din AMP i ATP
4. Din rezerva (celule nervoase i musculare) de
fosfocreatin

ATP + creatin fosfocreatin + ADP

Principiile bioenergetice
 OXIDAREA BIOLOGIC
Reaciile de oxido-reducere (redox) au o semnificaie
biochimic important, prin intermediul lor fiinele vii i
procur energia liber din aceste reacii. n metabolismul
aerob, care se desfoar n toate celulele eucariote i la cea
mai mare parte a procariotelor, energia liber de oxidare a
hidrailor de carbon serveasc la sinteza ATP.
n general, ntr-o reacie redox un donor (reductor)
cedeaz electroni unui acceptor (oxidant). De exemplu n
reacia Fe3+ +Cu+ Fe2+ +Cu2+. Aceast reacie poate fi
separat n dou pri numite cupluri redox, adic o
semireacie de oxidare Cu+ Cu2++e- i una de reducere:
Fe3++e- Fe2+. Cele dou cupluri sunt Cu+/Cu2+ i
Fe3+/Fe2+.
 OXIDAREA BIOLOGIC

Viteza cu care au loc aceste reacii ar putea fi foarte mic n

absena enzimelor, componentele proteice ale enzimelor
oxido-reductoare joac un rol important n reaciile de
transfer electronic modulnd potenialele redox ale centrelor
active ale lor. Definim potenialul de reducere ca un
indicator al spontaneitii reaciilor redox.
Catena transportoare de electroni din mitocondrie, este sursa
primar de ATP la eucariote, n cadrul acesteia electronii de la
NADH trec de la un acceptor la altul, n sensul creterii
potenialului de reducere, pn la O2.
 OXIDAREA BIOLOGIC
Lanul respirator
Exist patru tipuri de enzime oxido-reductoare sau proteine
care transport electroni:
1. Dehidrogenaze nicotinamid dependente (necesit NAD+
sau NADP+ derept coenzime)
2. Dehidrogenaze flavin dependente (necesit FMN sau FAD
drept coenzime)
3. Proteine cu Fe-S
4. Citocromii, care conin nucleul hemic drept grupare
prostetic
n plus fa de aceste proteine n lanul respirator
functioneaz i o conezim liposolubil numit ubichinona
sau coenzima Q
 OXIDAREA BIOLOGIC
Lanul respirator

Substraturile catenei transportoare de electroni sunt

nucleotidele NADH i FADH2 de la care electronii sunt preluai
n prima faz prin reacii de dehidrogenare. n final ei vor
reduce oxigenul molecular cu formare de ap.
Reaciile globale ale oxidrii biologice vor fi:
NADH+H++1/2O2 NAD+ + H2O;
Cele dou semireacii din care este constituit reacia de
oxidare a NADH sunt:
NAD+ + H+ +2e- NADH; i
1/2O2 +2 H+ +2e- H2O
 OXIDAREA BIOLOGIC
Lanul respirator
Cantitate de energie degajat din reaciile de oxido-reducere,
dac s-ar elibera brusc sub form de cldur, ar distruge
celula. Catena respiratoare asigur o "temporizare" a eliberrii
energiei i o partiie a ei n dou forme, cldur i energie
liber. O parte din aceast energie este capturat sub form
chimic macroergic n ATP n procesul numit fosforilarea
oxidativ.
Energia liber standard necesar sintezei unui mol de ATP din
ADP i Pi este 30,5 kJ. Deci la oxidarea unui mol de NADH (-
218kJ/mmol) ar genera energie suficient pentru sinteza a 7
moli de ATP. Catena respiratoare conine 3 etape de transfer
electronic care sunt cuplate cu fosforilarea ADP atunci cnd
substratul ei este NADH i doar 2 etape de fosforilare oxidativ
atunci cnd substratul este FADH2.
 Lanul respirator
Secvena lanului respirator

Electronii (de fapt atomii de hidrogen separabili n ioni

de hidrur H-i protoni H+) sunt preluai de la NADH+H+
sau FADH2 i, prin intermediul complexelor enzimatice I
respectiv II sunt transferai la coenzima Q, de la care
electronii sunt preluai, prin intermediul complexului III
de citocromul c. De la citocromul c electronii sunt
transferai, prin intermediul complexului IV, pe oxigenul
molecular.
 Lanul respirator
Secvena lanului respirator
+
NADH NAD
-
2e ADP + Pi
Complexul I Rotenona sau
o' Amytal
DG = - 69,5 kJ/mol
FADH2 ATP
Complexul II CoQ
-
2e ADP + Pi
FAD Complexul III Antimicina A
o'
Tenoiltrifluoro DG = - 36,7 kJ/mol
acetona ATP

Citocrom c
ADP + Pi
Complexul IV CN
-
o'
DG = - 112 kJ/mol
2e
- ATP
+
2H + 1/2 O2 H2O
 Lanul respirator
Secvena lanului respirator
Complexul I catalizeaz oxidarea NADH de ctre CoQ a
crei reacie este urmtoarea:
NADH+CoQox NAD+ +CoQred
Complexul II catalizeaz oxidarea FADH2 de ctre CoQ cu
reacia:
FADH2+CoQox FAD+CoQred
Complexul III catalizeaz oxidarea CoQred de ctre
citocromul c oxidat (cit.c (Fe3+)) care trece n form redus
CoQred+Cit c ox CoQ+Cit c red + 2H+,
Complexul IV catalizeaz oxidarea citocromului c de ctre
O2, ultimul acceptor de electroni al catenei transportoare de
electroni:
Cit c red +1/2O2 + 2H+ cit c ox+H2O
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
Cele 4 complexe care constituie catena respiratoare sunt incluse n
membrana mitocondrial intern, asociate cu diverse grupri active
redox ale cror poteniale de reducere sunt tot mai pozitive ctre
captul final al catenei.
Complexul I (NADH-CoQ reductaza). Acesta este probabil cea mai
mare component proteic, a membranei interne funcia ei fiind
transferul atomilor de hidrogen de la NADH la CoQ. Complexul
conine ca grupri prostetice (coenzime) redox o molecul de FMN
i mai slab asociat, o molecul de coenzim Q numit i
ubiquinon. Ubiquinona la mamifere catena poliizoprenic const
din 10 uniti izoprenoide motiv pentru care ubiquinona poart
numele de CoQ10
Catena poliizoprenic este hidrofob i deci poate difuza liber n
bistratul lipidic al membranei, realiznd o navet ntre
componentele mai puin mobile ale lanului respirator i complexele
I i II.
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
O
Coenzima Q 10

CH3 CH3
H3CO
H3CO (CH2 CH C CH2)10 H

O
.
+ [H ]
O.
H3CO CH3
H3CO
R
OH
+[H ].
OH

H3CO CH3
H3CO
R
OH
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
Complexul I (NADH-CoQ reductaza). n acest complex se
mai gsesc i Fe-S proteine, nehemice. Aceste proteine
realizeaz un transfer monoelectronic n care ionul de fer
trece dinstarea de oxidaie +2 la +3 i invers. Fe-S proteinele
din complexul I se mpart n dou clase:
Fe-S proteine cu 2 Fe i 2 S
Fe-S proteine cu 4 Fe i 4 S
Rotenona, Amytalul (amobarbital) i Ptericidina A, blocheaz
transferul electronilor de la Fe-S proteine la CoQ
Rotenona

Amytal Piericidina A
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
Complexul II (Succinat-CoQ reductaza) este dimerul enzimei
succinat dehidrogenaza din ciclul citric la care se mai adaug
alte cteva mici subuniti hidrofobe. Una din funciile lui este
transferul atomilor de hidrogen de la succinat la CoQ.
Complexul II realizeaz acest transfer cu ajutorul coenzimei
FAD legate covalent, o protein [4Fe4S), dou proteine [2Fe-
2S] i citocromul b560. Cu toate c la nivelul acestui complex
nu se produce suficient energie pentru sinteza ATP el
permite electronilor cu potenial de reducere relativ nalt s
ptrund n catena respiratoare. n catena respiratoare, la
nivelul CoQ, pot intra pe ci ce nu implic complexul II, atomi
de hidrogen care provin de la alte substraturi sub aciunea
altor flavoproteine.
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator

Complexul III (CoQ-citocrom c reductaza) conine citocromii

b562, b566, citocromul c, o Fe-S-protein (Fe-S) i alte 6
subuniti proteice, componente dispuse asimetric n
membrana intern mitocondrial. Drumul urmat de electroni
n complexul III implic aa-numitul ciclu Q prin care
ubiquinolul (CoQH2) se oxideaz iar cit.c se reduce prin
transfer monoelectronic. Secvena CoQCoQHCoQH2
se desfoar prin captarea electronilor de la cit.b566 (n
ciclul Q) i de la complexul I sau II, simultan cu captarea n
2 etape a cte unui proton din spaiul matricial. Secvena
CoQH2CoQHCoQ are loc prin cedarea electronilor
cit.b562 i cit.c1 simultan cu cedarea unul cte unul a doi
protoni n spaiul citosolar (intermembranar).
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator

Citocromii sunt proteine redox active. Ele conin nucleul

porfirinic n care ionul de fer poate adopta strile de oxidaie +2
sau +3. Clasele de citocromi difer prin partea prostetic adic
gruprile Hem, respectiv prin substituenii nucleului porfirinic.
La citocromii a se distinge ca substituent, o caten format din
uniti izoprenoide. Alte diferene sunt i ntre liganzii axiali.
Denumirea citocrom (n limba greac citos celul, chroma
culoare) vine de la faptul c hemul din citocromii redui au
spectre de absorbie optic n domeniul vizibil deci sunt
colorai.
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
CH3
CH3
CH2 ( CH2 CH C CH2)3 H
HO CH3 CH S Cys
CH3 CH C C
C C Proteina
C C HC CH
N

O HC C C CH H3 C C C C C CH3
N N Fe
3+
N
HC C C C C CH3 C C C C CH S Cys
3+
N Fe N N
H2C HC C C CH CH3
C C C C CH CH3 HC CH2 H 2C C C
N -
H2C HC C C CH CH2 C C COO CH2 CH3

H2C HC C C CH CH2
C C N
- COO
- Hem c
COO CH2 CH3 H3C C C C C CH3
3+
N Fe N
CH2
C C C C CH
COO Hem a
-
N
H2C HC C C CH CH2
H2C C C
-
COO CH2 CH3

CH2
COO
- Hem b
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator

Citocromul c este o protein globular i este una din cele

mai studiate molecule. Solubilitatea acestei proteine
globulare i asocierea ei slab la suprafaa extern a
membranei interne mitocondriale au uurat izolarea i
aceasta a permis conservarea conformaiei citocromului.
Citocromul c transport electroni de la complexul III la
complexul IV. El se leag la cit.c1 din complexul III de la care
preia un electron pe care l transport difuznd lateral la
suprafaa membranei pn la cit.a din complexul IV.
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
Complexul IV (citocromoxidaza) catalizeaz oxidarea
monoelectronic a 4 molecule de cit.c (Fe2+) i reducerea
concomitent a unei molecule de oxigen.
4cit.c Fe2+ +4H+ +O2 4cit.c Fe3+ +2H2O
La mamifere acest complex este o protein trans-membranar,
compus din 13 subuniti dintre care subunitile cele mai mari I,II
i III. Subunitile I i II conin toate cele 4 centre redox active: dou
de tip hem a i dou cu ioni de cupru care pot "pendula" ntre
strile de oxidare +1 i +2. Hem a i CuA au potenialul de reducere
standard mult mai mic dect hem a3 i CuB. CuA este coordinat de
subunitatea II prin doi radicali Cys i doi radicali His. Hem a3 i
CuB sunt legai printr-un atom de sulf formnd un complex
binuclear care cuprinde i centrul de asociere a O2. Electronii
captai de cit.a de la cit.c se repartizeaz i la CuA pentru ca apoi
s treac la complexul cita3-CuB-O2 producnd reducerea
oxigenului i formarea apei.
 Lanul respirator
Componentele lanului respirator
 Lanul respirator
Fosforilarea oxidativ
Cum reuete scurgerea de electroni prin catena respiratoare s
canalizeze energia chimic de oxidare ctre sinteza ATP?
Dificultatea elucidrii mecanismului se datoreaz faptului c
ATP- sintaza, este o protein distinct de proteinele lanului
respirator.
Ea este compus din 2 pri cu structuri complexe. Cele dou
pri ale sintazei se noteaz cu FO i F1. FO este componenta
transmembranar a sintazei, (indicele O se refer la
sensibilitatea la oligomicin) insolubil n ap datorit
hidrofobicitii ei, format din trei tipuri de subuniti notate cu
a,b,c sunt 12 uniti c care formeaz un tub care constituie
canalul de protoni. Subunitatea a leaga FO de F1 prin intermediul
a 2 subuniti b.
Lanul respirator
Fosforilarea oxidativ
 http://youtu.be/xbJ0nbzt5Kw

Lanul respirator
Fosforilarea oxidativ

Partea F1, expus pe suprafaa matriceal a membranei,

este o protein periferic, solubil n ap, compus din 5
tipuri de subuniti. Sunt trei subuniti de tip a trei subuniti
de tip b una g una d i una e. Subunitile de tip b conin
centrul catalitic de sintez a ATP-ului. Subunitile a i b
formeaz o structur inelar n interiorul creia se gsesc
subunitile g, d i e. Subunitatea g execut o micare de
rotaie n timpul sintezei de ATP. Subunitatea d realizeaz
legtura dintre canalul protonic FO i componenta F1.
Disociat de FO, F1. nu poate sintetiza ATP. FO F1 ATP-aza
poate funciona i ca o pomp de protoni adic, prin hidroliza
de ATP (cnd acesta este n exces) se pompeaz protoni n
spaiul intermembranar al mitocondriei.
Lanul respirator
Ipoteza chemiosmotic
 Lanul respirator
Generarea gradientului de protoni
Translocarea protonilor, d natere unui gradient protonic adic un
gradient de pH. Matricea mitocondrial (compartimentul interior)
este mai alcalin dect spaiul intermembranar (compartimentul
exterior). Prin urmare suprafaa intern a membranei interne
mitocondrial va fi mai negativ electric dect suprafaa extern a
ei. Energia osmotic (electrochimic) a acestui gradient este
generatoarea unei fore protonomotoare. Au fost propuse dou
mecanisme privind transportul protonilor: mecanismul buclei redox
i mecanismul pompei de protoni.
Mecanismul buclei redox presupune c centrele redox ale catenei
respiratoare (FMN, CoQ, citocromii, Fe-S-proteinele) s fie aranjate
n aa fel n membran nct reducerea s implice un centru redox
care s accepte simultan e- i H+ din spaiul matricial. Reoxidarea
acestui centru ar implica eliberarea H+ n spaiul citosolic i
transferul electronilor napoi pe faa matricial.
 Lanul respirator
Generarea gradientului de protoni

Decuplani ai fosforilrii oxidative

Mecanismul pompei de protoni nu necesit ca
centrele redox ale catenei respiratoare s fie
transportori de hidrogen (H++e-). n mecanismul
pompei de protoni transferul electronilor determin
modificri ale proteinelor lanului respirator.
Translocarea H+ are loc ca rezultat al influenei
acestor modificri conformaionale asupra pKa
(constanta de aciditate) ale radicalilor aminoacizilor
i expunerea alternativ a acestora ctre faa
intern i extern a membranei mitocondriale
 Lanul respirator
Generarea gradientului de protoni

Decuplani ai fosforilrii oxidative

-
O OH
NO 2 NO 2
+
H +

NO 2 NO 2
 Lanul respirator
Generarea gradientului de protoni

Decuplani ai fosforilrii oxidative

 Lanul respirator
Transportul transmembranar substrat/produs necesar
fosforilrii oxidative
- -
COO COO

HO C H Naveta HO C H
a-cetoglutarat
CH 2 malat CH 2
- -
COO COO
malat malat
+ +
NAD NAD
malat dehidrogenaza - malat dehidrogenaza
+ + COO
- COO + +
H + NAD H + NAD
- -
COO C O C O COO

C O CH 2 CH 2 C O
CH 2 CH 2 CH 2 CH 2
- - -
COO COO
- COO COO
oxalacetat
a-cetoglutarat COO - a-cetoglutarat oxalacetat
-
COO
+
aspartat aminotrasferaza (GOT) H3N CH H3N
+
CH aspartat aminotrasferaza (GOT)
CH 2 CH 2
- -
COO COO
CH 2 CH 2
+ +
H3N CH - Naveta H3N CH
COO COO
-
CH 2 glutamat glutamat glutamat CH 2
aspartat
- -
COO COO
aspartat CITOSOL MATRICE aspartat
Membrana intern
mitocondrial
 Lanul respirator
Transportul transmembranar substrat/produs necesar
fosforilrii oxidative
Lantul
dihidroxiaceton
respirator
fosfat
H2C OH
-
C e
O
2-
+
CH 2 OPO3
NADH+H FADH 2
Flavoprotein
3 - Fosfoglicerol dehidrogenaza
dehidrogenaza
+ FAD
NAD
H2C OH

HO C H
2-
CH 2 OPO3
glicerol 3-fosfat
membrana intern
CITOSOL mitocondrial MATRICE
 Lanul respirator
Transportul transmembranar substrat/produs necesar
fosforilrii oxidative
 Lanul respirator
Controlul fosforilrii oxidative
Consumul de ATP nu este constant (somn activitate)
Majoritatea etapelor lanului respirator sunt reversibile, etapa
catalizat de complexul IV (citocromoxidaza) este ireversibil.
Controlul acestui complex este realizat prin intermediul
concentraiei de cit.c Fe2+.
n repaos concetraia ATP-ului este mare, glicoliza i ciclul
Krebs sunt inhibate, concentraia NADH+H+ este mic prin
uramre concentraia cit.c Fe2+ este mic i invers

2cit c Fe2+ +2H + +1/2O2+ADP+Pi 2cit c Fe3+ +ATP+H2O

 Alte procese oxidoreductore
Rolul acestor procese este
hidroxilarea unor compui. Cele mai
numeroase reacii de hidroxilare
sunt cele care utilizeaz un sistem
enzimatic ce conine ca i
component terminal hem-proteina
citocrom P450
n REN i microzomii din ficat, acest
sistem asigur hidroxilarea unor
compui exogeni, cum ar fi unele
medicamente, dar i compui
endogeni, cum ar fi unii hormoni, Malat enzima malic piruvat
25-OH colecaciferol, avnd drept Izocitrat izocitrat dehidrogenaz cetoglutarat
rezultat creterea solubilitii
acestora sau schimbarea activitii biologice
 Alte procese oxidoreductore
n urma ultimei reacii din lanul de oxidare biologic rezult
ionul de superoxid

3+ + 2+ -
4cit c Fe O2 4 cit c Fe + O2
superoxid dismutaza
- +
2O2 + 2H H2O2 + O 2

catalaza
2H2O2 2 H 2O + O 2

glutation peroxidaza
H2O2+2G-SH 2 H 2O + G-S-S-G

glutation reductaza
+ +
G-S-S-G + NADPH+H 2 G-SH + NADP