UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE

FACULTAD DE QUMICA Y BIOLOGA

PRINCIPIOS DE SISTEMAS CELULARES

INTRODUCCIN
INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA
MICROBIOLOGA

INTEGRANTES: Francis Gonzlez

Javiera Tapia

PROFESOR: Eduardo Lpez

pez

AYUDANTE: Rafael Berrios

errios

FECHA DE ENTREGA: 26 de mayo de 2017

 1. INTRODUCCIN

Los organismos procariontes existen desde hace mas de 3500 millones de aos, pero fue recin en
el ao 1674 que el microscopista holands Anton van Leeuwenhoek descubri la bacteria y otros
microorganismos al observar una gota de agua de un lago a travs de una lente de vidrio. Durante la
parte final del siglo XIX la mayora de los microorganismos se identificaron como patgenos,
agentes que causan enfermedades, pero actualmente se sabe que solo una pequea parte lo son, la
mayora de las especies bacterianas desempean papeles fundamentales en la biosfera.

Los procariontes son organismos extremadamente exitosos en trminos de nmero y distribucin, lo

cual es debido a su capacidad de reproducirse con rapidez, lo hacen de modo asexual y en general
mediante fisin binaria. Si es que nada interfiere, una sola bacteria puede dar origen a ms de 1000
millones en solo 10 horas siempre y cuando existan los nutrientes necesarios para que se produzca
esta tasa de reproduccin, de lo contrario, al irse agotando los nutrientes y acumulndose los
productos desechos, disminuye la tasa hasta que comienza la muerte de los microorganismos.

Debido a la importancia de las bacterias en la naturaleza se hace necesario estudiarlas y

caracterizarlas realizando cultivos, lo que es posible y facilitado por su rpida reproduccin. Como
la mayora de los estudios de laboratorio se realizan con cultivos puros, es decir, con un nico
microorganismo, es necesario manejar tcnicas de inoculacin y de asepsia. La siembra se puede
realizar mediante estras (se realizan 2 o tres estras paralelas en el borde de la placa, se flamea el
asa, se enfra y se realizan dos o tres ms en ngulo recto con las primeras lneas y pasando por
ellas. Repetir una o dos veces ms y finalmente realizar un zig-zag hacia el centro de la placa) o en
forma de csped bacteriano (se pone rastrillo en alcohol y luego se flamea para esterilizarla, con una
micropipeta se agrega un volumen de microorganismos y luego se coloca el rastrillo estril sobre
este y se esparce por toda la placa) en medios slidos de cultivo como lo es el agar, por lo que al
inocular con microorganismo como Escherichia coli, Bacillus subtilis o Staphylococcus aureus una
placa petri con medio de cultivo Luria-Bertani (LB) agar y luego incubar las muestras por el tiempo
y las condiciones necesarias, se observarn colonias con tamao, forma, color y texturas diferentes,
caractersticas de cada microorganismo.

Por otro lado, aunque es la minora de las bacterias, algunas de ellas actan como patgenospor lo
que es necesario aplicar sustancias qumicas para prevenir contaminacin o infeccin inhibiendo las
actividades y/o el crecimiento bacteriano en el caso de los bacteriostticos, comnmente conocidos
como antispticos, o matando a los microorganismos si se trata de un bactericida, denominados
como desinfectantes. La eficiencia de estos depende de una variedad de factores como la

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concentracin, el tiempo de exposicin, las condiciones medio ambientales y el tipo de poblacin
microbiana que se quiere destruir, de modo que si aplicamos un desinfectante y un antisptico sobre
superficies contaminadas y luego incubamos muestras de las dos, no debera haber formacin de
colonias bacterianas.

Cuando los seres humanos o animales adquieren enfermedades debido a bacterias, deben
combatirlas mediante el uso de antibiticos, los cuales no actan de igual forma sobre todos los
microorganismos debido a sus diferentes modos de accin, adems algunas bacterias han generado
resistencia a ciertos antibiticos por el uso excesivo de estos.Una forma de evaluar la
susceptibilidad de las bacterias a los agentes antimicrobianos, es realizando un antibiograma
mediante el uso de multidiscos, en este ensayo la lectura de los resultados es en funcin del
dimetro de los halos de inhibicin, si es superior a 15 mm se dice que la bacteria es sensible, si es
inferior a 15 mm se clasifica como lmite y si el halo es inexistente, la bacteria es resistente. Este
halo de inhibicin es influenciado por varios factores como medio de cultivo, estabilidad y
capacidad de difusin del antibitico, cantidad de inoculo, rapidez de desarrollo del
microorganismo, sensibilidad al antibitico y tiempo de incubacin, cualquier variacin de algunos
de estos puede afectar los resultados.Al realizar un antibiograma sobre cultivo en csped de
Staphylococcus aureus, se debieran obtener 10 halos de distintos dimetros que indicaran la
susceptibilidad de este coco a diferentes antibiticos.

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivos generales

2.1.1. Identificar el material habitual utilizado en la prctica de microbiologa.

2.1.2. Manipular con alguna destreza y en condiciones de esterilidad materiales de laboratorio y
cultivo de microorganismos.

2.2 Objetivos especficos

2.2.1. Realizar un control microbiolgico al ambiente y al manipulador.

2.2.2. Realizar siembra de B. subtilis en paca petri con medio LB agar a partir de cultivo lquido
por estras.
2.2.3. Realizar siembra de E. coli en paca petri con medio LB agar partir de cultivo en medio
slido por estras.
2.2.4. Evaluar y Comparar la efectividad de desinfectantes, antispticos y antibiticos contra
microorganismos.

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 3. MATERIALES Y MTODOS

3.1 Pasos previos

Antes de comenzar la actividad se debe esterilizar la zona de trabajo y manos, luego fijar el
mechero al mesn, y mantener una llama azul, todos los instrumentos deben ser manipulados cerca
de la llama, tambin se deben rotular claramente tubos y placas.

3.2 Control microbiolgico del ambiente

Se dej abierta en el ambiente durante 10 minutos una placa Petri que contena LB agar, luego, se
cerr la placa y se incub durante 3 das a temperatura ambiente.

3.3 Control microbiolgico del manipulador

Para determinar la carga bacteriana del manipulador se utiliz muestra de las encas y lengua
extrada con una trula estril, luego se sembr en la mitad de la placa Petri con LB agar la muestra
extrada desde las encas y en la otra mitad la muestra extrada desde la lengua. Finalmente, se dej
incubando de la misma manera que el control microbiolgico anterior.

3.4 Accin de antisptico y desinfectante en la piel de manos.

En primera instancia, se pas sobre cada mano una torula humedecida en medio LB y se inocul la
mitad de dos placas, respectivamente. Luego, se aplic cloro y jabn gel, en cada una de las manos.
Se volvi a pasar sobre cada mano una torula humedecida, y se inocularon las mitades sin siembra
de las dos placas utilizadas anteriormente. Finalmente, se incubaron las placas sin invertirlas por 3
das a temperatura ambiente.

3.5 Efecto de antibiticos sobre el crecimiento bacteriano (antibiograma).

Se agregaron 200 l de un cultivo de S. aureus a una placa de LB agar, luego se esparci con
rastrillo estril, a fin de obtener un csped bacteriano.Finalmente, se le agregaron los discos con
antibiticos y se incub por tres das a temperatura ambiente.

3.6 Siembra de muestras.

Con ayuda de un asa estril se traspas una muestra de B. subtilis cultivada en medio lquido, y una
muestra de E. coli cultivada en medio slido a los extremos de dos placas Petri que
contuvieranmedio de cultivo LB Agar, se extendieron las muestras formando estras sobre la
superficie del agar, se dej incubando durante tres das a temperatura ambiente.

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 4. RESULTADOS

4.1 Control microbiolgico de ambiente

En la figura 4.1 se aprecia crecimiento de hongos filamentosos de color blanco, rojo y caf, siendo
el de color blanco el de mayor crecimiento, adems se observan unas cuantas colonias redondas de
color blanco.

Figura 4.1: Placa petri con LB agar que estuvo 15 minutos abierta en el Laboratorio de
Operaciones Unitarias de la Universidad de Santiago de Chile.

4.2 Control microbiolgico de manipulador.

En la figura 4.2 se observa crecimiento puntiforme en mucha mayor cantidad para la muestra de
enca que para la de lengua

Figura 4.2: (A) Siembra de muestra obtenida de lengua (B) Siembra de muestra obtenida de encas.

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4.3 Control de la accin de desinfectantes, antispticos y antibiticos.

En la figura 4.3 se observa que el desarrollo de la muestra sin desinfectante (B) es irregular y de
superficie brillante, mientras que en la muestra con desinfectante (A) se observan solo un par de
colonias circulares.

Figura 4.3: (A) Cultivo de muestra de manos con desinfectante de superficies (cloro) (B) Cultivo
de muestra de manos sin ningn tipo de desinfectante.

En la figura 4.4 se aprecia crecimiento puntiforme para la muestra con y sin desinfectante (B y A
respectivamente), pero con mayor concentracin en (B).

Figura 4.4: (A) Cultivo de muestra de manos con jabn gel (B) Cultivo de muestra de manos sin
ningn tipo de antisptico.

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En la figura 4.5 se observa que no se produjo crecimiento de S. aureus, no se aprecia ninguna
diferencia en el agar entre (A) y (B), por lo tanto tampoco se produjeron halos de inhibicin.

Figura 4.5: Placa petri en que se cultiv Staphylococcus aureus y se realiz antibiograma con
multidisco (A) Antes de la incubacin (B) Despus de la incubacin. Los antibiticos aplicados son
(a)Clindamicina (b)Oxacilina (c)Amp-Sulbactam (d)Gentamicina (e)Tetraciclina
(f)Ciprofloxacino (g)Cefalotina (h)Cefuroxima (i)Penicilina (j)Eritromicina.

4.4 Siembra de muestras.

En la figura 4.6 se observan algunas pequeas colonias circulares, de color blanco y brillante.

Figura 4.6: Siembra de Bacillus subtilis en medio slido a partir de medio lquido.

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En la figura 4.7 se observa un desarrollo mucoso del cultivo de E. coli, de color blanco y con un
poco de elevacin convexa.

Figura 4.7: Siembra de Escherichia coli en medio slido a partir de medio slido.

5. DISCUSIONES

5.1 Control microbiolgico de ambiente

El aire contiene en suspensin diferentes tipos de microorganismos, especialmente bacterias y

hongos. En la figura 4.1 se aprecia crecimiento de esporas fngicas, las que son componentes
normales de ambientes externos, que pueden corresponder a diferentes especies fngicas, como lo
son el Cladosporium, que es el hongo que predomina en el aire, tanto sobre la tierra como sobre el
mar, aunque tambin es frecuente encontrar otros mohos, como Aspergillus, Penicillium, Alternaria
y Mucor y la levadura Rhodotorula (De La Rosa M, Mosso M.A, Ulln C, 2012).Tambin se
observ el crecimiento de ciertas colonias redondeadas de color blanco, que pueden corresponder a
bacterias esporuladas,que se aislan frecuentemente en el aire, de los gneros Bacillus, Clostridium y
Actinomicetos (De La Rosa M, Mosso M.A, Ulln C, 2012).

5.2 Control microbiolgico de manipulador.

La boca presenta caractersticas que la hacen de un ambiente ideal para el crecimiento bacteriano.
En la figura 4.2 se observa crecimiento bacteriano en mayor cantidad para la muestra de enca que
para la de lengua, esto sedebe a que, en la boca los dientes y las encas acumulan una gran cantidad
de nutrientes que favorecen el crecimiento de bacterias en biopelculas. Sin embargo, la saliva
contiene una baja concentracin de nutrientes y sustancias antibacterianas como la lisozima

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(Ingraham, 1998), es por esta razn que en la muestra extrada de lengua se origina un menor
crecimiento bacteriano, que en la muestra extrada de las encas.

5.3 Accin desinfectante y antisptico.

Se observa en la imagen 4.3 y 4.4 (B) el crecimiento de numerosas poblaciones bacterianas para las
manos sucias. Comparando las imgenes 4.3 y 4.4 (A), se observa que el desinfectante cloro tiene
un mayor poder de accin sobre las bacterias aisladas que el jabn gel, esto es debido a que el jabn
gel es un antisptico bacteriosttico que solo inhibe el crecimiento de colonias, sin embargo el cloro
es un desinfectante bactericida que mata o destruye las bacterias.

5.4 Efecto de antibiticos sobre crecimiento bacteriano.

En la figura 4.5 se observa que no se produjo un csped bacteriano de S. aureus, por lo tanto, los
antibiticos no pudieron ejercer su accin en contra del agente infeccioso. Era de esperarse que al
realizar el antibiograma se produjeran diferentes halos de inhibicin, los que indicaran si la cepa es
sensible o resistente a cada antibitico utilizado.

Los antibiticos utilizados presentan las siguientes actividades para la cepa de S. aureus: La
clindamicina tiene actividad bacteriosttica frente a cerca del 85% de cepas de S. aureus
actualmente prevalentes en nuestro medio.Las tetraciclinas tienen actividad bacteriosttica, con
efecto postantibitico prolongado frente a S. aureus. Las penicilinas isoxazlicascomo la oxacilina,
son entre 4 y 8 veces ms activas que la meticilina, antibitico frente al cual la cepa de S aureuses
resistente. Aislados de S. aureus producen betalactamasasque inactivan a la penicilina, por lo tanto,
es resistente a este antibitico. El amp-Sulbactam, conformado por ampicilina y sulbactam, un
inhibidor de la enzima betalactamasa, es un antibitico activo frente al S. aureus(Sociedad Espaola
de Quimioterapia, 2013).

5.5 Siembra de muestras.

Se observa en la placa de csped bacteriano de Bacillus subtilis que la distribucin de

microorganismos no fue uniforme dado a que se aprecian pequeos crculos aislados,esto puede ser
debido a que los nutrientes no estn distribuidos de forma equitativa por toda la placa no
permitiendo la proliferacin igualitaria a travs de ella.

La placa por estras muestra diversas poblaciones de E. Coli. Se observa que por la parte inferior de
la placa existe una mayor proliferacin de microorganismos que en los otros hemisferios. Lo

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anterior se debe a que la muestra comenz por el lado de mayor proliferacin pasando a los dems.
Adems las condiciones de nutrientes fueron ms ptimas en la seccin ya mencionada.

6. CONCLUSIONES

Fue posible identificar y utilizarlos materiales comnmente usados en microbiologa, pero no fue
posible realizar de forma exitosa todos los procedimientos de cultivo de microorganismos.

Se observ el desarrollo de B. subtilis y E. coli cultivado mediante estras, tambin se pudo hacer
una control de la presencia de microorganismos tanto en el ambiente como en boca y manos. Se
logr ver la efectividad del cloro como desinfectante, pero por otro lado se observ que el jabn gel
no fue tan eficiente como antisptico.

Finalmente, no se pudo observar colonias de S. aureus, ni su susceptibilidad ante los antibiticos

porque no fue realizado de manera correcta el csped bacteriano.

7. REFERENCIAS

7.1 Ingraham John L, Ingraham Catherine A. (1998). Introduccin a la Microbiologa. Volumen 2.

Editorial Revert, S.A. (Barcelona) pp: 343.

7.2 Solomon, Berg, Martin. Biologa, 9 ed. Editorial Cengage Learning (Mxico) pp: 517, 522,
532, 534.

7.3 Sociedad Espaola de Quimioterapia, (2013), Gua de tratamiento antimicrobiano de la

infeccin por Staphylococcus aureus, Rev. esp. quimioter, 26 (Suppl. 1), pp: 1-84.

7.4 De La Rosa M, Mosso M.A, Ulln C. (2012). El aire: hbitat y medio de transmisin de
microorganismos, Observatorio Medioambiental, Vol. 5, pp: 375, 384.

7.5 https://www.emarinsda.com/informacin-tcnica lista halos.