INTEGRANTES:

Domnguez Ojeda Luis ngel.

Flores Ledesma Andrea.
Gua Rodrguez Juana.
Gutirrez Amezquita Felisa Daniela.
Miranda Martnez Ftima Guadalupe.
Rodrguez Rico Iris Yunuel.
 Practica 6 : PRACTICA No.6

identificacin de
IDENTIFICACION DE PROTEINAS

proteinas
OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las protenas, como la
configuracin y la identificacin por el reactivo BIURET.

MARCO TEORICO:

Protena, cualquiera de los numerosos compuestos orgnicos constituidos por

aminocidos unidos por enlaces peptdicos que intervienen en diversas funciones
vitales esenciales, como el metabolismo, la contraccin muscular o la respuesta
inmunolgica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes
principales de las clulas y que suponen ms del 50% del peso seco de los
animales. El termino protena deriva del griego proteico, que significa primero.

El plasma sanguneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de protenas por 100al. Las
protenas plasmticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibringenos; b) globulinas;
c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a
su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separacin simple o burda
mediante precipitacin salina de dichas protenas o fuerzas inicas diferentes.

La precipitacin salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar til en

muchas tcnicas de aislamiento de protenas en particular de enzimas. Existen 2
tipos de lograr esta etapa de purificacin o bien sea aadiendo sulfato de amonio
slido, o bien sea con una solucin saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el
primer caso, existe ventaja de mantener en un mnimo el aumento de volumen; en
cambio la solucin saturada presenta la ventaja de una manipulacin ms
cmoda.

Las molculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido
conectivo y el pelo, hasta los glbulos compactos solubles, capaces de atravesar
la membrana celular y desencadenar reacciones metablicas. Tienen un peso
molecular elevado y son especficas de cada especie y de cada uno de sus
rganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 protenas distintas, de
las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las protenas sirven sobre todo
para construir y mantener las clulas, aunque su descomposicin qumica tambin
proporciona energa, con un rendimiento de 4 kilocaloras por gramo, similar al de
los hidratos de carbono.
Las enzimas son protenas, al igual que la insulina y casi todas las dems
hormonas, los anticuerpos del sistema inmunolgico y la hemoglobina

REACCIONES COLOREADAS ESPECFICAS (BIURET)

Fundamento: Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que

sirven por tanto para su identificacin, destaca la reaccin del Biuret. Esta
reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos ya que
se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse
los aminocidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en
un medio fuertemente alcalino, se une con los enlaces peptdicos formando un
complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentracin de protenas.

MATERIAL

1 gradilla

Tubos de ensaye
Pescado, espinaca, levadura, Albmina, grenetina y casena

REACTIVOS

NaOH al 10%

Sulfato cprico al 1% en gotero

PROCEDIMIENTO
1 Preparamos las solucin de las distintas protenas

2 En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solucin de protena (diluida al 1%).

3 Aadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.

4 Agregar gota a gota solucin de sulfato cprico al 1% hasta la aparicin de

un color rosa o violeta (mximo 10 gotas).
 5 Reportar a que gota aparece el color.
RESULTADO

PROTENA NUMERO DE GOTA IMAGEN

PESCADO 5
ALBUMINA 3

LEVADURA 6

GRENETINA 2

ESPINACA 9
 CASEINA 4

Conclusin:

Entre las reacciones coloreadas especficas de Biuret nos dice que es una prctica
especialmente para identificar las protenas, Esta reaccin la producen los
pptidos y las protenas, pero no los aminocidos ya que se debe a la presencia
del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los aminocidos. Nos
dice que segn la intensidad de coloracin de la muestra es la cantidad de
protenas que tiene presentes.

En la siguiente imagen podemos comprobar lo que anterior mente se mencion: el

pescado es una fuente con alto contenido de protenas, por lo que su tincin fue
de un tono ms fuerte.

REACCION XANTOPROTEICA

Objetivo: El objetivo de esta experiencia es extraer protenas de algunas

sustancias para luego reconocer su naturaleza proteica.
Introduccin:

La reaccin xantoproteica es un mtodo que se puede utilizar para determinar la

presencia de protenas solubles en una solucin, empleando cido ntrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con
aminocidos portadores de grupos aromticos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se torna color
amarillo oscuro.

La reaccin xantoproteica se puede considerar como una sustitucin electroflica

aromtica de los residuos de tirosina de las protenas por el cido ntrico dando un
compuesto coloreado amarillo a pH cido.

Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa, mas no cuantitativa ( esto se
debe al hecho de que nos permite determinar si la muestra es una protena soluble
en agua, pero no aporta informacin relevante para clculos estequiomtricos).
Por ende determina la presencia o no de protenas. Para cuantificar se usa otra
reaccin, como la de Biuret, y se hace un anlisis espectro fotomtrico.

MATERIAL REACTIVOS
Tubos de ensaye Protenas de:
Pescado, Espinaca, grenetina,
albumina, levadura y casena

Gradilla

Bao Mara NaOH

 NaOH 3 (concentrado)

Procedimiento:
1 Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de protena.
2 Aadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO 3 concentrado.
3 Calentar en bao mara por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4 Agregar gota a gota solucin de NaOH concentrado (mximo 10 gotas) a l
vire de color. Observar y reportar resultados.

Metodologa en imgenes:
Imagen Procedimiento
Rotulamos 6 tubos de ensaye, cada
uno con el nombre de las distintas
muestras de protena.
Posteriormente colocamos 3 ml de
concentrado de protena en lo tubos de
ensaye correspondientes.
Una vez listos aadimos a cada tubo
1ml de HNO3 concentrado.

Posteriormente una vez agregado el

reactivo a cada muestra de protena
mezclamos perfectamente y lo
llevamos a un vaso de precipitados
con agua hirviendo durante dos
minutos

Una vez transcurrido el tiempo en un

vaso de precipitado con agua fra
colocamos los tubos previamente
calentados.
Hasta lograr que estos se enfriaran

Una vez fros agregaos gota a gota

solucin de NaOH concentrado en
cada una de las protenas hasta notar
su cambio de color.

Estos fueron los resultados obtenidos

Resultados:
Protena Numero de gotas
Pescado 9
Espinaca 5
Levadura 8
Almina 4
Grenetina 5
Casena 3

Observaciones.
Es importante el manejo del concentrado de las gotas para una buena
determinacin de concentrado de protenas
Conclusiones:
La reaccin xantoproteica es un mtodo que se puede utilizar para determinar la
presencia de protenas solubles en una solucin, empleando cido ntrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con
aminocidos portadores de grupos aromticos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se torna color
amarillo oscuro.
La reaccin xantoproteica se puede considerar como una sustitucin electroflica
aromtica de los residuos de tirosina de las protenas por el cido ntrico dando un
compuesto coloreado amarillo a pH cido.

DESNATURALIZACIN DE PROTENAS
Introduccin

Una protena es una cadena de aminocidos cuya secuencia es especfica. Se

forman en los ribosomas por lectura de los genes que llevan la informacin de la
secuencia concreta de aminocidos que da lugar a una determinada protena.
Esta cadena de aminocidos agrega otros tomos o molculas como cobre,
zinc, hierro, etc, para dar lugar a la protena final que comienza a plegarse sobre s
misma para adoptar la conformacin espacial necesaria para realizar
correctamente su funcin biolgica. La prdida de esta conformacin espacial
hace que la protena no pueda cumplir con su funcin biolgica en el organismo y
es lo que se conoce como desnaturalizacin de protenas. Por ejemplo, un enzima
pierde su funcin cataltica.

La desnaturalizacin de protenas es consecuencia de algn factor externo como

acidez del medio, temperatura, etc. Es importante saber que la desnaturalizacin
de una protena no afecta a lo que se conoce cmo estructura primaria, esto es, la
secuencia de aminocidos base de la protena.Hay casos excepcionalmente raros
en los que una protena desnaturalizada no pierde su funcin biolgica.

Fundamento

Al elevarse la temperatura la energa cintica de las molculas con lo que se

desorganiza la envoltura acuosa de las protenas, y se desnaturalizan. Asimismo
el aumento de la temperatura destruye las interacciones dbiles y desorganiza la
estructura de la protena de forma que comienza a interactuar, por lo cual es
importante realizar este mtodo aplicado.

Materiales y reactivos

Materiales Reactivos
Tubos de ensaye cido actico al 1%

Gradilla Acetona

Bao mara ter

Tetracloruro de
carbono

Butanol

Protenas

NaOH concentrado con gotero

Procedimiento

1. Calentar a hervir 5ml de solucin de protena

2.
3.
4. Aadir 2 gotas de
acido actico al 1%

5. Colocar en 4 tubos, la solucin repartida por igual y agregar de la siguiente

manera:
 Tubo1= 1ml acetona
Tubo2= 1ml de ter
Tubo3= 1ml de butanol
Tubo4=1ml de tolueno

6. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.

7. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH
concentrado, y agitar.

8. Observar y anotar diferencias.

ACIDO ACETICO SOLUCION NAOH
LECHE
tubo 1 ACETONA
tubo2 ETER
tubo 3 BUTANOL
tubo 4 TOLUENO
PESCADO
 tubo 1 ACETONA
tubo 2 ETER
tubo 3 BUTANOL
tubo 4 TOLUENO
LEVADURA
tubo 1 ACETONA
tubo 2 ETER
tubo 3 BUTANOL
tubo 4 TOLUENO
GRENETINA
tubo 1 ACETONA
tubo 2 ETER
tubo 3 BUTANOL
tubo 4 TOLUENO
HUEVO
tubo 1 ACETONA
tubo 2 ETER
tubo 3 BUTANOL
tubo 4 TOLUENO
ESPINACA
tubo 1 ACETONA
tubo 2 ETER
tubo 3 BUTANOL
tubo 4 TOLUENO

OBSERVACIONES

En esta prctica se pudo observar que al practicar este mtodo el coagulo, se

coagularon de inmediato las protenas y posteriormente, al terminar de agregarles
los 4 qumicos a cada una de ellas pudimos observar como el coagulo iba
desapareciendo con la aplicacin de las tres gotas de NaOH.

Conclusin
Se puede concluir que mediante esta prctica es ms fcil que se desnaturalize la
protena al exponerse a las altas temperaturas.
 OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE

OBJETIVO

El objetivo fundamental de esta prctica es la obtencin de la casena de la leche

entera liquida mediante un procedimiento qumico.

FUNDAMENTO
La casena es un conjunto heterogneo de protenas por lo que es difcil fijar una
definicin, sin embargo todas las protenas englobadas en lo que se denomina
casena tienen una caracterstica comn que precipitan cuando se acidifica la
leche a pH 4.6 por ello a la casena tambin se le suele denominar protena
insoluble de la leche.
A este pH (4,6), la casena precipita, debido a la reduccin de repulsiones
intermoleculares. A diferencia de muchas otras protenas, la casena no precipita
al calor. Precipita bajo la accin de la renina (enzima proteoltica presente en el
estmago de terneros) para formar la paracasena. Al precipitar por accin de
cidos se le llama casena cida. Este precipitado blanco forma la base para la
elaboracin de todo tipo de quesos. La secuencia peptdica de la casena
contiene un nmero inusual de residuos de prolina (Ca. 15%). Como resultado, es
relativamente hidrofbica (poco soluble en agua) y carece de estructura
secundaria o terciaria definida. En la leche se encuentra como suspensin de
partculas que asemeja a las micelas de surfactantes Estas micelas de casena se
estabilizan por iones de calcio e interacciones hidrofbicas.
La casena es una protena de la leche del tipo fosfoprotena que se separa de la
leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las fosfoprotenas son un grupo
de protenas que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido
fosfrico, por lo tanto su molcula contiene un elemento fsforo. La casena
representa cerca del 77 al 82 por ciento de las protenas presentes en la leche y el
2.7 por ciento en la composicin de la leche lquida.
Cuando coagula con renina, es llamada paracasena, y cuando coagula a travs
de la reduccin del pH es llamada casena cida. Cuando no est coagulada se le
llama caseingeno.
La casena es un slido blanco-amarillento, sin sabor ni olor, insoluble en agua. Se
dispersa bien en un medio alcalino, como una solucin acuosa de hidrxido de
sodio: NaOH, formando caseinatos de sodio.

MATERIALES
MATERIALES

2 vasos de precipitados de 250ml

1 probeta de 100ml

1 embudo

2 papel filtro

REACTIVO

leche entera

HCl 0.2N

acetona

ter
PROCEDIMIENTO
1 Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado

2 Agregar 100ml de agua destilada

3 Con una pipeta aadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8

4 Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.

5 Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.

6 Repetir este lavado 4 veces.

7 Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la

protena.
8 Suspender la casena en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar
y filtrar. Repetir 4 veces.
9 Despus del ltimo lavado, suspender la protena en 5ml de ter y 5ml de
acetona, y filtrar.
10 Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el
polvo 24 horas despus.
OBSERVACIONES

No pudimos filtrar la casena y por ello no pudimos obtener el polvo que es el

objetivo de esta prctica.

RESULTADOS

Esta fue una prctica que nos sirvi para identificar las protenas presentes en
ciertos alimentos utilizando diferentes mtodos para asi poder obtener las
protenas.
La casena es la protena presente en la leche, tiene una caracterstica comn que
precipita cuando se acidifica la leche a pH 4.6 por ello a la casena tambin se le
suele denominar protena insoluble de la leche.
Con esta prctica hubisemos podido separar la casena de la leche hasta obtener
el polvo, sin embargo no pudimos filtrarlo, as que solo dejamos que se separa en
el vaso de precipitado.

CASEINA

CUESTIONARIO

1. Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de las PROTEINAS?

R=las protenas pierden las estructuras de orden superior (secundaria,
terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica reducida a un
polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija.
2. Cul de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de
desnaturalizacin?
R=Practica 3 desnaturalizacin de protenas.
3. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una
protena?
 R=La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante
la reaccin del Biuret.
4. Qu es la desnaturalizacin de protenas?
R= En bioqumica es un cambio estructural de las protenas, donde pierden
su estructura nativa, y de esta forma su ptimo movimiento y a veces
tambin cambian sus propiedades fsico-qumicas.
5. Qu pasa cuando se aplica calor a las protenas
La energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la
envoltura acuosa de las protenas.
6. Cmo acta el NaOH en los alimentos?
R=Regula el pH y regenera el cambio inico
7. Si se realiza la reaccin del Biuret a un aminocido como la glicina
es positiva o negativa? Por qu?
R=No porque se necesita tener una cadena de aminocidos con al menos
un enlace peptdico para que la prueba de positiva. La glicina al no estar
unida con otro aminocido, dar negativo

8. Explica la reaccin Xantoproteica

R=Es un mtodo que se puede utilizar para determinar la presencia de
protenas solubles en una solucin, empleando cido ntrico concentrado.
La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos
portadores de grupos aromticos, especialmente en presencia de tirosina.
Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se torna color
amarillo oscuro.

BIBLIOGRAFIA

PROTEINAS https://es.scribd.com/doc/109416595/Reconocimiento-de-
Proteinas 24-05-2017
http://www.ercoworldwide.com/index.php/products/caustic/?lang=es
https://www.quiminet.com/articulos/las-propiedades-del-hidroxido-de-
sodio-2788210.htm
https://es.wikipedia.org/wiki/Desnaturalizacin_(bioqumica)