Estructura y replicacin

del material gentico

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del

material gentico
1
1
 Objetivos tema 6:
Estructura y replicacin del material
gentico
Debern quedar bien claros los siguientes puntos:

Cmo se descubri la naturaleza qumica del

material hereditario
La composicin qumica de los cidos nucleicos
La estructura 3D del DNA: naturaleza
complementaria y antiparalela de la doble cadena
del cido desoxirribonucleico (DNA)
La extraordinaria capacidad explicativa del
modelo del DNA de la funcin biolgica
fundamental de esta molcula
La replicacin semiconservativa
Enzimologa de la replicacin
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 2

2 material gentico
 La transformacin bacteriana en
Streptococcus pneumoniae (Griffith 1928)

Rugosa

Muerte por neumona Cepa resistente

Lisa

Dr. Antonio Barbadilla

No muere Tema 6: Estructura

Muere y replicacin del 3
3 material gentico
 Cul es el Principio transformante?

Principio

Rugosa Lisa

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 4

4 material gentico
 Colin MacLeod

El elemento transformante Maclyn McCarty

es el DNA (1944)
Oswald
Avery

Ver animacin
experimento
tranformacin
bacteriana
Dr. Antonio Barbadilla

Slo DNA produce transformacin

Tema 6: Estructura y replicacin del 5
5 material gentico
 Experimento de Alfred Hershey y Martha
Chase con fagos (1952)

Bacterifago T4

El DNA es el
material
infeccioso
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 6

6 material gentico
 Componentes de los cidos nucleicos

adenina

timina
guanina

citosina

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 7

7 material gentico
 Reglas de Chargaff

1. Proporcin de purinas = Proporcin de pirimidinas

A+G=C+T

2. A=T

3. G=C
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 8

8 material gentico
 1953. Ao culminante:
J. Watson y F. Crick resuelven la
estructura tridimensional del DNA
(Nature 171: 737-738)

Watson y yo hemos
encontrado el
secreto de la vida

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 9

9 material gentico
 1953. Ao culminante:

Dos lneas de evidencia:

Reglas de Chargaff

Fotografas de difraccin de rayos X

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 10

10 material gentico
 Significado reglas de Chargaff

Complementariedad de las basesy replicacin del

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura 11
11 material gentico
 Difraccin de rayos X

Hemoglobina

Linus Pauling
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 12

12 material gentico
 Interpretacin del patrn difraccin de rayos X del DNA

Rosalind E.
Franklin

Dr. Antonio Barbadilla

Crick del
Tema 6: Estructura y replicacin 13
13 material gentico
 Modelo en metal
del DNA

J. Watson y F. Crick
Concluyen: La estructura del DNA es una
doble hlice, formada por cadenas orientadas
en direcciones opuestas (antiparalelas). La
estructura se mantiene gracias a enlaces de
hidrgeno entre las bases nitrogenadas que se
encuentran orientadas hacia el interior de las
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 14

14 cadenas material gentico
 Doble hlice, formada La estructura se mantiene gracias
por cadenas orientadas a enlaces de hidrgeno entre las
bases nitrogenadas que se
en direcciones opuestas
encuentran orientadas hacia el
Dr. Antonio Barbadilla
(antiparalelas). interior de las cadenas
Tema 6: Estructura y replicacin del 15
15 material gentico
 Desnaturalizacin del DNA

Separacin de las dos hebras por calor

Una mayor proporcin G-C tiene una mayor
temperatura de desnaturalizacin (fusin)
100
Porcentaje G + C

80

60

40

20

Dr. Antonio Barbadilla

70 80 90 100 110
Temperatura de fusin (desnaturalizacin)
Tema 6: Estructura y replicacin del 16
16 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla
Hlices levgiras y dextrgiras
Tema 6: Estructura y replicacin del 17
17 material gentico
 DNA-B dextrgira
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 18

18 material gentico
 Ver artculo
Nature
1953
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 19

19 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 20

20 material gentico
 La estructura del DNA suministra una
explicacin asombrosamente
simple del fenmeno de la herencia
La estructura explica:

La naturaleza de la secuencia lineal de los genes

(informacin digital cuaternaria en secuencias
unidimensionales de monmeros A,T,G,C)
El mecanismo de replicacin exacta de los
genes
La naturaleza qumica de las mutaciones
Por qu la mutacin, la recombinacin y la
expresin gnica son fenmenos separables a
nivel molecular
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 21

21 material gentico
 Esencial a la relacin
ntima entre estructura
molecular y funcin
gentica del DNA es el
concepto de molde
La complementariedad de las
bases nitrogenadas permite que
la secuencia de una cadena
sencilla de DNA acte como un
molde para la formacin de una
copia complementaria de DNA
(replicacin) o de mRNA
(transcripcin)
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 22

22 material gentico
 Y ahora las declaraciones de Watson y
Crick sobre el ADN. Esto es para m la
prueba verdadera de la existencia de Dios
Salvador Dal

Antes pensbamos que nuestro futuro

estaba en las estrellas. Ahora sabemos que
est en nuestros genes.
James Watson

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 23

23 material gentico
 Una estructura
tan bonita tena,
por fuerza, que
existir
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 24

24 material gentico J. Watson
 Una estructura
tan bonita tena,
por fuerza, que
existir
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del J. 25

Watson
25 material gentico
El DNA
contiene informacin
digital cuaternaria en
secuencias unidimensionales
de monmeros A,T,G,C
Dr. Antonio Barbadilla

(cristal26 aperidico) Tema 6: Estructura y replicacin del

material gentico
26
Hay grandeza en esta concepcin de la
vida,... que mientras este planeta ha ido
girando segn la constante ley de la
gravitacin, se han desarrollado y se estn
desarrollando, a partir de ununacomienzo
molcula tan
sencillo, infinidad
helicoidal asombrosa,
de formas
infinidad
cada
de vez
formas
ms
bellasvez
cada y maravillosas
ms bellas y maravillosas
Charles Darwin

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 27

27 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 28

28 material gentico
 Replicacin del DNA

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 29

29 material gentico
 25 de Abril 1953

It has not escaped our notice that the

specific pairing we have postulated
immediately suggests a possible copying
mechanism for the genetic material.

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 30

30 material gentico
 Posibles modelos de replicacin

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 31

31 material gentico
 Replicacin del DNA
Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una
nueva cadena
El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958)
demuestra que la replicacin es semiconservativa

Mathew Meselson Frank Stahl

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 32

32 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 33

33 material gentico
 Replicacin del DNA
Enzimas que sintetizan (replican) el DNA
E. coli
DNA polimerasa I (rellena huecos y repara)
DNA polimerasa II y III (funcin principal en
la sntesis)
Aade bases en ambas cadenas en la
direccin 5 3
Requiere un 3 OH final
Eucariotas
5 polimerasas
y principal en replicacin
, y exonucleasas
Correccin de pruebas: actividad 3 5
exonucleotdica. Sustituye bases mal emparejadas
(10-5) por correctas (10-7); mecanismos de reparacin
adicionales la reducen hasta 10-10
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 34

34 material gentico
 3 5
Las polimerasas
conocidas aaden
nucletidos
solamente en la
direccin 5 3

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 35

35 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 36

36 material gentico
 Por qu no hay una enzima que
polimerice en la direccin 3-> 5?

No funcionara la correccin de errores por

falta de un trifosfato que suministre la
energa de enlace covalente azcar-fosfato

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 37

37 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 38

38 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 39

39 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 40

40 material gentico
 Adicin 53

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 41

41 material gentico
 P

P
P

P
OH

OH
P
P
P

P
5 3
PP + H2O
P

P
P
OH

OH

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 42

P

P
P
P

42 material gentico
 Adicin 35
(hipottica)

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 43

43 material gentico
 P
P

P
P

OH
OH

P
3 5

PP + H2O

P
P

P
P

OH
Adicin 35
OH

(hipottica)
P

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 44

44 material gentico
 Correccin de errores

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 45

45 material gentico
 P

P
OH

OH
P
P

P
5 3
PP + H2O
P

P
P
OH

Adicin 53
OH

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 46

P

P
P
P

46 material gentico
 P
P

OH
OH

P
3 5

Adicin 35
Dr. Antonio Barbadilla

47
(hipottica)
Tema 6: Estructura y replicacin del
material gentico
47
 Replicacin del DNA (2)
Replicacin: continua (cadena adelantada, cebador
slo inicio) y discontinua (cadena retrasada)

Discontinua
Cebador (pequeo RNA 2-60 nucletidos
aadido por enzima primasa o RNA pol que
provee 3 OH.
Fragmento de Okazaki por DNA pol III
(1500 bp en procariotas y 150 en eucariotas)
Pol I elimina cebador 3 -> 5 y llena huecos
(gap)
Ligacin (DNA ligasa, enlace fosfodister)
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 48

48 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 49

49 material gentico
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 50

50 material gentico
 Polimerasa III

Polimerasa I

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 51

51 material gentico
 Por qu el cebador es RNA?

El cebador es ms proclive al error, por

lo que debera eliminarse y el RNA
puede detectarse y eliminarse
fcilmente por la DNApol I

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 52

52 material gentico
 Replicacin del DNA (3)
El replisoma: complejo enzimtico de la
replicacin que coordina la sntesis de las
dos cadenas, maquinaria molecular
Dmero de la DNA pol III (ncleos
catalticos)
Primosoma: formado por dos enzimas
Primasa
Helicasa (desenrolla el DNA)
Protena de unin a cadena sencilla, ssb
(Unin Y, estabiliza el DNA de cadena
sencilla)
Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena)
y II (rotura de dos cadenas) junto a DNA
ligasa -> Relajacin del superenrollamiento
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 53

53 material gentico
 El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 54

54 material gentico
 El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 55

55 material gentico
 El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

DNA pol III + abrazadera beta -> Enzima procesiva

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 56

56 material gentico
 El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 57

57 material gentico
 Topoisomerasas

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 58

58 material gentico
 Replicacin del DNA (4)
Origen de replicacin:
Secuencia reconocida (Ori C en E. coli) por
protenas iniciadoras. Varios orgenes en
eucariotas
La replicacin es bidireccional

Horquilla
replicacin

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 59

59 material gentico
 En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes de
replicacin (~500 en levaduras y 60000 en mamferos). Cada
unidad de replicacin es un replicn. La replicacin es
bidireccional

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 60

60 material gentico
 En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes de
replicacin (~500 en levaduras y 60000 en mamferos). Cada
unidad de replicacin es un replicn. La replicacin es
bidireccional

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 61

61 material gentico
 1. Consideremos la replicacin de esta regin de una molcula de DNA:
Si la replicacin comenzase en el punto sealado con una flecha, seale
razonadamente qu parte de la molcula se replicara de forma discontinua.

Si la replicacin comenzase en el punto sealado con

una flecha, seale razonadamente qu parte de la
molcula se replicara de forma discontinua.

2 horquillas, la molde 3 -> 5 es

continua, la molde 5 -> 3es
discontinua:

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 62

62 material gentico
 Links de inters
Watson-Crick original paper (1953 Nature)
Trabajos estelares del descubrimiento de la doble
hlice
DNA: el secreto de la vida (Animacin)
Celebracin 50 aniversario descubrimiento de la
doble hlice en la UAB
DNA Structure
The Search for DNA - The Birth of Molecular
Biology
Image Library of Biological Macromolecules - DNA
DNA berkeley
DNA Learning Center
Beginner's guide to Molecular Biology
Glosario de Gentica molecular
DNA Replication
Animacin de la replicacin
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del 63

63 material gentico