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i
i
INGENIERIA BIOOU]MICA
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B
v
1
NTRODUCCION A LA
INGENIERIA BIOOUIMICA
w
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA OUIMICA
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA
Frlogo ...xvii
1. NTRODUCCTON
I.,t LA CELULA !i ,r . 2
1 .2.1.1 Gluclisis I
1.2.1.1.1 Ruta metablica Embden
i Meyerhof-Parnas.. I
1.2.1.1.2 Ruta metablca del
fosfato-pentosa . 11
1 .2.1.1.3 Ruta mstablica
Eatner-Doudoroff 12
1.2.1 .2 Respiracin 13
1.4.1 El biocatalizador . 30
1.4.2 Cultivos de clulas y tejidos 31
1.4.3 El biorreactor 33
1.4.4 Esterilizacin ....;. 35
1.4.5.1 Productosintacelulares....i.. 39
1.4.5.1.1 Separacideclulas'..... 39
1.4.5,1.2 Rupturadeclulas . . . . . . . i. 40
1.4.5.2 Productosextracelulares....; 40
BIBLIOGRAFIA.. .:... 46
2 BALANCE DE MATERIALES 52
ilt
Ejemplo 2.7 Evaluacin del rendimiento mximo en la
produccin de cido cltrico 77
tv
2.7 .7.4 Extracto fermentado de salvado
y aceite de semillas 104
2.7.7.5 Extracto de levadura 105
PROBLEMAS... 1'14
BTBLTOGRAFT1 .. 116
vt
3.9 BALANCE DE ENERGIA 164
vil
Ejemplo 4.2 Determinacin del nmero de
recambio , . i 194
4.2.3.1 pH 196
4.2.3.2 Temperatura . 196
vilt
Ejemplo 4.7 Determinacin del tipo de reaccin
y
enzimtica evaluaci6n de las
constantescaractersticas... 226
PROBLEMAS 255
BIBLIOGRAFIA 259
lx
ts crNETrcA DEL cRECMrENTo DE BroMAsA, coNsuMo
DE SUSTRATO Y FORMACION DE PRODUCTOS 263
5,5 . . . 297
aMODELOS CINETICOS PARA LA FORMACION DE PRODUCTO
5.5.1 Clasificacin de los productos 298
5.5.2 Modelos cintcos . 299
xt
5.5.2.3 Formacin de producto parcialmente
asociada al crecimiento: modelo de
Luedeking y Piret 301
PROBLEMAS . . . 347
BIBLIOGRAFIA 351
xil
\
6 ESTERILIZACION . 356
xlil
6.5.3 Filtracin 388
PROBLEMAS 400
BIBLIOGRAFIA 402
BIBLIOGRAFIA 505
xvr
PROLOGO
xvil
Despus de una introduccin de los aspectos de la lngeniria Bioqimica
el texto se divide en capltulos y secciones, algunos de los cuales corresponden
con otras asignaturas del plan de estudios tales como balance de materiales,
balance de energa, termodinmica, cintica y fenmenos de transporte con el
objeto de enfatizar las analogas y aplicaciones de la lngeniera oumica en
lngeniera Bioqumica. Asf, por ejemplo, la cintica de las reacciones catalizadas
por enzimas y su aplicacin en el diseo de reactores, la seccin sobre catlisis
enzimtica en fase heterognea y el efecto de la resistencia a la transferencia
de masa, las secciones sobre agitacin, aeracin y dispersin, las secciones de
transferencia de calor y transferencia de masa, la seccin sobre difusin de
oxlgeno en cultivos de tejidos animales y la seccin sobre estrategias de
cambio de escala, demuestran al lector la aplicacin de los principios de la
lngeniera Oumica en el campo de la Biotecnologa.
XVIII
Agradezco a Myriam, mi esposa, y a mis hiios Alejandra, Ximena y
, Felipe por su paciencia y su estimulo mientras escribla este lbro. Tampoco serla
posible esta obra sin la permanente colaboracin de la Doctora Dolly Montoya
Castao, directora del lnstituto de Biotecnologla, del lngeniero Gustavo Buitrago
Hurtado, subdirector del lnstituto de Biotecnologla, del lngeniero Luis A. Caicedo
M., con quien comparto el curso de postgrado en lngenierfa Bioqumica, de
todos los profesores del Departamento de lngenierfa Oufmica, de los profesores
e investigadores del tnstituto de Biotecnologfa, y de los estudantes de los
cursos pregrado y postgrado de lngeniera Oumica quienes ayudaron a corregir
y enriquecer los borradores del presente texto.
xtx
CAPITULO 1
INTRODUCCION
Entre los orgnulos est el ncleo (contiene el genoma celularJ, los mitocondrios
(sitio de sfntesis y tr'ansporte de energaf , los lisosomas {eontienen las enzimas
degradantesl, y los cloroplastos en los organismos fotosintticos. El niio
orgnulo comn a procariotes y eucariotes es el ribosoma (stio de sntesis de
las protenas).
CuerDo de GolQ
\ -Membraa celular B
M[Eri
'- Vescula "^.,on"t/"jrrrrr,.
r rrrrrr,-r,,
'
Veslibulo.
Eslrgma de
pgreno
Grnulo de azul \
Paed cella
Flib6oms
Membrana
aloplasmrca
Grnulo lrgldco
Grnuos de volulina
4
Las protenas son cadenas moleculares formadas por veinte clases de eslabones,
los aminocidos. El orden, o secuencia de los aminocidos en la cadena es
exacto y determina eltipo de protefna. Cada protena tiene funciones biolgicas
especiales. As, por ejemplo, la hemoglobina es una protelna que se pliega segn
una configuracin tridimensional, la nica capaz de aceptar y liberar eloxgeno.
La energa obtenida por la clula a partr de las sustancias nutritivas del entorno,
oife la luz solar, es utilizada en la realizacin de trabajo qufmico, en la biosfn-
tesis de las protenas, cidos nucleicos, lfpidos, pbfisacridos y dems
componentes celulares importantes para su desarrollo y replicacin. Tarnkin se
requiere energa para la realizacin de trabajo osmtico, en el transporte de
sustancias nutritivas a travs de la membrana celular y en el trabajo mecnico
de contraccin y locomocin.
Asf como las rutas catablicas on convergentes, las anabticas son divergen-
tes. Cada fase delcatabolismo o delanabolismo de una determinada biomolcu-
la es catali.zada por un sistema multienzimtico diferente. Generalmente la ruta
catablica, y la correspondiente, aunque opuesta, ruta anablica, entre
precursor y producto, difieren en sus metabolitos y en las enzimas catalizadoras
de las. etapas intermedias. La fase lll del metabolismo es amfiblica, funciona
catablicamente en la degradacin de las molculas producidas en la fase ll, o
anablicamente en la formacin de molculas precursoras de la biosntesis de
las macromolculas celulares.
6
Tabla 1.2 Actividad biosntetica durante los veinte minutos del ciclo de
replicacin de E. coli. (Lehninger, 19711
,I E
2-O0O.000-000 1
RN 10 1.000.000 15 - 000
Protenas 70 60.000 1 .700 . 000
1.2.1.1 Gluclisis
B
Figura 1.2 Fases del catabolismo y del anabolismo. Las rutas catablicas son
representadas con flechas descendentes y las anablicas mediante flechas
ascendentes. La fase lll es amfiblica, constituye la ruta finalde la degradacin
de los alimentOs hasta COz la cual proporciona las sustancias precursoras de
pequeo peso molecular para el anabolismo'
Protefnas
Fasel
Polisacridos
II
hexosas
il
aminocidos
pentosas
1t
lt
gliceraldehldo
3-fosfato
Fase ll
rt
fosfoenolpiruvato
Itr
piruvato
1l
Fase lll
llr
tt
succinatc
fumarato
CO,
t1 .11
ATP
t2t
glucosa glucosa 6-P =...-- fructosa 6-P
ADP
ATP
dihidroxi- fructosa
acetona 1-P 1,6-P2
(9)
fosfoenol glicerato
piruvato 2-P
+ H2O ADP
110) prruvato
ATP
10
_ 1.2.1.1.2 Ruta metablica del fosfato-pentosa
Smbolos: P, fosfato. Las enzimas que actan en la ruta del fosfato pentosa
son: (1) hexoquinasa, (2) glucosa 6 fosfato deshidrogenasa, (3) fosfogluconato
deshidrogenasa, (41 isomerasa, (51 epimerasa, (6) transquetolasa, (7)transaldo-
lasa, (81 transquetolasa. (Ratledge, 1987)
NADP
(1)
glucosa glucosa 6-P gluconato 6-P
I
xilulosa 5-P
fructosa 6-P
eritrosa 4-P
piruvato
11
1.2.1.2 Respiracin
13
Tabla 1.3 Reductores y oxidantes en las respiracioneg bacteriales. (Sistrom,
i . 1969),
(Fe) 2t
02 1Fe)'* FerrobaciTLus
(bacteria del
hierro)
14
En los organismos que se desarrollan con acetato, como nica fuente carbona-
da, entra en juego la derivacin del acido glioxflico (lfnea a trazos de la Figura
1 .6), una variante del ciclo del cido tricarboxflico, formndose succinato
y otros
'Muchas disponen de otra ruta para
intermediarios, a partir de acetato. clulas
degradar glucosa, conocida como ruta del foSfogluconato, El receptor
electrnico de estas reacciones es el nicotinamid-adenfn-dinucletido-fosfato,
NADP. Su forma reducida el NADPH, es uno de los principales reductores en
la sfntesis de molculas ricas en hidrgeno tales como los cidos grasos y el
colesterol.
ATP
(13)
I I
fumarato (1 1 ) isocitrato
15
Las,enzimas que intervienen en el ciclo del cido tricarboxlico son; (1) citrqto
sintetasa; (2) y {3): aconitasa; (a} v {5) ,isocitrato deshidrogenasa; (6} 2
oxogluconato deshidrogenasa; (7) succinato tioquinasa; (8) succinato deshidro-
genasa; (9) fumarasa; (10) malato deshidrogenasa; (,1,1) isocitrato liasa; (12)
malato'sintasa; (1 3) fosfoenol piruvato carboquinasa.
11.2t
16
metal inerte (platino o plata) se sumerge en un sistema OR, se establece una
diferencia de potencial entre los electrones en la solucin y los del metal,
conocida como potencial de electrodo :
Donde, Eo, es una constante especal para un sistema dado, conocida como
potencial de electrodo patrn, o fuerza electromotriz patrn; R : 8,314
J.(mol.K)-1: constante de los gases; F:96,485 kJ.(mol.V)'l: constante de
Faraday; r: temperatura absoluta, Ki lox.l y lred.l: concentraciones de las
formas oxidada y reducida del sistema
Por consiguiente hay necesidad de definir un nuevo smbolo: En, donde h indica
que elelectrodo de comparacin ha sido calibrado con respecto al de hidrgeno:
En=E'Es I1.41
E=Eo.yr:*+H t1.51
"t7
El valor.de E^ vara de acuerdo con el valor de la relacin entre las concentraco-
nes de la forma oxidada y la forma reducida. Cuando estas concentraciones son
iguales: E : Eo.
1B
t1.91
^G;=^GA-^G;2
En las reacciones de transferencia electrnica, como las que ocurren en la
cadena respiratoria, los electrones son transferidos desde un donante, o
reductor, hasta un aceptante, u oxidante. En algunas reacciones la transferencia
se efecta mediante tomos de hidrgeno. En este caso deshidrogenacin
equivale a oxidacin e hidrogenacin equivale a reduccin.
- Reacciones cido-base:
Donane de Ptonnes (===)
tl.101
H + Aceptanfc de protorus
- Reacciones de oxido-reduccin:
tl.11I
e- + Acepttre de electrones
Cualquier sistema Or? puede ser oxidado por un sistema ms positivo, esto es,
situado en una posicin ms baja en la escala, Debe tenerse presente que fre-
cuentemente se requiere un catalizador con el propsito de lograr una reaccin
entre ambos sistemas. La mayora de los pares electrnicos que ingresan a la
cadena respratoria proviene de algunas enzimas conocidas como deshidroge-
nasas ligadas a la piridina, catalizadoras de las siguientes reacciones generales:
19
susffato redrcifu + NAD' (===)
a1.12)
/istrato oxidado + NADH + H.
t1'13I
s'ustrato oxidado + NADPH + H'
. r ''';i ;-
Reaccin
'2e
acetato
!..
+ zH.', + -> acetaldehfdo a
- 0;60
H*+1e--)O,5H, - 0,42
Contina
20
Tabla 1.4 (Continuacin)
Reaccin
21
Otras enzimas asociadas al transporte electrnico son las deshidrogenasas
ligadas a la flavina, constituidas por flavin-adenn-dinucletido IFADI o flavin-
mono-nucletido IFMM. Los electrones y tomos de hidrgeno, participantes
en las oxido-reducciones, son conocidos como equivalentes de reduccin. La
coenzima O, conocida como ubiguinona, por su ubicuidad en todas las clulas,
es el aceptante de los equivalentes de reduccin de las deshidrogenasas ligads
a la flavina. Lob electrones aportados por las flavin-deshidrogenasas son reco-
gidos por la coenzima O. La velocidad de transporte electrnico se controla
mediante las concentraciones de ATP y ADP. Los citocrornos, grupo de
ferroprotenas responsables de la transferencia de electrones en las clulas aero-
bias, actan secuencialmente en el transporte de electrones desde la coenzima
O hasta el oxgeno molecular. Todos los componentes de la cadena respiratoria
aceptan electrones de los compuestos precedentes en la cadena y los trans-
fieren al siguiente eslabn.
22
Algunas aplicaciones de la biotecnologa en agricultura son: desarrollo de plantas
con mayor capacidad de fotosntesis y fijacin de nitrgeno; desarrollo de
insecticidas biolgicos, pesticidas, fungicidas y herbicidas, Algunas aplicaciones
industriales de la biotecnologa son: produccin de cido actico, acetona, buta-
nol, etanol, gas carbnico, h'idrgeno, aminocidos, enzimas, vitaminas, lfpidos,
bebidas dlcohlicas, protena unicelular, edulcorantes y biopolmeros; separacin
de minerales cocfltracin de metales; control de la contaminacin; degrada-
cin de residuos txicos; recuperacin de derrames de petrleo; produccin de
biosensores.
23
Tabla 1.5 Continuacin
24
Tabla 1.6 Continuacin
25
Tabla 1.7 (Continuacinl
Contina
26
Tabla 1.7 (Continuacin)
Contina
27
Tabla 1.7 (Continuacin)
t
ANTIBIOT]CO, DERIVACION ESPECT8O MoDooE ,'
PRODUCIDO MICROBIANA PRIMARIO ACCTON
28
1.4 CONSIDERACONES GENERALES SOBRE EL DISEO
PRELIMINAR DE UN BIOPROCESO
29
1.4.1 El biocatalizador
30
1.4.2 Cultivos de clulas y teidos
- Las clulas de tejldos animales y vegetales son de mayor tamao que las
clulas de bacterias y hongos.
31
Cuando una sustancia extraa entra al cuerpo de un anirnal vertebrado, sus
- .? linfocitos segregan protenas denominadas inmunoglobulinas o anticuerpos con
la propiedad de reconocer algunos sitios de la sustancia extraa, los antgenos.
El anticuerpo se liga al antgeno para neutralizar y eliminar la sustancia extraa.
Los anticuerpos constituyen una herramienta poderosa en la identificacin y
deteccin de drogas, Broductos bacteriales y virales, hormonas y otros
anticuerpos en muestras de sangre,
32
1.4.3 El biorreactor
33
Una de las etapas en el diseo de un biorreactor es la seleccin de las
especificaciones del sistema: sistema viable o un sistema enzimtico no vivo;
sistema aerbico o anaerbico; condiciones aspticas o no aspticas; cultivos
simptes o mezclados; clulas simples o agregados multicelulares; medios simples
o multisustrato.
Los reactores impulsados por aire " airlift" utilizan aire para satisfacer la demanda
bioqumica de oxfgeno DBO,la demanda qumica de oxlgeno DOO, impulsar el
contenido del reactor y satisfacer las necesidades de aeracin y agitacin en los
cultivos aerbicos,
Los reactores de lecho fijo y los de flujo tapn (PFB) son apropiados para
aquellas reacciones inhibidas por la formacin de producto. Los reactores
agitados mantienen una concentracin uniforme de sustrato y son apropiados
para aquellas reacciones inhibidas por sustrato.
Los reactores pueden ser operados en for'ma contnua o por lotes y como lechos
fijos, lechos fluidizados y tanques agitados. Los reactores operados en rnodo
continuo conducen a una mayor productividad y a una utilzacin ms eficiente
de sustrato para la produccin de biomasa, pero menos eficiente para la
obtencin de productos, cuandO se confrontan con los reactores operados por
lotes.
34
Algunos procesos requieren la recirculacin del contenido del reactor. Las
clulas son separadas del caldo mediante centrifugacin, sedimentacin y
filtracin y luego devueltas al reactor para mantener una elevada concentracin
celular.
1.4.4 Esterilizacin
35
1.4.4.2 Esterilizacin de medios
36
La esterilizacin continua se puede realizar mediante inyeccin directa de vapor
de agua a una presin entre 6,8 y 8 atmsferas, o mediante intercambiadores
de placas o de tubos. En el primer caso debe preverse la dilucin del medio,
entre 10 y 15 o/o, por la condensacin del vapor inyectado. El enfriamiento del
medio esterilizado se logra en forma indirecta mediante camisas, serpentines o
intercambiadores de calor.
37
La vida media de un lecho depende de las condiciones de operacin del filtro.
Cada cuatro meses, aproximadamente, debe ejecutarse el cambio de lecho, Este
costo adicional debe tenerse presente si se considera que el objetivo final del
diseo el lograr el mejor filtro al menor precto.
38
- Remover primero el contaminante ms abundante.
39
1.4.5.1.2 Ruptura de clulas
.40
1.4.5.3 Purificacin final del ptoducto
41
1.4.5.3.2 Extraccn lquido-lquido de antibiticos
42
1.5 APTICACION DE LOS LENGUAJES DE SIMUTACION EN
INGENIER!A
- Definir los lmites de la regin de control. Estos lmites pueden ser las paredes
del recipiente o una superficie de separacin entre fases.
43
- Expresar: la tegra disponible mediante relaciones matemtcas tales como
ecuaciones diferenciales simultneas y ecuaciones algebraicas.
Estas ecuaciones son generalmente ecuaciones de balance para cada una de las
propiedades extensivas del sistema tales como masa, energa, o elementos
qumicos; ecuaciones de velocidad de transferencia de masa, de energa y de
flujo de componentes individuales a travs de los lmites de la regin de control;
ecuaciones d.e generacin o de consumo de especies individuales dentro de la
regin de control; y ecuaciones que relacionan las propiedades termodinmicas
tales como presin, temperatura, densidad y concentracin ya sea dentro de la
regin de control, ,como en el caso de las leyes de los gases, o a uno u otro lado
de un llmite entre fases, como en el caso de la ley de Henry.
44
1.5.2 Lenguajes de simulacin continua
45
BIBLIOGRAFA
Aerstin, F., Street, G., (1978). Applied Chemical Process Design, plenum press,
, New York, Estados Unidos.
46
Belter P.A., (1985). lon exchange recovery of antibiotics, en: Comprehensive
Biotechnotogy, Vo1.2, pp. 473-480. C.L,'Cooney and A. E. l-'lumphrey
(Volume eds.), Pergamon Press Ltd., New York.
4-t
Hockenhull, D.J.D., (1983). "Organization of a pilot plant for the development
.of new products", Progress in lndustrial Microbiology, Vol. 17, M. E.
Bushell (ed.), Elsevier Science Publishing Co., Amsterdam, Holanda, 191
- 224.
King, F.G., and Hossain, M.A. (1982). "The effect of temperature, pH, and
nitial glucose concentration on the knetics of ethanol production by
. Zimomonas mobilis in batch fermgntatio," Biotechnology Letters, 4,
(8), 531-536.
Lehninger, A.L. (1971). "Bioenergetics", 2nd ed., W.A. Benjamin, lnc., New
York.
48
Liptak, B. G., K. Venczel (ed.), (1985). Process Control lnstrument Engineer's
Handbook, Chilton Book Co., Pennsylvania, Estados Unidos'
=, Mignot, L., and Junter, G.A. (1990). "Diffusion in immobilized-cell agar layers:
lnfluence of microbial burden and cell morphology on the diffusion
coefficients of L-malic acid and glucose," Applied Microbiology and
Biothecnology, 32, 41 8-423
i. palluzi, R. P., (1992). Pilot Plant Design, Construction and Operation, Mc Graw-
Hill, lnc., New York, Estados Unidos.
Pelczar, M.J., Reid, R.D., and Chan, E.C.S. l'19771. "Microbiology", 4th' ed',
McGraw-Hill., New York.
Pu, H.T., and Yang, R.Y.K. (1988). "Diffussion of sucrose and yohimbine in
calcium alginate gel beads with or without entrapped plant cells,"
Biotechnotogy and Bioengineerng, 32, 891 -896.
49
Perry's Chemical Engineer's Handbook, (1984). Gren, D. W., J, O. Malony
(ed.l. Mc Graw-Hill, New York, Estados Unidos.
Rahman, R., and streat, M. (1985). "Mass transfer in fixed and fluidized beds,"
Chemical Engineering Science, 40, 9, (3), l783-178S.
Rase, H. F., .1977l,. Chemcal Reactor Design for Process PlSnts, Vol. t:
Principles and Techniques, John Wiley a_nd Sons, New york.
Rase, H. F., '1977l.. Chemical Reactor Design for Process Plants, Vot. il: Case
Studies and Design Data, John Wiley and Sons, New York.
Sistrom, W.R. (1969). "Microbial Life", 2nd. ed.,Table 4.2, p.53, Holt, Rinehart
and Winston, lnc., New York.
50
Solomons, G, L., (1969). Materials and Methods in Fermentation, Academic
Press, Londres, lnglaterra.
Stanier, R,Y,, Doudoroff, M., and Adelberg, E,A, (1975)' "The microbial world",
4th. ed. Prentice Hall, lnc. Englewood Cliffs. N'J.
Van Reis Robert , Lee C. Leonard, Chung C, Hsu, and.Stuart E. Builder (1991),
lndustrial scate harvest of proteins from mammalian cell culture by
tangential flow filtration. Biotecnol. Bioeng., 38, 413-422.
Van't Riet, K., J. Tramper, (1991). Basic Bioreactor Design, Marcet Dekker lnc.,
New York, Estados Unidos.
51
-t
CAPITULO 2
BALANCE DE MATERIALES
52
,<
Blomosq
Fuente de corbono
Pnoducto
cu2
0xigeno
53
-r
Las siguiente ecuacin, vlida para medios mnimos, donde.la fuente de carbono
es utlizada en la produccin de biomasa y energa, reemplaza las ecuaciones
estequiomtricas globales (Ecuaciones 2.1, 2.2 y 2.3]r:
As+AOz=Lr+ACO2+Lp 12.4'l
t4;7frr-1dx'+1dco2*L@- t2.s1 v
x & x & x x, & ..:-
Los diferentes trmnos de la Ecuacin t2.51 son conocidos como velocidddes
. especlficas:
1ds
v,=;e 12.61
..
lro" =
1 doz fz.7.l
; dt
54
.r
-
Donde, plOzi: velocidad especlfica de consumo de oxfgeno, (mol Or).(mol
clulas.hora)-1 ,
1dx
,r=;A t2.81
llcoz =
1 dCOz
t2.91
; d,
1do
pr=i 12.101
Donde, os, oy, o, opi carbono en el ustrato,'en las clulas, en el CO, y en los
pfoducto, respeclivamente, g c/mot,
55
El balance de oxfgeno, expresado en trmnos de la Ecuacin f2.1 11,. es:
Donde,4: oxfgeno requerido para la combustin del sustrato hasta CO, HrO y
NH, si el sustrato contiene nitrgeno. mol O./mol sustrato; 8: oxlgeno requerido
para la combustin de las clulas:,secas hasta CO2, H2O y NH3, mol Orlmol
clulas; C: oxlgeno requerido para la combustn de los productos hasta COr,
H! y NH., si los productos contienen nitrgeno, mol Orlmol producto,
Solucin:
56
,,, .
,, _---_t
iai tr
.,
57
Adems, p!99g-g-u,onerse que er nmero totar
de electrones_exter.os se
conserva' por tanto, er nmero de equivarentes
erectrn"o. Lpo^;;,r;; ,;
frmula de un compuesto orgnico es 4 para
C, 1 para H, _ 2 para Oy _ 3 para
//. El nmero de erectrones disponibres es una medida der
contenido de energfa
de un compuesto,
El grado de reduccin de un
compu ae#fjtrefumO el nmero de
equivalentes de#trones disponibles
dB# por consgu,"^i", .,
frmula elementar de un compuesto es : c"HnooNn,,,entonces ,"
er nmero de
, Nro, es:
))" 12.151
58
r
Donde, Oo,: velocidad de flujo de producto i; mol.s-l; l-0,: grado de reduccin del
i-simo producto, en (mol electrn disponibfe).(mol producto il1.
i
I
+wH2O+cCO2
59
+
1=Y'fls+EY'r{s+c t2.20t
rs=4*s-2.or-3.n, 12.221 ,
I =4+hx-2.o*-3.n* 12.231
12.251
60
*
1=Y'fls+EY"rs+f" 12.261
ATP disponible de los procesos catablcos pede ser utlzado por la clula
para sintetizar nuevas clulas o para.sintetizar productos no relacionados con
el metabolismo de energa, (Lynd, 1989).
f,G.^o = :- - :, * 12,271
'dAt? 'ptlAT?
61
El trmno f".Go,, representa la produccin total de ATF por mol de carboU&n
el sustrato utiizado. Los trminos de la derecha de Ia Ecuacin 2.271indican ,
.t2.281
",,
Soluciri:
62
La de respiracin de la glucosa, de acuerdo con los siguiente~
1987; Bailey y Ollis, 1986; Atkins, 1983, es :
[2.291
. -
'>-. a .: .e
. .~Glucos
~
-2=4
" .
Clulas: CH,, 94 0 0 .3No.2s r x = 4 + 1,94 - 0,3(2) - 0,25 (3) = 4,59
..
Oxgeno: 0 2 r<Ol 2 = -2 (2) = - 4
63
_,*_=+
--De acuerdo con los conceptos mencionados anteriormente, por ser el agua
difcil de evaluar experimentalmente,'n se realizan los balances de H v O. La
forma final de la ecuacin de crecimiento se obtiene mediante la multiplicacin
de la Ecuacin l2l por el nrfmero de tomos de carbono en el sustrato:
Solucin:
G,ttp
2 mol ATP mol ATP
=
mol glu. catabozada mol C
64
0'3flg.(0'404) wol C cl
#' =
Y",
1 + 0,3ff1.(O,M)
=0.119
t@l C swfrcto
tl
: '"*[il l:'
'
'J/:l
65
'_:--7
66
rz
--?
fubv\rr()u \ *C [i1"-'\1
-+ '4
g(t.c
fabLa 2.L El-ementos de Ia Tabla 2.2 Composicin
materia orgfnica, (Lehninger, elemenEal de1 E. coli,
1973 ) (Luria,1950)
r
o Elemento t peso 6eco
c
N Carbono 50
,'H Oxfgeno 20
P Nitrgeno 1,4
s Hidrgeno I
Iones monoat.micos: Fsforo 3
Azufre 1
Na., K-, Nlg'- , Ca'- , CI Potasio 1
Sodio '1
Calcio or5
ELement,os que se Magnesio o,5
encuenEran en Erazas: Cloro O,5 i
Hierro o,2
W7, Fe, Co, Cu, Zn Ot.ros o,3
B, Al-, v, Mo, I, Si
Fsforo 2,0 -
3,0 0,4 4,5 0,8 - 2,6
Azufre 0,2 -
1,0 0,1 0,5 0, 01 - 0,24
Potasio 1, 0 -. 4,5 0'2 2,5 1, 00 - 4,0
Magnesio 0,1 - o,s 0,1 0,3 0, 10 - 0,5
Sodio 0,5 - 1,0 0 ,02 0,5 0, 01 - 0,1
Calcio 0,01 - 1,1 0,1 L,4 0., 1 - 0,3
Hierro 0,02 - 0,2 0,1 0,2 0; 01 - 0,5
Cobre 0,01 - 0,02 0,002 - 0,01
Manganeso o, 001- o, o1 0, 0005 - 0,007
Molibdeno q, oool - 0,0002
Ceniza total -7 -2t 2' 5 -L0
67
Tabla 2.4 Datos de la composicin elemental de diversos microorganismos; p:
velocidad especlfica de crecimiento de biomasa; M: peso "molecular" (Atkinson
y Mavituna, 19831.
Observaciones:.
68
=
u-l^
3,3 0,1_1
'o,o27
:
s .1,:2 0,04 9,76.1 0:3
' 7,32,10'3
K 1,1 0,03
Ca 0,6 2,44.7;3
69
7
dx
t-
Yyo= - ^
' = _& f2.311
ts ds
dt
70
dx
t.,
v_l
txlo - __ dt
f2.32'l
'ro- - do
dr
v.r, -MrQ*
- t2.331
I" O,
71
En algunos casos los factores de rendimiento son aproximadamente constantes
para un determinado microorganismo en un sustrato especfico. En estos casos
la estequiometra provee una metodologa til para relacionar los factores de
rendimiento con las diferentes variables de un bioproceso y prever, por ejemplo,
la influencia de los cambios de la composicin del sustrato, o de la concen-
tracin de algn producto, sobre la composicin de la biomasa o la generacin
de calor.
72
Electrones disponibles de ta glucosd, C6H12O5, (Ecuacin
2.141:
PeniciTlium
chrysogenum
Gl-ucosa o,43 77,1, 1, 08 L, 35 3 ,22
Contina
73
Tabla 2.6 Continuacin
,- t__t ,, \
Solucin:
74
Para el crecimiento aerobio de Saccharomyces cerevisiae en glucosa se utiliza
: i =' la siguiente ecuacin, Battley, 196O):
v =-
rxlo
2,, g ct. mol O"
1,95 mot ct.
3,u o, 32 g o,
^rt ^rt.L
75
dP
y_.=_rr.=_
rt
dt e.g4l
rs ds
dt
,,=R+- 12.35t
Si se tiene en cuenta que las energas del sustrato y del producto son aproxima-
damente proporcionales a su contenido de electrones disponibles, el trmino fo
puede nterpretarse como un rendimiento en el contenido de energa del
producto a partir del sustrato. Por consiguente, el valor mximo de fo es la
unidad:
o"'4
(Yil*- or.4 t2.36I
76
-
Donde, (Yp7s).6,: rendmiento mximo de sustrato en producto, g producto/g
,o sustrato. En la Tabla 2.7 se presenta un resumen de valores d (Yps),,,
calculados a partir de la Ecuacin t2.361, para diferentes productos obtendos
a partir de diferentes sustratos,
Sustrato
77
Solucin:
78
P"="*{"u, 1
2.371
u"={t*Y*'F* t2.38I
7g
a nivel de sustrato. En este caso el coeficiente verdadero se calcula mediante
la siguiente ecuacin, (Pirt, 1965):
I
Fo=mo* t2.391
{rr.u,
80
Tabla 2.8 Resultados experimentales de un proceso contnuo de fermentacin
con clulas de Saccharomyces cerevisiae en un medio limitado por etanol, (Mor
y Fiechter, 1968).
Donde;
D :
ltxi velocidad de dilucin, hora-1; pr: velocidad especffica de crecimiento de
clulas, hora-1; D = UV; O: caudal, m1/hora; V: volumen ocupado por el lquido
en el reactor, m3; x:concentracn de biomasa en el reactor: (g c|. secas)/litro;
s: concentracin de etanol en el reactor, g etanolilitro; so: concentracin de
etanol en el alimento a reactor: 10 g etanol/litro; Yr,r: rendimiento delsustrato
en clulas, (g cl secas)/(g etanol); ttlOrl: oxlgeno en el aire estril alimentado
al reactor, ml O, /g cl,hora; a(COrl: CO, formado, (ml COr)/{g cl.horal; Cr:
cociente respiratorio, (ml CO, formadol/(m! O, consumido).
Determinar:
Solucin:
81
- Balance de carbono
Donde, os, oy, os, op; Contenido de C, en sustrato, clulas, CO, y producto,
respectivamente, g Clmol; lts, lte, UlCOrl: velocidad especlfica de consumo de
sustrato, de formacin de producto y de produccin de cor, respectivamente;
mmol/g cl.h; p, : D: velocdad especffic de crecimiento de biomasa y
velocidad de dilucin, respectivamente, h-1.
Pr=;l As
Af =;(s,-r.1,
1
mmol etanol
ls = 5,65
g ct.h
:)
os : 24 (g.C).(mol etanol)-l
ox.ltx : 0,5 (g C/g cll(O,1 15 h-1)(1000 mg/g) : 57,5 (mg Cl.(g ct.h)'1
oc : 12 (g C).(mol CO2)'1
a2
s,c.r(co)
c 1 mol .u,z.^l co"
P.nolg CO,
'r e = 22,4 litro g cl.h
''P(CO)=
ZO'aS'ffi#
- Balance de oxgeno:
t. ,i:
En la Tabla'2.1 0 se presentan los rultados del,balance de oxfgno, evaluados
de acuerdo con la Ecuacin t2.131:
For=A.ltr:B.Fr-g.Ln tzt
,:,
Tabla 2.9 Balance de carbono durante el crecimiento de Saccharomyces
cerevisiae Gn,rrn cultivo cootinu) lirnitado por etanol. Ejemplo 2.8.
\1
83
Tabla 2.10 Balance de oxfgeno durante el crecimiento de Saccharomyces
cerevisiae en.,un cultivo continuo !imitado por etanol. Ejemplo 2.8.
Donde:
.
A, B, C: oxgeno requerido para la combustin del sustrato, las clulas y los
productos, respectvamente, hasta CO2, l.lO y NH (si el sustrato y los pro-
ductos contienen nitrgeno), en (mol Orl.(mol sustrato)-1.
mmol o'
= 16,95
g cl.h
no! oz=!::l=-cl
'
B = 1,1
mol c122,86 g lgfrcnrno]
mol
= 8,12
84
B.tt, = 4si2# o,tts -r = s,5o
#
O:
t (O) - 77,8^l
8c
Tabla 2.8, para D : 0,115 hora-l.
77,8 1 mol
tt(o) = ^lrrOr"
?2,4 lina
I CCt.N)r4
It(o) = S,Ol
ffi
C.gr: oxgeno en los productos no celulares descargados al medio de cultivo,
Ecuacin (2):
C.lt, : A.tt"- B.ttx- ltlOzl : 16,95 - 5,53 - 3,47 - 7,95 mmol/g cl,h
tL(o)=n"*Oh;+, (31
85
Figura 2.2 Determinacin grfica de los coeficientes de mantenimiento y rendi-
: .i miento verdadero t'bxgeno, durante el ,crecimento de .S. cerevisiae en un
cultivo continuo limitado por etanol. Ecuacin (3): p(or) vs lJx; Ecuacin (4):
(A./s - C.ltrl vs pr. Ejemplo 2,8.
- (mmol oxigeno)/(g
,U_
ceLh)
{*:,
o
o o,o2 0,o4 0,06 0,o8 0,1 0,12
Velocldad de dllucion, 1/h.
86
Figura 2.3 Variacin del contenido de oxgeno de los productos no celulares
con el coCiente respiratorio , lC.Pp vs Crl, durante el grecimiento de S' cerevisiae
en cultivo contnuo limitado por etanol.
(mmol oxigeno)/(9. celulas.hora)
t2
\i ,
10 .\_-i\:l
"i'
:\ ,
......'.-----...-....-.--i..-.-\sr---.-..-.....--"""'+'--'
i\i
:\i
i\i
-?---.--..--'-""""'-"'-""'--"""'--'\""'i
:ii\
"
'ii
'-'--'--."'----""-"'-"--'1"""" "'--" "" ""' - --"'+":"'
,i:
jri
o
o,4 o,44 o,48 o,52 o,56 o,6
Cociente res?iratorio, Cr
87
:i ],
7 r" =
*(r.^, *(, _
#,.r )
_
" r)
1,.
,o=i(kr-k2.Cr).x
-dxdoz-ds-dp
ro"=-
'r=A dt '"=- 'r=
Donde, rx; ro; rs y r": velocidades absolutas de crecimiento de biomasa, consu-
modeoxfgeno,consumodesustratoyformacindeproducto,enmol/l,h.
Estas ecuaciones cintcas son indispensables para el control del proceso de
crecimiento de S. cerevisiae en un cultivo continuo limitado por etanol.
::'
2.7.1 Requerimientos nutrimentales
-
88
Tabla 2.11 composicin qumica de los principales productos de la
fermentacin. (Cooney, 1 982)
Antibtcos
Bacitracina C6sH1o3N17Or6S
Cefalosporina C C16H21N3O.S
Eritromicina Ca7H67NO13
Penicilin G 'C,6H18N2O4S
Estreptomicina C, H3eN7O12
90
ocasionalmente, cuando tal experimento se realiza, el intercepto (curvas A y B
de la Figura 2.41 no coincide con el origen. La curva A se obtiene cuando hay
traspaso del nutrimento ensayado desde el cultivo semilla. Otra situacin se
presenta cuando hay necesidad de una concentracin crftca del nutrimento, ya
sea porque el nutrimento se liga con algn material celular y forma un
precipitado o un complejo, o si se destruye, o si su concentracin disminuye
durante la esterilizacin. En el balance de materiales deben tenerse presentes los
requerimientos nutrimentales interdependientes. Por ejemplo, el sodio puede
satisfacer parcialmente la necesidad de potaso. otros elementos como el
calcio, no son esenciales para el crecimiento pero pueden ser necesarios para
la establidad del producto.
Fototrficas
Ouimiotrficas
9t
Figura 2.4 Representacin esquemtica de la influencia de la concentracin de
un nutrrnento sobre la concentracin final de clulas. La curva A se obtiene
cuando hay traspaso de nutrimento desde el cultivo semilla. La curva B
representa la necesidad de una concentracin crtca de nutrimento.
Concentracion de celulas
:
92
Tabla 2.13 Concentracin relativa de elmentos en las clulas y en los medios
de'cultivo ms utilizados. Las cifras representan los valores promedio de los
datos publicados para bacterias Gram positivas y Gram negativas crecidas en
un medio mineral, X: proporcin del elemento con respecto al nitrgeno; n:
nmero de referencias consultadas.(Haggstrom, 1 975).
L energa requerda por una clula iar ta ,rnr"",a de tnasa celular, manten-
minto y formacin de producto, generalmente esta asociada con la utilizacin
de la fuente de carbono. La oxidacin de la fuente de carbono en el metabolismo
anaerobio, piovee energla y genera Compuestos que sirven como aceptantes de
los electrones generados en el proceso de oxidacin.
93
El rendimiento de un sustrato en clulas se calcula a partir de datos experimen=
tales, o del rendimiento de ATP en clulas, Y,orr. Adems, se ha encontrado
que la relacin Y*)o* es constante e igual a 10,5 (9. cl).(molATPfl = O,4O4
(mol C en cl). (mol ,4TPl-1, (Ecuacin 3.80). En aquellos casos donde un
producto es el resultado deseado de una fermentacin, hay que utilizar la fuente
ms apropiada de carbono para la sntesis del producto. La demanda de
sustrato es (pr.x)/Yrs, donde p, es la velocidad especlfica de formacin de
producto, x es la concentracin de clulaS, y Yps el rendimiento de sustrato en
producto (Secciones 2.5.5 v 2.5.6, y Tabla 2.7l,.
94
Tabla 2.14 Materias primas utilizadas con mayor frecuencia en las industras de
procesos bioqumicos. (Precios de 1988: valor promedio en dlares EE. UU.lkg
(Petrides et al., 19891.
Metanol 0,19
n-alcanos 0,50
Fuente de nitrgeno: .
95
T abla 2.1 4 Continuacin
Materia prima Comentario Precio
US $/ks
Urea .
Grado: agrieultura o,20
N: 460/o
Levadura Cervecerla, sin sabor amargo. 2,40
Suero Seco: 4,57o l, peso/peso o,45
96
Las fuentes de nitrgeno utlizadas con mayor frecuencia son: licor de
maceracin de ma2, harinas de soya y de pescado, hidrolizados y extractos de
levadura, hidrolizados de protefnas, rea, amonaco gaseoso y los productos
solubles de las destileras. Materiales como el licor de cocimiento de ma2, los
hidrolizados de protefnas y los extractos de levadura incrementan los rendimien-
tos y productividades de un proceso, pero contienen otros materiales no utiliza-
bles, que deben separarse del producto final y luego tratarse con los efluentes
de la planta. A medida que se conocen con mayor detalle los mecanismos de
regulacin metablica, aumenta la tendencia hacia la utilizacin de fuentes
definidas de nitrgeno, mediante la regulacin de la velocidad de adicin de
compuestos especficos, en lugar de la utilizacin de materiales complejos.
2.7.5 Agua
97
Las trazas de amonfaco en el agua indican contaminacin. simitarmente, las
sales de los cidos nitroso y nftrico afectan desfavorablemente el estado fisio-
lgico de los microorganismos.
Las aguas con un recuento bacterial menor que 20 - 100 grmenes por ml, son
consideradas como aguas de alta calidad, Las fluctuaciones de la dureza del
agua y de los niveles de los cationes presentes, especialmente calcio y
magnesio, afectan los rendimientos de sustrato en producto, En algunos casos,
generalmente a escala de laboratorio, se utiliza agua desmineralizada o deioni-
zada para agregarle todas las sustancias necesarias en las proporciones
adecuadas.
98
Tabla 2.15 Composicin de las melazas de remolachE y caa (White, l g48l.
Componente Melazas
Remolacha % o/o
Caa
99
Tabla 2.17 Composicin de extracto de malta en polvo. (Sikyta, 1 983).
Componente %
Maltosa 52,2
Hexosas (glucosa y fructosa) t9 ,1-
Sucrosa 1r8
Dextrina 15, 0
Otros carbohidratos 3,8
Protena 4,6
Ceniza 1r5
100
2.7.6.4 Aceites vegetales
2.7.6.5 Hidrocarbuos
101
2.7.7.1 Licor de maceracin de rnaz
de protelna; 0,5 - 1,2 o/o de grasas; 5;5 . 6,6 % de celulosa; 31 -..32 o/o
de
sustancias libres de nitrgeno disuelto; 5,5 - 6,0 o/o de cenizas; o,3o/o de calcio;
0,62 - 0,65 % de fsforo; 2,O - 2,5 7o de fosfatos. Los constituyentes
principales son protenas, grasa y fsforo. La torta s obtiene mediante extrac-
cin del aceite del frijol soya y su calidad depende de la fuente del frijol y del
proceso de extraccin.
102
Tabla 2.1 I Cornposicn qumica Tabla 2.19 Aminoidos prsentes
promedio del licor de maceracin en el lcor de maceracin de ma2.
de mafz. (Liggett,y Kgffler, 1948) (ardinal y Hedrick, 1 948) rr.
s 0, 34
Zn 0, 0s
103
Tabla 2.2O Composicin del licor de papa. Sikyta, 1983.
Componente 7o peso/volumen
70,0
Peso seco
Nitrgeno total 4,6
Nitrgeno amino 2,0
Sustancias reductoras 19,2
Carbohidratos no reductores 4,2
Total de carbohidratos 23 ,4
104
2.7.7.5 Extracto de levadura
Componente mg.g-1
Fe 0, 05
Mg 2
Cu 0, 05
zn 0, 05
Mn 0, 005
Co 0, 005
105
transferda a un recpente que contiene cloruro de sodio para inducir la plasmli-
sis. El extracto contene entre 3O y 40 o/o de cloruro de sodio, en peso.
Finalizada la plasmlisis, las mer.nbranas y las paredes celulares son separadas
de la solucin mediante filtracin o centrifugacin. El lfquido se concentra
rpidamente, a temperaturas menores que 37oC, con el propsito de prevenir
la contaminacin y la degradacin de las sustancias termolbiles,
106
2.7.9 Control ambiental
Tabla 2.23 Ejemplos de medios definidos. A: medio mlnimo calculado para una
concentracin celular de 6 g/litro, con (NHo)rSOo como sustrato limitativo y
biomasa con 7,5o/o de l; B: medio para el eRsayo de lisina. (Difco Laboratories
lnc.)
'SO{
MgSOn.TH2O 0,39 MgSOo 0,4
KH2P04 0, 68 IqHPO4 1,2
NACl 0, 008 NaCl- o ,02
FeSOn .'lH2O 0 ,002 FeSOo .7H2O 0,02, l
107
En el diseo de medios de cultivo se logra un efecto regulador del pH, mediante
la adicin de componentes con este propsito. Por ejemplo, una mezcla de
K2HPO4 y KHTPO. permite el ajuste del pH alrededor de 7,O.
Yrtt
olo elcmento cn la biomas 12.41t
o/o elmento en el nutrimetfu
108
La evaluacin de Yr,, para la fuente de carbono y energfa se fundamenta en el
concepto de electrones disponibles y grado de reduccin'(Seccin 2.3). Un
procedjmiento alternativo es la evaluacin delcoeficiente de rendimiento vrda-
dero de sustrato en clulas, (Y7s),, en medios mlimos y en medios complejos
(Seccin ?.5.7 v 2.5.81. La cantidad de cada nutrmento se calcula a partr de
la definicin del factor de rendimiento:
xF' xo
o=,F- 12.43t
Yrtt
110
Tabla 2.25 Diseo preliminar de un medio de cultivo. Columna 1: lerhnto;
Columna Z g ele'mento (g clulas)-t; Columna 3: materia prima seteccionada y
respectivo peso molecular (entre parntesisl; Columna 4: (g elemento),(g nu-
trimento)-r; Columna 5: (g clulas).(g nutrimentol-1; Columna 6: (g nutri-
mento).(litro de medio)-1.
+rry,"vv
I \tb
1 2 3 4
N[^-'"
C 0 ,493 c5H1206' (0,4).f C: O,49 28,747
(180) = 0,24
o 0 ,194
I 0, 145 (NH4 ) N: 0,21-2 lV: 1,46 9,576
, (L32, 'SO4
t) .9: 0,242
H 0, 0g
L234's - .'
s 12 - 10-3
K 11.10-3
Na 5.10-3
c1 5 - 10-3
Otros:
7,85.10 3
Solucin:
i ,
1- En los numerales anteriores se analza la necesidad de optimizar el medio de
cultivo y de seleccionar las materias primas por mtodos estadfsticos a partir
de datos obtenidos en el laboratorio y Ia planta piloto despus de un estudio de
I la factibilidad tcnco-econmica del proceso.
i
i El propsito de este ejemplo es realizar una prmera aproximacin hacia la
i del medio, sin considerar los aminocidos, vitaminas y otros
"omposicin
nutrimentos especficos, ni las restricciones tcnico-econmicas.
112
5- En la columna 4 figuran los resultados obtenidos al dividir el peso de cada
elemento por el del respectivo compuesto seleccionado como fuente del
elemento.
g'eleruenu
g rutrir,rtto _ g clulas
g ebnento g ruttrimenn
g cfulas
8- En la columna 6 figuran los resultados obtenidos al dividir la concentracin
deseada de clulas, 14 (g c|. secas).(litro)-1, por los correspondientes valores
de la columna 5:
14 g cL.
ltro netlio g runinento
g ca. lito medio
g unilo
-
9- Determinacin del contenido de sodio:
I, cel.
113
10- Et contendo de K, Cl y S, se evala de manera similar al del sodio. Los
elementos Cl y S son aportados simultneamente por diversos nutrimentos y l
cantidad total, calculada, de estos elementos en el medio es:
K: 0,0529 I K= , 11.10-3
cL.
' s cL.
' g cL.
PROBTEMAS
114
glucosa. Calcular los rendimietos de glucosa en producto, en (g glicerol)/(S
glucosa) y de sustrato en clulas (composicin: CH,,,r,rOo.u.,No,r,l en (g clulasl/(g
glucosa), y las velocidades de alimentacin de glucosa en (kg de glucosa)/(hora)
y de formacin de clulas en (kg clulas)/(hora), requeridas para producir 12 (kg
de glicerol)/(hora),
2.7 Se utiliza un reactor por lotes para producir cido cftrico a partr de glucosa.
El rendimiento de sustrato en clulas es O,22 (g clulas)/(g glucosa) y el de
sustrato en producto 0,58 (g cido)/(g glucosa). Calcular el volumen de aire
estrl lf : 22 oC, presn : 16 psia) requerido para obtener 4800 kg de cido
ctrico por lote.
115
B!BLIOGRAFIA
Aiba S., Humphrey, A.E., and Millis, N.F, (1973). "Biochemical Engineering;"
2nd. ed. Academic Press. New York.
Armstrong, F.B. (1983). "Biochemistry", 2nd. ed. Oxford University Press. New
York; Oxford.
Box, G.E.P., and Wilson, K,B. (1951). Royal StatisticalSoc.l3. Ser, 8., No. 1,
1-45.
Cardinal, E.V., and Hedrick, L.R. (19481. "Microbiological Assay of Corn Steep
Liquor for Aminoacid Content,' J. Biol. Chem. 172:609-612.
116
Cooney, C.L., H.Y. Wang., and D.l.C. Wang. {.1977l.. "Computer Aided Material
Balancing for Prediction of Fermentation Parameters," Biotechnol-
Bioeng., 19.55-67.
Cooney, C.L., y Acevpdo F., 119771. "Theoretical conversion yields for penicillin
synthesis," Biotech. Bioeng. 19, 1499,
Eroshin, V.K., and Minkevich, l.G. (1982). "On the Upper Limit of Mass yield
of an Orrganic Product from an Organic Substrate," Biotech. Bioeng.,
vol,24, p.2263.
Erickson, L,E., Minkevich, 1.G., and Eroshin, V.K. (1978). "Appliccation of Mass
and Energy Balance Regularities in Fermentation," Biotech, Bioeng., 20:
1 595.
Gommers, F., B.J. van Schie, J.P, van Dijken, and J.G. Kuenen. (19881."Bio-
chemical limits to microbial growth yields: An analysis of mixed
substrate utilization, " Biotechnology and Bioengineering. V ol 32: pp. 8S
94.
117
King, F.G., and Hossain, M.A, (1982). "The effect of temperature, pH, and
intial glucose concentration on the knetics of ethanol production by
Zimomonas mobilis in batch fermentation," Biotechnology Letters, 4,
(8), 531-536.
Lee, J.M., (1992). Biochemical Engineering. Prentice Hall, New Jgrsey, Estados
Unidos.
Ligget, R.W., and Koffler, H: (1948). "Corn Steep Liquor in Microbiology;" Bact.
Rev, 12: 297-311.
Nagai, S.(1979). "Mass and Energy Balances for Microbial Growth Kinetics,"
Advances in Biochemcal Engineering., T.K, Ghose., A. Fiechter., and N.
, Blakebrough, (eds.),Springer-Verlag,Berlin.
I :{
Payne,W,J. (1970). Ann. Rev. Micrabiol.24, 17.
Petrides, D.P., Cooney, C.L., and Evans, L.B. (1989). "An lntroduction to
Biochemical Process Design," ln Chemical Engineering Problems in Bio-
technology, Michael L. Schuler. (ed.), American lnstitute of Chemical
Engineers. New York,
118
Pelczar, M.J., Reid, R.D., and Chan, E,C.S. (1977l.. "Microbiology", 4th, ed.
McGraw-Hill, New York.
119
CAPITULO 3
TERMODINAMICA DE LOS
PROCESOS BIOOUIMICOS
120
La termodinmica utiliza parmetros macroscpicos para analizar las variaciones
de energla y, por tanto, no requiere del conocimiento de la composicin molecu-
lar del sistema o su medio, o del mecanismo molecular mediante el cual un
proceso tiene lugar. Un anlisis termodinmico de las variaciones de energla
tiene en cuenta soamente los estados inicial y final del sistema, y es indepen-
diente de la velocidad de los procesos que ocurren, aspecto que debe ser
estudiado por mtodos cinticos.
121
A,U=Ur*t-Un,a t3.11
LU = Q - W f3.21
a - volumen constante;
4U=Q" t3.3I
b - presin constante:
,U=eo_p.^V f3.41
Donde, Ou: calor absorbido bajo volumen constante, sin expansin y sin
realizacin de trabajo; oo: calor absorbido bajo presin constante, cuando l'
nico trabajo realizado es el trabajo de expansin prsin-volumen; p.aV:
trabajo presin-volumen reatizado por el sistema sobre su medio como conse-
cuencia de la expansin; aU: incremento de la energa interna del sistema.
't22
Cuando se consideran otras formas de trabajo (W'), la primera ley de la
Termodinmica se expresa como:
AU=Q-P.LV-fl t3.51
Finalmente, si W':0:
LU=Q-P.AV t3.61
3.1.2' Entalpa
La energfa interna (U) .de un sistema es un atributo que depende del estado
presente del sistema, por ser una fpncin de estado. No se puede medir e.l valor
de U de un sistema cerrado en cualquier estado, pefo s es posible medir la
diferencia que U adquiere entre dos estados. En condiciones de presin
constante, el valor de Qo se calcula a partr de la Ecuacin [3.4]:
Qo=(Ur-Ut*P.Vz-P.Vt) t3.7I
)
(-O, es una funcin de estady, por consiguente, puede calcularse como la dife-
rencia entre los valores de una propiedad de estado, entre los estados inicial y
final.
H=Qp=Hz-Ht t3.91
1-23
3.1.3 Energa libre
Cuando AG es negativo el sistema pierde energa fibre, que puede ser utlizada
en la realizacin de trabajo. Cuando AG es postivo, el sistema recibe energa
libre y la reaccin no puede realizar trabajo, De acuerdo con la segunda ley, una
reaccin espontnea se caracteriza por la prdida de energa libre. La segunda
ley predice la direccin de una determinada reaccin, pero no predice su
velocidad. Cuando AG es negativo, la reaccin es exergnica. Si AG es
postivo, la reaecin es endergnica. Cuando AH es negatvo, la reaccin es
exotrmica. Si AH es positivo la reaccin es endotrmica.
3.1.4 Entropa
124
Esa diferencia comnmente es tan grande (Crocomo, 1975) que convierte a AH
en un trmino sin valor como lndice de espontaneidad de la reaccin. Por tanto,
debe ocurrir otra variacin en la distribucin de la energa, independiente de la
variacin de la energla libre. De hecho, la dferencia entre los valores de H y G,
puede atribuirse a una variacin smultnea en el valor de otra funcin de estado
del sistema, la entropfa.
AG=LII-T.LS t3.10I
Todo proceso que ocurre con aumento de entropla es irreversible, mientras que
los procesos que ocurren sin variacin de entropa son reversibles. En nuestro
mundo fsico todos los procesos reales, incluida la vida, son irreversibles.
125
AG=AU-T.AS t3.111
AU=A,G+I.As 13.121
126
Para realizar su actividad metablca los organismos intercambian energfa con
el ambiente en la forma de sustancias qumicas y calor. En la Figura 3.1 se
representa esquemtcamente un sistema microbial con elpropsito de analizarlo
macroscpicamente. Las velocidades de flujo de masa de las sustancias
qumicas son representados por (Di, mol i.s-1; el qJa
molar parpial, h;, kJ/(mol i), v
s,, kJ. (mol i. K)-1. El calor intercambiado con el ambiente se define como Oo, kJ.s-
1. Todos los flujos son definidos como positivos cuando se dirigen hacia el
sistema. Los subndices ".4" y "F indican afluente y efluente respectvamente.
Micr oongonismo
Ut=v-4u t3.13I
127
0u=0 t3.141
0u=o+(rt.Qr) t3.151
Donde, rDo: velocidad de flujo de calor hacia el sistema, kJ.s-1; h,: entalpa molar
parcial, kJ.(mol i)-1; O: velocidad de flujo de masa de i, mol i.s'l.
0a=-8,(,'0,) t3.161
S/ = rs + 0s t3.17I
ro=-0s t3.18t
De acuerdo con la segunda ley de la Termodinmica n debe ser mayor que cero
para que el proceso ocurra y, en consecuencia, <Ds, el flujo de entropfa hacia el
sistema, es negativo. Pueden distinguirse dos contribuciones al valor de Q": el
cambio de entropfa asociado con calor, Qo/T, y el cambio de entropa asociado
con el transporte de sustancias qumicas, I,(tD,.s,l. (Roels, 1987):
128
Donde s,: entropfa molar parcial, kJ.(mol i.K)-1; <D,: velocidad de flujo de masa de
i, (mol i)/s; <Do: velocidad de flujo de calor, kW (1 kW : kJ.s-t); T: temperatura
absoluta, .K. En esta ecuacn se observa que la segunda ley de la Termodi-
nmica (Qs < 0) no necesariamente significa flujo de calor hacia elambiente (<Do
negatvo) desde un sistema donde ocurre un proceso, como en e! caso de una
reaccin bioqufmica en un organismo.
(o"gJ
0=- D t3.201
Donde, gi: entalpa libre molar parcial, kJ.lmol )-r , defnda como:
&=h-I's, t3.211
Donde, h,: entalpa molar parcial, kJ.(moli)-1; s,: entropa molarparcial, kJ,(mol
i.K)1.
129
En la descripcin de los procesos que ocurren en un sistema microbial hay
numerosos compuestos que en situaciones normales no estn sometidos a inter-
cambio con el ambiente, es el caso de los transportadores de energa, ATp y
NADH. En un anlisis termodinmico detallado de las diversas rutas bioqumicas
estos compuestos aparecen, pero en un tratamiento macroscpico. acorde con
la Ecuacin 1,3.221, estos compuestos no intervienen.(Roels, 1987).
La clula utiliza esta energa para realizar tres tipos de trabajo: sntesis qumica
de molculas grandes y complejas, transporte hacia el interior y hacia el exterior
de la clula o de sus orgnulos internos, de sustancias inicas y neutras, y
trabajo mecnico requerido para el movimiento y la divisin celular.
t3.231
Se expresa como:
130
Por esta razniel ltmo trmino de la Ecuacin t3.241 no n"i.iye las concentra-
ciones de agua e H*, an en el caso de que estas dos sustancias sfiguren en
la ecuacin t3.231. El superndice prima denota evaluacin en una solucin
acuosa a pH : 7i o, B, 4 e, son los coeficientes estequiomtricos de la
Ecuacin 13.231; F: constante de los gases, F = 8,314 J.(gmol.K)-1; T:
temperatura absoluta, K. Las soluciones biolgicas son tlpicamente dluidas, y
por consiguiqnte, la Ecuacin 13,241se expresa en trminos de concentraciones
molares en lugar de las correspondientes actividades.
AGo=-R.TlnK, t3.25I
CHO
I
cH2o- P t3.261
g1 iceraldehfdo- 3 - fosfato dihidro -oxiacetona- fosfato
131
3.3.1 Energla libre estndar de hidrlisis de algunos compuestos
' fosforilados
1.3 -Difosfo-glicerato 49 ,4
Fosfocreatina 43,1,
AcetiLfosfato 42 ,3
Fosfoarginiha 32 ,2
ATP 30,5
Glucoso-1-fosfaEo 20 ,9
132
- .i ? 3.3.2 Energa libre estndar de algunas reacciones biolgicamente
mportantes
Hidrlisis:
- nhtdridoE de cl,do
- EBereE
Acetato de etilo + HrO --> etanol + acetato - L9,7
Glucoso-5-fosfaEo + HrO -> glucosa + fosfato - 13,8
- Anldag
ReordenacLn:
133
3.3.3 Ciclo eirergtico d'las"clulas
tos tres ncletidos: ATP, ADP Y AM? representados en la Figura 3.2, estn
presentes en todas'las clulas. La suma de sus concentraciones es relati-
vamente constante, en la niayorfa de las clulas vara entre 5 y 15 mM.
Figura 3.2 ATP, ADP v AMP, a pFt ZO. Los enlaces ricos en energfa aprecen
representados por el sirbOlo -,(Lehninger, 1973).
o- o- o-
llt o-P,-.o-P:o_cH,
-g-P-
o1l oil oil 1.,
K.,H
OH O}I
ATP
ttr
-O-P - O-P - O-P-O- Ribosa-Adenina
llillr
ooo
sin embargo, las proporciones relativas de ATp, ADp y AMp en la clula varan
considerablemente de acuerdo con su estado metablco. Los nucletidos ATp
y ADP estn presentes en la clula como complejos: MgATp2- y MgADp-, a
causa de la afinidad de los grupos pirofosfato por los cationes divalentes y por
la elevada'concentracn de Mg2* en el fluido intracelular.
134
Un indicativo til del estado energtico de una clula es la carga energtica
(Atkinson, 19771:
135
Donde la reaccin t3.281 es catalizada por la enzima fosfoglicerato-quinasa y la
t3.291 por la piruvato quinasa. La.energfa liberada por los steres fosfrjcos
provicrie, no de los enlaces que se rornpen, sino del hecho de que los produc,tos
tidmi,'rnenor energb lhre flotafiiie tos reactivos ,. ,t Q o'1o v z ty't a cr
136
El pirofosfato inorgnico experimenta hdrlsis, por accin de la pirofosfatasa,
y forma dos molculas de ortofosfato inorgnico:
Donde el valor de la energa libre estndar de hidrtisis del ATP, o del ADP, LG'
: - 30,5 kJ/mol, supone que el pH es 7 ,O; la temperatura 37 oC; que hay iones
Mg2* en exceso, y que los reactivos y productos estn presentes en concen-
tracin lM. EI valor estndar de AGo' = - 30,5 kJ, no es aplicable en las
condiciones de la clula ntacta, donde el pH y la concentracin de Mg2* difieren
de las condiciones estndar. Adems, las concentraciones de ATP, ADP y
'137
fosfato en la clula intacta no son 1 M. El valor de la energta libre de hidrlisis
delATP en una clula intacta, en condiciones reales, es - 52,31 kJ, (Lehninger,
1973l., valor obtenido despus de efectuar las correcciones para pH, y concen-
traciones de Mg2*, ATP, ADP y fosfato, en elfluido intracelular. La energa libre
de hidrlisis del ATP no es constante sino que vara con la edad y el sitio dentro
de la clula y con las concentraciones locales de Mg2* , ADp y fosfato,
La ecuacin t3.351 muestra que la hidrlisis del ATP libera una elevada cantidad
de energfa libre y, al invertir la reaccin y aadir fosfato al ADp, se almacena
energa libre para ser utilzada posteriormentg.
138
Esta reaccin no ocurre en la clula viva, En la oxidacin bioqumica, cuando
el 3 fosfogliceraldehdo se convierte en cido carboxflico (3 fosfoglicerato), se
recupera enzimticamente ATP a parltir del ADP. Por consiguiente, la oxidacin
del aldehfdo hasta cido carboxlico se realiza prcticamente sin cambio de
energfa libre:
Solucin:
139
- La ecuacin global hasta lactato es la suma de las dos ecuaciones anteriores:
a- degradacin de la glucosa:
140
101,325 kPa, respectivamente) con los reactivos en concentracin 1 M' Estas
condiciones. no son apropiadas para describir la energfa de un sistema microbial,
donde las concentraciones del ion H* y la del agua difieren ampliamente del
valor 1 M.
kJ/mol
141
Los datos termodinmicos basados en cantdades molares parciales no son una
propiedad de una sustancia dada. Estos datos estn relacionados con las
propiedades de una mezcla integral y con las concentraciones de los compo-
nentes presentes en el punto donde ocurren las reacciones qumicas. Por consi-
guente, en diversas aplicaciones, las condiciones estndar son modificadas de
manera que la entalpa libre y la entalpa del agua son evaluadas como las
correspondientes al agua lquida libre, y para la concentracn de ion hidrgeno
se utiliza el valor correspondiente a pH 7,0. Estas consideraciones slo afectan
los cambios de entalpfa libre, ya que los cambios de entalpla son menos
dependientes de la concentracn de los reactivos involucrados.
kl
^fl,=-(115)r mol C
142
AII"=-(115).lVEd kI 13.471
' 'molfucompucsto
r, _
A rlzt6 26,8 keal 112,2kJ t3_49I
A
4E elctn electrn
L,H^
'v= - 112,2 kJ
.l_*"t gn*
elcctn mol O,
t3.50I
H
LHo = - ffi,74 mol O, consumido
143
L~s. Ecuaciones [3.491 y [3.501 expresan el calor producido en cualquier clase
de cultivo, sumergido o. semislido, cuando 'en el proceso nicamente se
.
produce biomasa sin la formacin de productos no celulares .
kJ (3.52]
AG" = - (435,3).M0
mol sustrato
Mo=~ (3.53)
32
[3.54)
s se calcula a panir
de reduccin de la
Donde: M;: moles del i-simo sustrato; t.G;: energa
completa del sustrato i. (A HJc =
144
3,5 CALOR DE REACCION
145
f
t'
\
3.6 DSIPACION DE ENERGIA Y EFICIENCIA TERMODINAMICA
il'
J
3.6.1
f(
Disipacin de energa ,L,V
r\
(. Los electrones no'conservados en la biomasa constituyen la fuente de energfa
disipada en el proceso de crecimento (Roels, 1987):
< '*.)
{ T.tr, = (a c'')r.(0r.I, - 0x.Ix )'A-' t3.581
\
Donde, nr: produccin de entropla, kJ.K'1.s'1; (Ag"')ro: cambio de entalpa libre
{ para la transferencia de un ml de electrones entre el sustrato y e aceptante de
\ los electrones, kJ.(mol electrn)'1, (Tabla 3.4); T: temperatura absoluta, K.
Roels (1987)-define la energfa,disipada en el proceso de crecimiento mediante
* la funcin de disipacin D:
D=+=(Le")r. t3.59I
146
Una base realista para el nivel de referencia de los microorganismos, es la
energfa contenida en una mezcla deCO", HzO, N2 y Oz, ya que en ausencia de
otras formas de energa,- diferentes de la energla qulmica, los organismos no
pueden obtener energla til de tal mezcla para su metabolsmo. La entalpla libre
o contenido de entalpfa de un compuesto qufmico con respecto a este nivel de
referencia es, por tanto, igual a la entalpa libre o entalpla (calorl de combustn
hasta COr, HrO, y Nr.
(Le') cx
rlr = t3.601
(ag")", +D
147
Tabla,3.4 Disipacin de calor y de entalpa libre, y rendimiento en biomasa de
los electrones disponibles, para diversas combinaciones entre el sustrato y el
aceptante de los electrones. (Ah")rr: disipacin de calor bajo condiciones
normalizadas de temperatura y presin con los reactivos en concentracin 1 M;
Yr,ro: rendimiento de los electrones en biomasa, g clulas. (electrn dsponiblel-1;
(Ag.'lro: cambio de entalpla libre baio condlciones modificadas (la entalpa del
agua se toma como la del agua lquida libre y la concentracin de H* es la
corres-pondiente a pH 7; (Roels, 1987).
Acido frmico
v2 127,5 118,0 3,t7
Acido succnico (NO3)- --> N2 100,6 100,6 2,28
lcido succfnico (NO2)- --> N2 727,0 2 ,77-
Acido succfnico o2 106,6 107,1 2,76
Gfuconato o2 7L7 |I 3,26
Glucosa, CO, (etanol) * 2,9 9,5 0,88
Glucosa CO, (cido lctico) 2,9 8r3 0,81
Glucoga CO, (propinico/ 7,6 t2,9 7,48
cido actico)
Glucosa Co, (metano/ 6r7 i4 ,4 1, 63
cido actico)
Acido actico CO, (metano) -2 ,0 3,9 0,36
Metanol CO, (metano) 9r 8 t2;0 0, 91
Acido frmico @, (mtano) l-5,0 : 16,4 0 ,27
Acido propinico CO, (metano) -2 ,3 4,0 0 ,4L
148
3.7 EFICIENCIA ENERGET]CA DEL CRECIMIENTO MICROBIAL
Donde, aH"or: calor generado por catabolismo, kJ/litro; aH^: calor de reaccin,
kJ.litro-l; aHx , aHs, AHr: calor de combustin de las clulas, sustrato y produc-
to, respectvamente, kJ.(mol)-1; Ax, As, Ap: concentracin de clulas, sustrato
y producto, respectivamente, mol/litro.
13.631
(r*d".(Hr)c + (AflJs
149
Ejemplo 3.2 Determinacin del'calor de combustin de las clulas
y del calor generado por mol de O, consumido
150
El calor generado por mol de oxgeno consumido AHo es:
a
afl^
no =
i
Donde, AH^: produccin de calor durante el crecimiento; AO: moles de oxgeno
consumido. En la Tabla 3.5 se presenta un resumen delprocedimiento seguido
y los resultados obtenidos para As : (1 mol de sustrato).(litrol-l.
151
Tabla 3.5 Determinacin del calor de combustin de las clulas, AHr, y del calor
: , generado por mol de oxgeno consumido, en las ecuaciones de crecimiento de ---
Saccharomyces cerevisrae, [3.65], t3.661 y t3.671.
Tabla 3.6
Determinacin del calor de combustn de las clulas y otros
compuestos orgnicos por dferentes mtodos, Ejemplo 3.3:
: c.H,,o" 24
Gl-ucosa
.?807
27 50 2692 ,4
Biomasa .
152
De acuerdo con Baileyry Ollis (1986), el peso de las clulas secas, evaluado
expermentalmente, incluye aproximadamente un 10% de cenizas. Por tanto:
't53
- El calor generado en 9l proceso de crecimiento de S- cerevisiae, bajo represin
:l por glucosa, puede calcularse como el promedio artmtico de los calores de
reaccin correspondientes a las Ecuaciones t3.651 y t3.661, (1050,7 kJ), o
calcularse mediante la Ecuacin t3.5SI:
El valor calculado 11062,26 kJ), coincide con el valor promedio (1OEO,7 kJ),
obtenido de las Ecuaciones t3.651 y t3.661. por consiguiente la Ecuacin t3.S5l
es apropiada para evaluar la produccin de calor bajo represin por glucosa.
154
Donde, AH^: calor de reaccin o calor producido durantb el crecimiento,
kJ.(litro) 1; AHs, AHp y AH*: calor de combustin del sustrato, los productos y
las clulas, respectivamente, kJ/mol; As, Ap y Ax: concentracin del sustrato,
los productos y las clulas, respectivamente, mol/litro; AH.or: calor generado
por catabolismo, kJ.(litro)-1.
(Ynol^ =
*k
t3.681
Lx
(Ynrl* =
Arr.(-As) - E tH,tp - LH*.Ax
(Ysol*=ffi t3.691
t3.70t
155
Generalmente los hidrocarburos producen ms calor que las especies parcial-
mente oxigenadas-. ,fsl, Oor ejemplo: (Yvrrl",rr^,o ) (Y)ys16
Por consiguiente, los reactores que contienen sustratos con mayor grado de
reduccin requieren mayores remociones de calor, aspecto muy importante en
el estudio de factibilidad econmica de un proceso (Bailey y Ollis, 1986).
.^HR = LHo.LOz =
t3.71I
kI *ol o'
- ffi.74
' mol 02. Lo^' Iitro
(Yo),
Lx
13.721
LHr,+ AHx.Lx
Donde, (Yr,*r)r: rendimiento basado en la energla total dsponible en el medio,
(g clulas secas)/kJ. El primer trmino del denominador de esta ecuacin
expresa la energa liberada por catabolismo y el segundo la energa incorporada
biosintticamente en el material celular. Si la expresin para AH"o, (Ecuacin
3.61) se remplaza en la ecuacin anterior se obtiene:
"(Ytr), A
=
LH*.Ax + AIls.(-As) - LHp.LP
156
Yilt
t3.73I
L,II..Y4s a AtrI5 - AHP.Y4I
(As)ce = 2 f3.74t
c1 ^,
r _ uz.Ax)
(As)." =
' 'q 6t 1 t3.751
t c1.AsJ
157
Y el factor de rendimiento basado en la energa total disponible en el medio
mfnimo es:
(Yxu), =
A
AHur + L,H*.Ax
yrt, 13.77t
I
AHx.Yx^ a AII l,\ar- I "o,) !np.yils
Ax A.r
( Yrw )o, =
AHr.(-As)-Etnr.tp LII^ + AH*.Ax
t3.781
Ynt
Afl, - E AHr.Y$
158
(Ysr)" , =
LH^ t3.791
A,H- + ------"
^ yrto
- Datos:
159
- Concentracin de los productos: en este caso no se forman productos no
Solucin:
-Rendimientobasadoenelcalorqueacompaaelcrecimientomicrobial,(calor
de reaccin), (Ecuacin 3.68):
(Yno)*=
ffi.ou,
= 1369(1,Gt).(22,86) = O.O27S s
(1,03).(500,1)
cl
H
-
- Rendimiento basado en la energa total disponible en el medio.
_ (1,03).(22,86)
= o.O12S s cl
(500,1).(1.03) + 1369 H
160
- Factor de rendimiento basado en la energfa liberada por catabolsmo:
!r,t-Y"
Vr)am LH" -E Aflr.yw
- (1,09).(22,86)
= O.OflZ
I ,c!l
1369 kt
(Y*,)o, =
W,74 kJlmol 02
0,566 mol cltmol O"
(Yw\o, = 7.73.10-a
# ,86 4
(Yru\o, = O,O1T1 #
161
3.8.5 Factor de rendimiento de ATP en biomasa en el crecimiento
asociado a la energa
yxun = mol C
to,s
ffi . @,4,2)
s ct{. 12gc
t3.801
mol C cl'
= O.44
' mol ATP
162
3.8.7 Goeficiente de rendimiento verdadero
Las clulas consumen sustrato para asimilarlo en masa celular, proveer energla
para la sfntesis celular y proveer energa para mantenimiento. El trmino mante-
nimiento expresa la energla requerida por la clula para satisfacer actvidades
tales como transporte actvo de iones y otras especies a travs de las mem-
branas celulares, reemplazar los consttuyentes celulares degradables Y
preservar el estado celular.
Donde, As: concentracin del sustrato, g.litro-1 , Esta ecuacin es vlida para
organismos quimiotrofos, que utilizan el mismo sustrato como fuente de carbono
y de energa. Si la ecuacin anterior se divide por la concentracin de biomasa,
Ax, en (g clulas secas)/litro, por ejemplo, se obtiene:
1_1*A"*4" 3.821
(Yn), (r*rr), a*, Ax*
163
finales formados. El rendimiento mximo de ATP en clulas, {Y*ro.r}ro,
evala mediante la ecuacin, (Nagai, 1979):
Las clulas consumen los sustratos que proveen la energa y las materias primas
requeridas para la sntesis de nueva masa adicional. La energa libre de las sus-
tancias nutritivas utilizadas es mayor que la de las clulas y productos del meta-
bolismo, Las clulas utilizan eficientemente la energfa qumica, pero, como en
todos los procesos reales, parte de la energla disponible en el sustrato es
liberada como calor.
164
Qutt * Qrc = Qrc + 4wt + Qrut + Lsnt t3.841
Donde, l/: volumen ocupado por el caldo, litros; c,: concentracin de compo-
nente kg.litro-1; H,: entalpfa del componente i, kJ.(k0)'1; t: tiempo, s.
Donde, M,: masa total del caldo de fermentacin, kg; 7: temperatura, oC; (Cr)-;
capacidad calorfica media del caldo, kJ.(kg.oC)-1.
Q,tc=Fu.G)^.Fq-T4) t3.871
Donde, Fr: velocidad de flujo de masa del caldo, kg.s-t; To,, Trr: Temperatura
media, del afluente al reactor y del efluente, respectivamente, oC.
165
- qrNr: velocidad de transferencia de calor entre el reactor y los alrededores o
entre el reactor y el intercambiador externo. En condiciones establesi grr :
Qrver * Qc.
Donde, Fr,: velocidad de flujo de masa de componente 4 kg/s; H,: entalpa del
i-simo componente, kJ.(kg)-l; Los subfndices s y p se refieren al sustrato y a
los productos, respectivamente. Los productos pueden ser celulares (biomasa)
y no celulares. La Ecuacin [3.87], expresada en trminos del calor de reaccin,
se convierte en:
166
husr = V'AH*'r, t3'88I
1
La velocidad de produccin de calor por el metabolisme aerobio ha sido
relacionada con la velocidad de consumo de oxlgeno por Cooney et a|.,{.1968!.,
para elcrecimiento de numerosos microorganismos con diferentes sustratos, en
cualquier clase de cultivo, sumergido o semislido, cuando en el proceso slo
se produce biomasa sin la formacin de productos no celulares (Ecuacin 3.50):
167
Donde, (Yr,*r)*: rendimiento en clulas del calor producido durante el crecimiento .t -
:2 aerobio (Ecuacin t3.70l), g cll(kJ); qrur: velocidad instantnea de generacin - -,
de caor en el metabolismo aerobio, kJ.sl; V: volumen del caldo de fermen-
tacin, litros; r*: velocidad especfica de crecimiento, s-l; x; concentracin de
' biomasa, (g c|. secasl/litro.
-a
(Ydu)R.(cMr) = V.tr*,
t3.91I
= (", - ").r.(Y,) - xrk.V
ryY = F,
- s)'D'(rrJ - 'ft, r3.e21
(Yao)*
168
- 3.9.6 Evaluacin experimental delcalor generado por metabolismo
Donde, Qrurr, Qre, q,nr: calor generado por metabolismo, calor generado por
agitacin y dispersin de gases y calor intercambiado, respectivamente, kW (:
kJ.s'1); Fro: velocidad de flujo de masa de agua, kg.s-'; cro: calor especlfico del
agua, kJ.kg-1 oC-l ' Trr, Tro: temperaturas del agua efluente y afluente, respectiva-
mente, al intercambiador, oC. En el tiempo t = B se desconecta el intercambia-
dor, q,* - 0.
t3.94I
dT V.
Qtc = V.Cp. = LIIn.ts
dt
169
Donde, qo":calor acumulado en elreactor, kw; dr/dt: variacin de-la temperatu-
ra del caldo de fermentacin con el tiempo, oc.s-t, es la pendiente de la curva
de la Figura 3.3 entre t : B y t : c; cr: capacidad calorfica global del reacror,
kJ.litro-l.o6-t, (Tabla 3.h; v: volumen delcaldo, litros; rr:velocidad de consumo
de sustrato, (mol C en sustrato).litro-l.s-l; AH^: calorde reaccin, kJ.(mol Cen
sustrato)-1 .
Lrc=4m {3.9st
170
Figura 3.3 Montaje experimental utilizado en la evaluacin del calor generado
por metabolismo. T"o, Tro: Temperaturas de los fluidos, caliente (caldo) y fro (a-
gua), respectivamente, afluentes al intercambiador; T"r, Trr: Temperaturas de
los fluidos, caliente y frio, respectivamente, efluentes del intercambiador.
c
Reqctor Intercqnblodor Tierrpo t
171
Solucin:
172
< 4- Calor generado por las reacciones del catabolsmo (Ecuacin 3.62):
- (Y4)c'(^II)c
'l
(rryJ..$H)" + (A,H)
(0,719),(515) =0.79
n'' _ (0,719).(510 + 97,il
4 s cl
elecon dirynibl por nnl C cn gfu.
D=+ =t^e\. (#
',)
173
,r _ 114,9 W 0,719 mol C cl _ 82 kJ
mol C cl mol C glu mol C glacosa
Donde, M,: peso molecular de las clulas, 22,24 (g c|. secas).(mol C en cl)-l;
Ag"': cambio de entalpa por la transferencia de un mol de electrones entre el
sustrato y el oxfgeno: 118,5 kJ.(mol electrn)-1 (Tabla 3.4); Yr,ro: factor de
rendimiento de los electrones dispoibles, (4 g cl).(molelectrn)-1; l-r: grado de
reduccin de la biomasa: (4,59 electrones disponibles).(mol C en clulas)-1.
(as')cx
rlr =
(Ago)"* + D
519.9
n- = -------l-lJL-
" 519,9 + 114,9 = O-[lB.
174
Solucin:
175
Calor de reaccin, Ecuacin (3):
_ (0,119).(515) =on??
- vr(,go
tv | -
vdBtc 0,119 mot C cl 22,24 g cl nol C gtt
' r*t C ct 4 tnr.
"t
y_ O,ffigcl
lDc- elctrn disponiblc por nol C en glacosa
176
: , '* 7 - Energa disipada en el proceso de crecimiento,(Ecuacin 3.59):
,=+=(as.)u# r4
H
= - .(2''24 - 4.s9) = - 2TG.52
- 9.s nolCcl
\0,66 )
_ _ 276,52H . 0,119 mol C cl _ _ 32,9 H
mol C cl mol C ght mol C ght.
(Lgolcx
rr =
(A,g")"* + D
177
PROBLEMAS
3.3 Se utiliza un reactor por lotes para producir 4800 kg de cido ctrco a partir
de glucosa. El rendimiento de sustrato en clulas es 0,22 (g clulasl/(g glucosa)
y el de sustrato en producto 0,58 (g ecidoli(g glucosa). La aeracin se realiza
con aire estril lT: 22 oC, presin : 16 psial. Calcular en el calor producido
por el cultivo en kJ/lote. Este calor debe ser retirado por el sistema de
enfriamiento del reactor.
't78
Glucosa + 6O, +.38ADP + 38Pi--> 6CO, + 38ATP + 44H2O
, ,,,(21
180
y. Fgura 3.5
Representaiin grfca de la velocidad especffica de formacin de
ATP, o.1p, en funcin de la velocidad especlfica de crecimiento de elulas, p,,,
de Vries et al., 1970. Problema 3.7.
(mmol ATP) /(9. celulas.hora)
28
24
20
16
12
o
o o,t o,2 0,0 0,4 0,6 0,6 0,7 0,a
Velocldad especiflca de creclmlento, l/h
BIBLIOGRAFA
181
Baltsheffsky, H., and Baltsheffsky, M. (1 974). " Electron transport phosphoryla- :
tion," Annu. Rev. Biochem. 43: 871.
Boyer, P.D., Chance, 8., Ernster, L., Mitchell, p., Racker, E., and Slater, E.C.
11 977l,. "Oxidative phosphorylation and photophosphorylation,', Annu.
Rev. Biochem. 43:871.
de Vries, W., Kapteijn, W.M.C., varder Beek, E.G., Stouthamer, A.H. (1970).:
J.Gen. Mcrobiol. 63: 333.
Ho, K.P., and Payne, W.J. (1979). "Assimilation Efficiency and Energy Contents
of Prototropic Bacteria" . Biotechnol. Boeng. 21: 7Bl.
Kagawa, Y., Sone, N., Hirata, H,, and yooshida, M. (1979). "Structure and
function of H* ATPases," J. Bioenerget. Biomemb. 11:39.
182
:. o "'n''
*,;
^t"X"i-J!M;- il'i"?ili;[;:'t'Jl'l"TT:'"1i1",1'lii"T'
Humphrey (Volume Editors), M. Moo-Young (Editor in Chief), Pergamon
Press,
Krebs, H.A. 980), "The history of the ticarboxyc acid cycle, " Perspect. Biol.
(1
Med.14:'154.
Nagai, S. (1979). "Mass and Energy Balances for Microbial Growth Kinetics".
Advances in BiochemicalEngineering., T.K. Ghose., A' Fiechter., and N'
Blakebrough, (eds.), Springer-Verlag, Berlin.
Payne, W.J. (1970) "Energy yields and growth of heterotrophos," Ann. Rev.
Microbiol. 24: 17.
183
Roeh,,',3,4.'{S987.)* lThennodynamics of Growtlr',;':ln.Basic Bi@echnology., :
i '/ ' r;;ijotln Buifck!hd Bjorn, Kristiansen, (Eitors)" Academi.Press, Inc.
';, 11'f66191.' , ,:i ' ,'': r.
'.1
Stouthamer, A.H. (1973). "A Theorical Study on the Amount of ATP required
, ''p j. for Syn$esis of, Microbiat Cdll [laterial' Antonieva& Leeuvsenhook, 39r
I r :':
1184
CAPITULO 4
4.1 TNTRODUCCTON
Las enzimas son protenas elaboradas por las clulas a paftir de aminocidos.
Cada enzima es una molcula especializada catalizadora nicamente de un tpo
especfico de reaccin qumica. Secuencias de reacciones enzimticas son
catalizadas en fracciones de segundo con un rendimiento de 1OO 7o sin
formacin de subproductos. El propsito de este captulo es realizar una
descripcin de las caracterlsticas generales de las reacciones catalizadas por
enzrmas.
185
4.1.1 Cofactores y coenzirnas
Tabla 4.1 Algunas enzimas que contienen o requieren iones metlcos como
cofactores. (Bailey y Ollis, 1986)
186
4.1.2 lsoenzimas y enzimas alostricas
4.1.3 Clasificacin
187
Tabla 4.2 Clasificacin internacional de las enzmas. (Lehninger, 1973l.
Contina
188
Tabla 4.3 (Continuacin)
189
Tabla 4.3 (Continuacin)
Nombre Fuente Aplicacin y comentarios
Proteasa Septomyces Detergentes; remocin de la gelatina
gnseus de las pelculas (recuperacinde
plata);-ablandador de carnes; pH p-
timo: 8,O
Varidasa streptococcus sp. Uso mdico.Lederle
Estreptoquinasa Streptococcus sp. Prof ibrinolsina
190
Tabla 4.3 (Continuacin)
191
La concentracin desustrato y de producto es registrada en diversos momentos
mediante tcnicas espectrofotomtricas, manomtricas, polarimtricas,
electrodos y mtodos de muestreo y anlisis.
192
enzima)/ml y se toman muestras (Volumen: 0,1 ml) de la mezcla a los 1, 5, 10,
15 y 30 minutos. Los datbs del contenido de glucosa de cada muestra se
presentan en la Tabla 4.4.
1 0, 05
5 0,23
10 0,38
15 0 ,52
30 t-, 03
= o,o45e
vctocidad iniciut =
*3 ##f
Affi = (o,o4sg).(so n[ = 2,288
W,
193'
: ,. Figura 4.1 Determinacin de la velocidad inicial de.la reaccin entre ta enzima v
B-glucosidasa y una solucin de celobiosa. Ejemplo 4.1.
0.5
o.4
0.3
Q.2
0.1
o
o 5 10 15
Tiempo de reoccion, mnutos
+ Dotos experimentoles '--- - Tendencio inicol
mal s+rao
Nnro d econbio = 3@.333,3
minuto.mol etuims
194
Tabla 4.5 Nmero de recambio.de algunas reacciones catalzadas por enzimas
y catalzadores slidos. (Maatman, 1973); ly': nmero de molculas por sitio
activo por segundo.
19s
4.2.3 lnfluencia de los factores ambientales
4.2.3.1 pH
4.2.3.2 Temperatura
196
frecuencia de las colisiones entre molculas de enzima y de sustrato. Esta
velocidad atcanza un mximo a la temperatura ptima para la actividad de cada
enzima particular. Un incremento adicional de temperatura reduce gradualmente
la velocidad de la reaccin catalizada a causa de la ruptura de los enlaces cova-
lentes dentro de la molcula de enzima. Un aspecto fundamental en el diseo
de reactores enzimticos es el logro de un microambiente apropiado para la
enzrma.
Actividod relativo, %
too
ao
60
40
20
o
17
pH
f4.21
ft = .r{.exP- (#,)
197
Donde: Eo: energla de activacin, J.mol-l; R: constante de los gases, R : 9,314
J.mol-l .K-l ;T: temperatura absoluta, K; A:factordefrecuencia, s-1; k: constante
de velocidad, s-1.'
Solucin:
198
::t
lnt, = ln,lr-{fi
EA
lntz=ln
"- nJ,
z.J
7.9
t7
1.5
2.9 3 3. 1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 J.7 3.8
199
Si se reemplazan estosvaloresen la Ecuacin (1), donde R = 8,314J.mo|-l.K-1, *
: '' se obtiene la energla de activacin: E^ = - 15.956 J.mol-1.
E=-212.746J.mo|'1
200
Michaefis y Menten (Bailey y Ollis, 19861 hicieron importantes contribuciones
a la deduccin de las ecuaciones de velocidad de la reaccin irreversible:
s--k--> P t4,31
S+E (--kr-- ES
Sise supone que la ecuacin t4.3.al est en equilibrio, o en otras palabras, que
'el
equilibrio se logra rpidamente si se-compara con la menor velocidad de'la
reaccin [4.3.b], la velocidad de la reaccin [4.3], es:
eo=e+(es) t4.51
1 =fs*fs t4.61
201
Donde: f, : eleo, fEs : (es)/eo: representan la fraccin de la enzirna total
presente en forma libre y la fraccin de enzima ligada al complejo, respectiva-
mente.
r = h.e"-fo f4.71
e.s=k_k- t4.81
c,s K1
_
t,- t4.9t
fts*s
Donde k. es la constante de disociacin del complejo enzma-sustrato.
Vx's
f= t4.101
Kr*s
vv = 4-e" 14.11'-L
202
enzimtica es prccamente iguala la mxima velocidad y es independiente de
un incremento de s:
t-Vu f4.12t
=Vu's t4.131
Ku
20
oo
ao
60
40
20
3 6 I 12 15
203
- Representacin grfica de Lineweaver-Burk:
1 1 *Ku
r - Vx Vus
1
4.141
205
En el mtodo de Eadie-Hofstee, Ecuacin t4. 1 61, los valores de r son representa-
dos grficamente contra los correspondientes datos de r/s,la variable medida,
r, aparece en ambas coordenadas y los grrores cometidos en la determinacin
de K, y V, pueden ser grandes. Una metodologa apropiada consiste en evaluar
Vr, por uno de los mtodos anteriores y luego construir una grfica de r vs s,
similar a la Figura 4.4, con el propsito de hallar la concentracin del sustrato
para la cual la velocidad r esY*12. Como se mencion anteriormente, este valor
de la concentracin de sutrato s es el correspondiente a Kr.
Solucin:
- Los datos de la Tabla 4.6 son representados grfieamente^en las Figuras 4.4,
4.6,.4.7 y 4.8.
206
i
/
/
Tabla 4.6 Datos de la hidrlisis del almidn con o-amilasa, Dawes, 1967 r:
velocidad relativa de la hidrlisis; s: concentracn del sustrato, mg/ml.
. ii
Figura 4.6
Representacin grfica de Linewaver-Burk de los datos experi-
mentales obtenidos por Dawes (1967) en la hidrlisis del almidn con a-amilasa'
1,/,
o.o3
o.o2
o.o I
o
-o.4 -o.2 o.2 0.4 o.6
l/Km 1/s, ml/mg
207
4.3.1.2 Modelo de Briggs-Haldane
Ftgwa 4.7
Representacin grfica de Langmuir de los datos experimentales
obtenidos por Dawes (1967) en la hidrlisis del almidn con a-amilasa.
0. l4
0.12
o.1
0.08 --i-...--
0.06
0.04
'm/Vrnax
o.o2
o
-4 -2 0 2 4 6 I to 12 14
- Km s, mg/ml
208
En la Figura 4.9 se muestran los resultados obtenidos con el prograrna
C:\lSlM\MENTEN.SIM, resumido en la Tabla 4.7, o con el programa C:\GWBA-
SIC\MENTEN.BAS, resumido en la Tabla 4.8, Los dos programas producen resul-
tados similares.
o,3
Si;ustrato, Producto Enzima,
Enzima, Complejo
Cometeio ES
o,o3
En una clula viva las concentraciones de sustrato y de enzima son del mismo
orden, y no se aplica la aproximacin de estado cuasiestable. Si en la Ecuacin
t4.181 se reemplaza dbs)/dt : 0, y se eliminan e y s mediante la Ecuacin
[4.5], se obtiene (Bailey y Ollis, 1986]:
210
t4.19I
i-=--=-
dS Vx.s
" dt Ka*s
211
4.3.1.3 Simulacin del modelo de Michaelis-Menten
:MENTEN,SIM
SIM
DYNAMIC
E: EO-ES : Balance de materiales
:Constantes
K3-VM/EO; K3:VM/EO:1
K2:10*K3: K2 >> K3;K2:10
Kl =K2IKM: K1 :10/(0,1)=100
: Ecuaciones diferenciales
S': K2*ES-Kl *E*S; Ecuacion 14.171
ES' : K1 *E"S-(K2 + K3l"ES: Ecuacion t4.181
P' : K3*ES: Ecuacion [4.4]
S'=-1 *P'
212
: Salida de resultados en forma de tabla
OUTPUT T,S,P,ES,E
: Control de salida de datos (En este caso cada 1000.C|NT)
S VAL NOCI : 1000.0
1O REM MENTEN.BAS
- 20 REM Simulacion del modelo de Michaelis-Menten
30 KEY OFF
40 CLS
50 NN:1
60 REM Escribir las constantes:
70 VM:.01 ' )
80 Kl = 100
90 K2:10
100 K3=1
110 KM=.1
12O E0 =.01
130 REM Paso de integracion: T1
140 T1 =.01
150 REM Valor final de la variable independiente: T2
160T2:1OO
170 REM lntervalo de impresion de los resultados: T3
180T3=10
190 PRINT "MENTEN.BAS"
2OO PRINT
210 PRINT "Simulacion del modelo de Michaelis-Menten"
220 PRINT
230 PRINT
240 PRINT "T: variable independiente (tiemo, minutos)"
250 PRINT "Valor final de , 2="T2
260 PRINT "T1: paso de integracion, T1 =";T1
270 PRINT "T3; intervalo de impresion, T3-";T3
280 PRTNT
k
213
290 PRINT "PULSE ENTER !"
: .; 300 ANS$: INPUT(1)
3IO CLS
320 PRINT "RESULTADOS"
330 PRINT
340 PRINT "T: tiempo, minutos"
350 PRINT "O(1): concentracion de sustrato, mg/ml"
360 PRINT "O(2): concentracion de complejo enzima-sustrato, mg/ml"
370 PRINT "O(3)i concentracion de producto, mg/ml"
380 PRINT "E: concentracion de enzima, m/ml!:
390 PRINT
400 REM Numero de ecuaciones diferenciales:
' 410 N:3
420 REM condiciones iniciales: Ol :S;O(2):ES;O(3):P;O(4):E j
430 O(1)=.3
440 O(2)=0 ,
450 0(3):0
460 REM Subrutina de Runge-Kutta de orden 4; , ,
214
690 NEXT T5
7oo rB: 1 :GoTo 720
710 REM ECUACIONES DIFERENCIALES:
72O tll l: K2*O(2)-K1 *(EO-O(2))*O(1)
73O ll2l: K1 *(E0-O(2))'O(1l-lK2+ K3)"O(2)
740 l(3)= K3+O(2)
750 E = E0-O(2)
760 GOTO 490
770 PRINT
TEOPR|NTSpC(3);"T = ";T;SPC(3);"O(1) = ";O(1);SPC(3);"Ol2l =" t0l2l;SPC(3)
;"O(31 : ";O(3);SPQ(J);"E: ";E
790NN=NN+1
8OO RETURN
S + E---k,---) ES
S + E <--k2---- ES 4.221
ES--k3---> E + P
ES(---ko--. E+P
=-'i ds
dt' =h.s.c-k.@l
t4'231
215
14.24t
i - i;
. ,:', '. .n:: '
(es)+:@o
14.25t
VN VP
f4 26t
Kx KP
1i --'+ P
Ka KP
k.
Vr=fk^ .Yu K, = t4.271
h t.k"
dLtetacin t4.261 es la"expresri de la vlcidad-de una reaccin enzimtca
reversible.
216
Eiemplo 4.5 Determinacin de la relacin entfe el caudal y el
grado de conversin, en la isomerizacin de glucosa,
en un feactor emPacado
Solucin:
1. Velocidad de la reaccin.
So:S+P (3)
217
Oohde so;,;,p: l'conifti'rc,frtFHf cle Strrstrato, de s'mtrflibd y de susttqto
snr'los;ro(fuctG,. fespectivmrente. i;.-'rij r '., i i,
,::;-'.:' r \'-,..,. .\:.:'j6.
Cuando se reemplazan las dos ecuaciones anteriores en la Ecuacin (1), se
obtiene:
Kr.+ , -',
,=-J"-.["-o.(",-")]
' Kx+sot \
\,' ,: l.
ds vx
- .ls. - c) (5t
dt Klt * so
Donde:
i. 1
.
Q=-:-=
P"
J
t-
I ,,trx *.s,
J
,, (6t
h!'--" =:'',
s.b-c Ko+so t=k,.t t
r = f,.a2t =
f.{o.geslz.o,
zs = 2,41.10-s ms
'218
3. Tiempo de retencin
v
t=L= 2.41
-"'==4O1 .7 s,
o 6.1n-3
0,38 kg gfu.
* 0,64 kB agua
= g.73.16-4 m3
1w ks.m-3 looo kg 22-s
0'S ,=412,3kg.^-"
-o
"-= g,7g.lo-4
's= ---:---l
O,52
A=
-p. 0,48 = 1,08B '
b = 1 + a = 2,0833:. c = d.so = 1,083l.so
ln -'-- - -. 1,0838.so
2,0833.so
"' (2,083ft). , , =k'.4O1,7 s :;
(0,76).s,.- 1,0833.s,
219
Kr = 0,005 nol.180 c.(mol)-1 = g,g e.(litro)-l
vy = o34
d;
Puede obaeivarse, gn"este ejemplo particular, so )) Kr:
o/o
8. Caudal correspondiente a una conversin de 40 de glucosa en fructosa:
En la Ecuacin (6) se remplaza s - 0,6.so:
. rn@ =tz)sto-s
.:"@f=l't*'I,--'t
- V- 141 litres''
r = 1038.34
" oa
Q = 2,g2 . 10-s litro
9. lnactivacin de la enzima.
.i --
o'7?.3'k'
m *Ko = - ko.t = 11
Ko
= - tp.fl)
tp = 5,4.10-s (ilo\-1
-
220
Ejemplo 4.6
Determnacin de la relacin entre la concentracin
de sustrato y el tiempo de reaccin en un reactor por lotes
empacado con enzima inmovilizada sobre un soporte
Solucin
1. Velocidad de reaccin.
Los siguientes datos fueron tomados del Ejemplo 4,5: K, = 0,9 g.litro-l; V, =
O,342 g.litro-1.s-l; c : (1,0833).s";b : 2,0833).s".
,t'=0,7196t t=2,49s
221
S.fiempo de reaccinco[rgspondier-e a so = Kur
=
o,9 s.l{1ro]r1. , _l
:i
,'.1,ro='k,.t=#*#, ,,_'
t'=0,07196i t=24,9s
,,: ., I
a ':; : ' r,
k'=7,837.1O-s; t =228,7 s
. t, ,1_::-. i j
tz?2
4.3.3 Modelo de inhibicin competitva
ES KS
E+ I (==:) EI K t4.281
ES --k--> P+ E
co=e+(cd)+(es) t4.291
fr= e
eo
ifer=*rrr= ? t4.301
fs=1-(fw*f'')
223
Si las reacciones que conducen &.la{ftrmacin de ltis:compljos,,(eil, .(es),
estn en equilibrio, la velocidad de la reaccin, en condiciones estables, es:
.-lj:,'",
/ .\
'o 'u 'D (rr" *-!-l
fs*fn=f"-l Kr)
t4.321
'i ,,!
t4.33I
+- s
x.
Kn" ! *; (' .)
224
Donde,Vr:k.eo,(Ecuacin4.14t.; Kr.:constantedeMichaelis.modificadapara
inhibicin competitva. Elefecto de la inhibicin competitiva es aumentar el valor
de la constante aparente de Michaells, sin alterar el valor de la velocidad
mxima, Vr, de la reaccin.
S + E (::=) ES Ks t4.35.a1
K t4.35.dI
eo=+(ci)+1s)+(eis) t4.36I
225
Donde, o, e, (es), (eil, (eis): concentracin inicial de la enzma, de enzima libre,
de enzima'en el complejo enzima-sustrato, de enzima en el complejo enzima-inhi-
bidor, y de enzima en el complejo enzima-inhibidor-sustrato, respectvamente.
En condiciones estables la ecuacin de la velocidad de la reaccin se obtiene
mediante un procedimiento similar al de la Seccin 4.3.3:
Va's
.t| +-
a4.371
Kr Vaxc-s
Ks*s - Ks*s
Donde:
14.37.A1
226
Tabla 4.9 Datos de la hidrlisis del almidn en presencia de maltos li = 12,7
mg/ml), (Dawes, 1 967); s: concentracin delsustrato, mg/ml; r: velocidad relati-
va de la hidrlisis.
s I 1/s 1l
o.o3
o.o2
o.o1
248
El intercepto sobre el ee l/s, !nea a trazos de !a Figura 4.11, es:
,i
Tabla :
4.10 Hidrlisis del almidn en presencia de a-dextrina (i 3,34 mg/ml),
(Dawes, 1967): s: concentracin del sustrato, mg/ml; r: velocidad relativa de la
hidrlisis.
s I 1ls llt ,
229
2, lnhibicin por o-dextrina.
o.o4
1/r
o,o3
o,o2
o.o 1
o.2 0.4
1/s, ml/mg
230
4.3.5 Modelo de inhibicin por sustrato
S+ E---> ES kl t4.38.a]
ES -k-->E+P t4.38.c]
231
Dickensheets et al., 1977, simplifican la ecuacin de Andrews para el caso de
inhibicin a elevadas concentraciones de sustrato:
lsl t4.431
r Kr.V* Vx
d, =o
ds
= --
" (+ .i. r)'( 3 . +)
Paa: = O :,s=.scn
ds
k1 1 14.41
V'-:=-
's2k2
233
permanece constante en cada punto con respecto al tiempo. En este caso la
concentracin de sustrato sa evalua de acuerdo con la Ecuacin t4.451. Sin
embargo, como la operacin es continua el tiempo de retencin se calcula segn
la ecuacin:
Y t4.46t
F
C6H12O6 + c6H12o6
sacarosa glucosa fructosa - 14.471
(PM : 342,31 (PM. : 180,16) (PM : 18O,16)
Solucin
235
: /'
'Vn - 0'99 gi(litro'minuto)
K, : 123 gr/litro
Kr = 177 gllitro
Los programas INVTSAl .SlM e INVTSAl .BAS producen resultados similares, los
cuales'son representados grficamente en las Figuras 4.12, y 4'13'
:IVTSAl,SIM
SIM
INITIAL
S=S0
V: V0
T:TO
DYNAMIC
S'= RS
RS =-VM*S/(KM + S + (S*
*2lKlll: Ecuacion de Andrews, 14.421
X:100"(SO-S)/S0: Porcentaje de conversion de sacarosa
P :2* 1 80. 1 6"(S0-S)/342.3: Producto, gilitro
236
F:Y lT: Caudal, litros/minuto
PD:60*P/T:Productvidad del reactor, (g producto)/(litro.hora)
NUM:O.Ol O4T"PO1|PD +0.00001):Numero de reactores (de 4000 litros c/u)
OUTPUT T,S, P,X,NUM, PD, F
VAL TFIN = 600.00
vAL NOCI 1000.0
1O REM INVTSA1.BAS
20 REM Cinetica de la inveftasa a bajas concentraciones de sustrato'
30 REM Modelo de Michaelis-Menten
40 REM Simulacion de un reactor ideal de flujo tapon
50 KEY OFF
60 CLS
70 NN:1
80 REM ESCRIBIR LAS CONSTANTES:
90 KM:123
100VM:,99
110K|:177
120 P0:8400
130 V0:4000
140 S0:80
150 REM PASO DE INTEGRACION: T1
160 T1 :.01
170 REM VALOR FINAL DE LA VARIABLE INDEPENDIENTE: T2
180 T2:600
190 REM INTERVALO DE IMPRESION DE LOS RESULTADOS: T3
200 T3:20
210 PRINT "INVTSAI .BAS"
220 PRINT
230 PRINT "Cinetica de la invertasa a bajas concentraciones de sustrato"
240 PRINT
250 PRTNT
260 PRINT "T: variable independiente (tiempo)"
270 PRINT "Valor final de , ) =";f 2
237
280 PRINT 'T1 : paso de integracion, T1 : ";Tl
: ' 290 PRINT "T3: intervalo de impresion, T3:'l;T3
3OO PRINT
310 PRINT "PULSE ENTER!"
320 ANSS : INPUT$(1)
330 CLS
340 PRINT "RESULTADOS"
350 PRINT
360 PRINT "O(1): concentracion del sustrato g sacarosa/litro"
310 PRINT "P: concentracion de producto, g/litro"
380 PRINT 'CS: Porcentaje de conversion de sacarosa"
390 PRINT "F: Caudal, litros/minuto"
400 PRINT "NUM: Numero de reactores"
410 PRINT "PD:Productividad del reactor, (g productoli(litro.hora)
420 PRTNT .,1
238
680 FOR T5=1 T0 N
690 O(T5) :T6(T5) + (T0(T5) +T1 *l(T5))/6
7OO NEXT T5
710 T8: 1 :GOTO 730
720 REM ECUACIONES DIFERENCIALES:
730 l(1 ) :-VM*O(1 )/(KM + O(1 ) + (O(1 ).O(1 )/Kl))
7 40 P : 2* 1 gO.1 6* (S0-O( 1 t342.3
750 CS : 1 0O"(S0-O(1 t)/So
760 rF T:0 THEN T:.00001
77O PD:60*P/T
780 F:Vo/T
790 lF PD =0 THEN PD: '00001
800 NUM:.01042*PO/PD
810 GOTO 500
820 PRINT
830 PRINT SPC(3); "T : " ;T;SPC(3);'O( 1 : " ;O( 1 );SPC(3); "P : " P; SPC(3); "CS
;
840 NN:NN+ 1
850 RETURN
239
Figwa 4.12 Representacin grfica de la productividad, el porcentaje de
conversin y el nmero de reactores en funcin del tiempo de retencin. Simula-
cin de la hidrlisis delazcar de caa por accin de la enzima invertasa a bajas
concentraciones de sustrato. Programas: C:\lSl M\l NVTSA 1,SlM y C:\GWBASIC
\lNVTSA1.BAS., elaborados segn el modelo de Michaelis-Menten.
250 25
200
150
'1 00
50
0
100 200 300 400 500
Trempo de rele nc io n, m in utos
240
en cido metacrlco y estireno, y los polipptidos. Normalmente los polmeros
naturales y sintticos antes de agregarse a la enzima son activados mediante un
tratamento con reactivos. Otros polmeros como los copolmeros del anhdfido
maleico slo requieren entrar en contacto de la enzima para inmovilizarla.
Figura 4.13
Representacin grfica de las concentraciones de sacarosa y de
producto y del porcentaje de conversin en funcin del tiempo de retencin.
Simulacin de la hidrlisis del azca de caa por accin de la enzima invertasa
a bajas concentraciones de sustrato. Programas: C:\|SIM\INVTSAl.SlM y
C:\GWBASIC\INVTSAl .BAS., elaborados segn el modelo de Michaelis-Menten.
Co ncentracro n, g/ lrtro
100
'r
00 200 300 400 50c
Trempo de retencion, mrnutos
241
4.5.2 Mtodos fsicos
242
4.5.3 Enzimas inmovilizadas sobre la superficie de una partcula
insoluble
/Vr=fr./.(s,-s) 14.481
Yu.S
r" = K".c.(so - s) = f4.491
Ky+
1-z B.z
DA =1+B.Z t4.50I
243
Donde
Z=~;
so
[4.511
V.11.S
B.Z
K 11 +s 1 + B.Z
TJ = [4.531
V.w.SB B
KM +ss 1 +B
244
4.5.4 Enzimas inmovilizadas por copolimerizacin o
microencaPsulacin
(- # 4,-R1^ ( r"
#a-r-n'z),+df,)
"
= (4.n.R2.dn)-r, f4.541
,,.[^'.4)
'I d/r*.*r l*'.*)l
\ di*l=R2-rs
dR
245
Y en el lmite cuando dR -.) O
[4,561.
246
Z= B= s T=R
o KL' Ro
=
R'( v" \'o t4.s8l
3 l\Ds.rf )
(4\=o . en r=R"
\dr ) Ro
vn=+''(#)*-o, t4.59t
3.s..Dt (2 \
vn=_#l=
^ R \drltr-t | t4.601
247
La Ecuacin t4.561 expres.gda en forma adimensional se conviefte en:
Yy.o Yx.Bo
t4.61I
Vo=
Kr+so 1+Bo
Ro'.v* nl .vu.n"
t2=g4.Kr=
e g-Dr*,
9.S2.Dr.s,
Vv= f4.621
n3-n,
,, _ 9.Q2 .Dr.so'1-4
Bo
t4.6sl
"- *?"4
(**),=,
fl 14.64t
'*H"]
248
Ejemplo 4.9
Determinacin de la variacin de la concentracin de
sustrato con respecto a la distancia radial para diferentes valores
del modulo de Thiele. Efecto del modulo de Thiele sobre el factor
de efectividad para partculas esfricas inmovilizadas, segn la
cintica de Michaelis Menten
Solucin:
dY
-=
{T
9.2.02
1+B.Z
- 2.r
T
t4.651
dz
dT
=y
R^ .s- R-
Y=O,'RsoR
enT=-!i Z=ZO=-2,cn T=--Y=TO
249
Este procedimiento, usualmente muy lento, sqacelera con la instruccin V/L. :
-? Esta instrucci.n permite al usuario del prggrama alimentar nuevos valores de las
condiciones iniciales de acuerdo con los resultados obtenidos al final de cada
simulacin. La simulacin termina cuando los resultados obtenidos se ajustan
a las condicions de frontera, que en este ejemplo partcular correspnden aZ
: 1 en T : 1. Los resultados obtenidos con elprograma THIELEI.SlM son'pre-
sentados en las Figuras 4.14 y 4.15.
Tabla 4.13
Programa C:\lSlM\THlELEl.SlM: Determinacin de la variacin de
la concentracin de sustrato con la posicin radial en una partfcula esfrica.
Efecto del modulo de Thiele, , sobre elfactor de efectividad segn la cintica
de Michaelis Menteri.
1:THlELEl.SlM
2:
3 : Enzimas inmovilizadas
4:por copolimerizacin o microencapsulacin
5:
6:Consumo de sustrato segn Michaetis-Mgnten
250
".
,i 4.5.7 Consumo de sustrato proporcional a la concentracin de
sustrato
Efectlvidad
\\r
\:\
\\
:\ \
\ !\
Ll!!j.::.i:
-t--l I ::ail
l"i"i"i'l{
o,ot
o,o1 o,1 1 to 100
Modulo de Thlele
-E-BO-t --+-8O.6 -4-AO -tO
252
14.711
t''e*),,=,,
La velocidad de la reaccin no frenada por difusin en los poros es K.so. Por
consiguiente, despus de diferenciar la Ecuacin [4.70] 6on respecto a T y
' sustituir ta expresin resultante en la Ecuacin 14.711se obtiene:
- _ 3.0r.coth (3.Q,)- 1
14.721
s 1 K".R:
14 _'.| ) -, [4.75t
=
s, 6 s,.D, l,2 )
254
EI radio crftco R" por debajo del cual s vale cero se obtiene mediante el
reemplazo de (s/s") : 0 en la ecuacin anterior:
/ 6.s-.4- \12
&=R.11-----s-i f4.76t
t r,''u I
14.78t
f,.".nl,.x,
Por consiguiente, el factor de efectividad, n, definido como !a relacin entre las
dos velocidades anteriores es:
=1-l-t f
r t4'7el
q
rR /
r=1_['H)- t4.801
PROBLEMAS
255
Calcular; (1) [a velocidad inici] de la reaccin; l2l La unidad de actividad de :
glucoamilasa exprsada como la cAntidad de enzima que produce un mieromol
de glucosa por minuto en una solucin de almidn de Lintner al 4Yo a 60oC y
pH 4,5,
E +S ---) ES
---k,,
ES --- k, ---) E + S
ES ---kr---) E+P+O
E+ P---ko---) EP
EP --- k, ---) E + P
' i -! r -
256
- Deducir la ecuacin de velocidad para la produccin de galactosa segn el
modelo de Briggs-Haldane, e indicar si la galactosa es un inhibidor competitvo
o no compettivo.
E + S ---k, ---) ES
ES --- k, ---) E + S
ES --- k. --) EP + O
EP --- ko ---) E + P
E + P --- k, ---) EP
4.4 En la Tabla 4.14 se presentan los resultados obtenidos por Eadie, 1942, en
la hidrlisis de una solucin de acetil colna (sustrato) con suero de sangre de
perro (fuente de la enzima). La tercera columna de la Tabla presenta la veloci-
dad inicial de la reaccin en presencia de prostgmna como inhibidor, concentra-
cin: 1 , 5. 1 0-7 (moll/(litro) .
257
Tabla 4.14 Datos experimentales de la velocidad inicial de la reaccin de
hidrlisis de acetil colina en presencia y en ausencia de un inhibidor, Eadie,
1942.
3,2 111 59
4,9 148 7l
6,2 r43 91
8,0 766 L11
9,5 200 r25
258
Bailey, J. E., and Ollis, D. F. (1986). "Biochemical Engineering Fundamentals,"
2nd. ed., McGraw-Hill, New York,
Briggs, G.E., and Haldane, J.B.S. (19251. "A note on the kinetics of enzime
action," Biochem. J. 19:338-339.
Dixon, M., and Webb, E. C. (1964), "Enzimes," 2nd. ed., p-55, Academic
Press, lnc., New York,
Ennis, 8.M., and l,S. Maddox. (1987). "The effect of pH and lactose concen-
tration on solvent production from whey permeate using Clostridium
acetobutylicum," Biotechnol. Bioeng. 29: 329 - 334.
260
Fruton, J, S., and Simmonds, S. (1953). "General Biochemistry," p.260, John
Wiley & Sons, lnc., New York.
Fukushima Y., K, Okamura, K. lmai, and H. Motai. (1988). "A new immobi-
lization technique of whole cells and enzimes with colloidal silica and
alginate" Biotechnol. Bioeng.32: 584 - 594.
Petersen, J.N., Davison, 8.H., and Scott, C.D. (lggl). "Minimizing the errors
associated with the determination of effective diffusion coefficients
when using spherical cell immobilization matrices," Biotech. Bioeng,37:
386-388.
Scott, T, C., Hll, C. G,, and Amundson, C. H., (19851 "Determination of the
steady state behavior of inmobilized R-galactosidase utilizing an integral
reactor scheme", Biotechnol. Bioeng. Symp. 15:431-445.
261
&c.vart,,f.S',..Bober.s!9},;GR'(198B}-1P,roductinhihritionofirnmobil{1ed
:l Esch erichia coli arising from mass tranpjer'limitation, " Appl@ Environ-
mental Microbiology, 2464-247 1 .
: !. : .: -
lbodvyard": J. :d3 985).,,,So .." lmmo.Dilized ag$s and,,e,BzrpFs.r, 4q. practcal
approach," J. Woodq#rd, led.l.il[hr|{,ess, W*hing@r,. epio3 - 12.
',::'i::l ;.r'ili
,,il,l,..n..',iofi...l,1,.,..
f_r ' : 'tlj
262
2"62
CAPITULO 5
Las clulas consumen las sustancias nutritivas requeridas para crecimiento y las
convierten en nuevas clulas y productos metablicos. La velocidad de estos
procesos varfa con el desarrollo del cultivo.
A medida que las clulas crecen se acumulan en el medio los productos finales
del metabolismo celular, Frecuentemente, estos componentes alteran el pH y
la reologfa del medio, factores decisivos sobre la actividad celular y los mecanis-
mos de transporte. Adems, la poblacin celular en crecimiento es heterognea,
y en cualquier momento, en cada punto del fermentador, coexisten clulas de
diferentes edades, con diversas funciones y actvdades metablicas.
5.1 CRECIMIENTO DE BIOMASA EN UN CULTIVO POR LOTES
La masa de una muestra se expresa como biomasa seca, esto es, la masa
residual obtenida despus de.someter la muestra a, un procedimiento estan-
darizado de secado, por la dificultad tcnca para remover el agua adherida a la
superficie de un biomateral, sin retirarle tam.bin el agua interior.. La densidad
de un biomaterial es la calltidad de biomasa seca presente, por unidad de volu-
men de biomaterial hmedo. Generalmente, el,agua constituye aproxinla-
damente el 8O% de la masa total y la densidad verdadera de un biomaterial, o
sea, la masa total por unidad de volumen de biomaterial hmedo, es similar a la
del agua. Por consiguiente, la densidad de un biomaterial es aproximadamente
200 kg.m-3 y su volumen especfico es aproximadamente 0,005 m3.kg-l, (Fre-
drickson y Hu, 1989).
264
5.1.3 Velocidad especfica
lx =
1dx 1
t5.11
xdtx^
Donde, p^: velocidad especfica de crecimiento del ffiicrg996ismo, h-l; x:
concentracin de clulas, (g clulas secas).litro-l; r: velocidad de crecimiento
de las clulas, g.litro-t.h-1 .
ls =
1.& =1.r^ 5.21
xro
r t5'3I
266
Ejemplo 5.1 Determinacin de las velocidades especficas de una
fermentacin
En las FigurEs 5.2, 5.3 y 5.4, se presentan los resultados obtenidos en una
fermentacin alcohlica, Borzani, 1975. Calcular las velocidades especfficas de
crecimiento de levadura, consumo de azcar y produccin de etanol en el
tiempot:5horas.
X, g/titro
4s6'
Tiempo, :h
+ X vs t '--- dx/dt
t
La concentracjn de clulas en el instante = 5 horas, es: x : 3,45 g.litro-1.
De acuerdo con la Ecuacin t5.11y la Figura [5.2], la velocidad de crecimiento
de levadura es:
267
i1,
djf,33
lrx = = 0,126 -r
3,45
34567
Tiempo, h
+ S ys t ---- ds/dt,
268
tx= dr = lr.x - k.x t5.4I
&
v-=+*=*u"o
IV = /V,.exp
[rrr.1r - h")] 15.61
270
dM
= pu.4tc.R'?# = b.,.(S .n.p*)'o .uE'
Donde:
b. =
# i bz =1.(36.n .pul'F
t5.81
Portonto: M=(
"r^-?)t'
Donde, 9r y bz: constantes; Mo: masa de la pelotilla en el tiempo t : 0; t:
intervalo de tiempo. La Ecuacin [5.8] concuerda con observaciones experimen-
tales segn las cuales el crecimiento de los organismos filamentosos es
proporcional al cubo deltiempo. La diversidad de la anatonomfa microbial y de
las condiciones de crecimiento afecta la velocidad de crec.imiento. General-
mente, entre mas complejo es un ricroorganismo, mayor es su tiempo de
divisin celular. En la Tabla 5.1 se presentan datos delperiodo de reproduccin
de algunas especies de bacterias.
5..2.1 Temperatura
272
El requisito fundamental es la presencia de agua lfquida. En la Antrtida hay
bacterias que se reproducen a 7"C, pero que se desarrollan a mayor rapidez a
temperaturas entre 20 y 30"C, (Pelczar, 19771' En la Tabla 5'2 se presenta una
clasificacin de los microorganismos en trminos de la dependencia de la veloci-
dad de crecimiento con la temperatura.
BaciTTus Caldo 37 28
mycoideis
273
5.2.2 Energa de activacin
Temperatra oC
Gtupo Mfnimo Optimo Mximo
Termfilos 40 45 55 75 60 80
Mesfilos 10 r5 30 45 35 47
Sicrfilos obligados -5 5 15 18 19 22
Facultativos -5 5 25 30 30 35
274
Finalmente es necesario recalcar, en la optimizacin de procesos, que la tempe-
ratura puede afectar de manera diferente las velocidades de crecimiento de
biomasa y de formacin de producto. Por tanto, estas dos funciones obletivo
deben optimzarse independientemente.
Algunas propiedades del agua tales como el punto de fusin, el punto de ebu-
llicin, la presin de vapor y la presin osmtica, conocidas como propiedades
coligativas, son modificadas por la presenciade solutos disueltos. La disolucin
de un peso molecular gramo (1 mol) de un soluto ideal en 1000 gramos de agua
(disolucin 1 molal), a presin atmosfrica normal, disminuye el punto de
congelacin del agua en 1,86 oC, eleva 0,543 oC el puntb de ebullicin, y
ejerce una presin osmtica de 22,4 atmsferas, Un soluto ideal no se disocia
en dos o ms componentes, ni se asocia para disminuir el nmero total de part
culas. Las leyes coligativas solo se cumplen con exactitud en soluciones muy
diluidas,
Los efectos de los solutos sobre las propiedades del agua tienen una importancia
biolgica considerable. Asf, por ejemplo, los peces pueden permanecer activos
a temperaturas de congelacin, y la presencia en la sangre de solutos incapaces
de atravesar membranas como en el caso de las proteinas, confiere a la sangre
una presin osmtca mayor que la del fluido.extracelular rl el agua presente en
este fludo tiende a difundirse hacia los capilares sangufneos.
275
Elagua constituye en promedio el 80 % de peso de la clula, intervine en la
reacciones de hidrlisis y en la reduccin del oxgeno en la cadena de transporte
de electrones. La actividad del agua se define como: i l
A, = I!p_ ts.10I
Donde, Pr: presin del vapor de agua de una solucin a una temperatura dada;
Pr: presin de vapor del agua a la misma temperatura
Pw-Ps
[5.11]
Pv n+N
276
,Un osmol es la cantidad de soluto que provee un nmero de Avogadro,
6,02.1023 partlculas en solucin, y que al disolverse en un kilogramo de agua,
genera un ncremento de 22,4 atmsferas en la presin osmtica. La solucin J l,-n
de un electrlito como el NaCl, representa un ion Na y un on Cl, o sea, 2
osmoles. Por consiguiente, 1 osmol de NaCl corresponde a 29,1 g de NaCl, Una
Lobcin 1 osmolal contiene 1 osmol de soluto por kilogramo de agua, en tanto
que una solucin 1 osmolar contiene un osmol de soluto por litro de solucin.
Los valores de la actividad del agua o de la tonicdad del medio son tiles en los
estudios de crecimiento de microorganismos en medios concentrados, en los
estudios de contaminacin microbial, y en el estudio del crecimiento de hibrido-
mas, metabolismo y produccin de anticuerpos, Ozturk, S.S., y B.O. Palsson,
1991. Las bacterias son mas sensibles a la actividad del agua que los mohos,
Los mtodos de prevencin de la contaminacin de los lquidos estn basados
en este comportamiento. Si se reduce la actividad del agua, A*, por debajo de
0,95 las bacterias no crecen y para valores de la actividad del agua, A*, por
debajo de 0,7 no crecen los mohos. En la Tabla 5.3 se presentan datos del
valor ptimo de la actividad del agua, y su Correspondiente tonicidad, para el
crecimiento de algunos microorganismos.
277
En la Figura 5.5 se presenta elefecto de la actrvidad delagua sobre la velocidad
de diversos procesos fsicos,"qumicos y enzimticos. La actividad se determina
experimentalmente con un higrmetro, o mediante la evaluacin de la disminu-
cin del punto de congelacin, (Bol et al., 1980). En trminos generales la
velocidad relativa de los procesos indicados en la Figura 5.5 es proporcional a
la actividad del agua,
5.2.5 pH
Los cidos dbles como el ion amonio manifiestan una alta afinidad por sus pro-
tones y tienen una considerable importancia biolgica, ya que actan como
amortiguadores para resistir los cambios de pH, y mantenerlo en un nivel
adecuado, en el organismo.
278
Figura 5.5 lnfluencia de la actividad del agua, a temperatura constante, sobre
Ias velocidades relativas de diversos procesos. Curva 1 : Destruccin de clorofila
en espinaca a 37 oC; Curva 2: Degradacin del cido ascrbico; Curva 3:
Oxidacin de astillas de papa almacenadas a 37 oC; Curva 4: lnactivacin de
fosfatasa en leche desnatada; Curva 5: lnactivacin del Closidium botulinum;
Curva 6: Secado de glucosa a 30 oC. (Thijssen, 1979).
Vet'ocldad relatlva
pH pK'. bg t5.14I
=
#
Los fluidos intra y extracelulares de los organismos vivos contienen pares con-
jugados cido-base que actan como athortiguadores. El principal sistema
amortiguador intracelular es el par conjugado HrPOo- - HPO42', IBK' *'7,21'.
279
Tabla 5.4 pH de algunos fluidos. (Lehninger, 1973)
Fluido pH
Agua de mar 7,O - 7,5
Plasma sangulneo 7,4
Fluido interstical 7,4
Fluidos intracelulares
Msculo 6,1
Hlgado 6,9
Jugo gstrico 1,2 - 3,O
Jugo pancreco 7,8 - 8,O
Saliva 6,35 - 6,85
Leche de vaca 6,6
O'ina 5 -8
Zumo de tomate 4,3
Zumo de toronja 3,2
Refrescos a base de cola 2,8
Zumo de limn 2,3
Elvalor ptimo de pH, entendido como el valor para el cual la velocidad de creci-
miento es mxima, vara entre 6,5 y 7,5 para bacterias, entre 4 y 5 para
fevaduras, y entre 5 y 7 paramohos. En la Tabla 5.5 se presentan los valores
mnimo, ptimo y mximo, para el desarrollo de algunas especies de bacterias.
280
cultivo, usualmente medante la adicin de cido clorhdrico o sulfrico, y una
de las bases: hidrxido de sodio, de potasio o de amonio, al medio. Se prefiere
- el amonlaco gaseoso en lugar del hidrxido de amonio, por la posibilidad de
contaminacin, de este ltimo compuesto con esporas bacteriales.
Lmite Lmite
Bacteria inferior Optimo superior
ThiobaciTTus thiooxidans 0, 5 2, o - 3 ,5 5
Generalmente hay un valor del pH del medio para el cual la veloqidad de un bio-
proceso es mxma. Valores de pH menores que el mximo estimulan la veloci-
dad y valores mayores la inhiben. Humphrey 11977 , 1 978) presenta la siguiente
ecuacin:
28'l
fi = fmax
t5.151
1r,.s(r.*.8)
Donde: r,: velocidad de produccin o de consumo de la especie i. El subndice
irepresenta uria concentracin, en g,.litro'l . As e, X, o, pt s, h*:concentracn
de enzima, de masa celular, de oxfgeno, de producto, de sustrato, y de ion
hidrgeno, respectivamflti [,.o: mxima velocidad de produccin o de consu-
mo de especie i; K.,: constante cntca, rbpresenta elefecto estimulante del pH
sobre la velocidad de un bioproceso, en g.litro-l; Kr: constante cintica, repre-
senta el efecto inhibitorio del pH sobre la velocidad de u4 proceso, g.litro-].
282
tanto que en un rnodelo no segregado, el comportamiento de la poblacin celular
se aproxima al de una clula promedio.
']
5.3.1 lnfluencia de la composcin del medo sobre la velocidad
especfca de crecimiento
'ds 1 dx
t5.181
I
o
^ - --
dt Yus dt
283
es la concentracn del sustrato para la cual la velocidad especfica de
crecimiento es la mitad del valor mximo, pr'
284
En el caso de medios con mltiples fuentes de carbono, una vez agotado un
sustrato, la clula adapta sus "rutas metablicas", catalizadas por enzimas, a la
siguiente fuente de carbono y, despus de un nuevo periodo de adaptacin, se
reinicia el crecimiento. Este fenmeno se conoce como crecimiento diauxico.
' t5.19I
Px = l
Ks * sn
bg ---Ir-
Pr-Px
= ,r.logs - log, t5.19.a]
285
.)
5.3.1.3 Modelo de Contois y Fuiimoto
Fr=Fv -"'e()
[' ] 'u"'
Donde las varibles tienen el mismo significado que en el modelo de Monod, r-
Ecuaciones [5.17 y 5.18].
* = k'(vx - F, )o 15'221
286
Donde, k :, l/fu*Kt; p: coftstanteempfrica.' Las variables tieneh el rnismo
significado que en el modelo de Monod,.Ecuaciones t5.17 y 5.181,.,.Adems,
Konak demostr que esta ecuacin se convierte en la ecuacin de Monod,
Ecuacin 15.17l,para p : 2, Y en la ecuacin de Teissier, Ecuacin [5.2O], para
p: 1.
15.231
Modelo K m p
Monod t/rx 0 2
Contois t/ (K,.x) 0 2
Konak k. p, p p
247
S.g.zlnfluencia de la concentracin de biomasa sobre la velocidad :
especfica de crecimento: Modelo de Meyrath
[x = ]la, f5.24t
Ks*
1; Las dems
Donde, so: concentracin inicial del sustrato limitante, (mg).litro
variables tenen el mismo significado que en el modelo de Monod, Ecuaciones
f5.17 y 5.181.
tt=t- 1x t5.2sI
Fr
--ln -xo
288
5.3.4 Fase estacionaria: Modelo de La Motta
fx= t5.261
ff=u*'*'['*t)
Donde, xM: concentracin de'biomasa en la fase estacionara, g.litro'l
289
Donde, rr: velocidad de consumo de sustrato, g.litro'1.h'1; r^: velocidad de
crecimiento de biomasa; Y*,.: rendimiento del sustrato en clulas, 19 cluias)/(O
sustrato); ,rr: velocidad especffica de crecimiento, h-1; x: concentracin de
biomasa, (g biomasa secal,litro-l; ko: velocidad especffica de muerte celular y
metabolismo endgeno, h-l .
1 = L* t f5.28t
Vx * ko lr.s Fa
Ko=Kl+K, f5.291
290
Las constantes de velocdad, Ko, y K, generalmente son evaluadas por el
mtodo recomendado por Snclair y Topiwala, '1970, a partr de la representa-
cin grfica de la Ecuacin f2.371, (Figura 56):
o
Velocidad especi flc"a de crecirrllento, l/h
291
- El valor de la velocidad verdadera de muerte, Ko, es el correspondiente al
ntercepto con el eje de las x.
t5.301
292
Otros sustratos como el fenol, el tolueno o el butanol, extraen componentes de
la clula y deterioran la membrana celular cuando su concentracin es de unos
pocos g,litro-1 .
293
5.4.1.3 Modelo de Andrews
*=o=py.(,.+.*)'(_:.*) *
.
lu
' 5)'o
1 + 2,1-
t5.33r"
(r" /
\
294
5.4.1.4 Modelo de Tseng y Waymann
En algunos casos el patrn de la inhibicin por sustrato difire del expresado por
la Ecuacin t5.311 y demuestra un decrecimiento lineal de la velocidad
especfica de crecimiento, /.rx. Tseng y Waymann, 1975, presentan una
ecuacin, vlida para concentraciones de sustrato mayores que un valor crftico,
sci
Vx=Va-f,t.(p-Kz) ts.3sl
295
5.4.2.2. Modelo de Ghose y Tyagi
Ghose y Tyagi, 1979, presentan un modeto para evaluar la' inhibicin del
crecimielto de revadura *'*;"1'-r.r,
-.cx)l r5.s6,
\
=r"'t'[ # t5'37]
t - \t/2
cx)I
rr=rc.ll*'c t5.381
t
296
Donde, pr: velocidad especlfica mxima de crecimiento, cc: concentracin media
del producto en cultivo continuo, g.litro-1; r.: velocidad especfica de crecimien-
to observada a la concentracin c..
ft=ltv
(,*".[r.) t5.391
297
metablica del microorganismo, para convertirlo en sobreproductor del compues-
to deseado, adems de ensayos con microorganismos mutados en diferentes
condiciones ambientales,
La energla que impulsa los procesos celulares es la energa qulmica del ATP, o
de sustancias similares, obtenida mediante la oxidacin del sustrato por el
oxgeno molecular hasta CO, y agua, proceso conocido como fosforilacin
oxidativa. Otro proceso de obtencin de energla es la fosforilacin a nivel de
sustrato mediante la degradacin del sustrato hasta productos mas simples
como etanol, cido lctico, cido cftrico, CO, y agua. Estos productos
excretados por la clula, mediante fosforilacin a nivel de sustrato, son
conocidos como productos del tipo 1.
Los productos del tipo 2 son compuestos extracelulares tales como exoenzimas,
polisacridos y metabolitos especiales, Las exoenzmas degradan las molculas
del sustrato demasiado grandes para atravesar la pared celular. Los polisacri-
dos como la celulosa y el almidn, cumplen funciones estructurales en la agrega-
oin de clulas, y como reserva de alimentos. Los metaboltos especales como
los antibiticos, evitan la competencia de otros microorganismos,
298
Gaden, (1959), distingue cuatro tipos de formacin de producto de acuerdo con
la relacin cuantitatva entre la cantidad de producto y el crecimiento de
biomasa. .
- Tipo 1:
La formacin de producto est directamente asociada con el
crecimiento. Es el caso de los metabolitos primarios en los cuales la formacin
del producto est asociada con el metabolismo de energa. Como ejemplos
pueden mencionarse la produccin de alcohol y cido glucnico, y el tratamiento
biolgico de aguas residuales.
- Tipo 2:
No hay una relacin entre el crecimiento y la formacin de producto.
Como ejemplos pueden mencionarse la produccin de penicilina y de estrep-
tomicina.
299
1dP
x =r= v,,il.! ff=vri.v* t5.411
ds
rp = (Yrts)."" = (Yry, ). t5.42)
Donde: rp, r, rsi velocidad de formacin de producto, crecimiento de biomasa,
y consumo de sustrato, respectivamente en g.litro-1.h-,; x, p, s: concentracin
de clulas, producto, y sustrato, respectivamente en g.(litro)-1 ; rr: velocidad
especfica de crecimiento de biomasa, h'1 ; ltpi velocidad especfica de formacin
de producto: (g producto).(g clulas)-1.h-1. La siguiente ecuacin relaciona los
factores de rendimiento de las tres ecuaciones anteriores:
t5.431
fP=fp,ti.
s.r
15.441
Ks *s
300
\
rt = x'Ky t5.451
301
- x _ Pu-b.r) 15.171
dt Ks*s
dsldx 15.181
dr Y*1, df
Donde, Y^,=: factor de rendimiento de sustrato en producto, (g clulas).(g
sustrato)-1; s: concentracin del sustrat limtante, g.litro-l; x: concentracin de
biomasa, (g clulas secas).litro-'; lt*: vetocidad especfica m{xima de creci-
miento, hora-l; Kr; constante de saturacin, g.litro-l; K.: es la concentracin del
sustrato correspondiente a una velocidad especffica de crecimiento igual a la
mitad del valor mximo, !u.
302
ds __ * *"'(s' -s)] t5.491
dt +ffi[r'
.ds=- P, la
Kr+s
I " [r, * Yrr-. (", - ")
Jo ] rrr.
1. s .1Lnfi., +a.dll
'.
-t ln- =D. . -c [5.50]
-so
o..= !s!. .
t5.511
xo
"=#["*r'r'"'] t5i53I
=(so-s) t5.541
c ts.55I
|-u=
b-1
303
_1 *sa
a t5.561
Ks=
b-1
Yr6=a.xo t5.57I
- Michaelis-Menten
dP _- fx's
d,
-,r- - Kr*, t5.581
- Monod
(n.E;.r - E.Ey )2
R2= 15.601
I n.Ex2 - (E* f )l".Dy' -(Ey]
Donde:
+a.d)
-_ln(1 t5.61I
t
304
t5.62I
305
- El procedimiento propuesto por Tao, 1987, fundamentado en arreglos de
polinomios de la forma:
- Lineweaver-Burk:
1_ 1 *5r ts.64l
lL Fx Vus
- Langmuir:
306
La representacin grfica de slp versus s, en el caso de microorganismos que
se comportan de acuerdo con el modelo de Monod, corresponde a una llnea
recta, cuyo intercepto es K./r,, y cuya pendiente es 1lp*,
- Eadie-Hofstee:
En los ensayos por lotes pueden utilizarse matraces para realizar simultnea-
mente mltples ensayos con diferentes condiciones ambientales. Los ensayos
en reactores continuos requieren tanques de reserva de nutrientes y de producto
cnectados aspticamente alfermentador. El control delcaudal efluente se difi-
culta en algunos casos por la formacin de espuma y por el taponamiento del
ducto de salida con aglomerados de clulas. La duracin de un ensayo puede
prolongarse durante varios dfas, e incluso semanas, y aumentar el riesgo de
contaminacin y de mutacin de la cepa por su adaptacin a las nuevas
condiciones ambientales. Las diferentes condiciones ambientales en un ensayo
por lotes y en una fermentacin continua afectan la validez del modelo cintico
desarrollado en un reactor continuo para la prediccin del comportamiento de
una fermentacin por lotes y vicversa. Por consiguiente, estos parmetros
requieren una verificacin cuidadosa con el propsito de evaluar la confiabilidad
del modelo establecdo.'
307
Ejemplo 5.2 Evaluacin de los parmetros cinticos de ra Ecuacin
de Monod a partir de datos experimentales
Tabla .5.8
Evaluacin de las velocidades de crecniento de biomasa y de r
/ consumo de sustrato a partr de datos experimentaleS. Anlisis de regresin
f realizado con el programa C:\OUATTRO\MONOD.WOI
ABCDEF
Tiempo BiomaEa Sustrato dx/dt dx/dt s.promedio
horas mg,/Iltro mg/litro LD-Z SPLINE
OEIiTKL.
d/dt dx/dt (t/s) x prom. LL tL
P_Iom ' Prom. LD-Z SPIJINE
LD-Z SPIJINE
308
Tabl 5.8 ConEinuacin
N o P.
I T v
p Prom. L/ .t. prom. p prom. /e s/ pprom.
LEZ-SPL IDZ-SPfr IJDZ - S PIJ LDZ-SPL
Observaciones:
309
- Columna J: Concentracin de biomasa. Promedio de los,valores anotados en
la columna B en cada intervalo de tiempo. Columnas K, L: Velocidad especfica
de crecimiento de biomasa, calculada'con los valores de la columna J, y las
columnas D y E respectvamente, en (horas)-1.
Y ErY R2 m ErrX
Y:lntetceptoconelejoY;Y:var.iab1edependiante',:.'
1-; ., : ..
: 'I -,
310
'v -- Lin'eweaver-Burk, Ecuacin t5.641: Variable independiente: datos de la ,
columnas
- Eadie-Hofstee, Ecuacin t5.661: Variable independiente: datos de las
l
datos de las columnas L, K y S (Tabla 5.81 para los mtodos de Spline, Leduy
y Zajlc, y velocidad especfica promedio de crecimiento, respectvamente.
311
Tabla 5.11 Parmetros de la Ecuacin de Monod obtenidos con el programa
:, C:\GWBASIC\MONOD.BAS. resumido -e la Tabla 5.12, pata el conjunto de v
valores expefirnentales de la Tabla 5.8.
, gttos valores coinciden con loi informados por Herbert et al., 1956:
Yx/s : 0,53 g/g;lrrrr : 0,85 (hora)-l; K, = 12,3 mg/litro.
1O CLS
20 PRINT "MONOD.BAS: METODO INTEGRAL DE ANALISIS"
30 PRINT "EVALUACION DE LOS PARAMETROS DE LA ECUACION DE
MONOD"
, 4o,PRINT :
50 PRINT "REFERENCIAS:"
60 PRINT
70 PRINT "Gates, W.E., y Marlar, J.T., Water Poll."
r
i
80 PRINT "Contro! Fed. 40: R 469, 1968"
90 PRINT
;
I
312
4 230 PRINT
240 PRINT "PULSE ENTER !"
250 ANS : INPUTS(1)
260 CLS
270FOR X:1 TO 10000
280 NEXT X
290 CLS:KEY OFF
3oo GosuB 1o5o
310 CLS
320 WHILE CMD < >3
330 0N CMD GOTO 360,640
340 WEND
350 GOTO 1030
360 PAGINAo/o =1
370 GOSUB 1200
380 REM SUMINISTRAR DATOS Y CONSTANTES
390 PR!NT
400 INPUT "Conc.inicial de biomasa y sustrato ";CXo,CSo
410 PRINT
42O INPUT "Numero de pares de datos, incluir datos para t=0 ";N
430 PRINT
440 l=N
450 Dt M CS(t),T(t), CX(t l,X(t),y(t),A (t), E1 (tl,XX(D,TTill
460 FOR l:1 TO N
470 INPUT "Conc. bio.masa, sustrato, tiempo ";CX(l),CS(l),T(l)
; 48O NEXT I
490 PRINT.,
500 cLS
510 REM ESCRIBIR LOS DATOS EXPERIMENTALES LEIDOS
520 PRINT SPC(1 0);"DATOS EXPERIMENTALES"
530 PRINT
540 PRINT SPC(5);"Conc.biomasa";SPC(5);"Conc.sustrato";SPC(5);"Tiempo"
550 PRINT
560F1$:" ##"+" ###.##'+SPACES(S)+" ###.## "+ SPACES(SI+
,
###.##"
570 FOR l=1 TO N
580 PRINT USING Fl $;l,CX(l),CS(ll,T(l)
590 NEXT I
600 PRINT
610 PRINT "PULSE ENTER t"
v
313
620 ANS$ : INPUTS(1}
:. 630 CLS
640 lF PAGINATo>1 THEN PRINT CHR$(12);
650 GOSUB 1200
" 660 REM CALCULO DEL RENDIMIENTO CELULAR
670 YE : (CX(N)-Cx0)/(CS0-CS(N))
680 REM CALCULO DE AP
690 AP:YE/CXO
7OO REM CALCULO DE X'S E Y'S SEGUN ONG
710FORt:1TON
72O X(t):LOG(1 +Ap*(CSo-CS(|)l)/Tfl)
730 Yfl) : LOc(CSfl)/CSo)/Tfl)
740 NEXT I
750 REM SUBRUTINA DE AJUSTE POR MINIMOS CUADRADOS ,,
760 L:2
770 INPUT "Criterio de convergencia, (se sugiere 1E-3): ";E
780 E1 :.5
790 GOSUB 1740
800 GosuB 1230
810 REM CALCULO DE MUMAX Y KS
82O MUMAX :A(2)/(A(1 )-1 )
830 KS = ((1 /AP) + CS0)/(A(1 )-1 )
840 PRINT
850 PRINT "Criterio de convergencia usado: ";E
. 860 PRINT
870 PRINT "El valor calculado del rendimiento y es: ";yE
88O PRINT
890 PRINT "Velocidad maxima de crecimiento, MUMAX ,';MUMAX
9OO PRINT
, 910 PRINT "El valor estimado constante Ks. es: ";KS .
920 PRINT
930 PRINT "Desviacion estandar del ajuste ",
940 pRtNT tNT(1 0000000#*D)/1 0000000#
950 PRINT
960 PRINT "Numero de iteraciones requeridas: ";M
' 970 PRINT
980 PRINT "PULSE ENTER !"
990 ANS : INPUTS(1)
l OOO WHILE CMD < > 3
1010 0N cMD GOTO 290,290
314
1O2O WEND
1O3O END
1O4O REM VENTANA DE MENU PRINCIPAL
1O5O PRINT "MENU PRINCIPAL"
1060 PRINT
1070 PRINT "1. lngreso datos experimentales"
1080 PRINI "2, Reiniciar calculo con nuevos valoresn
1090 PRINT "3. Terminar el calculo"
11OO PRINT
1110 INPUT "Favor seleccione numero y luego pulse ENTER !:",CMD'
1 120 PRINT
1130 PRINT "PULSE ENTER !"
1 140 WHILE CMD < > FIX(CMD) OR CMD < 1 OR CMD > 3
11 50 BEEP
1 160 PRINT SPC(40); ';
315
1410 REM CAMBIAR EL INTERVALO SI ES NECESARIO
-? 1420 REM St LA VARTANZA AUMENTA, DtVtDA E1(l) EN DOS PARTES
IGUALES
1430 tF M1 >M0 THEN E1(t):-El(t)/2
1440 REM SI LA VARIANZA DISMINUYE, AUMENTE E1(I)
1450 lF M1<M0 THEN E1(t):1.2*E1ltl
1460 REM SI LA VARIANZA AUMENTA, INTENTE REDUCIRLA
1470 IF M1 >MO THEN A(II:AO
1 480 tF M 1 > M0 THEN GOTO 1 340
1490 NEXT I
15OO REM FIN DE UN PASO COMPLETO
1 510 REM ENSAYO DE CONVERGENCIA
1520M:M+1
1530 IF L2:O THEN RETURN
1 540 IF ABS((11 -LzIILZI < E THEN RETURN
1650 NEXT J
1660 D=SOR(L2|(N-L))
1670 RETURN
1680 REM SUBRUTINA DE FUNCIONES
1690 Y:A(11"X-A(2)
17OO RETURN
1710 REM LECTURA ESTIMADOS DE PARAMETROS INICIALES
1720 ANSS : INPUTS(1)
1730 CLS
1740 INPUT "Estimado inicial de Ks para iniciar calculo:";KS
1750 PRINT
1760 PRINT "Estimado inicial de Ks: ";KS
1770 Al1) : (1 + (CXo + YE*CSoI/(YE"KS))
1780 PRINT
1.790 INPUT "Estmado inicial de MUMAX para iniciar calculo:";MUMAX
-
316
- ) -. 1800 PRINT "Estimado inicial MUMAX: ";MUMAX
1 81 0 A(21 : MUMAX* (CXO + YE*CSO)/(YE*KS)
1820 RETURN
fO CLS
20 PRINT "LEDUYZAJ.BAS: METODO DIFERENCIAL DE ANALISIS"
30 PRINT
40 PRINT "PROCEDIMIENTO GEOMETRICO DE DIFERENCIACION DE UNA"
50 PRINT " FUNCION EXPERIMENTAL EN UN PUNTO
60 PRINT
70 PRINT
80 PRINT "REFERENCIAS: tr
90 PRINT
100 PRINT'Leduy, A.L.,y Zajic, J.E., Biotechnol, Bioeng.
'ir
120 PRINT
130 PR|NT "Oner, M.D., et al., Biotechnol. Bioeng. "
140 PRINT "28:902, 1986
150 PRINT
160 PRINT "Rolz Carlos, lnstituto Centroamericano de rr
317
300 GosuB 790
: , 310 CLS
320 WHILE CMD < >3
330 0N CMD GOTO 360,440
340 WEND
350 GOTO 770
{'i
360 PAGINAYo:1
370 REM SUMINISTRAR DATOS
38O PR]NT
39O INPUT "Numero de valores de la variable dependiente ";V
4OO PRINT
41O W:V+3
42O DIM TETA(W),CX(WI,ZMAB(W),ZMBC(W},DCX(W),CXCR(W),ZMNO(W
,ZNNO(W}
430 DIM ZMMO(W),ZNMO(W},TETAC(W)
440 FOR l=1 TO V
450 INPUT"IND,DEP';TETA(ll,CX(l)
460 NEXT I
. 47O REM ESCRIBIR DATOS EXPERIMENTALES
480 CLS
490 PRINT SPC(1 6l;'DATOS EXPERIMENTALES"
5OO PRINT
510 PRINT SPC(5); "Variable independiente" ;SPC( 51;"Variable dependiente"
520 PRINT
530 Fl$=1 ## "+" ####.#### "+SPACE(10)+" ####,#### I
540 FOR l:1 TO V
550 PRINT USING Fl9;l,TETA(l),CX{l) ,
. 560 NEXT I
570 PRINT
58O PRINT "PULSE ENTER !"
590 ANSS : INPUTS(1}
600 IF PAGINA% > 1 THEN PRINT CHR${1 2};
610 CLS
620 PRINT SPC(1 0);"DATOS CALCULADOS"
630 PRINT
640 PRINT SPC(S);"lND";SPC(1 7);"DERIVADA"
650 PRINT
660 GOSUB 930
670 F1$:" ##.## "+SPACE$(8)+" ####.##
080 FoR l:1 TO v
318
r 690 PRINT USING F1; TETA(|),DCX(I)
7oo NEXT I
71O PRINT
720 PRINT "PULSE ENTER !"
730 ANS$ : INPUTS(1}
740 WHILE CMD < > 3
750 oN.CMD GOTO 290,290
760 WEND
770 CLS
780 END
790 PRINT "MENU PRINCIPAL"
8OO PRINT
81O PRINT "1. lngreso datos experimentales"
2r 820 PRINT "2. Reiniciar calculo"
830 PRINT "3. Terminar calculo"
840 PRINT
850 INPUT "Favor seleccione numero : ",CMD
j60 WHILE cMD < > FIX{CMD) OR CMD< 1 OR CMD> 3
870 BEEP
880 INPUT "Favor entre 1 ,2 o 3: ",CMD
890 WEND
9OO RETURN
910 PAGINAo/o: PAGINAo/o + 1
920 REM SUBRUTINA LEDUY Y ZAJIC
930 l:1
940 DCX(l) : (CX(l + 1)-CX(l))/(TETA(l + 1 )-TETA(ll)
r 9S0 ZMAB(t+ 1):(CX(t+ t )-CX(D)/(TETA(I+ 1]-TETA(|))
960 zMBC(l + 1 ) = (CX(l + 2)-CX(l + 1 ))/(TETA(| + 2)-TETA(| + 1 ))
970 lF ABS(ZMAB(I + 1)-ZMBC(l + 1 ))< : .001 THEN 980 ELSE 1030
980 DCX(t+ 1):.5"(ZMAB(|+ 1)+ZMBC(l+ t ))
990 l:l+1
1000 lF {l + 2} < : V THEN 1010 ELSE 1O20
1010 GOTO 950
1O2O IF I<V THEN 1110 ELSE 1130
1030 zMNO(l + 1) : (TETA(I + 1l-TETA(l + 2))/(CX(l + 2)-CX(l + 1))
1040 zNNO0 + 1):.5"(CXil + 1)+ CX(l+ 2))-zMNO(l+ 1)*.5*(TETA-
(l+ 1)+TETA(l+ 2))
1 050 ZMMO(l + I I : (TETA(l)-TETA(l + 1 )l/(CX(l + 1 )-CX(l))
1O CLS;KEY OFF
20 PRINT "SPLINE.BAS: METODO DIFERENCIAL DE ANALISIS"
30 PRINT
40 PRINT
50 PRINT "EVALUACION DE LOS COEFICIENTES DE LA CURVA"
60 PRINT "DE AJUSTE DE UNA FUNCION EXPERIMENTAL
70 PRINT
80 PRINT''REFERENCIAS:
90 PRINT
100 PRINT "Rolz Carlos, lnstituto Centroamericano de"
110 PRINT "lnvestigacion y Tecnologia lndustrial, lCA.lTl"
120 PRINT "Curso de lngenieria y Procesos Biologicos"
130 PRINT "Guatemala, 1989"
140 PRINT
1 50 PRINT "Tao, B.Y., Chem. Eng. Octobe 26, p. 109, 1987"
160 PRINT
170 PRINT
180 PRINT 'EVALUACION DE VELOCIDADES DE CRECIMIENTO"
190 PRINT "DE BIOMASA Y CONSUMO DE SUSTRATO A PARTIR"
2OO PRINT "DE DATOS EXPERIMENTALES II
210 PRINT
220 PRINT "PULSE ENTER !"
230 ANS : INPUT$(1}
240 CLS
250 INPUT "NUMERO DE PUNTOS DE DATOS ";NUM
260 PRINT
270 PRINT "X: variable independienfe: Y: variable dependiente"
280 PRINT
320
Y 290 DlM XDATA(NUMI,YDATA(NUM)
3OO FOR I:O TO NUM-I
31O INPUT"X,Y";XDATA(II, YDATA(I)
32O NEXT I
460 CLOSE
470 ANS = INPUTS(1)
480 N=NUM:CLS
490 PRINT "RESULTADOS"
5OO PRINT
510 PRINT
52O PRINT "X: Variable independiente"
53O PRINT "Y: Variable dependiente"
540 PRINT "B: primera derivada"
550 PRINT "C,D: coeficientes"
560 PRINT
570 DIM A(N),8(N),C(N},D(N), P(N), O(N),R(N},S(N), STEPSIZE(N}
580 REM XDATA(n!, YDATA(nI son arreglos de n puntos de datos
59O REM A(N),8(N),C(Nl,D(Nl son arreglos de coeficientes polinomiales
600 REM en la forma f(x)=1+b(i)+x+c(i)*x^2*d(i)*x^3
610 REM PASO 1 DEL ALGORITMO
620 O(0) : 1 :O(N) : 1 :R(0) :0:S(0) =0:S(N) :0:C(N) :0
630 FOR !=O TO N:A(l):YDATA(I):NEXT I
640 REM PASO 2 DEL ALGORITMO
650 FORr:0TON-1
660 STEPSIZE(I) : XDATA(I + 1)-XDATA(|)
6"70 NEXT I
860 END
322
modelo de Monod describe adecuadamente elcrecimiento de biomasa en la fase
exponencial de crecimiento:
rr=v-x = P'x'
:
t5.67I
&*
1d* =\
[5'68]
,
[4=far=t_to
J- J
'x ,o
Solucin
323
- La Figura 5.7 es una representacin grica de la variacin de las concen-
traciones de glicerol y de microorganismos con respecto al tiempo de retencin
1O CLS
20 PRINT "HERBERTI .BAS'
30 PRINT
40 PRINT "Cinetica de crecimiento de Aerobacter cloacae"
50 PRINT
60 PRINT
70 PRINT "CRECIMIENTO POR LOTES SIN FORMACION DE PRODUCTOS"
80 PRINT " NO CELULARES"
90 PRINT
1OO PRINT "PULSE ENTER !"
1 1O ANS : INPUT$(1 )
1 20 CLS
130 NN=1
140 REM Escribir las constantes: UMX:1/hora;KS:g/litro
150 REM Y:g microorganismos/g glicerol
160 REM S0: g glicerol/litro; X0: g microorganismos/litro
170 UMX:.85
180 KS:.0123
190 Y:.53
200 REM Paso de integracion: T1
210 T1 : .01
220 REM Valor final de la variable independbnte: T2
230 T2:3.5
240 REM lntervalo de impresion de los resultados: T3
250 T3:.1
260 PRINT "HERBERTl .BAS"
270 REIU Simulacion del crecimiento por lotes sin formacion de producto
280 PRINT
290 PRINT "T: variable independiente (tiempo, horas)"
324
300 PRINT "Valor final de T, T2:";T2
310 PRINT "T1: paso de integracion, T1 :";T1
320 PRINT 'T3: intervalo de impresion, T3=";T3
330 PRINT
340 PRINT "PULSE ENTER I"
350 ANSS : INPUT(1 )
360 CLS
370 PRINT "RESULTADOS"
380 PRINT
390 PRINT "T: tiempo, horas"
400 PRINT "O(1): concentracion de glicerol, g/litro"
410 PRINT "O(2): concentracion de microoorganismos, g/litro"
420 PRINT "l(2): velocidad de crecimiento de microorganismos, g/litro"
326
Figura 5.8 Resultados obtenidos en la simulacin delcrecimiento de Aerobacter
'i
cloacae en un reactor por lotes, programa: C:\GWBASIC\HERBERTI.BAS. El
tiempo de retencin requerido corresponde al rea bajo la curva 1/r* vs x.
l/Rx
10
o,5 1 1,5
Concentracion de biomasa, g/litro
321
En la prctica el comportamiento de los fermentadores de lecho empacado y
multietapa se aproxima al de flu.io tapn (PFR). Por consiguiente, las ecuaciones
correspondientes a un reactor porlotes (Ecuaciones t5.67ly t5.681) son aplica-
bles al reactor de flujo tapn. Sin embargo, como la operacin es contnua, el
tiempo de retencin se calcula como:
V
L --
t5.691
F
328
Figura 5.9 Representacin esquemtca de un reactor continuo de mezcla
completa (CSTR).
CSTR
x
f=- t5.711
tx
329
Donde, rn,: tiempo de residencia en el reactor contnuo de mezcla completa :
(CSTR). De acuerdo con esta ecuacin el tiempo de residencia es igual al rea
de un rectngulo de anchura x y altura 1lr*, tal como se indica en las Figuras
5.10 y 5.11.
o,5 1 1,6
Concentracion de biomasa, g,/l i tro
330
La Figura 5.12 es una representacin grfica de los resultados obtenidos en la
simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en un reactor contnuo de
mezcla completa (CSTR). Las condiciones de operacin del reactor, catculado
con los datos del Eiemplo 5.3, son evaluadas a partir de la representacin
grfica de la velocidad de formacin de producto, r*. La mxima productividad
es igual a la pendiente de la lfnea tangente a la curva de concentracin de
producto. Los valores,ptimos de la concentracin de producto (x : 1,586 g
producto/litro) y de tiempo de retencin (t : 1,25 horasl coinciden con los
obtenidos en la Figura 5.11.
f5.721
t5-73I
332
En el casO desustratos muy costosos, el proceso se prolonga hasta la completa
utilizacin del sustrato. En este punto la productivdad terica del proceso es
ceto.
15.741
Donde, C,.: grado de conversin del sustrato; sio: concentracin inicial del
sustrato r, en el tempo f : 0; sit: concentracin final del Sustrato en el tiempo
t : t. La definicin del grado de conversin (Ecuacin 5.74) supone que el
volumen de lquido en el reactor permanece constante.
1,5
o,5
Sustrato
o
^oF o,5 o,75 1 1,25 1,5 1,75
Tlempo de retencion, horas
333
En algunos casos elgrado de conversin se expresa como una cantidad relativa:
ci"
Pv= t5.75I
(P)"n
o.
334
Generalmente se utilza una de las siguientes estrategas de alimentacin con el
propsito de controlar el reactor:
Solucin
: ,t-
335
: ., Tabla 5.16 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en u reactor por
lotes con alimentacin continua, programa: C:\GWBASIC\HERBERT2.BAS'
1O CLS
20 PRINT "HERBERT2.BAS"
30 PRINT
40 PRINT "Cinetica de crecimiento de Aerobacter cloacae"
50 PRINT
60 PRINT
70 PRINT "CRECIMIENTO POR LOTES SIN FORMACION DE PRODUCTO"
80 PRINT " CON ALIMENTACION CONTINUA"
90 PRINT' SiN FORMACION DE PRODUCTOS NO CELULARES"
1OO PRINT.
110 PRINT "PULSE ENTER I"
1 20 ANSS = INPUT$(1 l
130 CLS
140 NN:1
150 REM Escribir las constantes: UMX:1/hora;KS:g/litro
160 REM Y:g microorganismos/g glicerol; Vo:volumen inicial, litros
170 REM SO: g glicerol/litro;XO: g microorganismos/litro
180 REM Fcaudal, litros/hora; MX: masa de microorganismos, g
190 REM MS: masa de sustrato, g
200 UMX:.85
210 KS:.0123
220 Y: .53
230 V0:100
240 SO:3
250 X0 = .1
260 F:160
270 REM Paso de integracion: T1
280 T1 :.O1
290 REM Valor final de la variable.independiente: T2
300 T2:6.5 :
336
Y 380 PRINT "T3: intervalo de impresion, T3:";T3
390 PRINT
4OO PRINT "PULSE ENTER !"
410 ANS = INPUTS(1)
420 CLS
43O PRINT "RESULTADOS"
44O PRINT
45O PRINT "T: tiempo, horas"
460 PRINT 'V: volumen del caldo, litros"
470 PRINT "X: concentracion de celulas, g/litro"
480 PRINT "S: concentracion de glicerol, g/ltro"
490 PRINT "MS: masa de sustrato, g"
=, 500 PRINT "MX: masa de celulas,g
510 REM Numero de ecuaciones diferenciales:
520 N:5
53O REM condiciones iniciales: Ol :S;O(2):X; O(3): volumen
s40 0(1):s0
550 O(2):X0
560 0(3t:v0
570 0(4):V0*S0
58O O(5):V0*X0
590 REM Subrutina de Runge-Kutta de orden 4:
600 T: INT(T2/T1 +.5):Tl =T2|T:T =INT(T3/T1 +,5):T3 :T*T1 :T=0:T4 :0
610 T8= 1:GOTO 860
620 IF(T-T4 +T1t10)<0 THEN 660
= 630 T4:T4 +T3:T5 = INT(T/TI +.5):T=T5*T1 : GOSUB 960
640 |F(T-T2 +T1l1O)<0 THEN 660
650 LOCATE 23,1:END
660 0N T8 GOTO 680,720,760,800
670 PRINT"*" ERROR **":STOP
680 FORTS:1 TO N
690 TO(T5) :T1 *l(T5):T6ff5) =O(T5):O(T5) : Offs) +TO(T5)/2
7OO NEXT T5
710 T:T +1112:T8:2:GOTO 860
72O.FOR T5:1 TO N
730 T7:T1 "l(T5):T0(T5l :T0(T5) +2*T7:OlT5) :T6(T5) +T712
740 NEXT T5
750T8=3:GOTO 860
760FOR T5=1 TO N
\i 77OT7=T1*|(T5):T0(T5)=T0(T5)+2*T7:OIT5)=T6(T5)+T7
337
780 NEXT T5
790 TB :4:T:f +T1|2:GOTO 860
BOO FOR T5:1 TO N
810 O(T5) =T6(T5) + {T0(T5} +T1 "l(T5))/6
820 NEXT T5
830 T8:1 :GOTO 860
840 REM ECUACIONES DIFERENCIALES:
850 REM l(1 ):RS; l(2):RX; l(3):F;l(41 :MS';l(5) =MX'
860 l(1 I =1l2lN
870 tl2l: u"o(2)
880 r(3) : F
890 U : (UMX*O(1 lli(Ks + O(1 ))
900 1(4) :O(3)*l(1 ) + 3*l(3)
910 l(51=O(3)*l(2)
920 0(1):O(4)/O(3)
930 0(2):O(s)/O(3)
940 GOTO 620
950 PRINT
960PRlNTSpC(3); "T :';T;SPC(3); "V : ";O(3);SPC(3); "X = ";O(2);SpC(3);'S : -
";O (1 );SPC(31;"MS : ";O(41;SpC(3);"MX= ";O(5)
97O NN:NN+1
980 RETURN
338
Figura 5.14 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en un reactor por
totes con alimentacin continua (F : 160 litros/hora, so 3 gramos/litro!,
'programa: =
C:\GWBASIC\HERAERT2.BAS. !1
:
..:
Masa, gramos
, --------------- Vol umen efec tlvo, I i tros
2 2000
1 600
1 000
500
o
.5 45
Tlempo, hors
339
Un procedimiento para aumentar la productividad es recircular las clulas
despus de separarlas del efluente mediante un filtro u otro sistema de
separacin (Figura 5.15). La vefocidad de crecimiento es proporcional a la
concentracin de clulas, x, y al aumentar x aumenta la productividad. Por
consiguiente, el reactor CSTR se puede operar en condiciones estables slo si
hay una recirculacin parcial y una corriente efluente, E, tal como se muestra
en la Figura 5.1 5.
E =3=P ;l=
FD
!;,=#,i=, ls.771
B.& 15.781
t.lt,o - B
340
vtrls -
s -s
E
F
| . = +.(s - ") t5.791
3,5
i, (e=o,o); concdntraolon de celtas, gllltro
2,5
l::i
1,5
.-.:::__--___]]
vidad, g/(litr
o
o 46 a
Tlempo de retencion, horas
341
5.7.7 Fermentadores en serie
342
Figura 5.17 Representacin esquemtica de dos fermentadores conectados en
serie: Reactor continuo de mezcla completa (CSTR) y reactor de fluio tapn
(PFR).
Xe
Se
Pe
343
Figura 5.18 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae, programal
C:\GWBASIC\HERBERTI.BAS. Tiempo total de retencin requerido por un
fermentador contnuo de mezcla completa (CSTR) y un reactor de flulo tapn
(PFR) conectados en serie.
1/Rx
to
0,6 1 1,5
Concentracion de biomasa, g,z/i tro
0,6 1 t,6
Concentracion de blomhsa, 9,4/tro
344
5.20 Representacin esquemtica de algunos reactores de columna: A-
Figura
columna de burbujeo; B- columna de platos perforados; C- columna con
recrculacin; D- lecho empacado.
Are Alre
345
Figura 5.21 Representacin esquemtica de algunos reactores de columna: A-
Reactor con circulacin lfquida inducida por aire; B- Columna de burbujeo de
seccin transversal variable; C- Reactor con circulacin lfquida inducida por
agitacin mecnica.
Reqcton 'or-ltFt' Coturnq de burbuJeo Chculocon nducdo
Clrculoclon lnducldq de seccton tronsversql
Atre Atre
En el fermentador de circulacin llquida inducida por aire "airlift" el aire gue sale
del aspersor'y asciende por el tubo central origina una diferencia de densidad
entre la porcin de caldo saturado de burbujas dentro del tubo y la porcin de
346
5.2 Monod, 1958, presenta los datos anotados en la Tabla 5.18 sobre el
crecimiento de Escherichia Colien un cultivo por lotes con un medio qulmica-
mente definido, con lactosa como sustrato limitativo del crecimiento. La
concentracin inicial de biomasa: 15,5 (mg de biomasa seca)ilitro, corresponde
a la concentracin de biomasa despus del perodo de adaptacin o a la con-
centracin al comienzo de la fase exponencial.
Evaluar los parmetros cinticos: pr, Ks y Yxvs, mediante los mtodos integral
y diferencial de anlisis de datos.
U 15, 5 151,0
o,54 23 ,0 L23 ,0
0, 90 30,0 105,0
I,23 38,8 75 ,0
l-,58 48 ,5 43,s
l_, 95 58,3 74 ,5
2 ,33 6t ,3 3,5
2,70 62 ,5 0,s
348
5.11 Simular el crecimiento de un microorganismo en un reactor por lotes.
utilizar los datos del problema 5.1 0 y suponer un perfodo de adaptacin de 1 ,2
horas. Evaluar la variacin de la concentracin de clulas, sustrato y producto
en funcin del tempo.
IEcu. 5.25]
Fa
[r
t*&*1
ks
tEcu. 5.31I
3s0
5.15 Simular el crecimiento de un rnicroorganismo en un reactor pOr lotes.
Utilzar los datos lel problema.5.10 e incluir en el modelo el efecto de la
inhibicin por producto [kp : O,12lg productol/(litro)].
Px = lr.
s Kn,
[Ecu. 5.37]
K, _ K_ _l
"-
BIBLIOGRAFIA
Aiba, S., Shoda, M., and Nagatani, M. (1968), " Kinetics of product inhibition
in alcohol fermentation," Biotechnol. Bioeng. 10:845-864'
Andreyeva, L.N., and Biryukov, V.V. (1973!.. Botechnol. Bioeng. Symp., 4,61.
351
Cooney, C.L. (19821. "Growth of Microorganisms,' En Biote:chnology, Vol. 1 , v
H.-J. Rehm and G. Reed (eds.l, Verlag Chemie, Weinheim.
Gates, W.E., y Marlar, J.T. (1968l., Water Poll. Control Fed. 40: R469.
Ghose, T.K., and Tyagi, R.D. (19791. Biotechnol. Bioeng., 21, 14O1.
Hinshelwood, C.N. (1946). The Chemical Kinetics of the Bacterial Cell. Oxfordt
Clarendon Press.
Herbert, D., Elsworth, R,, and Telling, R.C. (1956), "The continuous culture of
bacteria; a Theorical and Experimental Study," J. Gen. Microbiol. 14:
601-622.
352
Moser, H. (1958). The Dynamics of Bacterial Populations Maintained in the
Chemostat. Carnegie lnstitution, Washington D.C, Publ. no. 614.
Pirt, S.J. (1975). Principles of Microbe and Cell Cultivation. Oxford: Blackwell
Scientific Publishing.
Reklaitis, G.V., Ravindran, A., and Ragsdell, K.M, (1983). Engineering Optimiza-
tion, Methods and Applications, John Wiley & Sons.
Schgerl, K. (1982). "New bioreactors for aerobic processes," lnt. Chem. Eng.
22:591-610.
Sinclair, C,G,, and Topiwala, H.H. (197Ot.. Biotechnot. Bioeng. 't2, 1069.
Stiiier, R.Y., Doudoroff, M., and Adelberg, E.A. (1975). "The microbial wortd,',
4th. ed. Prentice Hall, lnc. Englewood Cliffs
354
Steel, R.G., and Torriei J.H, (19801, Principles and Proceduresof Stai{cs, A
'| ' t# bometrical approach. Second Edition. McGraw-Hill. NwYort.r
-
Webb, J.L. (1963l.. Enzyme and Metabolic lnhibitors, Yol. 1. New York:
Academic Press,
u .'Jr r:
r
,d
.t '
355
1\
CAPITULO 6
ESTERILIZACION
6.1 INTRODUGCION
356
El vapor saturado seco es el medio ideal para esterilizacin por su elevado
contenido de calor por unidad de masa o de volumen, por ceder este calor a una
temperatura constante y controlable, y por ser de fcil produccin y distribucin.
El vapor saturado hmedo cede menos calor que el vapor saturado seco a la
misma temperatura y contiene gotas de agua en suspensin que pueden originar
problemas de contaminacin.
357
!
N,lNoti,.,..:
10
o, 1
o,ol
l,OOOE-03
t,oooE-04
|,oooE-05
t,oooE-06
t,oooE-o7
20 30 40 50 60.
i 70 80
' Tlempo '
'
#=-*"'* t6.11
.rv
tn_= - Ko't t6.21
No
358
Figura 6.2 Velocidad de muerte delEsc/rerichia calia diferentes temperaturas,
Aiba et al. 1973.
N/NO
1
o, 1.
o,o 1
l,OOOE-03
t,oooE-04
l,OOOE-06
16.31
t6.41
359
El valor de la constante de velocidad de muerte
trmca, Kr, a una temperatura
dada es el varor de ra pendiente de ra curva de supervivenciJ
{r;guras 6.2 y 6.3}.
Asf, por ejempro, si los varores de Ko der g. stearothermophirus,
obtendos a
partir de ra Figura 6.3, son representados
en ra Figura 6.4 como rn Ko versus
1ff , se obtiene ra energa de activacin Eo del B.
stearothermophirusa partr de
la pendiente, - EDIR, de esta tfnea:
u( 2
pcttdictttc = = 34456,6'tr' --Eo
n
ED = (A4fi,6).(8,314) = 2EO4t2 J
gtol
360
Si se reemplazan en la Ecuacin 6.3 los valores de Eo/R, Ko y su correspondiente
ternperatura T, se obtiene el coeficiente de Arrhenius Koo del Bacillus stearother-
mophilus. La esterlzacin por lotes tiene la ventaja de ser un proceso sencillo
con algunos inconvenientes tales como la destruccin de muchas vitaminas y
la desnaturalizacin de protelnas por el calentamiento a altas temperaturas'
Figura 6.4
Determnacin de la energa de'activacin Eo Y del coeficiente de
Arrhenius Koo de las esporas de Bacllus stearothermophilus FS 7954, Aiba e
al., 1973.
Velocldad de muerte, Kd, l/(mnuto)
10
____\!
l--:.*........- -.... -. -. -............ - - -.. -. - :
i
i
t. i.+..,-.. -. -... ----... -'-..-
--- - -'.
-.. -..- - - ---
- 1- - - -
---.-...-........-'-'+.- i- .-.+....-.-'---.....-.."....
-........-1'..-
o1
o,o 1
361
Tabla 6.1 Valores aproximados de la energa de activacin de algunas
,reacciones, Bailey y Ollis, 1986.
Energla de activacin
cal/gmol J/gmol
No
Y=ln = Ko.t = Ko,.r.exP t6.5I
lV
362
v
oc alcanzar una
relacin N/No
: 10-16,
La Figura 6.6 enfatiza elhecho de que una llnea recta no siempre indica una sola
especie de microorganismos. En este caso la especie B, ms resistente al calor,
es la ms abundante inicialmente, No : 900 microorganismos. La lnea C
obtenida al sumar sobrevivientes de A y B en cada tempo r es prcticamente
recta y no indica una poblacin mezclada.
36s
Figura6.5 .Representacin esquemtica delefecto de la esterilizacin por calor
sobre un cultivo." rnezclado. l-a poblacin inicial menos resistente es la ms
abundante. Richards, 1968.
16 20 26. 30 35 40 45 50
fiemBo, minutos
100
10
o510 15 20 25 30 35
Tlempo, minutos
364
El factor Del, definido en la Ecuacin [6.5], constituye una metodologa
apropiada para casi todos los propsitos de la esterilizacin por calor con
temperatura variable. Si, por ejemplo, se desea esterilizar 10000 litros de un
caldo de fermentador con una poblacin inicial de 10O0 esporas/ml, el nmero
inicial de esporas es No : (104 litros),(103 esporas/mll.(103 ml/(litro) : 1010
esporas, y si se acepta que el nmero final de esporas viables es N : 0,00O1 ,
entonces:
365
La Figura 6.7 representa una curva tfpca de variacin de Ia temperatura T con
el tiempo t para el caldo de un fermentador. La reduccin fraccional de
microorganismos durante los perlodos de calentamiento y enfriaminto son
obtenidos mediante integracin de la Ecuacin [6.5]:
Generalmente los sistemas de esterilizacin por lotes incluyen por lo menos una
de las siguientes fuentes de calor: burbujeo de vapor vivo a travs del medio,
calefaccin elctrica y calentamiento o enfriamiento con un intercambiador.
Temperatura, C,
t40
120
ao
60
40
20
o
40 80 100 120 140 160 200 220 240
Tiempo, mnutos
366
Dotde: , =
, R.T,
"
Contina
367
Tblar 6.3 Continuacin
Lineal creciente:
Dottdc:_____
ED
c=
R'To
o=J!-; =*
M.CP.T,' M'
o \ +a.d
T=7.11 a= Q
16.16I
M.cp-To
Continria
368
Tabla 6.4 Continuacin
T = Tc .(1 * b.e-o")
16.171
U.A To-7"
a=-'.o=
M.C, Tc
369
6.3.1 Seleccin del microorganismo de diseo
370
La Tabla 6.5 presenta los valores, calculados a partr de las ecuaciones t6.31 v
[6.5], de la velocidad de destruccin y de la reduccin fraccional de B. stea-
rothermophrTus, durante el calentamiento o enfriamiento a razn de 1 oC/minuto:
Solucin:
Contina
371
'fabh.6.5. Velocidad de destruccin y reduceiil'fraccional de Bacillus,,stea-
rothetrnophrfus durante'el,calentamiento o enfriamionto a razn de 1-oC/minuto.
:r;
i3i2
:i Continuacin (Ejemplo 6.1):
v totat=rn
*=ln ffi =4t,st
Y calenamicno = 1g,tg2
373
Segn la Tabla 6.5, KD : 2,666 (minuto)-1, por tanto ef valor del perodo de
sostenimiento es:
Solucin
':
v = rl .\ = Kz.tz = (0,353).(1a) = (2,666).r,
= 1,85 mitutos
'z
l
Portanto 14 minutos a112 oC equivalen a 1,85 minutos a121 oC yelperodo
de sostenimiento se puede disminuir hasta:
374
Ejemplo 6.3 Determinacin de la influencia del volumen del caldo
sobre el perodo de sostenimiento
Y tout= r, 1'99'1^o-.tt
0,0001
= 44,43
Por consiguiente:
30
Y calent. =13,182. = 18,83
21
10,54
l= = 3,95 minutos
2,666
375
vacin de estas reacc.iones laterales indeseables (Tabta 6,'l ) son menores que
las requeridas por la reaccin de esterilizacin. Con el propsito de prevenir la
alteracin de los componentes susceptibles del medio, el proceso de esteriliza-
cin debe realizarse a la mayor temperatura posible durante el menor tiempo,
ffeifer y Vojnovich, (1952); Jacobs et al., 1923.
376
L
tr= t5.191
uM
Donde, ts: tempo de sostenimiento, s; L: longitud del tubo, fili urvr: velocidad
media del caldo, m/s.
Vs=ln& =Ko.t"
16.20
vs = K,o.eXp ( ,%) -
Donde, No: nmero de microorganismos viables a la entrada de la seccin de
sostenimiento; N: microorganismos viables a la salida; Kr: velocidad especffica .
377
organismos = organismos or9anrsmos t6.211
eliminados que entfan que salen
La diferencia entre el nmero de microorganismos que entran y los que salen por
flujo volumtrico es:
t6.221
Figura 6.8
Representacin esquemtica de un sistema de esterilizacin continua
mediante calentamiento directo por inyeccin de vapor de agua al medio.'
Voco
Volvulo
de
exponsioi
Seccon de sostennento
Enfrodor
Instonto
Itedo
sterl
378
La diferencia entre el nmero de microorganismos que entran y los que salen por
dispersin axial es:
- D. s. 4 -[ - o.s.4.
dxL
!(
b dr\- r. s.4\,]
dx)
t6.23I
J
4b.*)-+")
e\ tu) & -Ko.n=o 16.241
[6.25]
"=(,
K^.L
_z-
DAM = = Nmero dc Dm,hlr
uM
379
Pr= = Nnrero de Peclt
ryl
D/(u,d)
1Q
\I:
\!
i\ i
\.i
)'-"'
o, 1
380
bacteriales de tres muestras de caldo sin esterilizar dieron los siguientes
resultados: 6,8.108; 1,7 1Oe y 3,4.108/ml.
N/No
1,OOOE- 1 1
l,OOOE- t 2
t,oooE- t 3
t,oooE- 14
l,OOOE- 15
l,OOOE- 16
l,OOOE- 1 7
l,OOOE- 1A
l,OOOE- 19
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 100 140
(Kd,L)/u
381
Solucin
,, " , - |
0,41 &=rCrOO4.O
' -,i mo
- Microorganism s viables
no=1,7.toezr-3. t.+tefi.z+ au
ffln
no=1,226.1012 1,384.10-rg
_,i
" t= ?,,,h*=
- Criterio de diseo
lt
'nl, = tn - tn7'2N'10t' = 29.61
Kr= 1,51,.10s's----1.
- Perfodo de sostenimiento
382
- Dimetro de la tuberfa
ua =0,@6 mls
- De la Figura 6.9:
D
1 Pra RE = 5i446
;n"
- Por consiguiente elcoeficiente de dispersbn, es: '
- Nmero de Peclet
' P=+=W=.os.l
383
- Nmero de Damkhler
0,188s-1-14rn
M uM - 0,086
D,,,=Ko'L =30.6
m/s
v
Como la fraccin de microorganismos viables es mayor que la fraccin r"Or"r,d.
por el proceso de esterilizacin, se supone para un segundo estimatvo una
longitudL:16m:
Pz=2o5,4 i. Dut=
y de la Figura 6.3:
384
Segn Aiba et al., 1973, las bacterias y esporas detectadas con mayor frecuen-
cia en elaire son:. Aerobacter aerogenes, Bacillus cereus, Bacillus licheniformis,
Bacittus megaterium, Bacitlus mycoides, Bacillus subtilis, Micrcoccus aureus,
Proteus vulgaris, y las esporas de: 8. megaterium, B. mycoides y B.subtilis. El
tamao de estos microorganismos vara desde O,5 - 2,1 pm de anchura, hasta
0,5 - 26 pm de longitud.
- Salas estrles: Se utilizan para realizar operaciones en las cuales debe evitarse
la contaminacin de los materiales manipulados con microorganismos potencial-
mente infecciosos. Una sala estril no est completamente libre de microorganis-
mos, pero debe mantenerse escrupulosamente limpia y proveerse de aire estril
a una presin ligeramente mayor que la de las reas adyacentes. Usualmente
en las salas estriles donde se fabrican vacunas, materiales parenterales y se
seleccionan y propagan cultvos, se requieren grandes volmenes de aire estrl
a baja presin (13,8 kPa, o 2 psig).
385
- Aeracin de feimentadores: La mayora de las fermentaciones aerbicas a
escala industrial requieren grahdes volmenes de aire estril para aerar y en
algunos casos proveer agitacn. Generalmente la fermentacin requiere
aeracin asptica durante perodos que oscilan entre tres y diez das a razn de
o,5 - 2 vvm, lvolumenes de aire por volumen de licor cada minuto), si, por
ejemplo, el fermentador tiene un dimetro de 3 m y la profundidad del licor en
el fermentador.,es 3 m, los requerimientos de aire, a razn de 1 vvm, son:
o , n=i.(3r)' =21,2m3
386
En condiciones normales, a escala industrial, la compresin del aire es
politrpica, o sea, intermedia entre adiabtica e sotrmca. En este caso;
rz=r,(f t6.26I
)+
Donde: r: relacn entre los calores especficos del aire a presin constante y
volumen constante; r: 1,3 para compresin politrpica.
Se ha demostrado que las temperatura del aire inferiores a 2OO oC son de poco
valor en esterlizacin, a menos que el aire se mantenga durante un perodo
considerable, casi un minuto, a 150 oC. La esterilizacin de grandes volmenes
de aire debe satisfacer al menos dos condiciones:
- El aire normalmente debe comprimirse hasta una presin tres o cuatro veces
mayor que la requerida por el proceso.
21,24 =
H.30s f,.{o,rs ^)r.t
L = 599,84 m
387
6.5.2.2 Calentamento directo
En este caso el aire se hace fluir por el espacio anular entre dos cilindros
concntricos de hierro. El cilindro interior se calienta con un quemador de gas.
Estos hornos, que tambin pueden ser elctricos, slo son tiles para pequeos
flujos de gas hasta 30 litros/minuto. Se han diseado hornos elctricos donde
elaire se calienta hasta 700 oC en un tlempo de 0,4 segundos, con un consumo
de potencia de 1,8 kW/(100 litros/minutol.
En este caso el aire fluye, separado del gas caliente, por serpentines o tubos,
para prevenir la contaminacin de los productos de la combustin o el agota-
rniento del oxfgeno. Las dificultades para disear y mantener una unidad de esta
clase son considerables y los costos de capital y operacin son elevados. Por
esta razn el mtodo no es compettvo con el mtodo de filtracin. Con el
propsito de prevenir excesivos perodos de sostenimiento el aire se calienta
hasta 350 "C y se utiliza un serpentln como factor de,seguridad para evitar la
supervivencia de aquellas bacterias enclaustradas o protegidas por slidos.
6.5.3 Filtracin
388
Los filtros fibrosos de papel, algodn, lana de vidrio y lana mineral, no presentan
esta barrera impenetrable a los microorganismos, los espacios entre fibras son
mayores que el tamao de los microorganismos, pero son eficientes y originan
bajas prdidas de presin, Chen, 1955; Davies, 1973; Decker et al., 1962;
Decker et al., 1957, Conway, 1984; Esta eficiencia se explica por el hecho de
que los microorganismos generalmente estn asociados con partfculas de mayor
tamao.
389
Tabla 6.6 Caractersticas de la lana mineral,'(Stilmed AST 1 3)-, Richards, .l 968. _
El medio filtrante Stilmed AST/13 tene una densidad aparente de 1 92,3 kg/m3.
En la Tabla 6.7 se presentan datos de la prdida de presin del aire a travs de
este medo.
Tabla6.7Prdidadepresindelaireenunlechoempacadoconlanamineral,
| (Stilmed ASTi 13), Richards" 1968.
390
6.5.3.2 Filtros de vela
En la Tabla 6.8 se presentan datos sobre la relacin entre Ios caudales de agua
y de aire sus correspondientes prdidas de presin en un-a vela de "Celloton".
y
Este material, similar a la porcelana, se obtiene a elevada temperatura por la
recristalizacin de una mezcla de ahf mina y slice, produciendose una estructura
muy poiosa (porosidad e = O,4). La limpieza de la vela se realiza con cidos,
con detergentes, o mediante ignicin en un horno. La esterlizacin de la vela se
realiza con vapor, con aire caliente o en autoclave.
391
Tabla 6.8 Prdida de presin en una vela de "Celloton" de 10 pulgadas de
longitud, 2 pulgadas de dimetro exterior y 1,5 pulgadas de dimetro interior.
Richards, 1968.
1 10 9,45 o 2
1 15 14 ,77 4,L6
1 ZU 18, 90 18 ,37
2 5 7 ,55 7 ,64
2 10 15 ,7-2 1-5,29
2 15 22 ,08 22 ,6s
2 U 30,24 30,88
392
6.6 EFICIENCIA DE LOS FILTROS FIBROSOS
- lntercepcin: Se supone que todas las partlculas que siguen lfneas de corriente
que pasan a una distancia menor que la mitad del dimetro de partcula, dpl2,
son retenidas por la superficie del colector.
- otras fuerzas: Algunas fuerzas como las de London y Van der waals aceleran
o retardan la cofeccin de partculas. Las siguientes ecuaciones, obtenidas
analticamente (Bailey y ollis, 1986), permiten calcular la eficiencia de
recoleccin de partlculas por una fibra simple:
393
- Difusin: movimiento browniano
s-
rB = o.s .l K''z )*
-'' '[r, .dF.dp.U- 16.271
)
,
- lntercepcin ,
p, = (1,,
(* I t6.28I
- lmpacto
,t6.291
- Gravitacin
t6.30I
**-LP<1ipw=!L4rso 16.321
394
tlonde Ro : Nmero de Reynolds; P.r : Nmero de Peclet referido al radio de
la fibra; DF : Difusividad de partcula, m2ls:
t6.331
. !r(n')o .
;*[" (-, ,^", f - ] {^*)'."')
13a2
I[ =--lna--+d,-- t6.351
'244
Donde, o: Fraccin volumtrica de fibras en el lecho; e : (1 _ o): porosidad del
lecho; Rp, = dp/df : Relacin entre los dimetros de partfcula y de fibra.
Para nmeros de Peclet mayores que 200 y valores de Rpr pegueos la Ecuacin
t6.341 se convierte en:
F*9*Fu=
t6.36I
z,9.x;tts.r;4 * Kit.nfr.lt - c
395
A medida que aumenta el caudal, aumenta la'importancia relativa de los
trminos Br, y Bn. La eficiencia total de recoleccin Rr se calcula segn la
ecuacin:
9r=9s*9t*9u*Fzr*Fe 16.371
t6.38I
Solucin
) uo',.szs ur".x 3-
'
P,M
R.T
=(!#f 8,314H t,t273 * 2OlK
_ 1,217 +m'
bnol.K '
396
2. Nmero de Reynolds:
^ dn.U-,p-
E=-=
lc
Xc =0'592< 1
*=#4=ffi; l
DP = 3,865 '10-t1
,,=#=ffi=r3.o6s,eo>50
D-
5. Parmetro de Kuwabara:
'- Ev=-
tn, - I. " - =o,941 i =0,(Bo
6. Relacin entre los dimetros de partlcula y de fibra:
j'
.',
7. Euacin [6,361:
g * Fr * Fa=12,S.iO,SA)-I4.(113.065,g8-zs
* '
,,ir *(o,923)-f .rO,oqer.t0,962|=2,$14.10-e ,
397
8. Eficiencia de recoleccin por impacto:
p
rM = ug7s.tffi )'o
= o,orro
0r = 0,0197
ln 1800.20.60.1@ _ 4.0,038.0,0197.
0,001 r.(rs.t0-6 )
I; = 0,52 m
Los filtros de fibra de vidrio son los ms ulilizados en esterilizacin de aire para
las plantas de fermentacin. Las fibras deben reemplazarse despus de un
perodo de operacin que usualmente vara entre 1 y 2 aos. El reemplazo es
costoso y el empaquetamiento del lecho es relativamente difcI. Adems, los
costos de produccin de vapor y de aire caliente para la esterilizacin del lecho
y subsiguiente secado.del mismo son considerables. La prdida de presin del
aire que atraviesa un lecho de fibras se calcula usualmente segn el procedi-
miento de Kimura e linoya, 1959, estos autores recomiendan la Figura 6.1 3,
construida a partir de valores experimentales, para gvaluar el coeficiente de
arrastre Co, en funcin del nmero de Reynolds:
398
rc .9.-dr. A P
co* = t6.39I
2-p.L.r.0 - d^
- Prdida de presin:
A P =#05,3 Pa
399
Figura 6.13 Determinacin de la prdida de presin del aire que atraviesa un
lecho de fibras segn el procedimiento de Kimura e linoya, 1959. La ordenada
es el coeficiente de arrastre Co, definido en la Ecuacin t6.391 y !a abcisa es el
nmero de Reynolds.
Coeticiente de friccion
Reynolds
PROBLEMAS
400
6.2 Durante la etapa de calentamiento se presenta una falla en el control de
tempratura del fermentador del problema anterior' La temperatura aumenta a
oC, permanece constante durante
raz6n de 0,8 oC/minuto desde 1 00 hasta 108
8 minutos y luego aumenta a razn de 0,8
oClminuto desde 108 hasta 121 oC.
Calcular el valor del perodo de sostenimiento.
6.5 Hallar el espesor del lecho requerido para esterilizar mediante filtracin el
aire necesario para aerar durante 960 horas un fermentador con 80 m3 de caldo
a razn de 1,5 yym (volunren de aire por volumen de licor cada minutol. Se
dispone de aire a 18 oC y 6 psig (presin bromtrica : 12 psi; viscosidad:p"
: 1,85. 1 0{ kg. (m,s)-1). El aire contien e 24OO microorganismos/m3, (pp : t O00
kg/m3, dp : 0,6/m), y se acepta una probabilidad de hallar0,0o1 microorganis-
mos en el afluente al fermentador durante las 960 horas. El lecho est
compuesto de fibras de vidrio (d, : 1 5 Ym, o = 0,03)' La velocidad superficial
del aire es 0,46 m/s.
401
6.6 Calcular la prdida de presin del aire en el lecho fltrante descrito en el
: .i problema anterior. !
BBLIOGRAFIA
Aiba, S., S., Yamamoto, A. (1gSg). O.trbution of bacterial cells within fibrous
air sterilization filters. J. Biochem. Microbiol. technol. Eng. 'l l2l: 129.
Chen, C.Y. (19551. "Filtration of aerosols by fibrous media," Chem. Rev., 55,
595.
Chopra, C.L., G.N. Oazi, S.K. Chaturvedi, C.N. Gaind, and C.K. Aial. (1981).
"Production of citric acid by submerged fermentation. Effect of medium
sterilzation at pilot plant level," J. Chem. Technol. Biotechnol,,3l:122
-p 126.
402
Cooney, C.L. (1985). "Media sterilization" in Comprehensive Biotechnology.
Murray Moo Young (Editor in Chief). Volume 2.pp.287-297. Pergamon
Press. New York.
Decker, H,M., L.M. Buchanan, L.B, Hall, and K.R. Goddard. (1962). "Air
filtration of microbial particles," Public Health Seruice. Publication 953.
Government Printing Office, Washington.
,
Decker, H.M., J.B. Harstad, and F.T. Lense. (1957). "Removal of bacteria from
air streams by glass fiber filters," J. Ar Pollut. Control, T: 15 - 16.
Fitzgerald, J.J. and G.G. Detweiler. (1957). "Collection efficiency of filter media
in the particle size range of 0,005 to 0,1 micron," Am. lnd. Hyg. Assoc.
4., 18: 47 - 54.
Gaden, E.L. and Humptirey, A.E., (1956). "Fibrous filters for air sterilization,"
lnd. Eng. Chem., 48: 112l:2172.
Jacobs, R.A,, L.L. Kempe, and N.A. Milone. (1973). "Hgh temperature short
time (HTSTI processing of supensions containing bacterial spores," ,./.
Food Sci.,40: 985 - 996.
Harstad; J.8., H.M. Decker, L.M. Buchana, and M.E. Filler. (1967). "Air
filtration of submicron virus aerosols, "Am. J. Public Health,57:2186 -
2193.
Humphrey, A., (1960). "Air Sterilization," Adv. Appl. Micro.2': 301 - 311
403
Humphrey, A., (1989), Study module for biotechnology on bioprocess design.
En " Chemical Engineering Problems in Biotechnology," Michael L. Shuler
(Editor). Cornell University. American lnstitute of Chemical Engineers.
Kimura, N., and lnoya, G.-(1959). "Experimental studies on the pressure drpp
characteristics of fiber mats," Chem. Eng. Uapan) 23, 792.
Levenspiel, O., fi9V21. Chemical Reaction Engineering (2nd. ed.), John Wiley
& Sons. New York. NY.
Pick, A.E. (1982). "Consider direct steam injection tor heating liquids," Chem.
Eng., 6:87 - 89.
Shuler, M.L., and Domach, M.M., (1982). En Blanch, H.W., et al., (eds.). Amer.
Chem. Soc. Winter Symp. Kinetics and Thermodinamics in Biological
Sysfems. Boulder Colo.: Amer. Chem. Soc.
404
Solomons, G.L. (1969), 'Materials and methods in fermentation," Academic..
New York.
Stark Pohler (1950). "Sterile air for industrial fermentations" lnd. Eng. Chem.
42:1789.
Witliams, F.M., (1975). En Patten, B.V. (ed'). System Analysis and Simulation
in Ecology, Vol 7. New York. Academic Press'
Yao, K.M., M.T. Habbbian, and C.R. O'Melia.'(1971). "Waier and waste
filtration concepts and applications," Curr. Res., 5: 1105-112.
405
CAPITULO 7
FENOMENOS DE TRANSPORTE
EN BIOPROCESOS
406
7.1.1 Fluidos Newtonihnos
tz - 17.11
Donde, rxz: componente del tensor esfuerzo cor.tante en el plano XZ, N/m2;
{dv./dx}: gradiente de velocidad del caldo, (m/s}/m; p: viscosidad del caldo,
kg.(m.s) '.
La ecuacin anteior puede ser generalizada para incluir ftuidos con material
suspendido o con macromolculas disueltas:
E--
17.2t
407
Figura 7.1 Reogramas de fluidos con diferentes propiedades reolgicas
Cue de Cass
Plqstlco
Blnghorn
t luldo
Newtonlono
I
Esfuerzo
cortqnte Futdo
drtot Fludo
pseudoplos tlco
Grodlente de ve[ocldod
Los sustratos de alto O"ro *o,""ular como almidn de maz disuelto en agua,
o una elevada concentracin de slidos no disueltos, afectan la reologa del
caldo aun a bajas concentraciones celulares, La viscosidad es probablemente el
factOr gue afecta en mayor grado el coeficiente de transferencia de calor, La
disminucin de este coeficiente es drstica a partir de viscosidades del orden de
0,5 kg,(m.sl-1, cuando la velocidad de aeracin es alta.
408
u*=*"(*)" ' -,.(*)' 17.51
l*=1 "(*)'
+ K"'("t1P'(*)' -K: 17.71
410
(Perry y Chilton, 1973). Generalmente la agitacin se realiza mecnicamente
pero tambin se puede lograr mediante dispersin de aire.
Las prdidas por friccin en sellos, cojinetes, bandas y poleas, generan calor y
contribuyen a la disminucin de la eficiencia de transmisin de potencia, eo,
entre el motor y los impulsores. Harmes 119721encontr una prdida de 3O%
de potencia, entre el motor y el impulsor, en un reactor de 270 litros.
411
vatmetro acoplado al motor del agitador proporciona datos exactos a escala
industrial y de planta piloto:
P = I.Vu.er.oos$ 17.81
_f
(o'), - (r'), R.r . P t7.10I
_ln
[ 2.s. Ms P
412
Donde el primer trmno de esta ecuacin representa el cambio de la energfa
cintica del gas: v,: velocidad del gas en la tuberfa, rr.s-1i v,: velocidad del gas
en el reactor; g": factor de conversin de la ley de Newton (1 kg.m.s-2.N-l).
Donde, F: caudal de gas, m3 s-'; pg: densidad del gas, kg/m3; Por.: presin
absoluta, Pa, (Pa : N.m-2):
Puror*^ = Pu.mwlttrc1 * Pulpustruct
7.2.1.2 Agitacin
413
- Relaciones geomtricas (factores de formal similares a las de un ferrnentador
industrial.
414
tipo hlice marina son utlzados cuando se requiere bajo corte y bajas transfe-
rencias de oxgeno.
II
k- Do+t
fr
EI
-Dt+l
II
415
Fukuda (1968), encontr una proporcionalidad directa entre el nmero de
potencia y el nmero de impulsores. As, por ejemplo, se puede suponer gue la
potencia total es la suma de la potencia suministrada por cada mpulsor. En
condiciones aeradas el impulsor inferior consume menos potenca que el resto.
P.g,
p.n3.DAs
= rl\r,+, r, ,...,r"]
p^= P=8"
- p.no -Dt"
=iRe=n'D^2'P iFr=ol'D^
F I
17.121
s,=N,',=l:s,=l
s,=l,tr=*,t"=l
Donde, Po : nmero de potencia; Re: nmero de Reynolds; Fr: nmero de
Froude; S,, Sr, S., So, S., S.: factores de forma; P: potencia requerida para rotar
un impulsor dado a una determinada velocidad, W; g": factor de conversin de
la Ley de Newton (1 kg.m.s'2.N-'); p = densidad del fluido, kg,m-3; n
416
velocidad del impulsor, revoluciones s-l; l.r = viscosidad del fluido, kg.m-1.s'1;
Do: dimetro del impulsor, m; Dr: dimetro del tanque, m; g : 9,8 m.s-2:
aceleracin de la gravedad; E: altura del impulsor sobre el fondo del tanque, m;
L: longitud de las aspas del impulsor, m; W: anchura de las aspas, m; J: anchura
de las pantallas deflectoras, m.
Funcion de potencio
t00
-l'-i. t'-t
o
{--1.1.+
t0
,.\ e1
\l i -l
+i *i
'i rfi
t4
?.!.v. t.9:
\ l-{
iil
ts<
i l +
to 700 1000 too00 1 00000
Reynolds
417
dcima parte del dimetro del tanque (Su : 6,1), y Q : P". La curva B se
: .i aplica en el caso de tanques sin deflectores.
Figura 7.4 Functn de potencia, (D, versus Reynolds para hlices de 3 aspas.
McCabe y Smith, 1976,
.i
to0
'.4:::.t .le,tti dr.o16.sri.slFfr
-3i:P-qfg,i?:ili
.EL:..il. drk (Uts9i9 s.P..a:12I
a _a\a_
\\
...t\.
_'
e 'ai
d;i,t a-te7"'; i;'i 5,: Pilil:
---!--j---.- l-----i,-i-i+i
\^i..
'ii
\ \-.--. A
-*-: iX
==+:M j::iri:i:i1
I
it + *+
=
0.1
t t0 100 1000 10000 100000
Reynolds
418
El exponente m depende del nmero de Reynolds:
m= a-looRe
' t7.141
b
17.15t
419
Donde, Fo: caudal de gas, m3.s-',; Do: dimetro del impulsor, m; n: velocidad del
impulsor, revoluciones.s-1; n,Do: velocidad en la punta del impulsor, m.s'1.
Donde: *, =
+ ; & =
+, n, =
?,j,
Donde, Pu: consumo de potencia en el sistema gaseado, W; P: consumo de
potencia en el sistema sin gasear, W; Fo: caudal de air, m3.s-'; n: velocidad del
impulsor, revoluciones.s-'; Do: dimetro del impulso, mi pi densidad del caldo,
kg/m3; p: viscosidad del caldo, kg/(m.s).
= K.P2 F t7.18t
P c . n. D .
^3 ^-o'$]o'
Donde, K: constante que depende de la geometrfa del sistema y de las Unidades
utilizadas. Los intervalos de las variables fsicas en los ensayos de Michel y
Millerfueron: viscosidad: p - 9.10-4 - 0,:l kg,m-l's'1; densidad del caldo: p :
BOO -1650 kg.m-3 ; tensin superficial: O,O27 'O,O72 N.m-'; Potencia
consumida por el sistema gaseado: Po: 3,73 -74,6 W; Volumen del lquido en
el reactor: 3,5 - 10,5 litros,
420
Ejemplo 7.1 Consumo de potencia por agitacin
Solucin:
- Volumen de licor:
V = !;(O,gq2.(O,gg) = 0,762 mg
- Caudal de aire:
- Nrimero de Reynolds:
3.(0,$)2.(997,0q
Rr = \
8,904.10-4 t
Por consiguiente, Q - Po : 6, (Figura 7.3), y la potencia disipada por el
impulsor en el llquido sin gasear, Ecuacin [7.13], es:
P = 6.(997,08).(3)0.(0,33): = 6s2,1 W
- Nmero de Froude:
n2.D,
FR = = = 0,303
I
---a 9,8
421
- Nmero de aeracin:
A-= F^ - (5,08.10-1
=O.M7
' n.o| 3.(0,$)3
Pc = (0,7126).(632,1) = 450,4 W
Pc = 6O,V144}.(632,f) =.451,6 [
422 r
Taguchi y Miyamoto (19661 relacionaron los nmeros de potencia, po, y de
Reynolds, Rerr, para caldos no Newtonianos no aerados en la fermentacin de
glucoamilas a con Endomyces:
Donde, Dr: dimetro del tanque; Do: dimetro del impulsorr w: anchura del
impulsor.
423
P e = Kt -lr2.n. o^3 -F,{-o's' t7.211
]o'45
OonO", K,,: constante que depende de la geometra del sstema y de las unidades
utilizadas. Los mismos autores recomiendan la siguiente ecuacin para la zonas
laminar y de transicin:
424
-
entfe 280 W.m-2.oC-1 con medios de baja viscoSidad y 850 W.m-2.oC-ren el
caso de fluidos viscosos y no Newtonianos. La magnitud de la transferencia
de calor depende de los llmites del sistema y de las condiciones ambientales.
425
costosos y difciles de mantener. El rea de transferencia de calor de un sistema
de serpentfn interno (Figura 7.5.b1, es:
Ar=n.d.Ls=t2.d.Dr.n, 17.241
.Donde, A": rea de transferencia de calor del serpentn interno, mr; d: dimetro
externo del tubo del serpentn, m; Ls: longitud del serpentfn, mi Ls : n. D..n.; D.:
dimetro del serpentn, m.
426
-
Figura 7.5 Representacin esquemtica de algunos equipos de transferencia de
calor. '
:-
l-Dt x-Dt +
-
A B c
fco
Tfe TFe
.Tfo
Tce,
D
427
-
Figura 7.6 Variacin de la temperatura de los fluidos caliente fro en un
intercambiador de doble tubo. T"o, T.r: Temperaturas afluente y efluente,
respectivamente del fluido caliente, oC; Tro, Trr: Temperaturas afluente y
efluente del fluido fro.
Tco
ftudo coltente
T
AT2
Fluido colente
ftudo Pro I A:
Tf ftudo [are
T Tce
Tf
ATI
t fq Tfo
Dstoncio Dstonco
428
Donde, q,,ur: velocidad de transferencia de caior, kW; Frr, Fr.: velocidad de flujo
de masa de fluido fro y de fluido caliente, respectivamente, kg.s-'; H.r, Hro:
1;
entalplas del fluido frlo, efluente y afluente, respectivamente, kJ. (kg) H"o, H..:
entalpas del fluido caliente afluente y efluente, respectivamente.
Donde, T6, T6E: Temperaturas del fluido caliente, afluente y efluente, respecti-
oC, En
vamente, oC; Tr, Tr.: Temperaturas afluente y efluente del fluido fro,
la Ecuacin t7.2d los calores especficos se evalan a la temperatura media
aritmtca entre las temperaturas de entrada y de salida def fluido: crr: calor
espectfico del fluido fro, kJ (kg.oC)-1; Cr": calor especfico del fluido calente.
429
7
U=
A,.ln (r.lr,) v.2at
1
* * L t
hi Z.r.L.k Ao ho
uo
Aol ,l".ln (r" lr,l 1 7.291
+
Ai
-t_ hi 2..L.k ho
Donde, Ao : 2.n.ro.L: rea exteror del tubo interior, m2; ro: radio exterior del
tubo interior; L: longitud total de la tubera doble, m; A, : 2.n.r,.L: rea interior
del tubo interior; r,: radio interior del tubo interior; k; conductividad trmica de
la pared deltubo interior, kw.(m.oC) 1 ; ho: coeficiente de transferencia de calor
por conveccin, o coeficiente de pelcula, por el lado exterior del tubo interior,
kW,(m2 oC)-1; hi: coeficiente de pelcula por el lado interior del tubo interior,
430
\
LT1 -LT2
LTM =
LT. 17.301
ln'
LTz
431
ho'D,
= 0.74.(R,l)*. trrl'r. ( -r
)'''' t7.32)
pr=n'Dtz'P i pr=F"-cp
pk
ho'Dr
= 0,44.;y rJ, ()"' t7.33I
ho'D,
= a.R"N.P,1F. 17.341
432
Los valores promedio del coeficiente'a"dependen del tipo de agitador y de la
superficie de transferencia de calor:
Cuando los llquidos son muy viscosos se utiliza un agitador de tipo ancla, Uhl
y Gray (1966):
ho'Dr
= K.R,o.P,o* t7.3sI
()''"
hr'do
= (0,14.R:'l 17.361
'=P*l'{*l'(-1)'
Donde:
433
Rc= ".D1.p i pr =tP
Donde, ho: coeficiente de pelcula entre la superficie del serpentn y el lquido,
W.m-2.oC-1 ; do: dimetro exteror de la tubera del serpentn, m; a: exponente
dependiente db propiedades del fluido tales como viscosidad, capacidad calor
fica y conductividad trmica. Para una evaluacin preliminar, el valor de a,
consistente con otras ecuaciones similares es: a : O,24. La Ecuacin [7.36] se
aplica a un arrollamiento simple. La eficiencia trmica de un segundo arrolla-
miento con un rea equivalente a la del primero, se estima entre 70 y 90% de
la eficiencia del serpentn simple.
ho'D^
= o,(x) ne* .P:" (+i'" (i)" ()'" t7 sr/t
v.cp
k
Donde, no: nmero de haces de tubos; ho: coeficiente de pelfcula entre la super-
ficie de los tubos y el llquido en W.m-2.oC-1. El trabajo de Dunlap y Rushton
dernuestra que en el caso de seis haces de tubos, formado cada uno por tres
tubos de tamao do/D1 = 0,031, (do: dimetro exterior de los tubos; Dr:
dimetro del tanque), los tubos verticales originan una prdida equivalente al 75
o/ode la potencia consumida por un impulsor en un tanque equipado con
pantallas deflectoras estndar, Cuatro haces de tubos originan una prdida
equivalente al 50 - 60 % de la potencia consumida en un tanque equipado con
deflectores estndar.
434
-
de placa veftical
7.3.7 Reactores con serpentnes
Y Small' (1978):
R. > 4.103 :
t7.38I
+ =to,mrzl.n3'*."r".(l
4 < 1,4.103 :
t7.391
=(o,rzaa).n:'* r:* [tl
+
n -' u?
Dor.dc: Re =
+,
viscosidad del llquido a
Llanchuradelaplaca;ho:coeficientedepelfculaentrelasuperficiedelaplaca
lquido, w m.2oc.l; p: densidad a"rr"r, * m't. /,:
v el ''s
Li"rp"t.,ura mediade pelfcula' kg'm
raspada
7 .S.Slntercambiadores de superficie
eje rotatorio'
435
La superficie exterior del tubo central est en contacto con vapor de agua o con
el lquido refrigerante. Las porciones de llquido viscoso en contacto con la
superficie de transferencia de calor estn esencialmente en reposo, excepto
cuando son perturbadas por el paso de la hoja raspadora. La transferencia de
calor hacia el lfquido viscoso ocurre en condiciones inestables.
Dr.v'P
Rc= ;Pr=+
Donde, l-: longitud del intercambiador, m; h,: coeficiente de transferencia de
calor entre la superficie interior del tubo central y el llquido, W.m-',oC-'; v:
velocidad promedio del fluido en la direccin longitudinal, m.s-1; D^: dimetro
interior del tubo central, m; n: velocidad de rotacin del agitador, (revolucio-
es).s't.
436
fluido frfo; /n: masa del caldo en el reactor, kg; co: calor especfico a presin
constante, J.kg''.oC-l; f: tiempo, s.
, T" - To m.cD,tT
17.42t
l-m-
T" - Tru u.A
Donde, Tc: temperatura del fluido caliente; Tr: temperatura del fluido fro'
I --'-
K.=eXDl
(u.\ |
' \Fn''o )
Donde, cp, cp6l calores especficos a presin constante del fluido fro y del fluido
o6-t ' Frr: velocidad de flujo de masa de
caliente (caldo), respectivamente, J kg-t
fluido frlo, kg.s-'; mc: masa de fluido caliente (caldo), kg'
437
medio de crecimiento a 25 oC (densidad, p : 112O kglm3; viscosidad, p :
O,216 kg/(m.s); calor especfico, c, : 2836 J/(kg.oCl; conductividad trmica,
k : O,44 W.m-1.oC-l1, hasta un nivel de operacin H : 8,g6 m.
La velocidad mxima de consumo de, oxgeno del cultivo es: r(Or) : 0,03 mol
Orl(litro.hora). Se dispone de agua de refrigeracin cuya temperatura vara entre
15 y 18 oC. El tanque se alimenta qon aire estrla 25 oC y 2O,2 psig a razn
de 0,4 vvm (volumen de aire por volumen de licor cada minuto) por un orificio
situado debajo del impulsor. La presin tocal es 10,8 psi.
Solucin:
- Nmero de espiras:
7,17 +1=142
" e +l=
,ro=fl,
0,0508
esoias
438
v - Dimetro interior del serpentln:
, = ,2.d.Ds.ns = 2.(0,0?#1.@,2.(1421
.,
i, = 115,9 m2
- Volumen de licor:
'ns
v, = =lfd2,6 '
X,(4)2.(s,go)
4 = Q1,1 kW
- Caudal de aire:
:r .l '.r
D =- 0,4.(112,6)= u'lo
o, ^aE m-F
-8r-
--b-
- Nmero de Reynolds:
0,8.(1,)2.1120
n_ =
" 0,216
=77.
P = 6.(1120).(0,8)3.(1,33)s = 14118,5 w
439
- Nmero de Froude:
o2,Q*
Fn= = 0,087
g 9,8
- Nmero de aeracin:
F^ 0,75
' ,.ol =,. 0,8.(1,q0)"
A-= =o.gga
bsrc
+ = -2. (f}*.*3'"'. (+ )',*. t,
.1P^
,og,o = - q*7
;t
Pc = (0,45).(14f!18,5) = W2 W
= 0,4.35 .i -.
?=0,*. + (16,67).(0,398)
P6 = (0,435).(1.818,5) =.6221.5 W
. ,: , * =.
1?:1?
-0,172
kw-,
4rto
5- Calor entregado al licor por la dispersin del aire:
=.
- Velocidad del aire en la tuberla: se supone que el aire llega al dispersor'a 25
oC y 2O,2 psig por una tuberfa de 4 pulgadas de dimetro:
= o'76
msls
v^ = o,o6 nls
i t+ *t'
- Densidad del aire en el fondo de reactor:
(N,2 * 10,8\ 101,325 ft,f Zkg
'b''I
P.M t t4z |--,z
' R.T (8,g14lu.hnot-r.tr-t.(25 + 273)K
p = 2,5 kg-^-"
m. = o.r5 .25
'--as't9s k = 1,075 &
ur=
* P.-
g"
= B,e6 ,, =
,,#frO
441
- Presin en la cima del reactor: -
, = ((ge,sl,'t (o,oet').r,rru .
- Nmero de Prandtl:
'f
P_ _ (o'216).(2E36) = 1392,2
0,4
442
- Coeficiente de transferencia de calor, sistema de camisa, Ecuacin 17.321:
"" - (0,74).-(o'441
.n?.p)F = !t3,21 w
4 m2."c
r?*(+)o'i(0,%2s4[s
u. =
W^:,
ho = '1156,2
k
9- Area de transferencia de calor requerida por el sistema de camisa:
443
7.4 TRANSFERENCA DE MASA
7.4.1 lntroduccin
dc" f7.41
OTR = = Kfi.(C.- C)
dt
444
de calor hacia el medio, Armenante y Kirwan, 1989. La mayorla de los
nutrentes, excepto eloxfgeno, son altamente solubles en agua, y prcticamente
no requieren una accin previa de mezclado para ser consumidos por los micro-
organismos.
P(o)
ci= f7,451
H(O2,7\)
Temperatura Solubilidad
oc mmol,Orllitro mg Orllitro
0 2,!8 69 ,8
10 1,70 54 ,5
15 1_ ,54 49 ,3
20 1,38 44,2
25 1-,26 40, 3
30 7,76 37 ,9
35 1,09 34 ,9
40 1,03 33, 0
.
lnternational Critical Tables, Vol lll, p.271 , McGraw-Hill Book Co', New York,
1928.
445
El valor de la constante de la ley de Henry se obtiene de la Tabla 7.2. por
ejemplo, a 30oC, C-,_ : 1,16 mrnol Orllitro y P(Or) : 1 atmsfera, si se tiene
en cuenta que el gas es oxgeno puro. Despus de sustituir estos valores en la
Ecuacin 7 .451 se obtiene el valor de la constante de Henry para O, a ,la
temperatura T : 30 oc:1|fi,16) : 0,862, La concentracin de equilibrio det
oxgeno en el sistema aire-agua a 30oC es:
0,242 mmol O,
litro
mmol O" a mg Oz mg Oz
c. = 0,242 eL-- = 7,75
litro . mmol 02 tro
c = P-'p t7.46t
C* 760-p
Donde, C*: concentracin de oxgeno en agua, en equilibrio con aire, a presin
atmosfrica (valores anotados en la Tabla 7.3), mg Orllitro; C: concentracin de
oxgeno en agua, en equilibrio con aire, a una presin P diferente de la atmosf-
rica, mg Orllitro; P: presin absoluta, mm Hg.; p: presin del vapor saturado de
agua a la temperatura del agua, mm Hg.
446
Tbla 7.3 Valores de saturacin de oxgeno disueho en agua expuesta a aire
saturado con agua''. El aire a760 mm Hg contiene 20,9 o/o de oxfgeno.
., 0 5000 10000
13,8 13,1
'' 12,3 5
3 13,5 12,7 12,O 6
4 13,"1 12,4 11 ,7 6
5 12,8 12,1 11 ,4 7
6 12,5 1 1,8 11 ,1 7
7 12,2 1 1,5 10,9 8
I 1,9 11,2 'l 0,6 8
I 1,6 1 1,0 10,4 9
10 1,3 10,7 10,1 I
11 1,1 10,5 9,9 10
12 10,8 10,3 s,7 11
13 10,6 10,1 9,5 11
14 10,4 9,9 9,3 12
15 10,2 9,7 9,1 13
16' 10,o 9,5 s,0 14
17 9,7 9,3 8,8 15
18 9,5 9,1 8,6 16
19 9,4 8,9 8,5 17
20 9,2 8,7 8,3 18
21 9,0 8,6 8,1 19
22 8,8 8,4 I,O 20
23 8,7 8,3 7,9
24 8,5 8,1 7,7 22
25 8,4 8,0 7,6 24
26 8,2 7,8 7,4 25
27 8,1 7,7 7,3 27
28 7,9 1,5 7,1 28
29 7,8 7,4 7,O 30
30 7,6 7,3 6,9 32
447
oC, con
Asl, por ejemplo, la concentracin de oxgeno disuelto en agua a 15
'na concentracin de cloruros de 2000 mg/litro, en un tanque a una presin
manom&trica de 8 psig, en un sitio donde la presin baromtrica es 11 psi. se
calcula. en los siguientes pasos:
c = ro . fe82'3 - 13) mg Oz
= re.gz
[760-13) to
Welocdo.d
espectFtco. de
consLrr,o cle
oxlgeno
Concentro.clon
crltlco.
448
Tabla 7.4 Solubilidad del oxfgeno en una solucin de sal o de cido a 25oC,
(Todt, F,, 19581
449
7 .4.2 Determinacin experimental del coeficiente de transferencia
.de oxgeno
La velocidad de esta reaccin es tal que todo el oxgeno que entra en solucin
es inmediatamente consumido en la oxidacn del sulfito, de manera que la
velocidad de oxidacin del sulfito es equivalente a la velocidad de transferencia
de oxgeno, En la prctica, la concentracin de oxgeno disuelto, C., es igual a
cero, y la Ecuacin 7.441se convierte en:
dC"
oTR = = Kra.C' 17.471
dt
450
completamente diferente a la de un caldo de fermentacin. El costo del sifito
de sodio y el tiempo requerido para cada determinacin, usualmente de varias
horas de acuerdo con las velocidades de aeracin y de agitacin, dificultan su
aplicacin a escala industrial. Sin embargo, el mtodo es til para confrontar
resultados obtenidos con diferentes fermentadores y estudiar los efectos del
cambio de escala y de las condiciones de operacin sobre la transferencia de
masa.
n=-P.V
R.T
t7.481
n I Ie^.P^.Y^- eE.PE.YE]
1=l'la r, )
17.49t
RL TA -
orR. = = 17.50]
dt TE )V,
451
Dondg, OTR: velscidad de transferencia de oxlgeno: (gmol de Or)/(litro de
caldo.s); C.: concentracin de oxgeno en el caldo, gmol/litro; Vr: volumen del
caldo en el fermentador, litros.
(c'-c"l^-(c. -cr),
C'-C,
t7.51I
452
La velocidad de transferencia de oxfgeno es igual a la pendiente de la tangente
a la curva de valores de concentracin de oxfgeno disuelto'n funcin deltiempo
de aeracin tal como se muestra en !a Figura 7.8, de acuerdo con la Ecuacin
t7.441:
dC,
AR = = R.(c'- c) Ecu- 7-Utl
dt
C ton
d
d
t=t
Tiempo
----+
453
Figura 7.9 Representacin esquemtica de de la determinacin de K,_a por el
mtodo esttco de desgasificacin. La pendiente de, la curva es igual a (- Kra)
1
ln (cx c)
pendien t e,
Kl.o
f iernpo ---------+
La determinacin de Kra por el mtodo esttico tambin se reali4,a en el caldo
de fermentacin, agregandole clulas muertas o micelio para simular la
concentracin del medio real. El detector del cambio de la concentracin de
oxlgeno disuelto normalmente es del tipo recubierto por membrana, a causa de
la naturaleza compleja de los caldos de fermentacin. Adems el punto donde
se realiza la determinacin debe ser representativo de todo el volumen del caldo.
454
7.4.2.4 Mtodo dinmico
dc.
= - lt(Oz)x t7.531
"
La aeracin se reinicia en el punto B (Figura 7.1O!. y la concentracin de oxgeno
disuelto aumenta hasta alcanzar el valor inicial, El incremento observado de la
concentracin de oxgeno disuelto en el perfodo BC es la diferenca entre Ia
transferencia de oxgeno hacia la solucin y la demanda de oxfgeno por la
respracin del cultivo:
t7.541
455
Figura 7.10 Representacin esquemtca de la determinacin de Ka por el
mtodo de desgasificacin dinmica. La aeracin se suspende en el punto A y
se reinicia en elpunto B; r(Or) : plOrl.x: velocidad de respiraci6, (g Or)/(litro.
hora).
c ian
,d
d
pendienter
Tienpo ..-
pendiEnte
456
7.4.3 Coeficiente de transferencia de masa
La evidencia experimental indica que estas ecuaciones son tiles para predecir
el valor del coeficiente de transferencia de masa, Kr, y del coeficiente volu-
mtrico de transferencia de masa, K,_a, inclusive si los aspectos fundamentales
de la mecnica de fluidos no aparecen expllcitamente, La relacin entre la
potencia entregada alfluido y el volumen del caldo, Pfy', probablemente incluye
todos los efectos del nmero de Reynolds y de la viscosidad si se tiene en
cuenta que el consumo de potencia depende de cada fluido. La evaluacin del
coeficiente de transferencia de masa mediante ecuaciones emplricas depende
de las condiciones de operacin y de la configuracin del tanque elegido.
Desafortunadamente muchas de las ecuaciones empricas disponibles no
informan sobre la constante de proporcionalidad o sobre las condiciones de
operacin empleadas en los ensayos realizados para su deduccin, aspecto que
limita su empleo.
457
shs = 2 + 0,31 .(Sch)1B.(era1o t7.56I
Dorrde: Sherwood
*you, [tc
= Schni =
DAB P"'Dt
Dil.p".s-t p
Graslnf =
2
lc
Van't iliet, (1979) recomiendala siguiente ecuaciri para evaluar K,-a, con una
aproximabin entre 20 y 40 o/o, n el caso de transferencia de'oxgeno en
soluiones de electrlitos fuertes, no coalescentes, en fermentadores agitados
mecnicamente cuyo volumen vara entre 2 y 4400 litros:
458
K,a = oo02.(l)" .r:, t7.591
Las ecuaciones [7.58] y t7.591 son aplicables en reactores provistos con diver-
sos tipos de agitadores, diferentes valores de la relacin entre el dimetro del
impulsor y gl dimetro del tanque, D./Dr, y una relacin entre la potencia
disipada por impulsor y el volumen del caldo en el intervalo, 500 < P_/V <
10.0OO W/m3.
459
Donde, Dor: difusividad del componente A en el componente B, m'ls; vr:
viscosidad cinemtica del caldo, m'lsi o: tensin superficial, m2lst pci densidad
del caldo, kg/m3; Dr: dimetro deltanque, m; g: aceleracin de la gravedad, 9,8
mls2; tlt: fraccin volumtrica del gas en la fase dispersa, adimensional; Kra:
coeficiente volumtrico de transferencia de masa, s-t.
K,A
Kt=L 17.641
a
a= 6. t7.651
De
Donde, rp: fraccin volumtrica del gas en la fase dispersa lholdupl; Drr:
dimetro medio de Sauter:
460
n.dl
rl, = i Dg= t7.661
n.dl
Donde, d,: dimetro de las burbujas; Ho: altura ocupada por el lquido aerado: Ho:
Sstemq de nedcon
del votuT en de los
burbuos
Re
Bolbo de Ftu3o
/' rogeno
Lineo de succon Detector
de hurbuos det nivel
de tlquido
Pontqtlq
deftectorq
CSTR
461
7.4.5 Fraccin volumtrica del gas en la fase dispersa
. r-r o,"[4,=)'^[f)'^'[)
= t7.671
v
u= vs+vl t7.681
462
7.4.5.2 Dispersin de aire en sistemas con agitacin mecnica
0,5
* = l"' )oo + 2,16.,0 . (+)".01,1,__..( t7.69t
\ur )
Donde, v.: velocidad superficial, m/s; v. : FolA; Fo: caudal de gas, m3/s; A:
rea transversat de la'columna, m2; u.: velocidad de flotacin de las burbujas,
mlsi o: tensin superficial, kg/s?; PrAy': potencia entregada por impulsor y por
unidad de volumen en la dispersin gas-lfquido, Wm3; p": densidad del lquido,
kg/m3.
Donde todos los trminos tienen el mismo significado y las mismas unidades que
en la Ecuacin t7.691.
Donde todos los trminos tienen el mismo significado y las mismas unidades que
en la Ecuacin t7,691,
463
Sise aumenta progresivamente la alimentacin de aire a un reactor agitado por
un impulsor se observa que a bajas velocidades del impulsor el gas pasa por el
impulsor prcticamente sin dispersarse. Por consiguiente la potencia entregada
la fluido gasificado, Po, es igual a la entregada alfluido sin gasear, P. A medida
que se aumenta la velocidad del impulsor el gas es capturado por los vrtices
formados detrs de las paletas del impulsor y luego es dispersado. En este
momento la potencia entregada al fluido, Po, comienza a disminuir. Si la
velocidad del impulsor se incrementa, hasta un valor crtico, n"^, cambia la
configuracin de las cavidades, formndose las denominadas cavidades vrtice,
la relacin PolP,lcanza un valor mnimo, Nienow et al., 1978:
.'u.o9," 17.721
Dcn =
D1
n2.D^
*-=+=o'194'Fl'75 i Fa= f7.731
Donde, N^: nmero de redispersin; F^: caudal de gas, m3/s; n:velocidad del
impulsor, s-1; Do: dimetro del impulsor, m; g: aceleracin de la gravedad, 9,8
m/s2. Zlokarnik y Judat, 1967, encontraron tambin la siguiente relacin vlida
para nmeros de Froude entre 0,5 y 1:
Po'!"
= 1,36.F,0'ffi 17.741
,s.D1.p,
464
Donde, Po: potencia entregada alfluido gaseado en el punto de redispersin, W;
p,_: densidaddel lfquido en el punto de redispersin, kg.m't; g": factor de
conversin de unidades, 1 kg.m.s-2.N-1.
Datos del Ejemplo [7.1]: Volumen de licor, V = O,762 m3; Caudal de gas, Fo :
5,08.10-3 m3/s; Potencia disipada en llquido gaseado, Pc = 450,4 W. Nmero
de Froude, Fa = O,3O3.
v, = 5'08'10-s = G,6.io-o 4
s
].to,ssf
465
-
2- Retencin de gas, ry, (Ecuacin 7.69);
,' = (e,e.ro..
\ 0,265 )
*)o'' * z.rs..,o . f(#)''',rrr,o.,n'1[e,o.ro-.1n,
| 0,265
lO,OzrSz0,6 Il )
a'
= 0,1578.0,5 * 8,47.10-3 i u2 =
Donde, u1 :
0,265 m/s: velocid" d" flot."in de burbujas de dimetro entre
2 y 5 mm, McCabe y Smith (1976).
t(#)o'n{so''oe)"1
=l,N+
466
-
Nmero de Grashof; Gra, (Ecuacin 7.56):
t1 -- (n,zs.to-3)3.(997,0E).(9,8).(997,08 - 1,29)
= 941.48s,7
"r"
Kt = 4'58'10-4 Y
467
Ejemplo 7.4 Toma de muestras lquidas y gaseosas y evaluacin
del caudal de gases producdos durante la, fefmentacin aceto-
butlica
468
1. Descripcin de la fermentacin acetobutfica:
- Activacin de la cepa:
469
Tabla7.7 Composicin del medio empleado en la fermentacin, Silva E.,
(1989).
470
lnicialmente se preparan en un matraz 120 ml de medio vegetatvo; la composi-
con de este medio es siniilar a la del medio fermentativo (Tabla 7.7), pero con
80 g de miel de caa en lugar de 130 g. Posteriormente el matraz con medio
vegetatvo es inoculado con la cepa activa contenida en uno de los tubos.
- 2. Toma de muestras.
Una vez tomada la muestra, se sella con una pinza la lfnea B conectada con el
fermentador. El tubo descrito tambin se utliza para inocular el fermentador a
travs de l lnea A. Las muestras lquidas fueron analizadas por Alarcn y
Pieros (1989) para determinarles concentracin de clulas, concentracin de
glucosa, pH y solventes, Mclaughlin, 1., Meyer, C', y Papoutsakis, E' (1985)'
471
Figura 7.13 Botella para la toma de muestras lquidas, Alarcn, J,F, Pieros,
E.R., (1989).
Tomq de Jnocutoc on
ruestros B -
de gos
Line o
de
liquido
Despus de llenar la botella a travs del embudo con agua acidulada (2O o/o ptv
de NaCl V O,5 % p/v de cido ctrico) con el propsito de minimizar la cantidad
de gas carbnico disuelto en el lquido, segn el procedimieto sugerido por
Castillo, Contreras y Magario (1980).
472
\
Medidon VolvuIo
de dsco de dos
conqtes
Bureto
Botet(o Topon
tomo - inyectobte
nluestnos (
Enbudo
de vidrlo
Penlt(q So(ucion
etostico de jobon
Monguero
f texbte
Tan pronto como el gas desaloia el lquido de la botella, deben equilibrarse los
niveles del improvisado manmetro formado por la manguera flexible que
conecta la botella con el embudo mediante una adecuada manipulacin del
embudo, Cuando se logra e! equilibrio se cerran la vlvulas de la botella, se
cambia la posicin de la vlvula de dos niveles, se desaloja el lquido presente
en el embudo y se reemplaza la botella tomamuestra. El anlisis de las muestras
se realiza mediante cromatogratla de gases, Stambuk, J., (1970),
473
- 3. Determinacin del caudal de gas
- 4. Resultados
474
factor limitativo de la fermentacin. si se considera que tos ensayos
fueron
realizados en la fase de produccin de cidos (fase acidognica) y
no en ra fase
de produccin de solventes (fase solventognical, correspondiente a la fase
estacionaria del crecimiento, los rendimientos de sustrato en solventes (Tabla
7.8 y Figuras 7.1 7, l.1B V 7,l g) son relativamente bajos.
Observaciones:
475
- En la Figura 7 .21 se representa la variacin de la composicin de la mezcla de
gases con el tiempo.
81216
Tiempo de fermehtacion, horas
476
| ,t .1 Figura 7.16 Cintica de la fermentaci acetobutflica. Consumo de sustrato,
Alarcn, J.F, Pieros, E.R.(1 9891.
o,5
o
o4812 162024
Tiempo de fermentaclon, horas
47V
Figura 7.18 Cintica @ la fprrnpntacin acetqhutflica. Produccin (e acetona, ;
;, Alarcn, J.F, Pieros, E.R. (1989).
Concentracion de acetona, g/lltro
1,2
F--
1
o,g
o,6
o,4 :
tr
o,2
a
o4a262024
Tiernpo de fermentAcion, horas
.------.---.+----.-.-.
o,O
o,2 -""'.'-.'^i------:---------
o,7 .-.-i-.---l------..---
O---
o4a2162024
Tiempo da fermentecion, horas
f,78
Figura 7.2O Ctntica de la fermentacin acetobutllica. Produccin H. y COr,
Alarcn, J.F, Pieros, E.R. (1989).
200
150
too
50
o
8t216
Tlemp de,farmentaoion, horas
12 .-..t......-..'..-.... ----...+...-- /
10
a ..i..-...-.......-............i......-............-......i..-............-,..... ....t -.....-l
6
4 ll-/::
t--::
2 ----...".--.-.-.i..----.--...--.-.---.--....--.-...--...,...i..-.-.-........-..--i-
o
o 44P62024
Tiempo de fermentacion, horas
479
:' 7.4.7 Transporte de oxgeno en biorreactores para el cultivo de ;
tedos animates
-r
7.4.7.1 Condiciones ambientales tpicas
i3";",l.3.e:z oc.)
pH 7 - 7,s
Elsfuerzos cortantes por agitacj-n < 20 dinas/cm'
Osmolalidad deI medio de creeimiento 21O - 350 mosm.
Nutrientes:
Concentracin de oxlgeno disuelto 30 - 80 t saturacin
de ai-re
Coneentracin de glucosa O,l - 4 g/l-tro
Gfutamina 0,5 - 2 mM
Residuos:
Concentracin de ion amonio < 4 mM
Relacin cido lctico/J-actato no es crtica si se
control-a pH
Crecimiento:
vel-ocidad especfica de crecmiento, r o,001 - o,07 (hora) I
* Los intervalos de valores anotados corresporiden a clulas de mamfferos en
general. Una clula particular slo crecer dentro de un intervalo ms estrecho
tal como temperatura 37 t 0,5 oC o pH: 7,1 + 0,1 unidad.
480
En otros casos las clulas se cultivan para obtener algn producto como clulas
de eBidermis para atender victimas de quemaduras, o clulas de tejido del
pncreas para la produccin de insulina. Tambin se cultivan clulas para la pro-
duccin de vacunas (polio, aftosal, y para obtener protenas complejas como
enzimas, factores de crecimiento, hormonas y antcuerpos. t
Las clulas animales slo crecen en un ambiente fisicoqumico prcticamente
similar al del organismo vivo, Miller et al., 1991. Los nutrientes deben estar
disponibles en niveles estables y los subproductos deben retirarse continuamen-
te. En la Tabla 7.9 se presenta un resumen de las condiciones ambientales
tfpicas requeridas por las clulas de mamferos, Cherry, R.S, (1989),
Desde el punto de vista del diseo del biorreactor las clulas se pueden clasificar
como clulas en suspensin y clulas dependientes de anclaje, Las clulas en
suspensin crecen y funcionan normalmente cuando estn suspendidas en el
medio de crecimiento. Las clulas adherentes requieren una superficie para
adherirse y crecer hasta un tamao de aproximadamente 40 - 50 micrmetros
y un espesor de slo varios micrmetros. Estas clulas se multiplican hasta
cubrir completamente la superficie con una monocapa, estado conocido como
confluencia, en el cual la mayorfa de las clulas adherentes normales detienen
su crecimiento. Las clulas normales slo se multplcan entre 20 y 100 veces
antes de alcanzar la senescencia. Por otra parte las llneas de clulas transfor-
madas genticamente y las clulas de tumores cancerosos generalmente no
alcanzan el estado de confluencia ni tampoco la senescencia.
481
cubierta transparente para prevenir la contaminacin del cultivo, Otros sistemas
comerciales de cultivo de tejidos son los frascos T, los reactores de cartuchos
de fibras huecas, los reactores con clulas microencapsuladas, los reaetores de
* lecho empacado y los reactores de cultivo en suspensin.
#
482
Figura 7.22 Representacn esquemtica de un frasco T
topon
ffi
Fro.sco T
483
El valor de la derivada en y + 6y, en la ecuacin anterior, se expresa con los
: .i dos primeros trminos de la expansin de la serie de Taylor:
(+)
\
=(+\ . 914).u,
d! )r*q \dv ), dv \v )
17.77t
if
Por consiguiente:
c=.a.12*b.!+e 17'791 -
Donde, d, b ai constantes.
Por consiguiente:
' d'c &" =2'.o
.' -,i =2.a-v+b
- -''', , - ,: r-.7.8dl
dy " = Or, -''
De acuerdo con las condiciones de frontera: c : 0, en y : h, (Figura 7.22l.;
(dc/yl ': 0. Por tanto: .:
,*!
a_(g) : b=_2.a.y"=
2.D'D
t7.ell
rlozl r(oz)
,2.DD .z _ .h2 * e=O
, = '!o:)
2'D
-ft - v)2 t7 '82t
'i 1
Las otras condiciones de frontera son: c : c- en y : 0. Donde: c-: concentra-
cin de ofgeno en la sqperficie de separacin entre medio y aire, mmol Orlml.
484
Por consiguiente la profundidad, h, correspondiente a una concentracin de
oxlgeno igual a cero es:
n =(+*+)'. t7.83t
D
3600
(ar)2 hora
485
(y')
o = mr.Bo.ooo
# #^, = 24.w
#
No : Nmero inicial de clulas.
2- Punto de confluenca
-, ", ;,;: ; JV - 460.(X)0 = Jv;:exp (p.4 = 24,O00.erg(0@4.t)
Abol&
cry:r -Y2 = 1.530. ,roclqt/rt
cm2 ,6 nl ml
' t' :
;i
c*=r,9.10o4-o"
486
6- Profundidad, h, correspondiente a una concentracn de oxgeno iguala cero,
(Ecuacin 7.831:
487
ajas,clulas. Los valores,de esfuerzo cortante superiores a 3 dinasicm2 afectan
la morfologa de las clulas. En los reactores de fibras huecas se logran
concentracones de celulares hasta de 108 clulasicmt, comparables con las del
sistema vivo (10e clulasicm3). Sin embargo, a estas elevadas concentraciones
celulares los gradientes de concentracin, especialmente de oxgeno disuelto,
en las direcciones axial y radial, pueden conducir a la formacin de zonas
necrticas. Una de las principales desventajas de estos reactores es su costo,
($ 150 - 500 dlares/cartuchol. Adems, estos reactores no son reutilizables ni
permiten la toma de muestras.
- o'(#L.o* * r(o)'A'6R
'(#)-'=
Dotde:A=2..r-L t7.851
488
:, i- Por consiguiente:
| *\ ^( \
- =*)'= o'V';)'
D.lr.
|
*
''' (c.2)'6r 17'861
' "
Donde, D: coeficiente de difusin del oxgeno en agua, cm2/s; A: rea lateraldel
capilar, cm2; L: longitud de! capilar; c: toncentracin de oxfgeno, mmol Orlml;
r(O)r: velocidad de consumo de oxlgeno, (OURI, (mmol Or)/(cm3.s).
P+
El valor de la derivada en 6R, en la ecuacin anterior, se expresa con los
,_ dosprmero""^'&*;",.:ffi;.;t:il:
r7B't
Por consiguiente:
(o) !q)
\s = r-(-q"-. 1RdR) t7.881
[n'
!h.L\ - r(o)'R
dr[ dR) D
t7.891
t7.921
489
Despus de integrar la ecuacin [7.90], se obtiene:
r tO^\.R2
t7.931
'=il-'+ct'lnR+c2
Las otras condiciones de frontera son: c : e* en Fl : R", Donde: c*: concentra-
cin de oxlgeno en la superficie interior de la fibra, mmol Orlml. Por consiguien-
te el valor de l constante de integracin c, es:
(oz).R?
cq =
' c* - 4.D - '(oz)'Rl
2.D
,o * c
[7 41
c = c,
4.D I "
*'(o") .(n, - n1' -z.n?.t )
R,)
t7.951
490
sumnistrar grandes cantidades de oxlgeno. Estas microesferas porosas tambin
son utilizadas en los lechos fluidizados densos, en este caso, provistas de
diminutas esferas metlacas en su centro para aumentar su densidad relativa y
mantenerlas en el lecho.
491
Algunos autores como Finn, 1967; Aiba et al., 1 973; Oldshue, 1 983 y Charles,
1985; consideran que los mtodos de transferencia de calor generalmente son
diferentes a nivel de laboratorio y a nivel de planta de produccin y analizan una
estrategia de cambio de escala fundamentada en el mantenimiento de una
C,_, de oxgeno disuelto, por encima de un valor crtico.
concentracn constante,
Entre los criterios de cambio de escala utilizados con mayor xito estn potencia
por unidad de volumen, tiempo de mezcla, coeficiente volumtrico de transferen-
cia de masa y velocidad de la punta del impulsor. La aplicacin de estos criterios
requiere un profundo conocimiento del proceso y partcularmente del paso
limitante en la obtencin del producto.
7.5,1 Agitacin
P g, V-o,sl t7.961
V
? r.
Esta ecuacin significa que a nvel de laboratorio,Y = 0,1 m3, las potencias
tfpcas son de 10 - 15 W/litro. A nivel de planta piloto, Y = 1- 5 m3, las
potencias son de 6 - 8 W/litro, y nivel industrial se aplican potencias de 1 - 2,5
Wlitro. Einsele tambin estableci los siguientes criterios:
492
- La velocidad de la punta del impulsor (n.Drl eS prcticamente independiente
del volumen del reactor y vara entre 5 y 6 m.s-1.
Charles M., (19851, presenta dos ejemplos sobre los problemas y posibilidades
del cambio de escala en fermentacin. En el primer ejemplo analiza el consumo
de potencia en un reactor de 100 m3 de volumen til (Dr: 4 m; Do: 1 ,6 m; rt: 2
revoluciones/s; Caudal de aire: F = 20 m3/minuto, en condiciones estndar;
viscosidad delcaldo: ! = 1kg m-'s-11, Elconsumo de potencia en elcaldo sin
aerar, calculado segn la Ecuacin 17 .121, es 527 ,2 kW. El consumo de poten-
cia en elcaldo aerado, calculado por el mtodo de Oyama y Endoh, (1955), es
408,7 kW. El consumo de potencia en el caldo aerado, calculado segn el
mtodo de Michel-Miller, Ecuacin 17.1 81, es 667,4 kW. Hay una discrepancia
de 63o/o en los dos rfltimos resultados, pero debe tenerse en cuenta que Michel .
493
sido incorporadas explcitamente en las ecuaciones. Por onsiguiente, las
ecuaciones deducidas emplricamente usualmente no son aplicables en
situaciones apreciablemente dferentes de las condiciones para las cuales fueron
deducidEs.
494
Los circuitos externos de refrigeracin evitan las restricciones impuestas por el
diseo del reactor e independizan la transferencia de masa de la transferencia
de calor. Usualmente en un intercambiador externo se logran mayOrs coefi-
centes de transferencia de calor que en los sistemas de camsa o de serpentn.
495
- La seleccin de un agitador para asegurar la operacin del sistema en una zona
de conveccin forzada, normalmente resulta en el diseo rns econmico y, por
consiguiente, o es una buena prctic disear un agitador para obtener un
coeficiente especffico de transferencia de calor,
f7.97'l
K,a u, (+)" v!
496
En el Ejemplo 7.6 adaptado de Oldshue, 1983, se muestra una estrategia de
cambo de escala donde se mantiene constante un parmetro especfico en un
reactor de 100 litros y en otro de 10.000 litros. En este caso los dems
parmetros no pueden controlarse y toman valores diferentes de los originales
(Tabla 7.10) a medida que cambia el volumen del sistema.
Solucin.
498
ambos reactores, columnas A y B (Tabla 7.1O):
+=4$=1oo;
,vP 100
ad,,ts: v a ol a ),
Drn=(1))1F=4,A4
+ d nl .oln=nf,. ol,n
(1) . (1) = o3. G,ilF
ns = 0,36
499
El caudal de aire, por unidad de volumen de licor, suministrado al reactor de 10
m3 es O,36 veces menor que el correspondiente n el reactor de 0,1 m3.
Reactor de R6acEor de
100 litroa 10.000 litroe
A ED
1 100 2t5t 2t,5 0,27-5
500
ne = O'215
nn = Q'Q$!
PROBLEMAS
502
Calcular: 1- La cantidad de sulfito de sodio, mol/litro, que reacciona en 624 s;
2- Eloxgeno que reacciona con el sulfto de sodio, mol/litro; 3- La demanda de
oxgeno, en (g Or)/(litro.s); 4- La solubilidad del oxfgeno en equilibrio con el aire,
c-r, g/litro. 5- El valor de K,_a, {coeficiente volumtrico de transferencia de masa,
s-1).
7.2Un reactr de mezcla completa (D, : 1,2 m) se llena con agua hasta una
altura H = 0,8 m. El tanque est equipado con 4 pantallas deflectoras de
anchura J : 0,12 m y un impulsor de turbina de 6 hojas planas que gira a 260
rpm (dimetro del impulsor: D : 0,4 m). Aire a 25 oC (Presin local : '10,8
psi; Presin manomtricd = 5 psi) entra al reactor por un orificio situado debajo
del impulsor a raz6n de 2S litros/s.
s03
velocidad superficial del aire, m/s; B- La velocidad superficial del aire correspon-
diente al punto de redispersin, m/s; 9- La velocidad en la punta del impulsor;
10- El calor generado por metabolismo, por la agitacin mecnica y por la
dispersin del aire, W/(litro); 1 1- El coeficiente de transferencia de calor entre
la camisa y el licor; 12- El coeficiente de transferencia de calor entre el serpentn
interno y el licor; 13- El rea de transferencia de calor requerida para mantener
el caldo a 28 oC. Suponer que el fluido de enfriamiento es agua cuya
temperatura varla desde 12 hasta 16 oC.
= o.(1"- . ? L\
'(o") [n' R dR)
Tambin:
c=c* -'=(':).(^:-*')
6.D
504
BIBLIOGRAFIA
Akita, K. and Kawasaki, M., (1983). "Gas holdup in airlift reactors," Proceeding
of the Forty-eighth Meeting of Chemical Engineers of Japan, Kyoto,
Japan, p.122.
Akita, K. and Yoshida, F.,(1973), "Gas holdup and volumetric mass transfer
coefficient in bubble column," I & E.C. Proc. Des. Dev. 12:76-80.
505
Beloshitskii, A., Lanina, G., and simulik, M. (1983). "Analysisof theErrorof the
Bubble Method of Measuring small Gas Mass Flow". Measurements
Tecniques, 26, 9, Sep. pp. 780-783.
Calderbank, P.H, (1967). En V,W. Uhl yJ.B. Gray (eds.), "Mixing: Theory an
Practice,n vol ll, Academic, New york.
Calderbank, P.H., y M.B. Moo-Young, (1961). "The continuous phase heat and
mass transfer propertes of dispersions," Chem. Eng. Sci. 16: 3g-b4,
Casson, O., Baker, M.R., Warr, S., and Emerya, N. (1g87l. "On the physical
and physiological stablization of entrapped cells in calcium alginate
. fibres,l' Procc. 4 th. European Congress on Biotechnology, 2: 261. ..
506
Charles, M. 978). "Technical aspects of the rheological propertics of microbial
(1
cultures," en Adv. in Biochem. Eng. Vol.8: Mass Transfer in Biotechno-
logy, Ghose, T.H,, A. Fiechter, and N. Blakebrough, editors, Springer-
Verlag, Berlin, pp. 1-62,
Chen, C, Dale, M.C., and Okos, M.R. (1990). "Minimal nutritional requirements
for inrmobilized yeast," Biotechnology and Bioengineering, 36: 993-
1001.'
Cooper, C. M., Fernstrom, G. A., and Miller, C' A,, (1944). lnd. Eng. Chem., 36
504.
Cummings, G. H., and West, A. S. (19501. lnd. Eng. Chem. 42: 2303-2313'
Deindoerfer, F.H., and Gaden, E.L.. (1955). "Effects of liquid physical properties
on oxygen transfer in penicillin fermentation," Appl. Micro. 3:253'257 '
507
'Doremus, M., Linden, J., y Moreira,A, (1985). "Agitation and Pressure Effects
on Acetone-Butanol Fermentatio n" . Biotech nology and Bioengin eering,
I 27:'G,,'p. 852-860.
Dunlap, l, R., andRushton, J. H. (1953l,. Chem. Eng. Prog. Symp' Ser.49 (5):
137.
Foust, A. S., Wenzel, L. A., Clump, C, W., Maus, L.' and Andersen, L' B.
(1980). "Principles of Unit Operations," Wiley, New York.
508
Herbst, H., Schumpe, A., y Deckwer, W.D. (1992). "Xanthan production n
stirred tank fermentors: oxigen transfer and scale-up," Chem. Eng.
Technol.
Ho, C.S,, M. J, Stalker, and R.F. Baddour, (1987). "The oxigen transfer coeffi-
cient in aerated stirred reactors and ts correlation with oxigen diffusion
coefficients," en " Biotechnology Processes,". American lnstitute of
Chemical Engineers, Ho., C.S., J.Y., Oldshue (ed.). New York.
Kaye, G.W.C., y T.H. Laby., (1973). Tables of physical and chemical constants.
Longmans, Londres. l
King, F.G., and Hossain, M,A. (19821. "The effect of temperature, pH, and
initial glucose concentration on the kinetics of ethanol production by
Zimomonas mobilis in batch fermentation," Biotechnology Letters, 4,
(8), 531-536
509
: , Lee, J.M. (1992). "Biochemical Engineering," Prentice Hall, Englewood Cliffs,
New Jersey.
Metz, B, Kossen, N.W.F., and Van Suijdam, J.C. (1979). "Rheology of mould
suspensions" . Advs. in Biochem. Eng. 1 1 ,103-1 56.
Nagata, S,, (1975). "Mixing: Principles and application," pp. 59'62. John \/iley.
New York, N.Y.
510
Nienow, A.W., y Miles, D. (1969). "A dynamometer for the accurate measure-
ment of mixing torque," J. Sci. lnst. (J. Physics E/. Series 2,2:994-
995.
Nienow, A.W., Wisdom, D.J., y Middleton, J.C. (19781. "The effect of scale
and geometry on flooding, recirculation and power in gassed, stirred
vesssels," Procc. 2nd. European Conf. on Mixing. Cambridge, BHRA
Ffuid Engineering Centre, Cranfield, lnglaterra.
511
-) Pu, H,T., and Ypng, R"Y.K. (1988). "Diffussion of sucrose and yohimbine in
calcum alginate gel beads with or without entrapped plant cells,"
Biotechnology and Bioengineering, 32, 891 -896.
Roels, J.A., J. Van Den Berg, and R. M. Vancken. (1 974). Biotech. Bioeng, 16,
181 .
Sato, K,, (1961). "Rheological studies on some fermentation broths. (lV) Effect
of dilution rate on rheological properties of fermentation broth,' J. Fer-
ment. Tech. 39, 517 -52O.
Sideman, S., Hortacsu, O., and Fulton, J. W., (1 966). lnd. Eng.Chem., 58 (7),
32.
512
Stambuk, J., (1970). "Manual prctico de cromatografa de gases". The Perkin
Elmer Corp. p. 1277-1281.
Su, W.W., Caram, H.S.y Humphrey, A'E. (1992). "Optimal design of the
tubular microporous membrane aerator for shear sensitive cell cultures,"
Biotechnol. Prog. 8:19-24
Taguchi, H., lmanaka, T., Teramoto, S,, Takatsu, M., and Sato, M. (1968)'
"Scale-up of glucoamilase fermentation by Endomyces sp.," J. Ferm.
Tech. 46: (10), 823-828.
Uhl, V. W., and Gray, J. B. (1966). "Mixing, Theory and Practice," Vol 1,
Academic, New York.
513
_ ) Van't Riet, K., (1979). tnd. Eng. Chem., process Des. Dev., 19, 3S7.
Wang, D. L C., Cooney, Ch. L., Demain, A. L., Humphrey.A. E., and Lilly, M,
(1979). "Fermentation and Enzime Technology.', John Wiley & Sons,
New York.
514
INDICE DE MATERIAS
515
Biomasa
valores de pH para influencia de la concentracin
el desarrollo 281 sobre la velocidad especfica
decrecimiento... 288
Balance de energa 164
Calor
del proceso aerobio de rea de transferencia 425
produccin de levadura . . . .. . 171
Calor. coeficiente
del proceso anaerobio de detransferencia... 429
produccin de etanol ....... 114
Calor de combustin 142
Balance de materiales 52 de las clulas 152
consideraciones sobre de la biomasa,
cintica y simulacin determinacin 1 50,1 52
de reactores 322
Calor de reaccin 145
de'elementos qulmicos 54
en una fermentacin Calor especfico en fermentacin 170
anaerobia 56
Calor generado
de carbono durante el por metabolsmo 169
crecimiento de S. cereu iae 83 por mol de 02 . 150
por actividad metablicr . . 166
de oxgeno durante el
crecimiento de S. cerevisiae . . . 84 por metabolsmo aerobic en
un reactor por lotes 167
decarbono yoxgeno ....... 55
de electrones disponibles 57 Calor, produccin
bajo represin por glucosa . . 1 53
en catlisis enzimtica
en fase heterognea 245 durante el crecimiento
microbial 1 55
formulacin de ecuaciones
cinticas q0 C br transferido
enfermentacin... 424
Bibliografa en un reactor aerbico 437
captulo 1 . ... . 46 en cambio de escala 493
captu|o2.... 116 encondcionesinestables... 436
capftulo 3 181
491
captu|o5.... 351 agitacin 492
capftulo6.... 4O2 comportamientodevarlables. 498
captu|o1.... 505 transferenciadecalor 493
transferencia de masa 496
Biocatalizador 30
Capacidad calorfica
Biomasa : enfermentacin... 17O
modelos cinticos no
estructurados para crecimiento 282 Caracterstcas de la lana mineral 390
516
7 Carbono Cintica
balance 55 evaluacin de parmetros
a partir de datos
balance durante el crecimiento experimentales . , ' . 301
de S. cerevisiae 83
modelos cinticos
fuentes 89 noestructurados .... 282
qumicos 24O t
Cintica Concentracin
de las reacciones
catalizadas por enzimas . . . . . 185 de nutrimento y
concentracin de clulas 92
modelos cinticos 2OO
de la destruccin de de sustrato y velocidad de
microorganismos mediante una reaccin enzimtica . . . . 203
calor htlmedo 357
Conservacin de energla 121
del crecimiento de biomasa,
consumo de sustrato y Consumo de potencia
formacin de productos 263 por agitacin 421
517
Control ambiental, Diseo de un bioproceso
medios de cultivo i : .. . . . . . 107 medios 36
de aire 37
Cultivo de tejidos animales 480
separacin y purificaoin
Datos de productos de la
composicin elemental de ingenierla bioqumica. 38
diversos microorganismos 68
extraccin llquido-lquido
Datos de la hidrlisis de antibiticos 42
del almidn
con o-amilasa 207 filtracin de clulas
en presencia de o-dextrina . . . 229 atravsdemembranas .. .. 41
en presencia de maltosa 228
separacin de clulas 39
Datos del crecimiento productos ntracelulares 39
de Escherichia coli productos extracelulares . . . . 40
en un cultivo por lotes 348 purificacin final del producto -
,,O,
Datos experimentales de recuperacin de antibiticos ,
la velocidad inicial de y protenas medante
la reaccin de hidrlisis intercambio inico 42
de acetil colina 258
ruptura de clulas 40
Datos termodinmicos
de algunos compuestos Diseo de medios de
representatvos 141 crecimiento y produccin 88
Datos tlpicos de calor consideraciones tcnco
especlfico y capacidad econmicas 94
.
calorfica en fermerttacin. . . 17O 97
Densidad de la biomasa . . . 264 fuentes de carbono 98
aceites vegetales 101
Determinacin de la frmula alcoholes sintticos 100
de un microorganismo tpco . . 69 licor de sulfito . ' 1O0
melazas, cebada y
Difusin de oxgeno extracto de malta 98
hidrocarburos r01
enfrascosT...... 482
ejemplo ..:,:.:: 485 fuentes de nitrgeno
a travs de capilares 487 inorgnicas y sintticas 101
518
I
519
' !. Enzimas Enzimas
teiminacin del tpo relacin entre la
de reaccin enzimtca 226 concentracin de sustrato
y el tempo de reaccin,
- energfas de activacn en un reactor por lotes,
e inactivacin. 198 empacado con enzima
microorganismos 362
Enzimas, modelos de
inhibicin seleccin del
competitva 223 microorganismo de diseo. 370
no competitiva. 225
por sustrato. 231 Esterlzacin de aire 384
calor . 386
nmero de recambio , . . . 193,194 compresin politrpica 396
calentamiento rlirecto 388
reactores enzimticos 233
pr lotes 234 calentamiento indirecto
continuo de flujo tapn . . . . . 234 con gases combustibles 388
524
Esterilizacin de aire Factor de rendimiento
filtracin 388
filtros empacados 389 en el crecimiento aerobio
filtros de vela 391 de S- cerevisiae 74
' filtros de membrana 392
en medios mfnimos 78
Estudio del comportamiento en medios complejos 79
de algunas variables en el
procedimiento de cambio energla liberada
de escala 498 por catabolsmo . . 158
521
Fermentacin aerobia Formacin de producto,
' formulacin de ecuaciones modelos asociados al
522
f' Hidrlisis del almirln Melazas de remolacha y caa,
composicin 99
evaluacin de parmetros . ., 204
cono-amilasa.... 2O7,2Og Metabolsrno, microbial 5
anlisis termodinmico . . . . . . 12A
con o-amlasa en presencia
de maltosa. 228 procesos de produccin
de energa 7
con o-amilasa en presencia gluclisis 8
de a-dextrina 23O
rutas metablicas:
Hidrlisis del azcar de caa Embden-Meyerhof -Parnas I
por accin de la enzima del fosfato-pentosa 11
nvertasa. 235 Entner-Doudoroff . . 12
respiracin 13
pro9rama:
, C:\|SIM\|NVTSA1.S|M. 236 ciclo del cido
tricarboxllico 13
progfama:
C:\GWBASIC\INVTSAI.BAS- . 237 transporte electrnco
y fosforilacin
Hidrlisis de sacarosa oxidativa 16
con invertasa, velocidad
inicial de la reaccin 259 reacciones de oxidacin
reduccin 16
lntermediario qufmico
comn, principio del 138 Medios de crecimiento
y produccin, diseo 88
lsoenzimas y enzimas
alostricas 187 Microorganismos
composicin elemental 66
Lenguajes de simulacin,
aplicacin en ingenierfa 43 determinacin de la
composicin 69
lenguajes de simulacin contnua 45
Modelos cinticos
Licor de las reacciones
de maceracin de malz 102 catalizadas por enzimas 200
de papa 102
de sulfito 100 de Michaelis-Menten . .. . 2OO,2O4
de Briggs-Haldarie 208
Materias primas en la industria
de procesos bioqumicos. 95 Michaelis-Menten
523
- ., Modelos cinticos no Monosacridos y oligosacridos
estructurados Para en la cebada 99
crecimiento de biomasa,
consumo de sustrato Nitrgeno, fuentes
- yformacindeproducto. 282 inorgnicasysintticas..... 101
524
pH Productos de la ingenierfa
efecto sobre la velocidad bioqulmica,
de crecimiento de algunas purificacin 38,41
bacterias. 280 extracelulares 40
Problemas Programa:
Capltulo 2 114 C:\GWBASIC\HERBERTl.BAS 324
Capltulo 3 178 C:\GWBASIC\HERBERT2.BAS 336
Capftulo 4 255 C:\ISIM\MENTEN.SIM 212
Captulo 5 347 C:\GWBASIC\MENTEN.BAS . . 213
Capftulo 6 400 C:\lSlM\lNVTSAl.SlM 236
Capltulo 7 502 C;\GWBASIC\INVTSA1.BAS. . 237
C:\OUATTRO\MONOD.WOI . 308
Proceso aerobio C:\GWBASIC\MONOD.BAS . . 312
ecuacin de crecimiento . . . . . 62 C:\GWBASIC\LEDUYZAJ.BAS 317
de produccin de levadura C:\GWBASIC\SPLINE.BAS. . . 32O
a partir de glucosa 171 C:\lSlM\THlELEl.StM 25o
Proceso anaerobio Prlogo xvu
ecuacin de crecimiento . . . . . 64
Reactor ...... 33
obtencin de etanol a partir de a escala de laboratorio,
glucosa '174
evaluacin de los gases
Productividad y producidos durante la
grado de conversin 330 fermentacin 467
525
Reactor evaluacin de los gases
continuo, calor generado producidos durante la
por metabolismo aerobio . . . . 168 fermentacin en reactores
a escala de laboratorio . . 467
continuo de flujo tapn 327
contnuo de mzcla completa . 328 transporte de oxfgeno en
biorreactores para el
empacado, relacin entre cultivo de tejidos animales 480
ceudal y grado de conversin . .t 217
Fleduccin fraccional
relacin entre concentracin de la poblacin
de sustrato y tiempo de 'de microorganismos
... . 362
reaccin 221
Rendimiento 70
en serie 342,343 sustrato en biomas . . . . ., 70
oxlgenoenbiomasa.... 70
Reactores de electrones en biomasa 71
enzimticos 233 en el crecimiento aerobio 71
equivalencias ,..;.. . 72
pof lotes 234,322
en el crecimiento aerobio
por lotes con alimentacin '
de S. cerevisiae . . . . . . . 74
contrnua. 334
de sustrato en producto 75
continuo de flujo tapn . . . 234,321 mximo de sustrato en producto 76
contnuo (CSTR) .'.... 328
'
evaluacin del rendimiento t'
contnuo de mezcla mximo en la produccin de
completa con rcirculcn 338 cido ctrico 77
en serie 342
coeficiente verdadero en
con circulacin lquida medios mnimos 78
inducida por aire "airlift' . . . . 343 verdadero en medios complejos 19
verdadero del oxgeno 79
Reactores equipados con: '
Rendimiento '
526
Termodinmica, energa Transferencia de calor
libre estndar 130 en fermentacin
528
\
t.-, Transferencia de masa Velocidad especffica
-.
529