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DESARROLLO DEL INCULO Y
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CULTIVO CELULAR POR LOTE DE
PICHIA STIPITIS NRRL Y-7124
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Ao del buen servicio al ciudadano

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
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FACULTAD DE INGENIERA
E. A. P. DE AGROINDUSTRIA
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Pre-Informe n1:

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Docente:
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Ing. Augusto Castillo Caldern

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Integrantes:
CCERES PEREDA MERYSHELL
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ENCINAS ESTRADA GREISSY
LOREO JIMENES ESTRELLA
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PALACIOS HILARIO ANTONY
VALERIO MOLINA MARIB
wertyuiopasdfghjklzxcvbnCurso:
LABORATORIO DE BIOPROCESOS
mqwertyuiopasdfghjklzxcv Ciclo:
VII
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Nuevo
GrupoChimbote- Per
de prctica:
2017
B
 NDICE
I. OBJETIVOS:................................................................................................... 3
I.1. OBJETIVOS GENERALES:........................................................................3
I.2. OBJETIVOS ESPECFICOS:.......................................................................3
II. METODOLOGA EXPERIMENTAL:....................................................................4
A. REACTIVOS Y SOLUCIONES......................................................................27
B. PROCEDIMIENTO..................................................................................... 27
Anlisis Cromatogrfico..................................................................................... 27
CONDICIONES CROMATOGRAFAS..................................................................28
III. MATERIALES INSTRUMENTOS Y/O REACTIVOS:........................................30
III.1. Medio de Mantencin:................................................................................. 30
III.1.1. Materiales e instrumentos:.....................................................................30
III.1.2. Equipos:............................................................................................. 30
III.1.3. Reactivos:........................................................................................... 30
III.2. Medio de Activacin:.................................................................................. 31
III.2.1. Materiales e instrumentos:.....................................................................31
III.2.2. Equipos:............................................................................................. 31
III.2.3. Reactivos:........................................................................................... 31
III.3. Medio de fermentacin:............................................................................... 31
III.3.1. Materiales e instrumentos:.....................................................................31
III.3.2. Equipos:............................................................................................. 32
III.3.3. Reactivos:........................................................................................... 32
IV. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:..............................................................35
VI. ANEXOS:....................................................................................................... 35
 RESUMEN
En el presente trabajo se ha desarrollado el cultivo celular de la cepa Pichia
stipitis NRRL Y-7124 realizando su manipulacin desde su estado inactiva en
agar. El cual ha seguido una serie de procedimientos secuenciales tales como
activacin, inoculacin en agar, dndole todas las condiciones para que pueda
crecer, asimismo se inocul en un medio rico (15 ml), el cual tiene todos los
nutrientes que esta levadura requiere para su ptimo desarrollo.

Luego de un evidente crecimiento en el medio rico, la totalidad de este medio es

diluido dentro de otro medio (inoculacin lquida lquido) al que se denomina
mnimo (200 ml) por sus limitaciones en cuanto a nutrientes, ya que este contiene
solo los componentes necesarios para que el microorganismo pueda subsistir,
tales como fuente de carbono que en nuestro caso fue xilosa.

Se trata entonces de observar y comparar como se va produciendo el crecimiento

de la biomasa celular con los nutrientes necesarios para tal accin y al mismo
tiempo como va disminuyendo el sustrato en este caso principalmente la xilosa, lo
cual fue posible determinar por el mtodo DNS (azcares reductores) con las
muestras tomadas cada hora durante un tiempo de 12 horas. y la generacin de
productos como el etanol el cual fue medido mediante CG (cromatografa de
gases).

Se obtuvo un rendimiento promedio de: biomasa de 0,237 g/g glucosa. A partir de

la biomasa obtenida se pudieron obtener los parmetros cinticos los cuales
fueron un max = 0,225 hr-1, YP/S =1,736 x 10-3 g de Etanol/g de Fructosa, QX/S =
0,056 g de Biomasa/hora.
I. INTRODUCCIN

En la actualidad muchos de los alimentos son obtenidos gracias al manejo y

conocimiento del crecimiento de microorganismos. Resulta entonces importante el
conocimiento de las condiciones en que estos microorganismos puedan optimizar
sus productos. Para ello la preparacin de medios de cultivo para estos
microorganismos es un buen punto de partida para conocer sobre su
comportamiento, as como tambin el seguimiento de la cintica nos proporciona
datos mucho ms prcticos y exactos sobre la velocidad y caractersticas del
crecimiento del microorganismo tratado.

La preparacin de medios para el desarrollo de procesos de fermentacin es

una etapa fundamental para asegurar la productividad de los mismos. Los
componentes de los medios constituyen los efectores externos de naturaleza
qumica que desempean un rol esencial en los procesos ya que deben cumplir
con los requerimientos del crecimiento y de formacin de productos y adems
suministrar energa para la sntesis de metabolitos y para el mantenimiento celular.
No obstante que los microorganismos varan considerablemente respecto de los
nutrientes que pueden necesitar.

Es as que para esta prctica hemos centrado nuestra atencin en el

microorganismo (pichia stipitis NRRL Y 7124), iniciando la resiembra como
estado de cepa congelada, para luego resembrarlo en medio rico, empleando
como fuente de carbono la xilosa, procurando su rpida activacin, para poder
sembrar la levadura en un tiempo determinado y en un medio mnimo.
II. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVOS GENERALES:

Disear y realizar una experiencia de cultivo celular por lotes en
matraces, empleando una cepa Pichia stipis NRRL Y-7124,
evalundose el efecto de la fuente de carbono y la velocidad de
agitacin en la cintica de crecimiento y la produccin de etanol.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS:

Disear y preparar el medio liquido de cultivo.
Lograr la activacin celular y desarrollo del inculo.
Determinar la cintica de crecimiento de pichia stipitis NRRL Y-
7124.
Determinar la cintica de consumos de la fuente de carbono.
Determinar la cintica de generacin de etanol.
Determinar el M , q s y los rendimientos del nutriente

limitante en clulas y en etanol, adems de las respectivas

productividades en clulas y en etanol.
Evaluar el valor del pH durante la cintica.
III. MATERIALES Y METODOS

Material Biolgico: Cepa de Pichia stipis NRRL Y-7124

PREPARACIN DE SLIDO DE MANTENCIN:

Materiales y Equipos:
Balanza analtica
Matraz Erlenmeyer de 250 ml.
Mechero Bunsen
Gradilla
6 Tubos de ensayo con tapas.
Pipeta de 10 ml.
Vaso de precipitado.
Cocina a gas
Olla a presin.
Varilla de vidrio
Guantes.
Esptula

Reactivos y nutrientes:
Agua destilada.
Extracto de levadura.
Peptona.
Extracto de malta
Agar.

PREPARACIN DE MEDIO DE ACTIVACIN:

Materiales y Equipos:

Balanza analtica
2 Matraz de 125 ml.
 Una probeta de 100ml
Micropipeta
Estufa
Algodn
Gasa
Varilla de vidrio
Esptula
Reactivos y nutrientes:

Glucosa
Extracto de levadura
Solucin de sales
Agua destilada
Alcohol

PREPARACIN DE MEDIO DE FERMENTACIN:

Materiales y Equipos:

Matraz de 1 L
2 Matraces de 125 ml.
Varilla de vidrio
Balanza analtica
Gasa y algodn
Olla a presin
Reactivos y nutrientes:
Glucosa
(NH4)2SO4
Solucin de sales
KH2PO4
MgSO4.7H2O
Extracto de Levadura
 Agua destilada
Alcohol

INOCULACIN AL MEDIO DE ACTIVACIN:

Materiales y equipos

Matraz de 125 ml.

Algodn
Gasa
Agua destilada
Aza bacteriolgica
Shaker
Mechero Bunsen, trpode y rejilla

Espectrofotmetro Balanza Analtica Centrfuga

Horno Esterilizacin Agitador Autoclave

 Incubadora Shaker

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

V. CONCLUSIONES
VI.REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
VII. ANEXOS