UNIVERSITATEA TEFAN CEL MARE DIN SUCEAVA

FACULTATEA DE INGINERIE ALIMENTAR

PROIECT DEPISTAREA I ANALIZA

DROGURILOR
-Metode cromatografice pentru analiza cocainei-

Cadru didactic: Student:Galben Irina Mihaela

Prof.conf. dr. Poroch Maria FIA CEPA IV/1B

SUCEAVA, 2017
 Cuprins

Introducere...........................................................................................................................3
Cap.I Cocaina......................................................................................................................5
Cap. II Originile i sursele cocainei.....................................................................................6
Cap.III Testele prezumptive pentru cocain........................................................................7
Concluzii............................................................................................................................15
Bibliografie........................................................................................................................16

2
 Introducere

Cocaina ca i sare hidroclorid, uneori cunoscut ca i "zpad" este i ea alb

cu miros tipic de HCl i poate fi re-convertit ntr-o form de baz liber, care este mai
volatil pentru fumat. Astfel sunt obinute buci lustruite care sunt cunoscute ca i
"pietre" sau "sprturi".

n statul Kingdom, SUA cocaina este listat ca i drog care face parte din clasa A,
grupa 2 ca i ecgonina , benzoil ecgonina , ester metil ecgonina (fig.4) i orice alt derivat
al ecgoninei care este convertibil la ecgonine sau cocain.

Fig.1 Cocaina Fig. 2 Ecgonina

3
Fig. 3 Benzoil ecgonina Fig. 4 Ester metil ecgonina

4
 Cap.I Cocaina

Cocaina poate fi administrat prin diferite ci. Drogul este absorbit n fa de

ctre mucoasele nasului, alternativ poate fi administrat prin injecii. "Sprturile"i
"pietrele" pot fi administrate prin fumat.

Cantitatea luat depinde de gradul de dependen al drogului i frecvena

folosirii acestui drog de ctre utilizatori care duce la numeroase efecte. Efectele bune
sunt :
stare de vigilen
euforie
performan atletic
gndire limpede
concentraie i creterea energiei.
Efectele nedorite al drogului la doze nalte sunt :
insomnii
iritabilitate
confuzie
fric
paranoia
halucinaii
agresivitate
Utilizatorul poate deveni extrem de antisocial i agresiv, ceea ce poate duce la atac de
inim sau moarte.

5
 Cap. II Originile i sursele cocainei

Cocaina se gsete natural n materialul plantei, ca i alcaloizi , bazai pe

structur de tropan care pot fi izolai din materialul plantei i convertii n cocain.
Aceasta include ecgonina, ester metil ecgonina i benzoil ecgonina. Sunt 2 principale ci
prin care extracia poate fi ndeplinit nainte de sinteza cocainei.
2.1 Extracia i prepararea pastei de cocain
Frunzele din care cocaina va fi preparat sunt recoltate i inute la soare.
Dup aceasta, pasta de cocain este obinut prin 1 sau 2 metode.
Prima metod implic: umezirea frunzelor i macerarea lor cu acid sulfuric diluat,
acesta formnd sruri de sulfat solubile n ap ale alcaloizilor. Mixtura este apoi extras
cu kerosen (petrol lampant). Dup faza de separare stratul apos este bazificat cu
amoniac , var sau carbonat de sodiu i alcaloizii precipit. Ei sunt apoi recptai prin
filtrare.
A doua metod implic : bazificarea frunzelor cu carbonat de sodiu sau potasiu. Are loc
macerarea frunzelor, se adaug kerosen cu care alcaloizii sunt extrai. Acidul sulfuric
diluat este folosit apoi pentru a colecta alcaloizii sub form de sruri de sulfat. Stratul este
bazificat i alcaloizii filtrai i recptai.
Bazificarea mixturii rezult la nceput n alcaloizii prezeni n cele 3 forme de
baze i arat c sunt solubile n solveni organici (kerosen) n care alcaloizii au fost
extrai. n urma adugrii de acid rezult forma de sulfat a drogului produs. Adugarea de
baz neutralizeaz acidul returnnd drogurile n formele apolare, de baze libere, care nu
sunt solubile n ap i de aici vor fi precipitate.
2.2 Sintezele cocainei pure
Alcaloidul tropan extras din frunze poate fi folosit pentru a prepara cocaina
pur. Alcaloizii sunt hidrolizai folosind HCl 1M, care produce ecgonina. Mai trziu este
tratat cu 10% bor triclor n metanol, pentru a obine esterul metil ecgonina care
reacioneaz cu benzoilclor producnd cocaina.
2.3 Identificarea calitativ a cocainei
n termeni morfologici, frunza de cocain are dou linii care merg paralel
ctre interiorul frunzei. Taxonomic, este dificil a identifica frunza i tulpina speciilor pe
baz morfologic (frunz i floare).[5]
Pentru a stabili c frunzele provin de la genul Erythroxylon i conin
substane controlate, este necesar pentru a demonstra prezena cocainei.

6
 Cap.III Testele prezumptive pentru cocain

1.Testul cu izotiocianat de cobalt

Un simplu test pentru cocain este punerea materialului vegetal n 2% soluie

de izotiocianat de cobalt n ap. Prezena cocainei i relatarea alcaloizilor rezult prin
formarea culorii albastre. Diamorfina i temazepamul de asemenea rezult n reacia
albastr. Dar i alte somnifere sau benzodiazepine rezult n aceast reacie de culoare. Se
fac controale pozitive i negative n timp ce proba se examineaz.
Controlul negativ se face pentru a demonstra c echipamentul este curat i de
aceea nici o schimbare a culorii nu este fcut n actuala prezen a drogului. Controlul
pozitiv demonstreaz c testul funcioneaz i prevede culoarea de referin care va fi
comparat cu reacia fcut asupra probei.

2. Testul scoian

Acesta este o modificare a testului de izotiocianat de cobalt care implic 2%

soluie de izotiocianat de cobalt n ap, diluat cu un volum egal de glicerin (Reactiv 1),
concentrat cu acid HCl (Reactiv 2) i cloroform (Reactv 3). Pentru a testa proba pentru
prezena cocainei, o bucat mic de material vegetal este pus ntr-un tub test i sunt
adugate 5 picturi din primul reactiv (glicerin). Culoarea albastr dezvoltat indic
prezena cocainei. Este adugat o pictur de HCl concentrat i culoarea albastr care a
rezultat din prezena cocainei, va disprea devenind o soluie de culoare roz. Apoi se
adaug cteva picturi de cloroform. Se formeaz o culoare albastr intens prin
adugarea cloroformului dac este prezent cocaina. i n acest caz se fac controale
pozitive i negative.

3. Testul de miros cu metil benzoat

Acest test relev hidrolizele esterului benzoat al cocainei i benzoil ecgoninei

cu NaOH sau KOH [6]. 5 % soluie de hidroxid este preparat n metanol. Proba supus
testului este amestecat cu un volum mic de reactiv ntr-un pahar i nclzit de exemplu n
palma minii. Excesul de alcool este supus evaporrii i se degaj un miros de metil
benzoat . Benzoil ecgonina de asemenea rezult n test pozitiv.
Dac sunt obinute teste pozitive n testele prezumptive, urmtoarea cale n
analize este de a folosi TLC, o metod rapid i necostisitoare sau direct evaluarea
spectroscopic.

4.Cromatografia pe strat subire

7
 Pentru analizele materialului vegetal i identificarea cocainei se folosete
cromatografia. Pentru probele sub form de pudr este suficient omogenizarea a 1 mg ml -
1
soluie n metanol, pentru materialul vegetal, situaia este mai complex dac sunt evitate
problemele asociate cu extracia clorofilei. Un studiu arat c, n cazul n care au fost
folosite metanolul i etanolul singur i n prezena dietilaminelor sau amoniacului, acel
reflux n etanol pentru 15 minute , duce la recuperarea a 93% din cocaina din frunze.
Aceast investigaie suplimentar a demonstrat c folosind un acid de extracie, urmat
de o extracie cu cloroform, ar putea permite extractului s fie "curat"suficient de bine
pentru a putea fi folosit n cromatografia pe coloan GC .[2]
n soluiile apoase, n cazul n care pH-ul este mai mare de 5,5 se va produce
descompunerea cocainei cu benzoil ecgonina i metanol. La pH= 5,8 este observat o
pierdere de 10% dup 13 s, la pH= 8 s-a pierdut 35% din cocain dup 4,5 h.[5]
Prezena sau absena cocainei n prob poate fi calitativ determinat folosind
TLC, pe gel de siliciu. Sunt folosii diferii solveni tabel 1 :

Componente Solveni

MeOH/NH3 Ciclohexan/toluen/Et2NH
1.Cocaina 0,59 0,56
2. Ecgonina 0,84 0
3.Esterul metil ecgonina 0,65 0,44
4.Benzoil ecgonina 0,25 0
5. Lidocaina 0,69 0,40-0,55
6. Procaina 0,55 0,08-0,16

Tabel 1.Rezultatul TLC Rf pentru cocain obinut de-a lungul operrii condiiilor descrise
n text.

Componentele pot fi examinate vizual la o lungime de und scurt de 254 nm i o

lungime de und lung de 360 nm dup folosirea vizualizrii reactivilor. Aceasta include
n general folosirea reactivilor ca i 1% KMnO4 n ap.
n ceea ce privesc dificultile asociate cu interpretarea rezultatelor de la TLC,
exist 2 probleme de principiu : prima este lipsa de rezoluie, de exemplu n
metanol/sistemul de amoniac, cocain/procaina i ester metil ecgonina/lidocaina, nu sunt
bine rezolvate i nc pot s apar mpreun n amestec. O dificultate n plus, se adaug
lipsa de specificitate la vizualizarea reactivilor. Nici unul dintre reactivii folosii aici nu
sunt specifici pentru acest grup de compui.
Comparnd rezultatul Rf i culorile observate la diferite lungimi de und i cu
diferite vizualizri ale reactivilor, componentele care sunt prezente n amestecuri pot fi
determinate i preparate standard pentru analizele GC-MS. Este posibil s se fac
comparaii ntre probe.

5. Identificarea cocainei

GC-MS este metoda aplicat pentru identificarea cocainei datorit naltei

rezoluii pe care o are i pentru c poate fi folosit n amestecuri de probe.

8
 Urmele probelor ar trebui s fie obinute prin tamponarea suprafeelor care urmeaz s
fie analizate i ulterior prelucrarea tamponului prin eluia drogului folosind metanol sau
etanol. n cazul n care probele martor sunt analizate, acestea ar trebui s fie bine
omogenizate nainte. Derivatizarea este frecvent utilizat i sunt disponibili o serie de
reactivi. Materialele sunt prelucrate dup cum urmeaz :
1. Proba este preparat ntr-un solvent potrivit, care este volatil, fr ap i nu
reacioneaz cu analiii. n general sunt utilizai pentru probele de cocain
metanolul i etanolul.
2. Proba este centrifugat pentru a elimina orice material solid care ar putea bloca
seringa sau sistemul cromatografic de gaz. Pentru analizele ulterioare este
utilizat lichidul limpezit.
3. Standardele sunt pregtite la o concentraie de acelai ordin de mrime ca i
proba.
4. De asemenea pentru analize este pregtit un solvent blank.
5. Proba i standardele sunt plasate n flacoane GC cu azot, azotul fiind utilizat
pentru a preveni descompunerea probei.
6. Reactivul de derivatizare (un amestec standard care cuprinde 100l la 10% N,O-
BSA n n-hexan coninnd 0,1 mg ml-1 n-alcan) se adaug n prob, fiola cu
proba se nchide i se agit, iar sistemul este lsat s derivatizeze la temperatura
camerei.
7. Proba este apoi analizat n urmtoarea ordine: derivatizant blank, standard,
derivatizant prob, derivatizant blank etc.

De ce este recomandata derivatizarea ?

Astfel de tratament este sugerat datorit proprietatilor chimice ale drogurilor n cauz.
Compusul organic ecgonina (cocaina nu derivatizeaza) conine hidroxid liber i / sau
pri de acid carboxilic. Acestea sunt absorbinte de site-uri active i "impure" n cadrul
sistemului de gaz cromatograf de inalta rezolutie cuplat cu spectometru de masa i, de
asemenea, legaturile de hidrogen se absorb reciproc, n faza de gaz n sistemul
cromatografic. Aceasta va duce la un transfer de mas deficitar i, prin urmare, la un
comportamentul cromatografic deficitar, dupa cum s-a observat prin valorile de vrf ale
particulelor nedevulcanizate in regenerat. Prin derivatizare aceti compui, hidroxidul si
gruprile de acid carboxilic sunt protejate i problema este astfel redus.

Condiiile tipice GC de funcionare i parametrii potrivii pentru analiza de cocain prin

utilizarea detectorului de ionizare in flacara sau gazul cromatograf de nalta rezolutie
cuplat cu spectometru de mas.

Sistem / Parametrii Descriere / Conditii

Coloana OV-1: 25 m 0.222 mm i.d.; df, 0.5 m

9
Temperatura de injecie 300 C

Coloana programului de temperatura ridicat 170 C, timp de min 2; a crescut la 280 C

la 16 C min-1; a avut loc timp de 2 minute
Transportatorul de gaze
He or N2, la un debit de 1 ml min-1
Detector
Ionizare cu flacara sau detectare masa spectrometric
Detector de temperatura (FID) 300 C

Reactiv derivatizare N, O-(bistrimethylsilyl) acetamida

Tabelul 2 prezint o serie a condiiilor tipice de operare a gazului cromatograf

care au fost gsite pentru a oferi un comportament de separare eficient pentru mostrele de
cocain.
Timpii de retenie (sau indicii relativi de retenie) i spectrele de mas a fiecarei
componente a amestecului standard i a mostrelor sunt apoi comparate. Dac ambele
tipuri de date se potrivesc, identitatea compusilor poate fi dedus.

Figura 5. prezinta o separare cromatografic a ecoisinei i a cocainei.

Valoare totala ioni

100 -
-
-
-
-
50 -
-
-
-
-
200 300 400 500 600 700

Timp retenie (s)

Figura 5 Separarea cromatografic a ecoisinei, C20H42 ( standard intern; tr, 8.36 min) i
a cocainei (tr, 10.56 min).
Indicele de retenie relativ al cocainei este dat de raportul dintre cei doi timpi de
retenie, n acest caz:

10
tr (cocaina) / tr (ecoisine) = 10.56 / 8.36 = 1.26

Nu conteaz c standardul intern eluteaz naintea analitului de interes, cu

condiia ca standardul intern s corspund cu un numrul de criterii. Acestea includ
faptul c nu ar trebui s co-elueze, s reacioneze sau s catalizeze descompunerea altor
compui care pot fi prezenti, i c aceasta prezint un comportament cromatografic bun n
sistemul utilizat.

Figura 6. prezinta spectrul de mas de cocain, n urma analizei gazului

cromatograf cuplat cu spectometru de mas a acestui drog,utiliznd un detector capcana
de ioni.

Greutate molecular a cocain este de 303. n detectoarele capcana de ionii

primari protonai adesea formeaz ioni la m / z 304 [M + H]+ (ion la m / z 303 este ionul
primar [M]+). Ionul la m / z 272 provine din [M - MeO] +, in timp ce in mod similar,
Ionul d la m/z 198 reprezint [M - C6H5CO]+.

Intensitate relative (%)

182
100
82 304

94
50
51 105
68 122
150 198 272

50 100 150 200 250 300

m/z
Figura 6.Impactul electronului spectru de mas al cocainei, obinut prin utilizarea unui
detector capcana de ioni.

n plus, ionul la m / z 182 provine de la [M - C6H5COO] +, i la m / z 82 rezult

din fragmentul urmtor:

Me

N+

6. Cuantificarea cocainei

Dei exist mai multe metode disponibile pentru analiza HPLC a cocainei [7], acestea par
s fi fost utilizate n principal n studiile toxicologice. Pentru analiza drogurilor de strada ,

11
 metoda preferat este n prezent GC (fie prin utilizarea detectorului de ionizare in flacara
sau a gazului cromatograf de inalt rezolutie cuplat cu spectometru de mas). n plus fa
de identificare, metoda gazului cromatograf de nalt rezolutie cuplat cu spectometru de
masa pote fi, de asemenea, folosit pentru a cuantifica cocain n mostrele de strada.
Pentru amestecuri simple, care conin numai cocaina i zahr, spectroscopia UV poate fi
de asemenea folosit n scopuri de cuantificare. Exemple pentru fiecare dintre aceste
metode sunt detaliate mai jos.

6. 1 Cuantificarea cocainei prin metoda gazului cromatograf de inalt rezolutie

cuplat cu spectometru de mas

Aceast metod se bazeaz pe rspunsul detectorului fiind direct proporional cu

concentraia de droguri din eantionul evaluat. O serie de standarde a concentratiilor
cunoscute sunt pregtite i analizate, fiecare analiz fiind
separate printr-un blank.
Aceeai soluie sistem trebuie s fie utilizat pentru a pregti att standardele ct i
mostrele.

Tabelul 3. Calibrarea i datele calculate, obinute prin analiza gazului cromatograf cuplat
cu spectometru de masa, utilizate pentru cuantificarea cocainei intr-o mostra de drog.
Concentratie Suprafaa valorii Suprafaa valorii valoarea Y X2 XxY
Cocaine de vrf a cocainei de vrf a standardului intern (Mg ml-1) b
(Uniti arbitrare) (Uniti arbitrare)

0,188 280 959 8 062 322 0,035 0,035 0,007

0,188 309 454 9 364 403 0,033 0,035 0,006
0,375 779 646 9 165 776 0,085 0,141 0,032
0,375 764 902 9 423 551 0,081 0,141 0,030
0,750 1 184 352 9 411 496 0,126 0,563 0,094
0,750 1 390 950 10 782 244 0,129 0,563 0,097
1.500 2 007 799 231 9 358 0.217 2.250 0.326
1,500 2 107 793 9 542 613 0,221 2,250 0,331
3,000 3 002 575 6 672 401 0,450 9,000 1,350
3,000 4 129 815 9 572 136 0,431 9,000 1,294
11,625 8 825 855 91 228 300 1,809 23,977 3,568

Raportul valorii de vrf a cocaine si valorii de vrf a standardului intern

Zonele valorilor de vrf ale drogurilor n standarde sunt obinute, i rspunsurile relative
calculate. Unele date standard exemplare, pentru cuantificarea de cocain ntr-un eantion
de droguri sunt prezentate n Tabelul 3. Folosind acestea, un grafic de calibrare a

12
rspunsului relativ mpotriva concentraiei de cocain, ca baz liber, este reprezentat
(figura 7), i din ecuaiile simultane:

Y = m X + nc
XY = m X2 + c X

ecuaia de regresie corespunztoare poate fi calculat.

Pentru exemplul luat n considerare aici, aceast ecuaie este dup cum urmeaz:
Y = 0.1401X + 0.0181
i, prin urmare, folosind datele HPLC obinute din mostrele de droguri, concentraia de
cocain poate fi calculat.

6. 2 Cuantificarea de cocain prin spectroscopie UV

Aceast tehnic funcioneaz foarte bine n cazul n care cocaina este amestecata cu
zaharuri, care pot fi uor separate prin dizolvare. Standarde de calibrare sunt pregtite, n
soluia de metanol, la concentraii de 1,0, 0,5, 0.25, 0.125, 0.0625, 0.031 25 i 0.0156 mg
ml-1, folosind diluii repetate. Un spectru UV de filtru holmiu este prima dat msurat
pentru a confirma c reglarea instrumental este efectuart n mod satisfctor.

Un spectru de referin pentru cuva n care cocaina se msoar este apoi obinut
cu ajutorul metanolului. Dup aceasta, la fiecare concentraie de cocain, spectre
ultraviolete ntre 210 nm i 350 nm, msurnd valorile absorbiei la max, sunt nregistrate.
ntre fiecare msurare, cuva se spal cu metanol "grad HPLC-" i se usuca. Utiliznd
absorbia valorilor msurate pentru standardele de calibrare, o curb de absorbie ca o
funcie a concentraiei de cocain baz liber este produs i ecuaia de regresie
corespunztoare este calculat. Odat ce liniaritatea setului de date a fost confirmat, o
soluie a materialului n care valoarea de cocain urmeaz s fie determinat, din nou la
o concentraie de 1 mg ml-1, n acelai metanol ca i standardele, este pregtit (o baie cu
ultrasunete este adesea folosit n acest scop). Orice material solid rmas este apoi eliminat
prin centrifugare, iar lichidul supernatant pstrat pentru msurari viitoare ( un blank de
metanol trebuie s fie pregtit, de asemenea, n acelai mod). Un spectru de ultraviolete
se nregistreaz ntre 210 nm i 350 nm pentru blank
urmat de mostr, i de r max i valorile de absorbie obinute. Din ecuaia de regresie
formulat anterior, cantitatea de cocain din mostr poate fi calculat.

Profilarea i compararea cocainei reprezint un proces complex, detalii care sunt

dincolo de domeniul de aplicare al prezentei lucrri. Cu toate acestea, este util s se ia n
considerare compuii care ar putea fi prezeni ntr-o mostr i modul n care acesttia
apar.
Acestea includ coninutul de cocain n sine, att din droguri i ecgonine i alte
sub-produse din procesul de sintez al cocainei, mpreun cu diverse
produse analizate. n plus, exist i non-cocaina un metabolit minor al cocainei, de tip N
care elimin unul sau mai multe grupuri de metal dintr-o molecul, produs care apare ca
urmare a utilizrii de permanganat de potasiu pentru a purifica cocaina n timpul
procesului de sintez, plus cinamil cocaina
i truxiline, care sunt compui ai cocaine n produsele de plante originale i care se

13
desfoar prin intermediul proceselor sintetice utilizate la fabricarea cocainei. Una
dintre cele mai bune descrieri ale profilului de cocain a fost prezentat de ctre Moore
[8]. Cu toate acestea, o astfel de analiz complet aa cum este descris n aceast lucrare
este puin probabil s gseasc utilizarea de rutin, din cauza naturii sale extrem de
specializate i complexe, dei este unul dintre chimitii de droguri care ar trebui s fie n
cunotin de cauz. In acest caz, mostre ilicite de cocain, gsite ntr-o valiz i ntr-un
portofel, au fost supuse derivatizrii chimice i totodat supuse la trei analize diferite de
gaz cromatograf pentru detectarea i cuantificarea relativ a impuritilor/ produselor
secundare de cocain fabricate. Derivatizarea chimic a mostrelor de cocain a fost
realizat utiliznd anhidrid heptafluorobutiric i N, O-bi (trimetilsilil) acetamid i
produse examinate apoi prin cromatografie de gaz, care utilizeaz att flacr cu ionizare
(GC-FID) ct i cu captura de electroni de detectare (GC-CED), rezultnd astfel o
comparaie detaliat a materialelor. Cu toate acestea, n cele mai multe laboratoare,
comparararea amestecurilor derivatizate vor fi suficiente.

14
 Concluzii

Cocaina este derivat din planta Erythroxylon coca. Acest drog este pregtit prin extracia
din plante de alcaloizi tropane asociai cocainei, urmat de hidroliz i de continuarea
tratrii sintetice pentru a oferi produsul final. Att majoritatea drogurilor ct i
materialele marcate pot fi ntlnite de ctre oamenii de tiin. Pentru majoritatea
mostrelor, secvena analitic cuprinde descrierea fizic, teste prezumtive,purificarea
mostrelor i confirmarea prin utilizarea gazului cromatograf cuplat cu spectometru de
mas. Interesant, dei faza de testare prezumtiv poate include teste de culoare, o alt
metod poate fi, de asemenea, folosit n cazul n care mirosul este notat ca urmare a
adugrii de hidroxid de sodiu n metanol. Mostrele marcate sunt analizate prin metoda
gazului cromatoraf de nalt rezoluie cuplat cu spectometru de mas a rezidurilor
recuperate.
Compararea mostrelor implic analiza unui numr de diferite tipuri de produsele gsite n
cocain, efectuat, de obicei dup o extracie, derivatizare i dup analiza gazului
cromatoraf de nalt rezoluie cuplat cu spectometru de mas

15
 Bibliografie

[1] Abruzzese, R., Coca leaf production in the countries of the Andean subregion,
Bull. Narcotics,
41(1), 9598 (1989).
[2] Turner, C. E., Ma, C. Y. and El Sohly, M. A., Constituents of Erythroxylum coca
I: gas chromatographic
analysis of cocaine from three locations in Peru, Bull. Narcotics, 31(1), 7176
(1979).
[3] http://www.rasfoiesc.com/sanatate/medicina/DROGURI-DIN-PLANTE-
MESCALINA-P42.php
[4] http://sylladys.com/ro/pages/722230
[5] http://www.dependenta.ro/droguri/cocaina

16