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TRABAJO ENCARGADO:
CROMATOGRAFIA
CURSO:
ANLISIS DE ALIMENTOS
ALUMNA:
DOCENTE:
INDICE
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
Pag.
I. INTRODUCCION 3
II. OBJETIVOS 4
LA CROMATOGRAFIA
4
i. DEFINICION 4
ii. APLICACION
DE LA MUESTRA 6
iii. OBTENCION DEL
CROMATOGRAMA 7
iv. INTERPRETACION:
FACTOR DE RETENCION Rf 10
v. FACTORES QUE INFLUYEN
EN LA SEPARACIN POR
CROMATOGRAFA 11
vi. APARATOS, MATERIALES
Y GENERALIDADES 12
vii. CROMATOGRAFIA
BIDIMENSIONAL EN
CAPA FINA 16
IV. CONCLUSIONES 17
V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 18
ANEXOS
I. INTRODUCCION
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II. OBJETIVOS
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Deducir, a travs del Rf la relacin que existe entre la polaridad de las sustancias
que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
En esta tcnica la fase estacionaria es una capa fina de gel de slice u otro soporte
con propiedades adsorbentes dispuesta sobre un soporte de vidrio o aluminio que
denominaremos placa. El eluyente o fase mvil ser la mezcla de disolventes
adecuada.
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Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por accin capilar, se inicia una
competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la sustancia con el
solvente. Los adsorbentes ms utilizados en la Cromatografa de Capa Fina son:
Tamao de Partcula
Volumen de Poro
Dimetro de Poro
rea Superficial
Homogeneidad
Pureza
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tubo capilar, de modo que una pequea cantidad de la disolucin pase a la placa.
De esta manera, la muestra queda adsorbida por el soporte slido en la placa.
En la cubeta se introduce una tira de papel de filtro para que el vapor del
eluyente est por toda la cubeta.
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Para otros compuestos, las placas comerciales suelen llevar una sustancia
fluorescente que si se irradia con luz UV, se pueden ver los componentes como
manchas oscuras circulares. Estas manchas se deben marcar sobre la placa
con lpiz.
Otro mtodo puede ser hacer reaccionar los componentes con alguna
sustancia que coloree esos compuestos para dar una seal visual.
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La placa est formada por una capa de gel de slice, una sustancia muy polar, y
por lo tanto, atraer en mayor medida a componentes ms polares.
Es decir, para un eluyente con mayor polaridad, ste estar ms atrado por el
soporte y los componentes sern ms libres para moverse mejor, por lo que, al
revelar la placa, los componentes saldrn ms alejados de la lnea base.
Por la misma razn, con un eluyente menos polar, ste casi no interacciona con
el soporte polar, y los compuestos tendrn una mayor interaccin con el
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Aplicaciones
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Una vez que la placa ha sido revelada nos encontramos con una serie de manchas
circulares. Si la separacin ha sido buena cada una de ellas se corresponder a un
nico compuesto de la mezcla inicial.
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Polaridad
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Los volmenes mayores se cargan en varias veces, secando entre una y otra
(con aire fro o caliente, aire a presin o con nitrgeno), para evitar que las
manchas se extiendan.
Desarrollo
El eluyente, cuya composicin depende de cada problema concreto, se pone
en la cubeta cromatogrfica por lo menos 30 minutos antes del principio de la
separacin hasta una altura de 0.5 cm. La cubeta se cerrar con su tapa para
que se sature con los vapores del disolvente y se coloca en un lugar adecuado.
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Para que la saturacin sea mejor, se recubre la cubeta con papel secante (se
indicar en el protocolo en el caso que sea necesario).
Para desarrollar la placa, su extremo inferior se introduce en el diluyente y se
vuelve a cerrar la cubeta inmediatamente. Para evitar eluciones, las manchas
cargadas debern estar completamente por encima del nivel de eluyente.
Clculos
Tras el desarrollo del cromatograma, se saca la placa de la cubeta y (despus
de marcar el frente) se seca cuidadosamente al aire o con un secador. La
posicin de las manchas se determina:
-por su color propio
-por su fluorescencia
-por la disminucin o amortiguacin de la fluorescencia
-por reaccin qumica: la placa una vez seca se roca parcial o totalmente con
un determinado reactivo, de manera que aparecern coloraciones
caractersticas o una fluorescencia particular.
rf = ls (cm)
lL (cm)
Aplicaciones
En la mayora de los casos la TLC se realiza cuando se quieren hacer
evaluaciones cualitativas rpidas. Las determinaciones cuantitativas son
posibles por acoplamiento del equipamiento necesario (unidades de
carga,scanner); en estos casos, es mejor recurrir a las placas de HPTLC,
porque son ms efectivas.
IV. CONCLUSIONES
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V. REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS
LIBROS
Rojo Callejas F., Manual de Qumica Analtica Instrumental II, Anexo III,
Facultad de Qumica UNAM, Mxico 2002
Principios de Anlisis Instrumental. 5 ed. (2001). Douglas A. Skoog,
F.J. Holler, T.A. Nieman. Mc Graw-Hill Interamericana.
Anlisis Instrumental. (2001). K.A. Rubinson, J.F. Rubinson. Prentice
Hall.
Anlisis de los Alimentos. (1992). Matissek, Schnepel, Steiner. Ed.
Acribia, S.A.
Composicin y Anlisis de los Alimentos de Pearson. 2 ed. (1996).
R.S. Kirk, R. Sawyer, H. Egan.
Qumica Analtica. 6 ed. (1997). Skoog, West, Holler. Mc Graw-Hill.
PGINAS WEB
www.dq.fct.unl.pt/qof/hplcts.html
www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografa/hplc.html
www.merck.com.pe/MPSA%5csite%5cwmsp.nsg/contents/cromatografa
www.hplc.co.uk/homeframe.htm
www.shu.ac.uk/virtual_campus/courses/241/hplc.htm
www.dicdoc.ucv.cl/lab_sibyl
www.lafaw.com
www.aldbot.com/HPLC-Analysis.htm
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CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
www.richardscientific.com
http://ull.chemistry.uakron.edu/chemsep/
http://biologa.med.ub.es:8080/curso/curso.html
ANEXOS
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