Sunteți pe pagina 1din 19

Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n

ingineria tisulara

Universitatea de Medicin i Farmacie Gr. T. Popa


Facultatea de Bioinginerie Medical

Master: Biotehnologii Medicale i Biomateriale Avansate

Sisteme specifice de culturi


celulare utilizate n ingineria
tisular

NUME STUDENT: NISFOEANU (DANAILA) ADRIANA IONELA

AN II, GRUPA 1
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

Cuprins

Cuprins..........................................................................................................................2

Introducere....................................................................................................................3

Celulele, elementul de baza al sistemelor utilizate n ingineria tisular.......................4

Structuri destinate culturilor de celule pentru ingineria tisular..................................6

Sisteme n bioreactoare.............................................................................................7

Scaffold-urile............................................................................................................7

Polimeri naturali i sintetici folosii pentru scaffold-uri.........................................10

Tipuri de scaffold-uri...............................................................................................11

Studii actuale privind sistemele de culturi celulare utilizate in ingineria tisular......12

Concluzii.....................................................................................................................16

Bibliografie.................................................................................................................17
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

Introducere

Ingineria tisular reprezint un domeniu multidisciplinar, care aparine medicinei


regenerative i care are ca scop promovarea calitii vieii umane prin restabilirea, meninerea
sau ameliorarea funciei esuturilor sau organelor. n acest scop, ingineria tisular combin
tehnici biologice (realizarea de culture celulare i de esuturi) cu tehnici inginereti (crearea de
matrici artificiale pentru regenerare tisular, material artificiale pentru nlocuirea celor natural,
etc).
Medicina regenerativ a aparut la nceputul anilor 1990, cnd a fost publicat primul
articol din domeniu. Terapiile prin inginerie tisular reprezint o trecere de la tehnologiile
medicale tradiionale la tratamentul personificat pentru fiecare pacient. Ingineria tisular uman
se bazeaz pe mai multe componente importante. Componenta central o reprezint celulele,
care pot fi autologe (de la acelai pacient), alogene (de la o alta persoana) sau xenogene (celule
animale). Celulele pot fi celule stem sau celule care au atins deja un anumit grad de difereniere.
Aplicabilitatea ingineriei tisulare este att una terapeutica (esutul crete n corpul
pacientului sau n afara lui, de unde este ulterior transplantat), ct i diagnostic (esutul este
crescut in vitro i utilizat pentru testarea metabolismului celular n prezena unor substane, n
vederea stabilirii toxicitii i biocompatibilitii lor).
Scopul ingineriei tisulare este restabilirea funciei prin distribuirea elementelor vii
care devin integrate n corpul pacientului.
Baza ingineriei tisulare este constituita din biomateriale. Acestea pot include
biomateriale noi, care pot influena fizic sau chimic, organizarea, creterea i diferenierea
celulelor n procesul de formare a esutului dorit i biomolecule care includ factori de cretere,
factori de difereniere i alte proteine cheie. Biomaterialele sunt prevzute pentru organizarea
creterii i diferenierii celulelor n scopul formrii unui esut functional. La biomateriale i
biomolecule se adaug i celulele, elementul viu, funcional, care fac pn la urm, obiectul
acestui domeniu. Sistemele utilizate n ingineria tisular in cont de toate aceste trei elemente
correlate cu scopul i destinaia utilizrii lor. [1]
Domeniul include i aspect de design ingineresc, care include expansiunea celulelor
pe structure bidimensionale, creterea esuturilor cu structure tridimensionale, bioreactoare,
stocarea celulelor i esuturilor i distribuirea lor. Trebuie luat n considerare i aspectul
biomecanic al problemei, care include determinarea proprietior esuturilor ce trebuie nlocuite,
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

identificarea unor proprieti minime pe care trebuie sa le dein esutul ingineresc, identificarea
semnalelor mecanice care influeneaz esuturile ingineriei tisulare, eficacitatea i sigurana
acestor esuturi. Componenta informatic pentru susinerea ingineriei tisulare realizeaz analiza
secvenelor de gene i proteine, expresia genic, expresia proteinelor, interaciunile, analiza
cantitativ a celulelor i esuturilor, modelarea tisular i celular, manufactura digital a
esuturilor, sisteme automatizate de asigurare a calitii, interfeelor.
Avnd n vedere cele trei componente enumerate mai sus se disting trei ramuri
importante ale acestui domeniu:
1. Regenerarea tisular bazat pe cellule (terapie celular, care presupune
transplantarea de cellule noi n scopul nlocuirii celulelor distruse dintr-un esut)
2. Regenerarea tisular bazat pe matrici artificiale (folosirea de matrici artificale
biodegradabile pentru a orienta creterea celular)
3. Regenerarea tisular bazat pe molecule bioactive (factori de cretere, cytokine,
etc)
Scopul acestui proiect l reprezint prezentarea componentelor sistemelor utilizate n
ingineria tisular, n contextul ultimelor cercetri din domeniu.

Celulele, elementul de baza al sistemelor utilizate


n ingineria tisular
Celulele vii sunt necesare pentru a fabrica noi nlocuitori de esuturi, din acest motiv
e necesar studierea lor n dou situaii normale: dezvoltarea lor n morfogenez i vindecarea
n mod natural a unei rni. n aceste situaii celulele recreaz structurile funcionale pe baza
informaiilor genetice i a semnalelor din mediul extracelular i intracelular.
Din punct de vedere istoric, cultur de esut a aprut din ideea c fragmente mici de
tesut pot fi meninute in afara corpului ntr-un mediu adecvat, in care celulele ar supravieui.
Harrison (1907) a fost primul care a arta c celulele nu numai ar putea supravieui, dar c
acestea ar putea ndeplini funcii. Civa ani mai trziu, cultur de tesut a deviat n cultura de
celule, i cultura de organe, unde pstrarea structurii histologice a fost vzuta ca indicativ de
pstrarea a funciei in vivo. Cultura de celule are avantajul c este posibila cuantificarea are
capacitatea i permite dezvoltarea de condiiile de cultur optimizate, iniial pentru proliferarea
celulelor, dar n cele din urm pentru expresia functinala a aceastora.
Ca o resurs, cultura de celule a contribuit istoric nu doar pentru studii fundamentale
ale genotipurilor i fenotipurilor cat i alte procese celulare, dar i la obinerea de produse
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

biofarmaceutice. Cu substraturi sau scaffold-uri elaborate corect i capacitatea de a regla


microclimatul, cultura de celule a devenit o resurs de materiale credibila pentru reconstructia
tesuturilor.
Funcionalitatea unui esut obinut prin inginerie tisular poate fi structural (oase,
cartilaj, piele), metabolic (ficat, pancreas) sau ambele. Celulele pot fi utilizate singure sau pot fi
folosite in vivo alaturi de biomateriale i/sau biomolecule. n momentul selectrii componentelor
celulare ce vor fi utilizate pentru un bioprodus este important identificarea celulelor adecvate
(fibroblaste, condrocite, celule stem mezenchimale, etc.) precum i izolarea lor dintr-o surs
primar.
La nivel tisular, celule sunt organizate ntr-o form tridimensional i sunt
nconjurate de o serie de componente (colagen, elastin, acid hialuronic, proteoglicani,
glicozaminoglicani, glicoproteine etc.) ale matricii extracelulare secretat de acestea. De
asemenea, matricea extracelular reprezint mediul propice pentru creterea i diferenierea
celulelor cu funcii diferite (expresie genic specific fiecrui tip de esut). Fr stimularea
mediului extracelular nu este primit semnalul pentru proliferarea i diferenierea celular. De
aceea, n ingineria tisular este necesar simularea mediului extracelular prin folosirea de celule
specifice, matrice suport i molecule semnal (de exemplu factori de cretere) care se regsesc n
matricea extracelular corespunztoare esutului care se dorete a fi reparat. n timp ce matricea
suport favorizeaz adeziunea, migrarea i organizarea celular, moleculele semnal influeneaz
i direcioneaz fenotipul i metabolismul celular.
Celulele difereniate (celule nervoase, hepatice etc.) sunt utilizate frecvent la
nsmnarea matricilor suport, ns celulele stem adulte au ctigat popularitate rapid datorit
proprietilor biologice remarcabile, precum potenialul de a se diferenia n diferite tipuri de
celule. Atunci cnd celulele stem sunt folosite n co-culturi, acestea pot s induc repararea
tisular. Prin urmare, terapia cu celule stem a devenit o metod de tratament promitoare care
folosete att celule stem autologe ct i alogene pentru regenerarea esuturilor i organelor
lezate sau deteriorate de traumatisme prin refacerea micromediului local i organizarea
histostructural.
Dei celule stem adulte au o capacitate mai sczut de a se diferenia dect celulele
stem embrionare i cele pluripotente induse (IPS), utilizarea lor nu este mpiedicat de aspectele
etice asociate aplicrii celulelor stem embrionare n medicin sau de costurile de producie
ridicate necesare izolrii celulelor stem pluripotente induse. Din momentul identificrii celulelor
stem n stroma mduvei osoase (BMSCs) care a avut loc acum 42 de ani i pn n prezent,
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

BMSCs au devenit un standard n medicin regenerativ datorit potenialului ridicat de a se


diferenia i a morbiditii sczute n timpul recoltrii.
Din cauza numrului sczut de celule stem care pot fi izolate din stroma mduvei
osoase, la care se adaug i procedeul invaziv dureros de recoltare prin aspirare, s-au investigat
i alte surse de celule stem adulte, ajungndu-se la concluzia c celule obinute din esutul
adipos (ASC) ar avea potenial de difereniere i capacitate regenerativ similare cu cele ale
BMSCs. Prin folosirea tehnicilor de prelevare i izolare minim invazive se obin amestecuri
omogene de celule mixte denumit fracie stromala vascular care conine pe lng celule stem
adipoase i celule endoteliale, hematopoietice i stromale. Celule stem adipoase induc
angiogeneza, secret factori de cretere, regleaz procesul inflamator i se pot diferenia n
diferite tipuri de celule, proprieti care le recomand pentru utilizarea n regenerarea tisular.
De asemenea, ele sunt stabile din punct de vedere genetic n culturi pe termen lung i au efect
imunomodulator.

Structuri destinate culturilor de celule pentru


ingineria tisular
Noiunea de cultur celular se refer la situaia n care fragmentul de esut este
disociat n elementele celulare componente, care pot prolifera n condiii fizico-biochimice
speciale prestabilite, prin aderarea la un substrat de plastic sau sticl sau n suspensie n mediul
de cultur. Pe de alt parte, prin cultura tisular a unor fragmente mici se urmrete explantul.
Meninerea fragmentelor mici la o interfa lichid-solid prin ataarea tisular la un substrat de
plastic sau de sticl permite creterea celulelor pe substrat, precum i migrarea i proliferarea
celular ulterioar.
Toate aceste structuri sunt adaptate tipului de celule utilizat (fibroblaste, condrocite,
celule stem mezenchimale), ct i tipului de esut care trebuie nlocuit.
Masele de celule obinute prin culturile de celule i esuturi trebuie meninute n
via, att in vitro, ct i in vivo. Proiectarea de sisteme pentru a realiza acest lucru, atat in flow
bioreactoars in vitro cat i n vivo prin strategii de ntreinere a masei de celule, reprezinta o
provocare enorm. n prezent sunt studiate i dezvoltate diverse asemenea sisteme i
biomateriale. Aceste biomateriale pot fi permanente sau biodegradabil. Ele pot fi materiale
naturale, materiale sintetice sau materiale hibride. Sunt dezvoltate pentru a fi compatibile cu
sistemele vii sau cu celule vii, att in vitro ct i in vivo. Caracteristicile de proiectare sunt
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

provocri majore care in de mai muli factori.. Sistemele pot fi nchise, semipermeabil, sau
deschise.

Sisteme n bioreactoare
Un pas important n ingineria tisular il constituie caracterizarea mediilor celulare
native esuturilor pe care e necesar s le obinem. Un mediu adecvat poate remodela celulele,
esuturile imature, pentru a se putea integra ntr-un tot funcional cu celulele vecine i restul
organismului. Aceste medii au fost reproduse experimental n bioreactoare. Se disting dou
tipuri de bioreactoare:
1. bioreactoare pentru ingineria tisulara care presupun o nelegere cantitativ a mediilor native cat
si a caracteristicilor structurale ale esutului. Ele sunt concepute pentru a reglementa cu precizie
micromediul celular, pentru a facilita construirea in uniformitate i viabilitatea celular a
ansamblului. Cerinele cheie a acestor reactoare includ eficien n scaffoldul 3D, mbuntirea
transferului de mas, schimbul de gaze adecvat la mediul de cultur,alimentarea regulata a
mediului uzat, controlul temperaturii /controlul pH-ului i a stimulilor fiziologici.
2. bioreactoare ce au ca scop optimizarea variabilelor de proces nainte de aplicaiile de inginerie
tisulara reale. Acestea sunt utilizate n principal n scopuri de screening i sunt deosebit de
avantajoase pentru economia de celule necesare, precum i pentru investigarea intervalele
fiziologice, parametrilor i efectele lor sinergice. Ele sunt proiectate pentru a fi modulare,
miniscaled, i multiparametrice. Organizarea spaial 3D de celule din aceste reactoare nu este
critic, iar ele de obicei nu sunt celule sau esuturi specifice.
De exemplu, sistemele pot fi utilizate pentru a investiga efectele nivelului de oxigen
sau tensiuni de forfecare pe supravieuirea, proliferarea, sau interaciunile de celule.
Avantajele utilizrii bioreactoarelor:
- metod universal,
- echipament automatizat,
- reducerea timpului de cretere (de la 45 la 15 zile)
- productivitate crescut (+500%).

Scaffold-urile
Scaffold-urile tridimensionale (3D) servesc drept substrat temporar pentru
sprijinirea i ndrumarea formarii de esut de la diferite stri in vitro si in regenerarea esutului in
vivo. Ele reprezint de fapt structuri din materiale naturale sau artificiale pe care este crescut
esutul n scopul de a mima procesele biologice cnd se folosesc in vitro - sau pentru a nlocui
un esut lezat sau distrus - in vivo. Deoarece celulele vii i esuturile sunt sisteme extrem de
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

complexe, o tem central n proiectarea construcii este de a nelege modul n care structurile
de scaffold-uri, proprietile i funciile sunt corelate. Un concept cheie in ingineria tisular este
utilizarea material pe baz de scaffold-uri 3D poroase pentru a oferi sprijin fizice i un mediu ce
permite facilitare dezvoltrii esutului. De la mijlocul anilor 1980, sistemele 3D au evoluat
pentru a servi funciei complexe de ghidare a comportamentului celular n diferite aplicaii ale
ingineriei tisulare. Scaffold-ul poate fi nsmnat cu celule stem embrionare sau celulele stem
adulte, celule progenitoare, mature, difereniate sau co-culturi de celule pentru a induce formarea
de esut n vitro i in vivo. Pot fi, de asemenea, implantate direct in vivo cu capaciti de a livra
biomolecule solubile / insolubile i repere temporale / spaiale pentru a ghida funcia de
regenerare n esuturi i organe defecte. n timp ce funciile specifice variaz n funcie de tipul
de esut i necesitii clinice, scaffold-urile pot coordona evenimente biologice la nivelurile
tisular, molecular, celular, variind de la nanometri la centimetri.
Din punctul de vedere al proprietilor materialelor, transport n comun, mecanica,
conductivitate electric, suprafaa chimica, i topologie mediaz comportamentul celulelor de la
scri nano, micro la macroscopice. Aceste proprieti sunt adesea corelate cu compoziiile
chimice ale scaffold-urilor.
Comparativ cu sistemele de culturi bi-dimensionale (2D)culturi monostrat,
construcii 3D impun cerine mai stricte pentru eficienta transportului n mas a celulelor pentru
a obine uniformitatea esutului i pentru a evita moartea celulelor pe scara larga in interiorul
schelei. Nutrienii, oxigenul, i molecule de reglementare trebuie s fie eficient transportate de la
mediul de cultur la suprafeele de esut (masa externa de transfer) i apoi prin esut a celulelor
(masa intern de transfer). n mod similar, metaboliii i CO2 sunt eliminate din celulele prin
matricea de esut la suprafeele i apoi la mediu. Ratele de transfer de mas externe depind n
primul rnd de condiiile hidrodinamice din bioreactor, n schimb, ratele interne pot depinde de
difuzie i convecie i n mod semnificativ de structura scaffold-ului.
Pe scurt, caracteristicile pe care trebuie s le aib un scaffold polimeric ideal sunt: (1)
o arhitectura tridimensional cu un volum dorit, forma i rezisten mecanic (D.M.
Hutmacher et al., 2000), (2) o structur poroasa, cu porii bine interconectai pentru a permite o
nsmnare mai bun a celulelor, (3) o compoziie chimic astfel nct suprafaa i produii de
degradare sa fie biocompatibili pentru a provoca minimum de raspunsuri imune sau inflamatorii
(4) rata de degradare s ofere sprijin suficient pn la creterea complet a esutului.
Pana n prezent au fost dezvoltate multe tehnici de prelucrare i fabricare de
scaffolduri polimerice naturale i sintetice. Dei materialele naturale sunt mult mai potrivite n
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

furnizarea de diferite funcii biologice, scaffoldurile polimerice sintetice sunt favorizate,


deoarece pot fi fabricate dintr-o gam larg de polimeri biodegradabili cu prelucrabilitate uoar,
degradare controlat i susceptibilitate pentru modificri conform cerinelor cercetrii (Peter et
al., 1998). Pentru a aciona ca un suport fizic, scaffoldurile pot fi proiectate pentru a furniza
anumite funcii biologice i pentru a induce activ regenerarea esuturilor. Ele trebuie s realizeze
una sau toate funciile urmtoare: (1)S contribuie la interaciunea celule-biomaterial, adeziunea
celular i depunerea ECM, (2)S permit transportul suficient de gaze, nutrieni i factori ce
permit supravieuirea celular, proliferarea i diferenierea, (3)S fie biodegradabile cu o vitez
controlabil care aproximeaz rata de regenerare a esuturilor, (4)S determine un grad minim de
inflamaie sau toxicitate n vivo
Biomaterialele destinate pentru aplicaiile biomedicale au sarcina de a dezvolta
materiale artificiale care pot fi utilizate pentru repararea sau restaurarea funciilor esutului ssu
organului traumatizat din corpul uman. Dup o faz timpurie de selecie a biomaterialelor n
funcie de disponibilitate, ncercrile de proiectare s-au bazat n primul rnd pe obinerea
performanei structurale/mecanice sau de redare a ineriei, fiind astfel nerecunoscut ca un corp
strin de ctre sistemul imunitar.
In 1994, Freed s.a. a formulat 6 criterii de proiectare pentru polimeri biodegradabili
care ar trebui indeplinite in ingineria tisulara: (1) suprafata ar trebui sa permita adeziunea si
cresterea celulara; (2) dupa implantarea in vivo a polimerului si a produselor sale de degradare
nu ar trebui sa produca inflamatie si toxicitate; (3) polimerul ar trebui sa fie reproductibil in 3
structuri dimensionale; (4) porozitate mare pentru reducerea dificultatilor la difuziune si
cresterea suprafetei si un spatiu adecvat pentru regenerarea matricei extracelulare; (5) resorbtia
grefei dupa indeplinirea scopului sau (materialele straine prezinta intotdeauna risc de
inflamatie); (6) gradul de degradare a grefei trebuie sa corespunda gradului de regenerare a
tesutului de interes.
Biopolimerii, cum ar fi colagenul, elastin, fibroin, draglin, fibronectina, fibrin,
amidonul, celuloz bacterian, dextranii, mananii, alginaii, pectinele, chitin, chitosanul,
glicozaminoglicanii etc., i-au gsit o multitudine de aplicaii biomimetice n domeniul medical
(inginerie tisular, implantologie, medicin regenerativ, fire de sutur, burei, filme,
biomateriale poroase, substitueni plasmatici, purttori de medicament cu eliberare controlat i
preparate de uz farmaceutic) datorit asemnrii lor cu matricile extracelulare i ceilali
biopolimeri din organismul uman.
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

Polimeri naturali i sintetici folosii pentru scaffold-uri


Scafold-urile pot avea forme i compoziii diferite (spum, fibre, reele, geluri), pot
fi obinute dintr-o gam larg de materiale, sunt biodegradabile i reprezint o aplicaie major a
polimerilor n ingineria tisular. La fabricarea lor se folosesc cu precadere urmatoarele
materiale:
- Polimeri sintetici biodegradabili: poli acid L-lactic (PLLA), poli acidD,L- lactic
(PDLLA), poli acid glicolic (PGA), poli acid lactic-co-glicolic(PLGA), poli
hidroxi butirati, poli-caprolactona, polidioxanona, polianhidride, polifosfazene,
polipeptide, etc
- Polimeri naturali biodegradabili: celuloz, chitin, chitosan, dextran, colagen,
gelatin, fibrin, fibrinogen, cazein, etc.
Polimerii naturali sunt primele biomateriale utilizate clinic. Ca urmare a
proprietilor bioactive, materialele naturale au interaciuni mai bune cu celulele, lucru care
mbuntete performana celulelor n mediul biologic. Polimerii naturali pot fi calasificati n:
proteine (colagen, gelatin, fibrogen, elastin, keratina, actina i miozin), polizaharide
(celuloz, amiloz, dextran, chitin i glicozaminoglicani) su polinucleotide(ADN, ARN).
Orientarea biomaterialelor sintetice poate facilita restaurarea structurii i funciei
esutului deteriorat sau bolnav. Polimerii sintetici sunt foarte utili n domeniul biomedical,
deoarece proprietile lor (de exemplu porozitatea, timpul de degradare i
caracteristicilemecanice) pot fi adaptate pentru specificitatea aplicaiilor. Muli polimeri sintetici
prezint proprieti fizico-chimice i mecanice comparabile cu cele ale esuturilor biologice.
Polimerii sintetici reprezint cel mai mare grup de polimeri biodegradabili, iar acetia pot fi
fabricai n condiii controlate. Acetia prezint n general, proprieti mecanice i fizice
previzibile i reproductibile, cum ar fi rezistena la traciune, modulul de elasticitate i viteza de
degradare. Copolimerii PLA (acid polilactic), PGA(acid poliglicolic), PLGA sunt printre
polimerii sintetici cel mai frecvent utilizai n ingineria tisular. PHA (Polihidroxialcanatii)
aparin unei clase de poliesteri microbieni i sunt luai n considerare din ce n ce mai mult
pentru aplicaiile ingineriei tisulare. Ceramicile bioactive, cum ar fi HA (hidroxiapatita), TCP
(fosfatul tricalcic) i anumite compoziii sticle fosfatice, silicatice (sticle bioactive) i sticle
ceramice (cum ar fi apatita- Wolastonit (CaSiO3)) reacioneaz cu fluidele fiziologice i prin
ermediul activitii celulare formeaz legturi benefice n cazul esuturilor dure, uneori chiar i
n cazul esuturilor moi. Cu toate acestea, biocompatibilitatea i biodegradabilitatea sunt de
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

multe ori insuficiente, limitnd utilizarea lor potenial n domeniul clinic. Aceste neajunsuri pot
fi depite prin amestecul de
polimeri naturali i sintetici, sau prin folosirea unor materiale compozite, ce mbuntesc
proprietile schelelor, permind o degradare controlat i mbuntirea biocompatibilitatii n
aplicaiile ingineriei tisulare.

Tipuri de scaffold-uri
TIPURI DE CARACTERISTICI UTILIZRI
SCAFFOLDURI
Scaffold-uri poroase -poroziti mari - creterea esutului gazd,
-reele de pori interconectate -regenerarea oaselor
PLA (acid polilactic), -permit interaciunea celule- - vascularizarea organelor
PGA(acid poliglicolic), PLGA mediu
(acid polilactic -elimin grupurile de celule
-co-glicolic), PCL foarte mari
(policaprolactona), PBT -permit transportul nutrienilor
(tereftalat de polibutilen) spre centru
-structurile poroase pot fi
orientate
-pot fi fabricate cu o
dimensiune specific a porilor,
porozitate, raportul suprafata-
volum i cristalinitate
Scaffold-uri de hidrogeluri -biocompatibilitatea, -vindecarea cartilajelor,
-biodegradabilitatea controlat -regenerarea oaselor
colagen, gelatin, fibrin, -interaciunea celular -hidrogeluri cu factori de
alginat i chitosan PLA (acid intrinsec cretere
polilactic), copolimerii - similaritate structural a -la nlocuirea esuturilor
derivai PPF (sulfur de componenelor conjunctive
polifenilen), derivai ai PEG macromoleculare de baz din
(polietilenglicol) i PVA organism
(alcool polivinilic)
Scaffold-uri fibroase -Pe baz de nanofibre - ingineria tisular musculo-
- Raportul crescut suprafata- Scheletala
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

colagen, gelatin, chitosan, volum al nanofibrelor cu - esuturi neuronale


fibr de mtase, PLA structur poroas favorizeaza
(polilactid), PU (poliuretan), adeziunea celular,
PCL(policaprolactona), PLGA proliferarea, migrarea i
(Poli (L-lactid-co-glicolid)), diferenierea
PLLA-CL (Poli (L-lactid-co-
glicolid))

Studii actuale privind sistemele de culturi celulare


utilizate in ingineria tisular
n ultimul an au fost dezvoltate mai multe materiale i tehnici de obinere a
materialelor ce intr n alctuirea sistemelor de culturi celulare destinate ingineriei tisulare. n
continuare voi prezenta cteva dintre aceste studii care arat tendina general n domeniu.
Chen Q. i colaboratorii au dezvoltat un dispozitiv care recreaz mini-ficat 3D, n
scopul testrii medicamentelor pentru toxicitate hepatic. [3]. Sistemul produce milioane de
picturi care conin microesuturi realizate din dou tipuri diferite de celule hepatice organizate
pentru a mima esutul hepatic real. Aceste sisteme pornesc de la platforme de dimensiunea
buricului degetului proiectate s susin tipuri multiple de celule hepatice ntr-un mediu 3D.
Canalele minuscule din platform transport nutrieni la celule. Deoarece acestea prezentau
neajunsuri, cercettorii condui de David Weitz, Ph.D., Professor of Physics and Applied Physics
at Harvard University, au creat un chip microfluidiccare poate genera rapid i precis
microesuturi funcionale hepatice umane n interiorul unor picturi. Sistemul poate genera pn
la o mie de picaturi/sec care pot fi utilizate pentru analiza toxicitii unui numr mare de
medicamente n diferite doze i combinaii. Chipul microfluidic al lui Weitz e o platform cu un
sistem de canale concentrice interconectate foarte apropiate, de diametrul unui fir de pr. ntr-o
prim faz este aplicat o soluie salin pe baz de hepatocite care curge prin canale pn cnd
se intersecteaz cu o soluie tip gel de fibroblaste. Datorit proprietilor fizice ale celor dou
msoluii i fizicii fluidelor care circul prin spaii nguste fibroblastele ader la marginile
canalelor, pe cnd hepatocitele curg prin centru. Amestecul se intersecteaz cu o soluie de ulei
care se comport ca o ruptur i cauzeaz desprinderea picturii. Pictura cade intr-o soluie
mediu acid care determin aezarea stratului exterior gelatinos, reinnd celulele n poziia
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

respectiv. Rezult o pictur cu miez apos umplut cu hepatocite i un nveli gelatinos de


fibroblaste.

Fig. 1. Microesuturile hepatice realizate de Chen


Cercettorii de la National Institute of Biomedical Imaging and Bioengineering
(NIBIB), SUA au realizat un nou tip de fragment de esut avnd la baz mtasea. Chipsurile de
esut sunt colecii de celule care mimeaz anatomia i fiziologia unui esut fcnd mai eficient
testarea medicamentelor n laborator. Pentru a realiza acesta in vitro celulele au nevoie de
structura 3D, n acest caz reprezentat de scaffold-uri pe baz polydimethylsiloxane (PDMS), un
polimer pe baz de silicon ce conine camere microfluidice reprezentnd vase de snge sau
tractul respirator. Pentru a combate neajunsurile acestui material nebiodegradabil, s-a recurs la
matase. Prin amestecarea matasei intr-un gel i turnarea n form s-a obinut un bloc rectangular
de hidrogel cu o reea tridimensional de canale. Datorit condiiilor de reticulare acesta poate
ngloba celule i enzime. Mtasea a mai fost folosit anterior pentru modele de esut cerebral i
mduv osoas , ca metod de a pstra anticorpii i vaccinurile stabile la temperatura camerei.
[4] Mtasea mai apare ntr-un studiu din 2015 care l are printre autori pe Kaplan, privind
dezvoltarea i integrarea unui scaffold dublu pentru articulaiile deteriorate. O parte pe baz de
mtase ca suport pentru cartilaj, alta ca scaffold pentru os, fcut din ceramic. [5] Fiecare faz
promoveaz popularea cu celule stem mezenchimale umane i diferenierea lor n tipul potrivit
de celule. Porii mici din segmentul din mtase duc la diferenierea n celule de cartilaj, pe cnd
porii mari din materialul ceramic se difereniaz n celule osoase. Interfaa dintre cele dou pri
permite migrarea celulelor i interaciunea dintre faze.
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

Fig. 2. Scaffoldul bifazic pentru repararea articulaiei [6]


Paul Lu, Ph.D., i Mark Tuszynski, MD, PhD, alturi de echipa lor de la University
of California - San Diego Center for Neural Repair, au realizat un experiment bazat pe studiile
anterioare utiliznd celule stem umane pentru a reconstrui o poriune afectat din mduva
spinrii la un obolan. Celulele stem au fost obinute din fibroblaste primare transduse cu vectori
retrovirali, apoi cultivate n prezena unor inhibitori pentru a induce celulele stem neurale i
FACTS purificate folosind CD184+, CD15+, CD44-, i CD271-. Acestea au fost cultivate pe
nite plci de poly-ornitin acoperite cu laminin, cu DMEM/F12 suplimentat cu N2, B27 i
factori de cretere pentru fibroblaste primare. Celulele stem neurale au fost introduse ntr-o
matrice de fibrin mbibat cu un amestec de factori de cretere, care a fost grefat ntr-o zon
deteriorat a mduvei spinrii. Dup trei luni s-a observat c din celulele stem s-au dezvoltat
neuroni cu axoni care se ntindeau n ambele direcii pe lungimea mduvei spinrii. Deci s-a
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

obinut o cultur in vivo, pe un biomaterial mbibat cu factori de cretere. [7]

Fig 3. Sistemul de regenerare a maduvei spinrii [8]


Cercettorii au experimentat diverse scaffold-uri cu aplicaii neurologice, realizate
din diveri polimeri i fibre, de densitate diferit. Ei au creat o reea de fibre polimerice dese pe
baz de tyrosine-derived polycarbonate pDTEc, pe care s adere bine celulele stem. Au fost
populate cu celule stem umane pluripotente izolate din fibroblaste, apoi prin introducerea
proteinei NeuroD1 n celule au fost programate s se diferenieze n celule nervoase. Aceste
mini-scaffolduri trebuiau s aib porii suficient de mari pentru a fi populate cu celule i suficient
de mici pentru a produce diferenierea. Dup ce au fost injectate ntr-o zon lezat a creierului,
aceste mini scaffold-uri au manifestat activitate electric specific neuronilor funcionali. [9]
National Institute of Biomedical Imaging and Bioengineering (NIBIB), a publicat n
iunie 2016 issue of Science Translational Medicine un articol n care descrie realizarea unui
scaffold din os de vac decelularizat, matrice pe care s-au cultivat celule stem din grasimea unui
porc (beneficiarul), crescute apoi ntr-un bioreactor pentru trei sptmni. Acest sistem (grefa) a
fost implantat la porc, n locul unei buci de maxilar excizat. Timp de 6 sptmni ct a durat
monitorizarea s-a observat o integrare anatomo-fiziologic a sistemului populat cu celule n osul
maxilar al porcului. Ulterior s-a observat c organismul porcului s-a comportat ca i cum grefa
reprezenta propriul os, realiznd rennoirea celular natural. Succesul a fost atribuit unor factori
cheie: un scaffold bine realizat, celulele potrivite, condiii optime pentru cultura de celule i
sincronizarea exact. [10]
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

Sistemele de cultur 3D culture ofer noi oportuniti pentru meninerea fertilitii.


Astfel, Lonnie Shea, Professor of Chemical and Biological Engineering at Northwestern
University, i Teresa Woodruff, Thomas J. Watkins Professor of Obstetrics and Gynecology and
Professor of Biochemistry, Molecular Biology and Cell Biology at Northwestern University, au
colaborat pentru dezvoltarea unui sistem de cultur 3D pentru maturarea foliculilor ovarieni
proaspei i criogenai. Sistemele 3D se bazeaz pe o matrice de hidrogel alginat proiectat
pentru a imita mediul din ovarul nativ. Hidrogelul menine arhitectura folicular i interaciunea
dintre celulele foliculare. Prin adugarea de factori de cretere i hormoni aceti foliculi au fost
maturizai in vitro. [11]
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

Concluzii
Ingineria tisular este un domeniu multidisciplinar care vizeaz producerea de noi sisteme care
s restabileasc funcionalitatea organelor i esuturilor cu deficiene sau deteriorate de boli sau
traumatisme combinnd principii i teorii inginereti cu cele ale tiinelor biomedicale.
Cea mai important utilizare a ingineriei tisulare este n medicina regenerativ.
Sistemele utilizate n ingineria tisular au la baz cultura de celule, structuri sintetice sau matrici
decelularizate cu rol n susinerea, creterea, modelarea creterii i diferenierii att in vitro ct
i in vivo i biomolecule semnal.
Aceste sisteme sunt utilizate in medicina regenerativ ca substituent pentru tesutul cutanat, osos,
miocard, esutul nervos sau hepatic.
n elaborarea sistemelor se ine cont de cerinele organului/esutului de destinaie, caracteristicile
i nevoile celulelor, timpul de populare, materialele utilizate.
n toate cazurile, materialele utilizate sunt polimeri naturali, sintetici sau micti, biocompatibili
i biodegradabili, iar structurile obinute imit anatomic sau funcional structura de destinaie.
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

Bibliografie
1. biofizica-umfcd.ro/people/ap/curs_IMC/8_Inginerie_tisulara.pdf Sisteme specifice de culturi
celulare utilizate in ingineria tisulara (04.01.2017)
2. Verma P, Verma V, Concepts of Tissue Engineering, n Animal Biotechnology: Models in
Discovery and Translation, editat de Ashish Verma i Anchal Singh, 2014, pp.233-245
3. Chen Q, Utech S, Chen D, Prodanovic R, Lin JM4, Weitz DA.) Controlled assembly of
heterotypic cells in a core-shell scaffold: organ in a droplet. (Lab Chip. 2016 Apr 21;16(8):1346-
9.
4. Zhao S, Chen Y, Partlow BP, Golding AS, Tseng P, Coburn J, Applegate MB, Moreau JE,
Omenetto FG, Kaplan DL, Bio-functionalized silk hydrogel microfluidic systems.. Biomaterials.
2016 Joule)
5. Li JJ, Kim K, Roohani-Esfahani SI, Guo J, Kaplan DL, Zreiqat H. J Mater Chem B, A biphasic
scaffold based on silk and bioactive ceramic with stratified properties for osteochondral tissue
regeneration Mater Biol Med. 2015 Jul 14;3(26):5361-5376.
6. https://www.nibib.nih.gov/news-events/newsroom/silk-and-ceramics-offer-hope-long-term-
repair-joint-injuries
7. Lu P, Wang Y, Graham L, McHale K, Gao M, Wu D, Brock J, Blesch A, Rosenzweig ES, Havton
LA, Zheng B, Conner JM, Marsala M, Tuszynski MH. Long-distance growth and connectivity
of neural stem cells after severe spinal cord injury. Cell. 2012 Sep 14;150(6):1264-73
8. Lu P, Woodruff G, Wang Y, Graham L, Hunt M, Wu D, Boehle E, Ahmad R, Poplawski G,
Brock J, Goldstein LS, Tuszynski MH, Long-distance axonal growth from human induced
pluripotent stem cells after spinal cord injury. Neuron. 2014 Aug 20;83(4):789-96)
9. Aaron L. Carlson, Neal K. Bennett, Nicola L. Francis, Apoorva Halikere, Stephen Clarke,
Jennifer C. Moore, Ronald P. Hart, Kenneth Paradiso, Marius Wernig, Joachim Kohn, Zhiping P.
Pang, Generation and Transplantation of Reprogrammed Human Neurons in the Brain Using 3D
Microtopographic Scaffolds. Prabhas V. Moghe. Nat Comms. 2016 March 17
10. Bhumiratana S, Bernhard JC, Alfi DM, Yeager K, Eton RE, Bova J, Shah F, Gimble JM, Lopez
MJ, Eisig SB, Vunjak-Novakovic G., Tissue-engineered autologous grafts for facial bone
reconstruction. Sci Transl Med. 2016 Jun 15.
11. Xu M1, Banc A, Woodruff TK, Shea LD., Secondary follicle growth and oocyte maturation by
culture in alginate hydrogel following cryopreservation of the ovary or individual follicles.,
Biotechnol Bioeng. 2009 Jun 1;103(2):378-86. doi: 10.1002/bit.22250.
12. West-Farrell ER, Xu M, Gomberg MA, Chow YH, Woodruff TK, Shea LD. The mouse follicle
microenvironment regulates antrum formation and steroid production: alterations in gene
expression profiles. Biol Reprod. 2009 March;80(3):432-9. Epub 2008 Nov 12.
Sisteme specifice de culturi celulare utilizate n
ingineria tisulara

13. Ali Yasin Sonay, et al. 2D Gold Nanoparticle Structures Engineered Through DNA Tiles for
Delivery and Therapy. Nano Biomed. Eng. 2012, 4(1), 17-22.
14. Xu M, Banc A, Woodruff TK, Shea LD. Secondary follicle growth and oocyte maturation by
culture in alginate hydrogel following cryopreservation of the ovary or individual follicles.
Biotechnol Bioeng. 2009 June 1;103(2):378-86.
15. Lindroos B, Suuronen R, Miettinen S. The potential of adipose stem cells in
regenerative medicine. Stem Cell Rev. 7(2011):269-91
16. http://www.medicalstudent.ro/genetica/ingineria-tisulara-si-terapia-cu-celule-
stem.html(04.01.2017)
17. https://www.nibib.nih.gov/science-education/science-topics/tissue-engineering-and-
regenerative-medicine(04.01.2017)
18. www.uvvg.ro/site/docs/studii/doctorat/biologie_rezumate/..(04.01.2017)

S-ar putea să vă placă și