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MANEJO DE CEPAS MICROBIOLOGICAS

ELABOR REVIS APROB

REFERENTE DE LABORATORIO SECRETARIO DE SALUD REPRESENTANTE DE LA
REPRESENTANTE DE CALIDAD DIRECCIN
PROFESIONAL DEL LABORATORIO
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1. OBJETIVO

Asegurar la trazabilidad a cultivos de referencia de las cepas utilizadas para la

evaluacin del desempeo de los medios de cultivos, controles internos de
calidad para los ensayos microbiolgicos y validacin de mtodos.

2. ALCANCE

Se aplica a cepas obtenidas a partir de colecciones de microorganismos nacional o

internacionalmente reconocidos que se usan en el laboratorio de microbiologa.

3. DEFINICIONES

Cultivo o material de referencia: Cultivos provenientes de una coleccin

reconocida nacional o internacionalmente, acompaada de un certificado que
especifique las caractersticas fenotpicas y genotpicas. Termino colectivo
que se refiera a cepas de referencia, cepas de reserva y cepas de trabajo.

Cepas de referencia (C ref): Microorganismos definidos por lo menos a nivel

de gnero y especie catalogados muy caracterizados y de origen conocido.
Para demostrar la trazabilidad debe obtenerse directamente de una coleccin
nacional e internacional de cultivo de referencia conocido

Cepas de reserva (C r): cultivo obtenido a partir de la reactivacin y

resiembra de un cultivo de referencia certificado y mantenido como una
fuente para la preparacin de cultivos de trabajo.

Cepas de trabajo (Ct): subcultivos obtenidos de un cultivo de reserva

destinados al uso como control en el trabajo diario.

ATCC: American Type Culture Collection.

4. RESPONSABLES

Los profesionales del Laboratorio de Microbiologa de Alimentos y Aguas del

Laboratorio de Salud Pblica del Meta, son responsables de aplicar este
procedimiento en forma adecuada, sin hacer ningn cambio o variacin que no est
debidamente documentado y autorizado.
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5. DESARROLLO

No. RESPONSABLE ACTIVIDAD FLUJO REGISTRO

Inicio

Reconstituir las cepas de

referencia:
Registrar el ingreso de las
cepas de referencia (C ref) al
laboratorio de microbiologa
Reconstituir las
Almacenar las C ref entre 2-8 cepas de referencia:
Profesional del C hasta su uso. F-SA-122 Cepas de
1
Laboratorio Referencia
Reconstituir las C ref y sembrar
utilizando el medio de cultivo,
las condiciones de incubacin y
el procedimiento indicado en
las instrucciones del fabricante
para cada tipo de
microorganismo.
Realizar a las C ref, control de
calidad de pureza y viabilidad y
registrar los resultados

Coloracin de Gram: Realizar a las C ref,

Morfologa control de calidad de F-SA-123 Control
Profesional del pureza y viabilidad de pureza y
2
Laboratorio Caractersticas de las viabilidad de las
colonias en medios cepas
selectivos / Conformidad

Pruebas bioqumicas y
serolgicas/ Conformidad

Obtener las cepas de

reserva: Las cepas de reserva
Profesional del F-SA-124 Cepas
3 (C r) se obtienen a partir de C Obtener las cepas
Laboratorio de reserva
ref. de reserva

Rotular los tubos o crioviales

Profesional del donde se almacenan las Cr, Sticker de
4
Laboratorio (previamente a la inoculacin) Rotular los tubos o Crioviales
indicando: Identificacin de la crioviales.
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cepa (Nombre y Nmero de

ATCC), N de pase, fecha de
realizacin del Cr, fecha de
vencimiento de la cepa, y N de
tubo o criovial.

Inocular el desarrollo
microbiano obtenido en el
punto 1, aspticamente en el
medio lquido sobrenadante
que contienen los crioviales o Inocular los
tubos. crioviales o tubos
Profesional del
5
Laboratorio
NOTA: En caso de no contar
con crioviales mantener las
cepas en agar Tripticasa de
Soya en tubo inclinado y
mantener con aceite mineral
para logar su preservacin.
Mezclar invirtiendo los
crioviales para obtener una
completa distribucin de los
microorganismos y remover
totalmente el lquido
sobrenadante cuidadosamente Mezclar
Profesional del F-SA-124 Cepas
6 con una pipeta estril o una
Laboratorio de reserva
punta.

Nota: El sobrendante de los

criviales se desecha en
solucin de hipoclorito de sodio
al 5%.

Mantener los crioviales que

contengan las cepas de
reserva en congelamiento
segn las especificaciones del Mantener las cepas
fabricante. Para los crioviales de reserva en
con Cr obtenidos a partir de congelamiento
Profesional del cada Cref se completar F-SA-124 Cepas
7
Laboratorio planilla de registro. de reserva
El tiempo lmite de
conservacin de Cr depende
de la cepa, ser determinado
segn informacin
suministrada por el proveedor
de crioviales.
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NOTA: en caso de utilizar

tubos estos se mantendrn en
refrigeracin.
Obtener las cepas de trabajo:
Los cultivos de trabajo se
obtienen mensualmente a
partir de la Cr sobre un medio
slido o lquido no selectivo e
incubando en condiciones
adecuadas y se realiza control
de calidad a las Cr, (F-SA-123)

Rotular cepas de trabajo Ct, F-SA-124 Cepas

indicando: Identificacin de la de reserva
Obtener las cepas
Profesional del cepa (Nombre de la bacteria y de trabajo
8 F-SA-123 Control
Laboratorio Nmero de ATCC), fecha de de pureza y
repique viabilidad de las
cepas
Las cepas de trabajo no deben
ser subcultivadas.

Nota: Quincenalmente las

cepas de Trabajo se siembran
en medios selectivos para
hacer seguimiento de las
caracteristicas macroscopicas
de la mismas.

Profesional del Eliminar del cepario los Eliminar del cepario F-SA-124 Cepas
9 crioviales vencidos. los crioviales
Laboratorio de reserva
vencidos

FIN
10
FIN

5.1 OBSERVACIONES:

La manipulacin de la Cr para la produccin de cepas de trabajo Ct se realizar

evitando el descongelamiento y la contaminacin del criovial, mediante el
traslado en una nevera de transporte conservando la cadena de frio y el repique
se realizara en cabina de seguridad biologica.

5.2 ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

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Control de calidad de los cultivos de referencia: Ensayos para asegurar la

pureza y viabilidad de los cultivos.

Coloracin de Gram
Caractersticas de las colonias en medios selectivos.
Pruebas bioqumicas de identificacin.

Criterio de Aceptacin o Rechazo

ACCION PARA
CRITERIO ACEPTACION INCUMPLIMIENTO DE
CRITERIOS
Gram positivo o Gram
Repetir Anlisis, verificar el
Coloracin de Gram negativo segn
cultivo de referencia
corresponda
Morfologa tpica Repetir Anlisis, verificar el
Caractersticas de las colonias
macroscpica de las cultivo de referencia
en medios selectivos colonias
Pruebas bioqumicas de Repetir Anlisis, verificar el
Perfil bioqumico propio cultivo de referencia
identificacin. del microorganismo.

6. ANEXOS Y REGISTROS

Como Donde Tiempo de Disposicin

Registro Responsable
conservarlo conservarlo conservacin Final
Segn Listado Segn Listado Segn Listado
Maestro de Maestro de Maestro de
Profesionales documentos F- documentos F- documentos F-
F-SA-122 de MC-04, Segn F- MC-04, Segn F- MC-04, Segn F-
MC-03 -Listado MC-03 -Listado MC-03 -Listado
Cepas De Laboratorio- Fsico
maestro de maestro de maestro de
Referencia Profesionales registros y/o registros y/o registros y/o
universitarios- tabla de tabla de tabla de
retencin retencin retencin
documental documental documental
Segn Listado Segn Listado Segn Listado
Maestro de Maestro de Maestro de
F-SA-123 Profesionales documentos F- documentos F- documentos F-
Control de de MC-04, Segn F- MC-04, Segn F- MC-04, Segn F-
MC-03 -Listado MC-03 -Listado MC-03 -Listado
pureza y Laboratorio- Fsico
maestro de maestro de maestro de
viabilidad de Profesionales registros y/o registros y/o registros y/o
las cepas universitarios- tabla de tabla de tabla de
retencin retencin retencin
documental documental documental
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Como Donde Tiempo de Disposicin

Registro Responsable
conservarlo conservarlo conservacin Final
Segn Listado Segn Listado Segn Listado
Maestro de Maestro de Maestro de
Profesionales documentos F- documentos F- documentos F-
F-SA-124 de MC-04, Segn F- MC-04, Segn F- MC-04, Segn F-
MC-03 -Listado MC-03 -Listado MC-03 -Listado
Cepas de Laboratorio- Fsico
maestro de maestro de maestro de
reserva Profesionales registros y/o registros y/o registros y/o
universitarios- tabla de tabla de tabla de
retencin retencin retencin
documental documental documental

7. HISTORIAL

VERSIN VIGENCIA IDENTIFICACIN DE LOS

CAMBIOS
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