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Resumen
Stenotrophomonas maltophilia, anteriormente conocida como Xanthomonas maltophilia y
Pseudomonas maltophilia es un bacilo Gram negativo no fermentador de la glucosa, reconocido
como agente causal de diversas infecciones nosocomiales, adems de presentar resistencia a ml-
tiples agentes antimicrobianos. El objetivo del presente estudio fu identificar y caracterizar feno-
tpicamente cepas clnicas de S. maltophilia as como tambin establecer un patrn de actividad in
vitro a diferentes antimicrobianos. Los aislados bacterianos, fueron suministrados por el labora-
torio de Bacteriologa del Hospital de Cuman para ser identificadas a travs de pruebas bioqumi-
cas convencionales y de un mtodo comercial empleando las galerias API ID32GN. Se determin la
CMI de los antimicrobianos mediante la tcnica de dilucin en agar Mueller Hinton siguiendo las
normas del CLSI. Se identificaron fenotpicamente 24 cepas de S. maltophilia. La identificacin
fue 100% coincidente con ambas tcnicas. Se mantuvo un patrn uniforme entre las cepas excepto
para oxidasa donde 17 (70,83%) fueron positivas y 7 (29,17%) negativas. Los resultados de las
pruebas de identificacin mostraron la presencia de 5 fenotipos prevaleciendo el patrn tpico del
microorganismo (fenotipo I, 14 aislados). Las cepas mostraron 100% de resistencia a Imipenem,
cefepime, amikacina y cido nalidixico, 95,83% a cefotaxima, ceftazidima y ampicilina sulbactam,
91,67% a ceftriaxona y ciprofloxacina y 75% a piperacilina tazobactam, siendo ms susceptibles a
trimetoprim sulfametoxazol (91,67%), levofloxacina (75%) y rifampicina (95,83%).
Palabras clave: S. maltophilia, Antimicrobianos, susceptibilidad, fenotipificacin, infec-
cin nosocomial.
Abstract
Stenotrophomonas maltophilia, previously known as Xanthomonas maltophilia and
Pseudomonas maltophilia, is a Gram negative rod, and a non fermentator of glucose, recognized
as a causal agent of diverse hospital infections, it also shows resistance to multiple antimicrobial
agents. The objective of the present study was to identify and to characterize phenol-type, clinical
isolates of S. maltophilia, as well as to establish an in vitro activity pattern of different
antimicrobials. The bacterial strains were isolatde in the Bacteriology Laboratory at the General
Hospital in Cuman, and were identified through conventional biochemical tests, as well as using
the commercial galleries of API ID32GN. The MIC of the anti-microbes was determined by
dilution in Mueller Hutton agar following CLSI norms. Pheno-typically, 24 strains were identified
of S. maltophilia. The identification was 100% coincident with both classification techniques. The
uniform pattern was maintained for the isolates except for the oxidase test, where 17 (70.83%)
were positive and 7 (29.17%) negative. The results of the identification test showed the presence of
5 phenotypes in which the typical pattern of the microorganism (phenotype I, 14 isolates)
prevailed. The strains showed 100% resistance to imipenem, cefepime, amikacin and nalidixico,
95.83% to cefotaxime, ceftazidime and ampicillin- sulbactam, 91,67% to ceftriaxone and
ciprofloxacin, and 75.00% to piperacillin-tazobactam, all of which showed more susceptibility to
trimetoprim sulfametoxazole (91.67%), levofloxacin (75%) and rifampin (95.83%)
Key words: S. maltophilia, anti-microbials, susceptibility, phenotipification, nosocomial
infections.
Los BGNNF son microorganismos que como agentes causales de infecciones intra-
constituyen aproximadamente, el 15% de to- hospitalarias a consecuencia de su demostra-
dos los aislamientos en los laboratorios de da multirresistencia, a los antimicrobianos
microbiologa clnica, se comportan como t- de uso frecuente, y al aumento creciente de
picos patgenos oportunistas y actualmente sus aislamientos. En Venezuela son escasos y
han cobrado notoria importancia por su inci- poco precisos los estudios reportados al res-
dencia en infecciones hospitalarias (2). Mu- pecto por lo que, en el presente estudio se
chos de estos microorganismos muestran re- plante como objetivo identificar y caracteri-
sistencia a un amplio rango de agentes anti- zar fenotpicamente cepas de S. maltophilia
microbianos y/o tienen la habilidad de desa- de origen hospitalario, as como tambin es-
rrollar resistencia durante la terapia con an- tablecer un patrn de actividad in vitro a di-
timicrobianos (12). ferentes antimicrobianos.
La comprobacin de la resistencia bacte-
riana implica el fracaso de la teraputica. El Materiales y Mtodos
aumento del uso de antimicrobianos desde la
dcada de 1940 se ha acompaado del alza Los aislados clnicos utilizados en este
creciente en la resistencia, cuya principal cau- estudio, identificados como bacilos Gram ne-
sa es la inactivacin del antimicrobiano por la gativos no fermentadores de glucosa fueron
bacteria responsable de la infeccin (13). recolectados en el laboratorio de Bacteriolo-
Una caracterstica importante en el au- ga del Servicio Autnomo Hospital Universi-
mento de la incidencia de infecciones produ- tario Antonio Patricio de Alcal provenien-
cidas por S. maltophilia es el perfil particular tes principalmente de muestras de hemocul-
de sensibilidad a antibiticos que posee el tivos, secreciones bronquiales, heridas y que-
microorganismo. La mayora de las cepas de maduras, uretral, lquido cefalorraqudeo y
S. maltophilia se caracteriza por su resisten- peritoneal, de pacientes hospitalizados con
cia a variados agentes antimicrobianos de procesos infecciosos.
amplio espectro incluyendo los b-lactmicos, Todos los aislados obtenidos fueron ca-
debido a la produccin heterognea de dos ti- racterizados por una combinacin de mto-
pos de betalactamasas inducibles, L1 y L2 dos microbiolgicos y bioqumicos en el labo-
(14, 15, 16, 17, 18), as como a otras alternati- ratorio de Bacteriologa del Departamento de
vas de tratamiento como aminoglucsidos y Bioanlisis y el Laboratorio de Microbiologa
quinolonas. Esta caracterstica de multirre- del Postgrado de Biologa Aplicada de la Uni-
sistencia involucra una disminucin de la versidad de Oriente, Cuman, siguiendo los
permeabilidad de la membrana que impide la procedimientos y esquemas de diagnstico
entrada del antibitico, falta de un sistema de establecidos para el aislamiento e identifica-
transporte para ese antibitico, en combina- cin de BGNNF (2).
cin con la produccin de enzimas hidrolti- El aislamiento de las cepas se realiz en
cas o inactivantes, y sistema de bombeo acti- Agar Nutritivo, Agar Sangre (AS) y Agar
vo del antibitico hacia el exterior de la bacte- MacConkey (MK), y se incubaron en aerobio-
ria (14, 19, 20, 21). sis a 35C por 24 a 48 horas verificndose las
Los BGNNF, constituyen los patgenos caractersticas morfolgicas de las colonias,
oportunistas de mayor inters en el rea hos- como tamao, forma, aspecto, color, hemli-
pitalaria, debido a su elevada incidencia sis, olor y produccin de pigmentos, para
orientar hacia el posible gnero a identificar. agar Mueller Hinton, segn el Clinical and
Tambin se le realiz un extendido y colora- Laboratory Standards Institute (22) para lo
cin de Gram a las colonias aisladas para ob- cual se utilizaron soluciones stock de los si-
servar su morfologa microscpica. guientes antibiticos obtenidos comercial-
mente y reconstituidos segn las indicacio-
Identificacin mediante pruebas nes del manufacturante: ceftriaxona, cefota-
convencionales xima, ampicilina sulbactam, cefepime, cefta-
Para la caracterizacin de los aislados zidima, imipenem, piperacilina-tazobactam,
bacterianos con base a sus caractersticas fe- amikacina, ciprofloxacina, levofloxacina, tri-
notpicas se utilizaron las siguientes pruebas: metoprim sulfametoxazol, acido nalidxico y
Oxidasa, motilidad, Oxidacin-Fermenta- rifampicina. Para realizar el control de cali-
cin de azcares glucosa, maltosa y manitol, dad, se emplearon cepas bacterianas con es-
crecimiento a 42C, Polimixina B, descarbo- pectro de sensibilidad conocido, utilizando
xilacin de la lisina, hidrlisis de la arginina e para ello, cepas certificadas de Pseudomonas
hidrlisis de la esculina. aeruginosa ATCC 27853 y Escherichia coli
ATCC 25922.
Identificacin mediante API ID32GN
La identificacin de los aislados me- Resultados
diante el kit de identificacin API ID32GN
empleando el sistema semiautomtico Se estudiaron 24 cepas identificadas
ATBplus (Biomeriux), se realiz preparando como S. maltophilia, todas ellas aisladas de
una suspensin colocando un inculo en un muestras patolgicas humanas durante el pe-
tubo con 2 mL de NaCl al 0,85% obteniendo riodo enero 2002 a mayo 2003 procedentes
una densidad ptica equivalente al patrn del Hospital Universitario Antonio Patricio
0,5 de MacFarland. 200L de la suspensin de Alcal, de Cuman, estado Sucre.
se transfirieron a un medio AUX (medio m- Mediante la coloracin de Gram se pu-
nimo semislido) y se homogeneiz, para dieron evidenciar las formas de bacilos Gram
inocular luego las tiras de reaccin de API negativos de 0,5 a 1,5 m aproximadamente
ID32GN con 135 L de la suspensin. Las ti- en su mayora dispuestos en pares o aislados
ras se incubaron de 24 a 48 horas a 30C y los y se pudo obtener buen crecimiento en los
resultados fueron obtenidos a travs de un agares especialmente en agar MacConkey a
equipo ATB expression. temperaturas de 35C. En cuanto a sus carac-
La caracterizacin definitiva del micro- tersticas morfolgicas las cepas mostraron
organismo se llev a cabo a travs del anlisis un patrn uniforme en la forma, tamao y co-
de los resultados de las pruebas convenciona- lor, reflejndose como cepas lactosa negativa
les y los resultados obtenidos con las galerias en el medio de agar MacConkey, pequeas,
API ID32GN. redondas, de bordes lisos, y un ligero color
amarillento en agar nutritivo y agar sangre.
Determinacin de la Concentracin De las 24 cepas identificadas como S.
Mnima Inhibitoria (CMI) maltophilia (Tabla 1) 17 (70,83%) resultaron
Las Concentraciones Mnimas Inhibito- ser oxidasa negativa y 7 (29,17%) oxidasa po-
rias para los diferentes antimicrobianos se sitiva, por lo que no se puede hablar de que
realiz empleando el mtodo de dilucin en este microorganismo es exclusivamente oxi-
dasa negativo, sino tambin hay que conside- pida y sencilla que por el mtodo manual,
rar las cepas oxidasa positiva con las caracte- aunque un poco ms costoso.
rsticas morfolgicas de la colonia. Las prue- Las pruebas de susceptibilidad reporta-
bas de OxidacinFermentacin de azcares ron 100% de resistencia a imipenem, cefepi-
mostraron que todas las cepas eran positivas me, amikacina y acido nalidxico, 95,83% a
para glucosa y maltosa pero 23 eran negati- cefotaxima, ceftazidima y ampicilina-sulbac-
vas para manitol. Todas las cepas resultaron tam, 91,67% a ceftriaxona y ciprofloxacina y
ser motilidad positiva, Lisina positiva y Poli- 75,00% a piperacilina tazobactam, sin em-
mixina B sensibles, lo cual corresponde con bargo arrojaron 91,67% de sensibilidad al tri-
lo sealado en la literatura (2). En el caso de metoprim sulfametoxazol, 75,00% a levoflo-
la prueba de la esculina todas dieron positi- xacina y 95,83% a rifampicina. Los resulta-
vas a excepcin de una sola cepa que dio ne- dos de las pruebas evidenciaron que la mayo-
gativa. Estos resultados permitieron caracte- ra de los aislados de S. maltophilia fueron al-
rizarlas bioqumicamente, mostrando como tamente resistentes entre 9 a 12 de los anti-
resultado la presencia de 5 fenotipos , siendo microbianos estudiados, incluyendo betalac-
el fenotipo I el ms frecuente (Tabla 2). tmicos y aminoglucsidos, siendo ms sen-
La caracterizacin bioqumica a travs sible a trimetoprim sulfametoxazol, levoflo-
de API ID32GN mostr resultados realmente xacina y a rifampicina (Tabla 3). Estos resul-
satisfactorios, ya que las cepas reportadas tados, revelaron la existencia de siete patro-
como S. maltophilia por este Kit, se corres- nes de susceptibilidad (Tabla 4), siendo el
pondieron con las identificadas por las prue- ms frecuente el patrn I con 11 aislados
bas bioqumicas convencionales. La identifi- (45,83%), seguido del II con 7 (29,17%).
cacin por este Kit result ser mucho ms r-
sobre su frecuencia de aislamientos en el me- (6) Blazevic D.J. Current taxonomy and identi-
dio hospitalario y los patrones de susceptibi- fication of non-fermentative Gram-negative
bacilli. Hum. Pathol. 1976.7:265-275
lidad antimicrobiana que este microorganis-
(7) Davin-Regli A.; Bollet C.; Auffray J.P.; Saux
mo ha desarrollado. P.; De Micco P.;Use of random amplified
S. maltophilia, present variaciones en polymorphic DNA for epidemiological Typ-
su fenotipo bioqumico, sin embargo prevale- ing of Stenotrophomonas maltophilia. J.
ci el patrn tpico del microorganismo (Fe- Hosp. Infect. 1996; 32:39-50.
notipo I, 14 aislados). (8) Holmes B., Lapage S.P.; Easterling B.G. Dis-
tribution in clinical material and identifica-
La prueba de oxidasa, al momento de
tion of Pseudomonas maltophilia. J. Clin.
aplicar los esquemas de identificacin, debe Pathol. 1979; 32: 66-72
se analizada teniendo en cuenta la posibili- (9) Morrison A. J.; Jr., K. K. Hoffmann and R. P.
dad de cepas oxidasa positiva. Wenzel. Associated mortality and clinical
Los aislados estudiados presentaron characteristics of nosocomial Pseudomonas
gran homogeneidad en su perfil antimicro- maltophilia in a university hospital. J. Clin.
Microbiol. 1986; 24:52-55.
biano mostrando multirresistencia a la ma-
(10) Ronconi M.; Merino L.; Usandizaga, G.; Ca-
yora de los antibiticos probados siendo tri-
margo M.; Irigoyen B.; Presti S.; Mrquez I.;
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