UNIVERSITATEA BABES-BOLYAI CLUJ-NAPOCA

FACULTATEA DE CHIMIE I INGINERIE CHIMICA

TEZA DE DOCTORAT

INVESTIGAII PRIVIND OBINEREA COMBUSTIBILILOR DE

TIP BIODIESEL PE CALE ENZIMATIC
REZUMAT

Conductor tiinific,
Prof. Dr. Florin-Dan Irimie Doctorand,
Adriana Jurj (cs. Gog)

Cluj-Napoca
2011
 Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Cuprins
CAPITOLUL I: PREAMBUL 12
CAPITOLUL II: TEHNOLOGII DE OBTINERE A COMBUSTIBILILOR DE TIP 16
BIODIESEL
1. Introducere 16
2 Obinerea de biodiesel prin reacii de transesterificare 17
2.1 Generaliti 17
2.2 Transesterificarea n cataliz omogen alcalin 19
2.3 Transesterificarea n cataliz omogen acid 20
2.4 Transesterificarea n cataliz eterogen bazic i acid 20
2.5 Transesterificarea enzimatic 21
2.6 Transesterificarea cu alcool n stare supercritic i subcritic 22
2.7 Transesterificarea folosind microunde 23
2.8 Transesterificarea folosind ultrasunete 24
3 Concluzii 25
4 Bibliografie 25
CAPITOLUL III: UTILIZAREA ENZIMELOR PENTRU OBINEREA 31
COMBUSTIBILILOR DE TIP BIODIESEL
1. Introducere 31
2. Dezavantajele proceselor utilizate n prezent pentru obinerea de biodiesel 32
3. Obinerea de biodiesel prin tehnici enzimatice 32
3.1 Mecanismul reaciei de transesterificare a trigliceridelor n alchil esteri 33
catalizat de lipaze
3.2 Lipazele utilizate n procesele de obinere a biodieselului 37
3.3 Substraturile folosite pentru obinerea de biodiesel 38
3.4 Alcoolii utilizai n procesul enzimatic de transesterificare 39
3.5 Mediul de reacie prezena sau absena solventului organic 39
3.6 Coninutul de ap 41
3.7 Inactivarea i regenerarea lipazelor n cadrul proceselor de obinere a 41
biodieselului
3.7.1 Inactivarea lipazelor datorat metanolului 41
3.7.2 Inactivarea lipazelor datorat glicerolului 43
3.7.3 Inactivarea lipazelor datorat fosfolipidelor 44
4. Concluzii 44
5. Bibliografie 45
CAPITOLUL IV: CARACTERIZARE FIZICO-CHIMICA ULEI DE FLOAREA 49
SOARELUI - MATERIA PRIM FOLOSIT PENTRU OBINEREA DE
BIODIESEL PE CALE ENZIMATIC
1. Generaliti 49
2. Materiale si metode 50
2.1 Materiale 50
2.2Determinarea compoziiei n acizi grai a uleiului de floarea soarelui 50
2.2.1 Principiul metodei 50
2.2.2 Aparatura 50
2.2.3 Mod de lucru: 50
2.3 Determinarea indicelui de iod 51
2.3.1 Principiul metodei 51
2.3.2 Mod de lucru 51
2.4 Determinarea indicelui de aciditate 51
 Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

2.4.1 Principiul metodei 51

2.4.2 Mod de lucru 51
2.5 Determinarea coninutului de ap 52
2.5.1 Principiul metodei 52
2.5.2 Mod de lucru 52
2.6 Determinarea coninutului de sulf 52
2.6.1 Principiul metodei 52
2.6.2 Mod de lucru 53
3. Rezultate si discutii 53
3.1 Compoziia n acizi grai a uleiului de floarea soarelui 53
3.2 Indicele de iod 56
3.3 Indicele de aciditate 57
3.4 Coninutul de ap 57
3.5 Coninutul de sulf 58
4. Concluzii 58
5. Bibliografie 59
CAPITOLUL V CONTRIBUII ORIGINALE PRIVIND OBINEREA 60
ENZIMATIC A COMBUSTIBILILOR DE TIP BIODIESEL
1. Consideraii generale 60
2. Screeningul lipazelor pentru obtinerea de biodiesel din ulei de floarea soarelui 62
2.1 Materiale i metode 63
2.1.1 Materiale 63
2.1.2 Reacia de metanoliz enzimatic 63
2.1.3 Analiza gaz-cromatografic 64
2.2 Rezultate i discuii 64
3. Optimizarea metanolizei enzimatice de obtinere biodiesel din ulei de floarea 72
soarelui
3.1 Materiale i metode 72
3.1.1 Materiale 72
3.1.2 Metanoliza uleiului de floarea soarelui 73
3.1.3 Analiza gaz-cromatografic 73
3.2 Rezultate i discuii 74
3.2.1 Efectul tert-butanolului ca mediu de reacie pentru metanoliza 74
uleiului de floarea soarelui
3.2.2 Efectul raportului molar metanol/ulei floarea soarelui 75
3.2.3 Cantitatea de enzim 75
4. Obtinerea de biodiesel prin metanoliza enzimatica a uleiului de floarea soarelui: 77
sistem batch cu agitare vs sistem coloana cu umplutura si recirculare
4.1 Materiale i metode 77
4.1.1 Materiale 77
4.1.2 Metanoliza uleiului de floarea soarelui 78
4.1.2.1 Reactor tip batch 78
4.1.2.2 Reactor tip coloan cu umplutur 78
4.1.3 Analiza gaz-cromatografic 78
4.2 Rezultate i discuii 79
5. Concluzii 87
6. Anexe 88
7.Bibliografie 100
CAPITOLUL VI CARACTERIZARE FIZICO-CHIMICA BIODIESEL 102
OBINUT PRIN METANOLIZA ENZIMATIC A ULEIULUI DE FLOAREA
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

SOARELUI
1. Generaliti 102
2 Materiale si metode 104
2.1 Materiale 104
2.2 Determinarea coninutului de esteri din biodiesel 105
2.2.1 Principiul metodei 105
2.2.2 Aparatura 105
2.2.3 Mod de lucru 105
2.3 Determinarea densitii la 15C 106
2.3.1 Principiul metodei 106
2.3.2 Mod de lucru 106
2.4 Determinarea viscozitii la 40C 106
2.4.1 Principiul metodei 106
2.4.2 Mod de lucru 106
2.5 Determinarea punctului de inflamabilitate 107
2.5.1 Principiul metodei 107
2.5.2 Mod de lucru 107
2.6 Determinarea coninutului de sulf 107
2.6.1 Principiul metodei 107
2.6.2 Mod de lucru 108
2.7 Determinarea coninutului de ap 108
2.7.1 Principiul metodei 108
2.7.2 Mod de lucru 108
2.8 Determinarea indicelui de aciditate 108
2.8.1 Principiul metodei 108
2.8.2 Mod de lucru 109
2.9 Determinarea indicelui de iod 109
2.9.1 Principiul metodei 109
2.9.2 Mod de lucru 109
2.10 Determinarea coninutului de metanol 109
2.10.1 Principiul metodei 109
2.10.2 Aparatura 109
2.10.3 Mod de lucru 110
2.11 Determinarea coninutului de glicerol liber i total i mono-, di-, 110
trigliceridelor reziduale
2.11.1 Principiul metodei 110
2.11.2 Aparatura 111
2.11.3 Mod de lucru 111
2.12 Determinarea coninutului de Na, K 112
2.12.1 Principiul metodei 112
2.12.2 Mod de lucru 112
2.13 Valoare energetic (puterea calorific) 112
2.13.1 Principiul metodei 112
2.13.2 Mod de lucru 112
3. Rezultate si discuii 113
3.1 Coninutul de esteri 114
3.2 Densitatea la 15 C 115
3.3 Viscozitatea la 40 C 115
3.4 Punctul de inflamabilitate 116
3.5 Coninutul de sulf 117
 Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

3.6 Coninutul de ap 117

3.7 Indicele de aciditate 118
3.8 Indicele de iod 118
3.9 Coninutul de metanol 119
3.10 Coninutul de mono- di- i trigliceride, glicerol liber i glicerol total 120
3.11 Coninutul de Na, K 123
3.12 Valoarea energetic (puterea calorific) 123
4. Concluzii 124
5. Bibliografie 124
CAPITOLUL VII CONCLUZII 126
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Capitolul I
Preambul
Biodieselul este format dintr-un amestec de esteri alchilici ai acizilor grai i reprezint
un substituent natural pentru combustibilii de tip diesel de origine petrolier, datorit
calitilor similare sau uneori, chiar superioare, pe care le prezint fa de acetia. Biodieselul
este un combustibil obinut din surse regenerabile, n principal uleiuri vegetale i grsimi
animale.
Un domeniu de mare interes este reprezentat de obinerea biodieselului pe cale
enzimatic, proces care elimin dezavantajele procesului alcalin aplicat n prezent pentru
producia de biodiesel la nivel industrial.
Teza de doctorat abordeaz o tematic de actualitate i anume, obinerea
combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic.
n urma activitii de cercetare teoretic i experimental se pot evidenia urmtoarele
contribuii originale ale acestei teze de doctorat:
Caracterizarea uleiului de floarea soarelui obinut local folosit ca materie prim pentru
obinerea de biodiesel pe cale enzimatic. Aceast caracterizare este necesar deoarece
materia prim influeneaz semnificativ caracteristicile de combustibil ale biodieselului
obinut. Caracteristicile care s-au determinat au fost urmtoarele: compoziia n acizi
grai, indicele de aciditate, indicele de iod, coninutul de ap, coninutul de sulf.
Screeningul a ase tipuri de lipaze pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui i
anume: lipaza din Candida rugosa sub form liber (CRL), lipaza B din Candida
antarctica sub form imobilizat pe suport de rin acrilic (Novoyzm 435), lipaza
pancreatic de origine porcin sub form liber (PPL), lipaza din Mucor miehei sub
form imobilizat pe rin macroporoas schimbtor de ioni (Lipozyme MM IM),
lipaza AK din Pseudomonas fluorescens (AK) sub form liber i lipaza A din Candida
antarctica sub form imobilizat.
Stabilirea condiiilor optime de reacie pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui
catalizat de Novozym 435 i anume: prezena tert-butanolului ca mediu de reacie
pentru a evita inhibiia lipazei cauzat excesul de metanol, temperatura optim de
reacie: 40 C, raportul volumetric tert-butanol:ulei 6:1, raportul molar metanol:ulei 6:1,
cantitatea de Novozym 435 10 % (m/m), n raport cu cantitatea de ulei.
Evaluarea a dou sisteme de reacie pentru metanoliza enzimatic a uleiului de floarea
soarelui i anume: un sistem de reacie cu agitare continu (reactor de tip batch) cu un
sistem de reacie cu deplasare continu i recirculare (reactor de tip coloan cu
umplutur);
Caracterizarea combustibilului de tip biodiesel obinut prin metanoliza enzimatic a
uleiului de floarea soarelui i evaluarea acestui biodiesel n raport cu specificaiile de
calitate impuse de standardul european de biodiesel, SR EN 14214:2010. n acest sens
s-au determinat urmtoarele caracteristici fizico-chimice: coninutul de esteri,
densitatea la 15C, viscozitatea la 40C, punctul de inflamabilitate, coninutul de sulf,
coninutul de ap, indicele de aciditate, indicele de iod, coninutul de metanol,
coninutul de mono-, di-, trigliceride, glicerol liber i total, coninutul de Na, K,
valoarea energetic.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Capitolul IV
Caracterizarea fizico-chimic a uleiului de floarea soarelui - materia
prim folosit pentru obinerea de biodiesel pe cale enzimatic
3.1 Compoziia n acizi grai a uleiului de floarea soarelui
Determinarea compoziiei n acizi grai prin gaz cromatografie presupune transformarea
lor n esteri metilici mai volatili, prin metanoliza bazic. Cromatograma obinut n urma
analizei gaz-cromatografice este dat n Figura 4.1.

Figura 4.1. Cromatograma obinuta prin analiza gaz-cromatografic n vederea determinrii

compoziiei n acizi grai a uleiului de floarea soarelui

Compoziia n acizi grai a uleiului de floarea soarelui determinat prin gaz

cromatografie cu detector cu ionizare n flacr este prezentat n Tabelul 4.1.

Tabel 4.1. Compoziia n acizi grai a uleiului de floarea soarelui folosit pentru reaciile de obinere
a biodieselului
RT Coninut
Denumire sistematic Denumire uzual Abreviere
(min) [%] (m/m)
Acid hexadecanoic Acid palmitic C16:0 8,793 6,16
Acid octadecanoic Acid stearic C18:0 10,707 3,88
Acid cis-9-octadecenoic Acid oleic C18:1n9 10,980 26,3
Acid cis,cis-9,12- Acid linoleic C18:2n6 11,575 62,65
octadecadienoic
Acid 6,9,12- Acid -linolenic C18:3n6 12,351 0,10
octadecatrienoic
Acid eicosanoic Acid arahidic C20:0 13,256 0,16
Acid cis-11-eicosenoic Acid gadoleic C20:1 c 13,561 0,02
Acid docosanoic Acid behenic C22:0 16,439 0,63
Acid tetracosanoic Acid lignoceric C24:0 20,915 0,10
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Din fig. 4.1 i tabelul 4.1 se observ c acidul gras majoritar este acidul linoleic cu un
procent masic de 62.6%, urmat de acidul oleic cu un procent de 26.3%. Pe baza rezultatelor
obinute se poate calcula compoziia n acizi grai n funcie de gradul de nesaturare, aceasta
fiind dat n Tabelul 4.2.

Tabel 4.2. Compoziia n acizi grai a uleiului de floarea soarelui n funcie de gradul de nesaturare
Compoziia n acizi grai Coninut
[%] (m/m)
Acizi grai saturai 11.0
Acizi grai mononesaturai 26.3
Acizi grai polinesaturai 62.7

Datele obinute arat faptul c uleiul de floarea soarelui, datorit compoziiei n acizi
grai prezint unele dezavantaje n ceea ce privete cteva caracteristici de motor i anume:
stabilitatea la oxidare, stabilitatea la depozitare, performana motorului, dei n amestecurile
cu motorin n proporiile folosite la ora actual (5-20%) influena lor este nesemnificativ. n
schimb, avantajul principal l constituie scderea CFPP care are ca i consecin direct
creterea utilizrii biodieselului rezultat pe timp de iarn.
Valorile obinute pentru celelalte caracteristici determinate pentru uleiul de floarea
soarelui: indicele de iod, indicele de aciditate, coninutul de sulf, coninutul de ap, sunt date
n Tabelul 4.5, acestea fiind discutate ulterior.

Tabel 4.5 Caracteristici fizico-chimice ale uleiului de floarea soarelui folosit ca materie prim pentru
obinerea biodieselului pe cale enzimatic
Caracteristica UM Valoare
Coninut de sulf mg/kg 0.27
Coninut de ap mg/kg 360.6
Indice de aciditate mg KOH/g 0.06
Indice de iod g I2/100g 128

3.2 Indicele de iod

Indicele de iod este exprimat n grame de iod care reacioneaz cu 100 g grsime sau
ulei n anumite condiii, fiind un parametru care cuantific gradul de nesaturare al
grsimii/uleiului respectiv. Pentru uleiul de floarea soarelui s-a obinut o valoare a indicelui
de iod de 128 g I2/100 g ulei, valoare care corespunde cu datele existente n literatur, pentru
care indicele de iod este situat n domeniul 125 135 g I2/100 g ulei [5].
Preocuprile privind posibilele probleme cauzate de biodiesel asupra motoarelor au fost
adesea atribuite materiilor prime cu valoare ridicat a indicelui de iod dei studiile realizate
au demonstrat faptul c stabilitatea biodieselului depinde, n afar de gradul de nesaturare i
de coninutul de antioxidani, i de tehnologia de producie utilizat.

3.3 Indicele de aciditate

Aciditatea este un indiciu al prezenei acizilor grai liberi sau al acizilor formai ca
urmare a degradrii i arderii uleiului (n timpul sau dup prelucrare). Indicele de aciditate
reprezint cantitatea de baz necesar pentru a neutraliza proba de ulei, fiind exprimat n mg
KOH/g prob. Acest parametru este de foarte mare interes, mai ales, n cazul metanolizei
alcaline unde prezena acizilor grai liberi trebuie limitat datorit formrii de spunuri care
duc la formarea de emulsii. n cazul biodieselului enzimatic, prezena acizilor grai liberi n
materia prim nu constituie o problem, acetia fiind convertii n esteri concomitent cu
trigliceridele.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Valoarea indicelui de aciditate pentru uleiul de floarea soarelui utilizat ca materie prim
pentru obinerea de biodiesel pe cale enzimatic este de 0.06 mg KOH/g ulei, o valoare care
indic un coninut sczut de acizi grai liberi.

3.4 Coninutul de ap
Apa reprezint un component minor care se regsete n majoritatea materiilor prime
folosite pentru obinerea de biodiesel. n general, un coninut ridicat de ap determin o
scdere a randamentului n esteri deoarece are loc o reacie nedorit de hidroliz a
trigliceridelor. n ceea ce privete procesele enzimatice, este necesar prezena unei anumite
cantiti de ap care s lubrifice lanurile polipeptidice i care s menin enzima n
conformaia sa activ. Pentru uleiul de floarea soarelui folosit ca materie prim s-a obinut o
valoare de 360 mg/Kg, o valoare sub limita maxim admis pentru biodiesel conform
standardului de calitate SR EN 14214:2010 i anume 500 mg/Kg [1].

3.5 Coninutul de sulf

Coninutul de sulf din biodiesel este limitat la 10 mg/Kg de ctre standardul de calitate
SR EN 14214:2010. Din aceast cauz este important de tiut coninutul de sulf din materia
prim deoarece aceasta poate contribui la coninutul de sulf din biodieselul rezultat. Pentru
uleiul de floarea soarelui s-a obinut o valoare a coninutului de sulf de numai 0,27 mg/Kg,
mult sub limita impus de standardul de calitate SR EN 14214:2010 [1].

Capitolul V
Contribuii originale privind obinerea enzimatic a combustibililor
de tip biodiesel

2. Screeningul lipazelor pentru obinerea de biodiesel din ulei de floarea

soarelui
n cadrul acestei activiti de cercetare experimental s-a realizat un proces de
screening al lipazelor n vederea stabilirii enzimei adecvate pentru metanoliza uleiului de
floarea soarelui. Lipazele care s-au testat pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui au
fost urmtoarele: lipaza din Candida rugosa sub form liber (CRL), lipaza B din Candida
antarctica sub form imobilizat pe suport de rin acrilic (Novozym 435), lipaza
pancreatic de origine porcin sub form liber (PPL), lipaza din Mucor miehei sub form
imobilizat pe rin macroporoas schimbtor de ioni (Lipozyme MM IM), lipaza AK din
Pseudomonas fluorescens (AK) sub form liber i lipaza A din Candida antarctica sub
form imobilizat.
Pentru fiecare dintre aceste lipaze a fost realizat reacia de metanoliz a uleiului de
floarea soarelui n mediu de ter-butanol, la patru temperaturi de reacie diferite: 25C, 40C,
50C i 60C. Experimentele pentru screeningul lipazelor au fost realizate n prezen de ter-
butanol pentru a evita inactivarea lipazelor de ctre metanol, respectiv de glicerolul rezultat n
cadrul reaciei. ter-Butanolul dizolv att metanolul ct i glicerolul i nu reprezint un
substrat pentru lipaze deoarece acestea nu acioneaz asupra alcoolilor teriari.
Reaciile au fost monitorizate timp de 24 h, iar pentru aceasta s-au prelevat probe din
amestecul de reacie la intervale regulate de timp i s-au analizat. Analizele au urmrit
determinarea coninutului de esteri metilici i au fost realizate cu ajutorul cromatografiei n
faz gazoas cu detector cu ionizare n flacr.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Prin reprezentarea grafic a datelor obinute s-a evideniat att influena lipazei ct i a
temperaturii asupra reaciei de transesterificare a uleiului de floarea soarelui cu metanol.
n Figurile 5.2-5.3 sunt reprezentate grafic rezultatele obinute pentru metanoliza
uleiului de floarea soarelui la 25 C pentru cele ase lipaze supuse testrii. Se poate observa
c cele mai bune rezultate dup 24 h de reacie au fost obinute pentru Novozym 435 cu un
randament n esteri de 70,2 %, urmat de lipazele Lipozyme MM i AK cu randamente de
46,5 %, respectiv 41,5 %. PPL a dus la obinerea unui randament de 11,7 % n timp ce CRL a
prezentat o activitate enzimatica foarte slab, cu un randament de numai 1,8 %. Lipaza A de
la Candida antarctica nu a prezentat activitate enzimatic.

100
Randament in esteri, %

80
AK
60 Novozym 435
Lipozyme MM IM
PPL
40 CRL
CaLA
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp, h
Figura 5.2 Reprezentarea grafic a variaiei n timp a randamentelor n esteri pentru cele ase lipaze
studiate la 25C metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim (m/m) n raport cu
cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm

100
Randament in esteri, %

80

60

40

20

0
AK Novozym Lipozyme PPL CRL CaLA
435 MM IM

Figura 5.3 Screening-ul lipazelor pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui n prezen de t-
butanol la 25C metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim (m/m) n raport cu
cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm

Rezultatele obinute pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui la 40 C pentru cele

ase lipaze supuse testrii sunt reprezentate grafic n Figurile 5.4-5.5. Cele mai bune rezultate
pentru temperatura de 40 C au fost obinute tot pentru Novozym 435 cu un randament n
esteri de 88,7 %, urmat de lipaza AK i Lipozyme MM cu randamente de 59,3 %, respectiv
53,2 %. PPL a dus la obinerea unui randament de 12,2 % n timp ce CRL a prezentat o
activitate enzimatic foarte slab, cu un randament de numai 2.2 %. Lipaza A de la Candida
antarctica nu a prezentat activitate enzimatic.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

100

Randament in esteri, %
80
AK
60 Novozym 435

Lipozyme MM
40 IM
PPL

20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp, h
Figura 5.4 Reprezentarea grafic a variaiei n timp a randamentelor n esteri pentru cele ase lipaze
studiate la 40C metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim (m/m) n raport cu
cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm

100
Randament in esteri, %

80

60

40

20

0
AK Novozym Lipozyme PPL CRL CaLA
435 MM

Figura 5.5 Screening-ul lipazelor pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui n prezen de t-
butanol la 40C metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim (m/m) n raport cu
cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm

Rezultatele obinute pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui la 50 C pentru cele

ase lipaze testate sunt reprezentate grafic n Figurile 5.6-5.7.

100
Randament in esteri, %

80
AK
60 Novozym 435
Lipozyme MM IM
PPL
40 CRL
CaLA
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp, h
Figura 5.6 Reprezentarea grafic a variaiei n timp a randamentelor n esteri pentru cele ase lipaze
studiate la 50C metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim (m/m) n raport cu
cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

100

Randament in esteri, %
80

60

40

20

0
AK Novozym Lipozyme PPL CRL CaLA
435 MM

Figura 5.7 Screening-ul lipazelor pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui n prezen de t-
butanol la 50C metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim (m/m) n raport cu
cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm

Dup 24 h de reacie la 50 C, cele mai bune rezultate au fost obinute tot pentru Novozym
435 cu un randament n esteri de 82,7 %, urmat de lipaza AK i Lipozyme MM cu
randamente de 42,4 %, respectiv 38,0 %. PPL a prezentat o foarte slab activitate enzimatic
cu un randament de numai 0,3 % iar CRL i CaL A nu au prezentat activitate enzimatic.
Variaia randamentelor pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui la 60 C catalizat
de cele ase lipaze supuse testrii, este reprezentat grafic n Figurile 5.8-5.9.
100
Randament in esteri, %

80
AK
60 Novozym 435
Lipozyme MM IM
PPL
40 CRL
CaLA
20

0
0 5 10 15 h
Timp, 20 25 30
Figura 5.8 Reprezentarea grafic a variaiei n timp a randamentelor n esteri pentru cele ase lipaze
studiate la 60C metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim (m/m) n raport cu
cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm

100
Randament in esteri, %

80
60
40
20
0
AK Novozym Lipozyme PPL CRL CaLA
435 MM

Figura 5.9 Screening-ul lipazelor pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui n prezen de t-
butanol la 60C metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim (m/m) n raport cu
cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

i n acest caz, cele mai bune rezultate dup 24 h de reacie au fost obinute pentru
Novozym 435, dei randamentul n esteri a sczut la 77,2%. Pentru lipaza AK s-a obinut un
randament de numai 23,2 %, n timp ce Lipozyme MM a prezentat o foarte slab activitate
enzimatic cu un randament de numai 1,84 %. Celelalte trei lipaze nu au prezentat activitate
enzimatic.
Influena temperaturii asupra activitii enzimatice a lipazelor studiate pentru
metanoliza uleiului de floarea soarelui este reprezentat grafic n Figura 5.10. Creterea
temperaturii peste 40C a determinat scderea activitii enzimatice pentru fiecare caz.
n urma seturilor de experimente realizate n vederea gsirii enzimei cu cea mai mare
eficien, se poate concluziona c cele mai bune rezultate au fost obinute pentru Novozym
435 care a dus la obinerea unui randament n esteri de 88,7 % pentru o temperatur de reacie
de 40C. Aceasta a fost urmat de lipaza AK cu un randament de 59,3 % i de Lipozyme MM
cu un randament de 53,2%. PPL a prezentat o activitate enzimatic destul de slab cu un
randament de 12,2 % n timp ce pentru CRL activitatea enzimatic a fost aproape inexistent
(randament de 2,2 %). Lipaza A de la Candida antarctica nu a prezentat activitate enzimatic
ceea ce nseamn c trigliceridele nu reprezint un substrat pentru aceast enzim. n ceea ce
privete temperatura de reacie, se observ c, pentru toate lipazele testate, temperatura de
40C a dus la cele mai mari randamente n esteri metilici.

100
Randament in esteri, %

80
25C
60 40C
50C
40 60C

20

0
AK Novozym Lipozyme PPL CRL CaLA
435 MM

Figura 5.10 Influena temperaturii asupra activitii lipazelor pentru metanoliza uleiului de floarea
soarelui n prezen de t-butanol metanol/ulei 6:1(mol/mol); ter-butanol:ulei 4:1 (v/v), 2% enzim
(m/m) n raport cu cantitatea de ulei; timp de reacie, 24 h, agitare 200 rpm

3. Optimizarea metanolizei enzimatice de obinere biodiesel din ulei de floarea

soarelui
Obiectivul acestei activiti de cercetare experimentale l-a constituit identificarea
condiiilor optime de reacie pentru metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui,
catalizat de Novozym 435, lipaza B din Candida antarctica. Dintre enzimele testate n
procesul de screening pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui, Novozym 435 a dus la
obinerea celor mai bune rezultate, aceasta fiind n continuare utilizat pentru procesele de
metanoliz a uleiului de floarea soarelui. Temperatura optim a enzimei pentru reacia de
transesterificare a trigliceridelor s-a dovedit a fi 40 C. Rezultate bune s-au obinut i la
temperatura camerei, la care s-au testat i urmtorii parametri de reacie: cantitatea de
solvent, cantitatea de enzim i raportul molar metanol/ulei.

3.2.1 Efectul ter-butanolului ca mediu de reacie pentru metanoliza uleiului de floarea

soarelui
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Pentru reacia de metanoliz a uleiului de floarea soarelui catalizat de Novozym 435,

ca mediu de reacie s-a ales ter-butanolul deoarece dizolv att metanolul ct i glicerolul i
nu reprezint un substrat pentru lipaze (lipazele nu prezint activitate enzimatic fa de
alcoolii teriari) [6]. n plus, ter-butanolul este un solvent netoxic, iar n ceea ce privete
preul, este relativ ieftin. n cadrul acestei lucrri s-a studiat efectul ter-butanolului asupra
metanolizei enzimatice a uleiului de floarea soarelui prin determinarea randamentului n
esteri pentru un raport ter-butanol/ulei cuprins n intervalul 0:1 8:1 (v/v). Rezultatele
obinute sunt reprezentate grafic n Figura 5.11.

100
Randament in esteri ,% (m/m)

80

60

40

20

0
0 2 4 6 8
tert-butanol/ulei (v/v)

Figura 5.11. Efectul ter-butanolului asupra metanolizei enzimatice a uleiului de floarea soarelui.
Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), 10% Novozym 435 raportat la cantitatea de ulei, timp
de reacie 8 h

n lipsa solventului organic, randamentul n esteri a fost foarte sczut, de numai 5,7 %
(m/m), ca urmare a toxicitii metanolului asupra activitii lipazei. n momentul n care ter-
butanolul a fost introdus n amestecul de reacie randamentul a crescut semnificativ. Cel mai
bun randament n esteri, i anume de 70% (m/m), a fost obinut pentru un raport volumetric
ter-butanol/ulei de 6:1, acesta fiind n continuare folosit n experimentele ulterioare.

3.2.2 Efectul raportului molar metanol/ulei floarea soarelui

Un alt parametru studiat a fost influena metanolului asupra randamentului n esteri.
Pentru aceasta s-a realizat un set de experimente n care raportul molar metanol/ulei a fost
variat n intervalul (3:1-8:1) (mol/mol), rezultatele fiind prezentate n Figura 5.12.

100
Randament in esteri ,% (m/m)

80

60

40

20

0
3 4 5 6 7 8
metanol/ulei (mol/mol)

Figura 5.12. Efectul raportului molar metanol/ulei asupra reaciei de metanoliz a uleiului de floarea
soarelui. Condiii de reacie: ter-butanol/ulei 6:1 (mol/mol), 10% Novozym 435 raportat la
cantitatea de ulei, timp de reacie 8 h
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Din rezultatele obinute (fig. 5.12) se observ c randamentul n esteri metilici a crescut
odat cu creterea raportului molar metanol/ulei iar prezena ter-butanolului a permis
folosirea metanolului n mare exces fr s determine inactivarea lipazei. Avnd n vedere c
rezultatele pentru un raport molar metanol/ulei situat peste 6:1 nu mai variaz substanial,
varianta optim aleas a fost metanol/ulei 6:1 (mol/mol), utilizat n continuare.

3.2.3 Cantitatea de enzim

Un alt parametru studiat l-a constituit cantitatea de Novozym 435. Efectul cantitii de
enzim asupra randamentului n esteri a fost studiat prin folosirea unei cantiti de Novozym
435 cuprins ntre 1 i 15% (m/m) n raport cu cantitatea de ulei folosit.
Rezultatele obinute sunt prezentate n Figura 5.13.

100
Randament in esteri ,% (m/m)

80

60

40

20

0
1 2 4 6 8 10 12 15
cantitate de lipaza, % (m/m)

Figura 5.13. Efectul cantitii de lipaz asupra reaciei de metanoliz a uleiului de floarea soarelui.
Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1 (mol/mol), timp de reacie 8 h.

Din fig. 5.13 se observ c randamentul n esteri a crescut odat cu creterea cantitii
de enzim iar la o cantitate de lipaz de 10% (m/m) s-a obinut un randament de 72% dup 8
h de reacie. Creterea n continuare a cantitii de lipaz nu a dus la modificri semnificative
ale randamentului ceea ce a determinat ca n experimentele ulterioare cantitatea de 10 %
(m/m) s fie utilizat ca variant optim.
n urma experimentelor realizate pentru metanoliza uleiului de floarea soarelui
catalizat de Novozym 435 s-au gsit urmtoarele condiii optime de reacie:
este necesar prezena ter-butanolului ca mediu de reacie pentru a evita inhibiia
lipazei cauzat excesul de metanol;
raportul ter-butanol:ulei - 6:1 (v/v);
raportul metanol:ulei - 6:1 (mol/mol);
cantitatea de Novozym 435- 10 % (m/m), n raport cu cantitatea de ulei.

4. Obinerea de biodiesel prin metanoliza enzimatica a uleiului de floarea

soarelui: reactor batch cu agitare vs reactor coloana cu umplutura i
recirculare
n cadrul acestei activiti de cercetare experimental obiectivul principal l-a constituit
compararea a dou sisteme de reacie pentru obinerea de biodiesel pe cale enzimatic i
anume: metanoliz n sistem cu agitare continu, respectiv metanoliz n sistem cu deplasare
i recirculare.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

n primul caz reacia a fost realizat folosind un reactor de tip batch n care enzima este
supus agitrii mpreun cu amestecul de reacie de la nceputul reaciei pn la finalizarea
acesteia, n timp ce, n al doilea caz, reacia a avut loc prin recircularea amestecului de reacie
peste stratul fix de enzim reactor tip coloan cu umplutur.
Condiiile de reacie folosite n ambele cazuri sunt cele care s-au dovedit a fi optime
pentru metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui catalizat de Novozym 435.
Reaciile au fost monitorizate timp de 24 h, iar pentru aceasta s-au prelevat probe din
amestecul de reacie la intervale regulate de timp i s-au analizat. Analizele efectuate au
urmrit determinarea randamentului n esteri metilici i au fost realizate cu ajutorul
cromatografiei n faz gazoas.

4.2 Rezultate i discuii

Monitorizarea reaciilor n timp a fost realizat prin gaz-cromatografie folosind ca
standard intern heptadecanoatul de metil.
Pentru fiecare sistem de reacie, pe lng variaia n timp a randamentului global n
esteri, s-a monitorizat i variaia n timp a randamentului pentru fiecare ester cuantificat
individual. Datele astfel obinute au fost reprezentate grafic n Figurile 5.14-5.20.
Analiznd fig. 5.14 5.20 se observ c modul de variaie al randamentului global este
dat de cel al esterilor metilici ai acizilor majoritari din compoziia uleiului de floarea soarelui,
i anume acidul linoleic (C18:2, 63,25 % (m/m)) i acidul oleic (C18:1, 25,23 % (m/m)).
Pentru ambele sisteme folosite conversia uleiului n esteri metilici a fost aproape complet
dup 24 h. Pentru reacia cu agitare, dup 24 h, randamentul n esteri a atins valoarea de
98,6% (m/m) n timp ce pentru reacia cu deplasare continu i recirculare, valoarea
randamentului n esteri a fost puin mai sczut, i anume de 95,6% (m/m).
Dup 24 h de reacie, sistemul cu agitare a dus la rezultate mai bune comparativ cu
sistemul cu deplasare continu. Acest lucru se datoreaz faptului c, n sistemul cu agitare,
nc de la nceputul reaciei enzima se afl n contact cu toat cantitatea de ulei ceea ce duce
la o vitez mai mare de reacie. Astfel, dup primele 15 min, randamentul global pentru
reacia cu agitare este deja de 23,6% (m/m), n timp ce pentru cea cu deplasare, conversia
uleiului n esteri nici mcar nu a nceput. Acest avans al reaciei cu agitare persist pe toat
durata zonei liniare de variaie, dup aproximativ 4 h, randamentul global pentru reacia cu
agitare fiind de 75,1% (m/m), fa de numai 57,7% (m/m), valoarea corespunztoare pentru
sistemul cu deplasare i recirculare continu (Figura 5.14). n continuare ns, se observ o
ncetinire a reaciei cu agitare comparativ cu reacia cu deplasare i recirculare continu.
Astfel dup 6 h de reacie randamentul pentru sistemul de agitare este de 78,2% (m/m) n
timp ce pentru sistemul cu deplasare randamentul a atins valoarea de 70,2% (m/m). Aceast
scdere a vitezei de reacie pentru sistemul cu agitare se datoreaz faptului c glicerina
rezultat ca produs secundar, ca urmare a agitrii continue, este antrenat n amestecul de
reacie i creeaz impedimente n ceea ce privete contactul direct dintre enzim i ulei.
Pentru sistemul cu deplasare, acest lucru nu se ntmpl, glicerina format separndu-se la
partea inferioar a amestecului de reacie. Acest lucru se poate observa i pentru perioada
urmtoare de timp, dup 12 h de reacie, randamentul reaciei cu agitare fiind de 86,5%
(m/m) iar cel al reaciei cu deplasare fiind de 82,9% (m/m). Aceast mic diferen se
pstreaz ns i dup 24 h de reacie, randamentul pentru sistemul cu agitare atingnd
valoarea de 98,6% (m/m), respectiv o valoare de 95,6% (m/m) pentru reacia cu deplasare.
Modul de variaie pentru randamentul reaciilor este acelai, att pentru fiecare ester
cuantificat individual ct i pentru coninutul total de esteri, i anume: randamentul variaz
liniar n prima perioad, dup 4 h de reacie variaia devine asimptotic, atingnd un maxim
dup aproximativ 24 h.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

100

Randament in esteri, % (m/m)

80

60
agitare
40
recirculare
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp (h)
Figura 5.14 Variaia n timp a randamentului global n esteri pentru procesul de metanoliz enzimatic a
uleiului de floarea soarelui. Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1 (v/v), 10%
Novozym 435, timp de reacie 24 h

100
Randament palmitat de metil

80
(C16:0) % (m/m)

60
agitare
40
recirculare
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp (h)
Figura 5.15 Variaia n timp a randamentului pentru palmitatul de metil (C16:0) n procesul de metanoliza
enzimatica a uleiului de floarea soarelui. Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1
(v/v), 10% Novozym 435, timp de reacie 24 h

100
Randament palmitoleat de metil

80
(C16:1) % (m/m)

60
agitare
40
recirculare

20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp (h)
Figura 5.16 Variaia n timp a randamentului pentru palmitoleatul de metil (C16:1) n procesul de metanoliza
enzimatica a uleiului de floarea soarelui. Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1
(v/v), 10% Novozym 435, timp de reacie 24 h
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

100

Randament stearat de metil

80

(C18:0) % (m/m) 60
agitare
40
recirculare
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp (h)
\
Figura 5.17 Variaia n timp a randamentului pentru stearatul de metil (C18:0) n procesul de metanoliza
enzimatic a uleiului de floarea soarelui. Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1
(mol/mol), 10% Novozym 435, timp de reacie 24 h

100
Randament oleat de metil

80
(C18:1) % (m/m)

60
agitare
40
recirculare
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp (h)

Figura 5.18 Variaia n timp a randamentului pentru oleatul de metil (C18:1) n procesul de metanoliza
enzimatic a uleiului de floarea soarelui. Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1
(mol/mol), 10% Novozym 435, timp de reacie 24 h

100
Randament linoleat de metil

80
(C18:2) % (m/m)

60
agitare
40
recirculare
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp (h)
Figura 5.19 Variaia n timp a randamentului pentru linoleatul de metil (C18:2) n procesul de metanoliza
enzimatic a uleiului de floarea soarelui. Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1
(mol/mol), 10% Novozym 435, timp de reacie 24 h
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

100

Randament arahidat de metil

80

(C20:0) % (m/m)
60
agitare
40
recirculare
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp (h)

Figura 5.20 Variaia n timp a randamentului pentru arahidatul de metil (C20:0) n procesul de metanoliza
enzimatic a uleiului de floarea soarelui. Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1
(mol/mol), 10% Novozym 435, timp de reacie 24 h

100
Randament behenat de metil

80
(C22:0) % (m/m)

60
agitare
40
recirculare
20

0
0 5 10 15 20 25 30
Timp (h)
Figura 5.21 Variaia n timp a randamentului pentru behenatul de metil (C22:0) n procesul de metanoliza
enzimatic a uleiului de floarea soarelui. Condiii de reacie: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1
(mol/mol), 10% Novozym 435, timp de reacie 24 h.

n cazul oleatului de metil (C18:1), unul din componenii majoritari ai biodieselului

rezultat, se observ aceeai diferen substanial a randamentului pentru zona de variaie
liniar. Astfel, pentru reacia cu agitare, dup primele 15 min randamentul este de 23%
(m/m), n timp ce pentru reacia cu deplasare conversia acidului oleic a fost practic
inexistent. Aceast diferen s-a constatat i dup primele 4 h, cnd pentru reacia cu agitare
randamentul a atins valoarea de 77,5% (m/m), iar pentru cea cu deplasare valoarea de numai
56,1% (m/m). Dup cele 24 h de reacie randamentul a atins valoarea 99,6% (m/m) pentru
sistemul cu agitare, n timp ce pentru sistemul cu deplasare valoarea randamentului a fost de
96% (m/m) (Figura 5.18).
Esterul metilic al acidului linoleic este componentul majoritar al biodieselului obinut
din uleiul de floarea soarelui. Din acest motiv modul de variaie a randamentului acestuia
influeneaz cel mai pregnant modul de variaie a randamentului global n esteri (Figura
5.19). La fel ca i n cazul oleatului de metil, dup primele 4 h de reacie, n care modul de
variaie este aproape liniar, randamentul a atins valoarea de 76,9% (m/m) pentru reacia cu
agitare n timp ce pentru reacia cu deplasare valoarea atins a fost de 55,7% (m/m). Dup
acest moment variaia devine asimptotic, atingnd maximul de 98,4% (m/m) dup 24 h
pentru reacia cu agitare, respectiv de 95,6% (m/m) pentru reacia cu deplasare. Se poate
observa, c aceste valori se regsesc i pentru randamentul global n esteri dup 24 h de
reacie.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Ambele sisteme folosite pentru metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui,

catalizat de Novozym 435, au dus la obinerea de randamente mai mari de 95% (m/m), dup
24 h de reacie. Totui, sistemul cu agitare continu a dus la randamentul cel mai bun, i
anume de 98,6% (m/m), n timp ce randamentul pentru reactorul tip coloan cu umplutur i
recirculare a fost de 95,6% (m/m). Diferena major dintre cele dou sisteme de reacie poate
fi observat pentru prima perioad n care variaia este liniar, unde sistemul cu agitare
prezint un avantaj net superior. Ulterior, aceast diferen scade ca urmare a problemelor
cauzate de glicerolul rezultat ca produs secundar n cazul sistemului cu agitare, dup cele 24
h de reacie aceasta fiind doar de 3%.

Capitolul VI
Caracterizare fizico-chimica biodiesel obinut prin metanoliza
enzimatic a uleiului de floarea soarelui

Biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui a fost

analizat prin metode specifice n vederea determinrii unor caracteristice fizico-chimice care
s indice calitatea acestuia n comparaie cu specificaiile de calitate impuse de standardul n
vigoare pentru biodiesel, SR EN 14214:2010. n acest sens s-au determinat urmtoarele
caracteristici fizico-chimice: coninut de esteri, densitate la 15C, viscozitate la 40C, punct
de inflamabilitate, coninut de sulf, coninut de ap, indice de aciditate, indice de iod, coninut
de metanol, coninut de mono-, di-, trigliceride, glicerol liber i total, coninut de Na, K,
valoare energetic, valorile obinute fiind date n Tabelul 6.5. Aceste caracteristici sunt
detaliate n continuare, evideniindu-se influena lor direct asupra parametrilor de motor.

Tabel 6.5. Caracteristici fizico-chimice ale biodieselului obinut prin transesterificarea

enzimatic a uleiului de floarea soarelui
Valori SR EN 14214:2010 [1]
Caracteristica UM Valoare
min max
Coninut de esteri % 98.9 96.5
Densitate la 15C kg/m3 890 860 900
Viscozitate la 40C mm2/s 4.36 3.50 5.00
Punct de inflamabilitate C 133 120 -
Coninut de sulf mg/kg 0.10 - 10
Coninut de ap mg/kg 479 - 500
Indice de aciditate mg KOH/g 0.11 0.50
Indice de iod g I2/100g 127 120
Coninut de metanol % 0.003 0.20
Coninut de monogliceride % (m/m) 0.65 0.80
Coninut de digliceride 0.17 0.20
Coninut de trigliceride % (m/m) 0.01 0.20
Glicerol liber % (m/m) 0.015 0.02
Glicerol total % (m/m) 0.21 0.25
Coninut de - Na mg/kg <0.25 5
-K mg/kg 0.11 5
Valoare energetic MJ/Kg 32.7

3.1 Coninutul de esteri

Coninutul de esteri este o msur a integralitii reaciei de transesterificare. O
conversie mai mare a materiei prime n esteri determin o mai bun performan a motorului.
Coninutul de esteri din biodiesel poate varia foarte mult n funcie de diferitele tehnologii
utilizate i de materiile prime disponibile. Standardul european pentru biodiesel, SR EN
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

14214:2010, stabilete o limit pentru coninutul de esteri de minimum 96.5% (m/m) n timp
ce standardul american pentru biodiesel, ASTM D 6751 nu specific o limit minim pentru
coninutul de esteri [7].
Coninutul de esteri determinat pentru biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a
uleiului de floarea soarelui s-a determinat prin gaz-cromatografie, avnd ca standard intern
heptadecanoatul de metil, cromatograma obinut n urma analizei fiind prezentat n Figura
6.1.

Figura 6.1 Cromatograma coninutului de esteri pentru biodieselul obinut prin metanoliza
enzimatic a uleiului de floarea soarelui

Datele astfel obinute au fost prelucrate, obinndu-se o valoare pentru coninutul de esteri de
98,9 % (m/m), ceea ce indic o conversie aproape complet a trigliceridelor n esteri.

3.2 Densitatea la 15 C
Standardul european pentru biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete un domeniu
pentru densitatea la 15C cuprins ntre 860 900 kg/m3. Standardul american pentru
biodiesel, ASTM D 6751, nu stabilete o limit pentru densitate i precizeaz faptul c
densitatea biodieselului se ncadreaz ntre 860 i 900 kg/m3 (valori tipice ntre 880 i 890
kg/m3) atunci cnd sunt ndeplinite celelalte specificaii de calitate.
Valoarea densitii pentru biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a uleiului de
floarea este de 890 kg/m3, ncadrndu-se n intervalul specificat de standardul de calitate SR
EN 14214:2010.

3.3 Viscozitatea la 40 C
Viscozitatea influeneaz curgerea combustibililor prin conducte, duzele i orificiile de
injecie precum i intervalul de temperatur pentru buna funcionare a combustibilului n
arztoare. O viscozitate ridicat poate cauza probleme la efectul de spray din injector care
poate determina o cocsificarea excesiv i o diluare a uleiului. Aceste probleme sunt asociate
cu o via redus a motorului.
Standardele de calitate specific i o limit minim a viscozitii pentru a preveni uzura
prin frecare produs de combustibil asupra sistemului de injecie, ceea ce ar duce la scderea
puterii motorului. O viscozitate care se ncadreaz n limitele cerute de standardele de calitate
asigur o lubrifiere adecvat precum i caracteristici corespunztoare de pompare [9].
Standardul european pentru biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete un domeniu pentru
viscozitate (40C) cuprins ntre 3.5 5 mm2/s. n timp ce standardul american pentru
biodiesel, ASTM D 6751 stabilete un domeniu pentru viscozitate (40C) cuprins ntre 1.9
6 mm2/s.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui, are o

valoare a viscozitii de 4.36 mm2/s, ncadrndu-se n intervalul impus de ambele standarde
de calitate SR EN 14214:2010, respectiv ASTM 6751.

3.4 Punctul de inflamabilitate

Punctul de inflamabilitate determin inflamabilitatea materialului. n general, valoarea
specificat n standardele de calitate pentru punctul de inflamabilitate este relativ ridicat din
motive de siguran i de transport i, de asemenea, pentru a se asigura c productorii
ndeprteaz alcoolul din produsul finit. Puncte de inflamabilitate sczute pot indica reziduuri
de alcool n biodiesel.
Standardul european pentru biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete o limit pentru
punctul de inflamabilitate de minimum 120C n timp ce standardul american pentru
biodiesel, ASTM D 6751, stabilete o limit pentru punctul de inflamabilitate de minimum
130C.
Punctul de inflamabilitate obinut pentru biodieselul rezultat n metanoliza enzimatic a
uleiului de floarea soarelui a fost 133 C ceea ce corespunde cu cerinele de calitate impuse
att de standardul de calitate SR EN 14214:2010 ct i de ASTM D 6751.

3.5 Coninutul de sulf

Arderea n motoare a combustibililor care conin sulf duce la formarea emisiilor de
dioxid de sulf i de pulberi n suspensie. Limitele de sulf sunt, n general impuse pentru
motive de mediu.
Standardul european pentru biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete o limit pentru
coninutul de sulf de maximum 10 mg/kg n timp ce standardul american pentru biodiesel,
ASTM D 6751 stabilete o limit pentru coninutul de sulf de maximum 50 mg/kg.
Pentru biodieselul obinut din ulei de floarea soarelui pe cale enzimatic coninutul de
sulf obinut a fost de 0.10 mg/Kg, o valoare foarte sczut comparativ cu limita maxima
impus de standardele de calitate, consecina imediat fiind direct o scdere considerabil a
emisiilor de dioxid de sulf.

3.6 Coninutul de ap
Standardul european pentru biodiesel, SR EN 14214:2010 mpreun cu standardul
american pentru biodiesel, ASTM D 6751, stabilesc o limit pentru coninutul de ap de
maximum 500 mg/kg.
Coninutul de ap determinat pentru biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a
uleiului de floarea soarelui este de 379 mg/Kg, valoare ce corespunde cu cerinele de calitate
impuse de standardele de calitate.

3.7 Indicele de aciditate

Aciditatea este un indiciu al prezenei acizilor grai liberi sau a acizilor formai ca
urmare a degradrii i a arderii uleiului (n timpul sau dup prelucrare). Standardul european
pentru biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete o limit pentru indicele de aciditate de
maximum 0.5 mg KOH/g. Standardul american pentru biodiesel, ASTM D 6751, stabilete o
limit pentru indicele de aciditate de maximum 0.80 mg KOH/g.
Pentru biodieselul obinut pe cale enzimatic s-a obinut o valoare a indicelui de
aciditate de 0.11 situndu-se sub limita maxim impus de standardele de calitate.

3.8 Indicele de iod

Pentru biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui s-a
obinut o valoare a indicelui de iod de 127, depind limita maxim impus de standardul SR
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

EN 14214:2010, dar datele din literatur specific un interval cuprins ntre 110-143 g I2/100 g
pentru biodieselul obinut din ulei de floarea soarelui [16]. Dac standardul european pentru
biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete o limit pentru indicele de iod de maximum 120 g
I2/100g standardul american pentru biodiesel, ASTM D 6751, nu stabilete o limit pentru
indicele de iod. Indicele de iod cerut n standardul european de calitate pentru biodiesel
limiteaz posibilitatea de a alege materia prim pentru obinerea de biodiesel, prezena
acestui parametru n anumite standarde de calitate putnd fi de fapt o tactic politic de
limitare a importurilor anumitor materii prime n acest scop.

3.9 Coninutul de metanol

Valoarea pentru coninutul de metanol pentru biodieselul obinut prin metanoliza
enzimatic a uleiului de floarea soarelui este de 0.003 % (m/m), cromatograma fiind ilustrat
n Figura 6.2. Valoarea se situeaz cu mult sub limita maxim admis de standardul european
de biodiesel SR EN 14214:2010 care este 0.2% (m/m).
Studiile din literatur au demonstrat c un coninut de metanol de numai 1% n
biodiesel poate reduce punctul de inflamabilitate de la 170 C la mai puin de 40 C. Astfel
prin introducerea unei specificaii de calitate a punctului de inflamabilitate de minimum 120
C, standardul european SR EN 14214:2010 limiteaz implicit cantitatea de alcool la un nivel
foarte sczut (<0.1%).

Figura 6.2. Cromatograma obinut pentru determinarea metanolului din biodieselul obinut prin
metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui.

3.10 Coninutul de mono- di- i trigliceride, glicerol liber i glicerol total

Coninutul de mono-, di-, trigliceride, glicerol liber si glicerol total s-a determinat prin
gaz cromatografie cu ajutorul a dou standarde interne: 1,2,4-butantriolul (standardul intern
folosit pentru cuantificarea glicerolului liber) i tricaprina (standardul interne folosit pentru
cuantificarea mono-, di-, trigliceridelor). Cromatograma obinut n urma analizei este dat n
Figura 4.
Pentru biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui
coninutul de mono-, di- i trigliceride, se ncadreaz n limitele impuse de standardele de
calitate, avnd valori de 0.65% (m/m), 0.17% (m/m), respectiv de 0.01 % (m/m). Standardul
european pentru biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete o limit pentru coninutul de
monogliceride de maximum 0.8 % (m/m), pentru coninutul de digliceride de maximum 0.2
% (m/m) iar pentru coninutul de trigliceride de maximum 0.2 % (m/m). Standardul american
pentru biodiesel, ASTM D 6751, nu stabilete o limit pentru coninutul de mono-, di-, i
trigliceride.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Figura 6.3 Cromatograma obinut pentru determinarea coninutului de glicerol, mono-,di- i

trigliceride din biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui

n ceea ce privete coninutul de glicerol liber, pentru biodieselul obinut pe cale enzimatic
s-a obinut valoarea de 0.015 % (m/m), sub limita maxim impus de standardul european
pentru biodiesel, SR EN 14214:2010 i de standardul american pentru biodiesel, ASTM D
6751, i anume 0.02 % (m/m).
Coninutul total de glicerol obinut pentru biodieselul enzimatic este de 0.21% (m/m),
aproape de limita maxim impus de standardele de calitate pentru biodiesel. Astfel
standardul european pentru biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete o limit pentru
coninutul de glicerol total de maximum 0.25 % (m/m) n timp ce limita impus de standardul
american pentru biodiesel, ASTM D 6751, este de 0.24 % (m/m).

3.11 Coninutul de Na, K

n cazul biodieselului obinut pe cale enzimatic aceast analiz a completat doar restul
caracteristicilor deoarece nefolosindu-se catalizatori alcalini, aceste metale pot s sugereze
doar prezena unor contaminai din timpul procesului de obinere sau de depozitare. Valorile
obinute pentru Na i K sunt foarte mici, pentru Na fiind mai mic dect limita de cuantificare
a metodei n timp ce pentru K valoarea este de 0.11 mg/Kg. Standardul european pentru
biodiesel, SR EN 14214:2010, stabilete o limit pentru coninutul de metale din grupa I (Na,
K) de maximum 5 mg/kg i pentru coninutul de metale din grupa II (Ca, Mg) de maximum 5
mg/kg. Standardul american pentru biodiesel, ASTM D 6751, nu stabilete o limit pentru
coninutul de metale alcaline.

3.12 Valoarea energetic (puterea calorific)

Pentru biodieselul obinut prin metanoliza enzimatic a uleiului de floarea soarelui s-a
obinut o valoare energetic de 32.7 MJ/Kg, valoare care corespunde cu datele existente n
literatur. [18]
Dei datorit prezenei oxigenului valoarea energetic a biodieselului este n general
mai mic dect cea a motorinei, (o valoare medie de 37.2 MJ/Kg comparativ cu 43.8 MJ/Kg
pentru motorin), aceasta este n acelai timp mult mai puin variabil, i depinde n special
de materia prim utilizat i nu de procesul de obinere.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Capitolul VII
Concluzii

n urma parcurgerii metodologiei de cercetare a tezei cu titlul Investigaii privind

obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic, pot fi prezentate urmtoarele
concluzii privind obinerea de combustibil de tip biodiesel prin metanoliza enzimatic a
uleiului de floarea soarelui :
Uleiul de floarea soarelui prezint un coninut destul de ridicat de acizi grai
polinesaturai ceea ce i confer unele dezavantaje cu privire la stabilitatea la oxidare i
la depozitare. Acest grad de nesaturare mai ridicat pentru uleiul de floarea soarelui se
regsete i n valoarea indicelui de iod. Valoarea determinat pentru indicele de
aciditate indic un coninut foarte redus de acizi grai liberi, iar valorile pentru
coninutul de ap i pentru coninutul de sulf sunt mult sub limitele impuse de
standardul de calitate pentru biodiesel SR EN 14214:2010. n acelai timp, coninutul
ridicat de acizi grai nesaturai i confer i avantaje, precum: creterea posibilitii de
utilizare a biodieselului pe timp de iarn, ceea ce este de mare interes pentru rile cu
climat rece, precum i o performan mai bun a motorului, ca urmare a unui coninut
energetic mai ridicat.
Dintre enzimele testate n cadrul procesului de screening pentru metanoliza enzimatic
a uleiului de floarea soarelui, lipaza B din Candida antarctica , sub form imobilizat
pe rin acrilic (Novozym 435) s-a dovedit a fi cea mai eficient pentru conversia
trigliceridelor n biodiesel.
Condiiile optime de reacie pentru reacia catalizat Novozym 435 s-au dovedit a fi
urmtoarele: metanol/ulei 6:1 (mol/mol), ter-butanol/ulei 6:1 (v/v), 10% Novozym 435
n raport cu cantitatea de ulei.
Folosind aceste condiii optime de reacie s-a urmrit variaia n timp a randamentului
reaciei pentru dou sisteme de reacie: sistem cu agitare folosind un reactor de tip
batch respectiv, sistem cu deplasare continu i recirculare folosind un reactor tip
coloan cu umplutur. Pentru ambele sisteme s-au obinut randamente mai mari de 95%
(m/m), dupa 24 h de reacie. Totui, sistemul cu agitare continu a dus la randamentul
cel mai bun i anume, de 98,6% (m/m), n timp ce randamentul pentru reactorul tip
coloan cu umplutur i recirculare a fost de 95,6% (m/m), Acest lucru s-a datorat
avantajului net superior al reaciei cu agitare continu pentru prima perioad (primele 4
h) cnd, datorit agitrii, enzima este n contact cu toat cantitatea de ulei, ceea ce duce
la o vitez mai mare de reacie.
Biodieselul obinut n urma procesului de metanoliz enzimatic a uleiului de floarea
soarelui, a fost testat n vederea determinrii urmtoarelor caracteristici fizico-chimice:
coninutul de esteri, densitatea la 15C, viscozitatea la 40C, punctul de inflamabilitate,
coninutul de sulf, coninutul de ap, indicele de aciditate, indicele de iod, coninutul de
metanol, coninutul de mono-, di-, trigliceride, glicerol liber i total, coninutul de Na,
K, valoarea energetic. Datele obinute au demonstrat faptul c pentru caracteristicile
fizico-chimice testate, biodieselul rezultat ndeplinete cerinele de calitate specificate
de standardul european SR EN 14214: 2010, cu excepia indicelui de iod. Acest lucru
ns se datoreaz materiei prime uleiul de floarea soarelui i nu procesului de
obinere, standardul european fiind unul specific pentru biodieselul din ulei de rapi,
limitnd materia prim care poate fi utilizat pentru obinerea de biodiesel.
Investigaii privind obinerea combustibililor de tip biodiesel pe cale enzimatic Tez de doctorat

Bibliografie selectiv
1. SR EN 14214:2010:2004 Carburani pentru automobile. Esteri metilici ai acizilor grai
(EMAG) pentru motoare diesel. Cerine i metode de ncercare.
5. Prankl H., High biodiesel quality required by European Standards, European J Lipid
Science and Technology; 104:371-375, 2002.
6. Royon, D., Daz, M., Ellenrieder, G., Locatelli, S., Enzymatic production of Biodiesel from
cotton seed oil using t-butanol as a solvent, Bioresour. Technol. 96, 767-777, 2007.
7. American Society for Testing and Materials, Standard Specification for Biodiesel Fuel
(B100) Blend Stock for Distillate Fuels, Designation D6751-02, ASTM International,
West Conshohocken, PA, 2002.
9. www.worldenergy.net/Dec_22_2001/Cummins%20aug%2030%202001.pdf
16. Knothe G., Dunn R.O., Bagby, M.O., Biodiesel: The Use of Vegetable Oils and Their
Derivatives as Alternative Diesel Fuels., National Centre for Agricultural Utilization
Research, US Department of Agriculture, USA, 1997, http://www.biodiesel.org.
18. Bajpai, D., Tyagi, V.K., Biodiesel: Source, Production, Composition, Properties and Its
Benefits, J. Oleo Sci., 2006,(55):10, 487-502.