DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE

CALCIO
La determinacin analtica tanto de la concentracin total de calcio como de la cantidad de el
que se encuentra libre o asociado, as como el registro de la evolucin de estas cantidades
durante el transcurso de los procesos biolgicos, son parmetros esenciales para comprender la
bioqumica del calcio.
Con esta finalidad se han desarrollado distintos mtodos analticos y a continuacin se har una
breve mencin de los ms significativos o importantes.

Ensayos de bioluminiscencia
El emisor de luz de las medusas (aequorea) es una protena denominada aequorina de masa
molecular aproximada a 20KD. La emisin de luz se produce por medio de una reaccin
qumica que depende de la concentracin de iones calcio. A valores de (Ca 2+ ) 0,3M la
emisin es muy dbil, pero en el intervalo de 0,5-10 M la emisin depende de forma
exponencial de la concentracin de calcio, y la respuesta a fluctuaciones en la concentracin de
iones calcio se produce en milisegundos.

Agentes complejantes biticos con grupos fluoroforos y cromoforos

En los ltimos aos se han preparado numerosos compuestos quelantes sintticos de Ca (II) en
los que se ha incorporado mediante unin covalente un grupo fluoroforo o cromoforo. La
caracterstica genrica de estos compuestos es la presencia de grupos dadores carboxilato.
Los receptores con grupos fluorescentes suelen mostrar una rpida disminucin de la emisin de
fluorescencia por coordinacin del Ca (II). Estos ligandos permiten medir concentraciones de
Ca (II) comprendidas entre 1 M y 10 mM en presencia de concentraciones de 1mM de Mg (II)
y de 100 mM de cationes sodio y potasio, que son las habituales en los organismos vivos. Por
otra parte la elevada rapidez de respuesta de la emisin fluorescente acoplada con dispositivos
instrumentales adecuados, ha permitido medir oscilaciones en la concentracin de calcio libre y
la detencin de gradientes de calcio.
Un aspecto que debe evaluarse cuando se utilizan este tipo de quelatos anionicos es siempre su
toxicidad intrnseca, asociada frecuentemente a su interaccin con restos aminocidos cargados
positivamente.

Agentes complejantes para RMN

Se han preparado algunos quelantes de calcio cuyo espectro de RMN vara en funcin de la
concentracin de ion calcio presente en el medio. Uno de los ms populares es el denominado
5F-BAPTA, receptor en el que se han incluido tomos de flor en las posiciones no sustituidas
de los anillos bencnicos del BAPTA.
La coordinacin del Ca (II) produce un desplazamiento de la seal RMN de F de alrededor de
6ppm.la velocidad de intercambio en los procesos de formacin y disociacin del complejo
permite identificar, en condiciones de subsaturacion, dos seales RMN de F correspondiente al
ligando libre y unido al calcio, la integracin de las reas de dichas seales permite cuantificar
la cantidad de calcio presente. Sin embargo, el tiempo de deteccin es normalmente demasiado
largo como para permitir el seguimiento de flujos rpidos de calcio, la obtencin de un espectro
requiere acumular por un periodo de tiempo del orden de varios minutos.
Medidas de la concentracin total de iones Ca (II)
Hay muchas tcnicas que permiten cuantificar la concentracin total de iones calcio en muestras
biolgicas. La absorcin atmica es quiz la ms habitual y con ella se alcanza lmites de
deteccin de 1 M. otras tcnicas de inters son el microanlisis de sonda electrnica (EPMA),
la emisin de rayos X fotoinducida (PIXE) o la microscopia inica.

BOMBA DE CALCIO E INTERCAMBIADOR Na+/Ca2+

El gran gradiente que se establece en la membrana celular est controlada por dos sistemas de
transporte: una bomba de calcio y un intercambiador Na +_Ca2+ que utiliza los gradientes de
sodio a travs de la membrana plasmtica como fuente de energa. La bomba de calcio mejor
conocida es la del retculo sarcoplasmatico de los msculos esquelticos, que es una forma
especializada del retculo endoplasmatico. La contraccin muscular esta activada por un
aumento abrupto de la concentracin citosolica de calcio y la relajacin muscular depende de la
eliminacin rpida del exceso de calcio citosolica mediante la actuacin de la bomba de Ca (II)
del retculo sarcoplasmatico que es una protena integral de membrana que ocupa ms de la
mitad de la superficie de la membrana. La membrana plasmtica contiene una bomba de calcio
relacionada aunque de menor densidad.
El intercambiador de Na+/Ca2+ de la membrana del plasma utiliza un gradiente electroqumico
de Na+ para bombear Ca2+ hacia el exterior celular; se produce la entrada de tres iones Na + por
cada ion de Ca2+ que sale de la clula. El coste energtico de este proceso viene pagado por la
bomba de Na+/K+ que genera el gradiente de sodio requerido. La concentracin de Ca 2+ puede
ser reducida hasta el orden micromolar por el intercambiador mientras que la accin consecutiva
de la bomba la bajara hasta el nivel submicromolar. El intercambiador puede eliminar hasta
2000 iones Ca2+por segundo, comparado con los solo 30 iones calcio por segundo que elimina
la bomba. Sin embargo, estos flujos de transportes son muy inferiores a los de 10 7moles s-1.que
se producen a travs de los canales. En general el transporte activo es ms lento que el pasivo.
PROTEINAS DE CALCIO
El calcio es utilizado para desarrollar un nmero elevado de funciones biolgicas.
CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES GENERALES DE LOS CENTROS DE
COORDINACION DE Ca (II) EN PROTEINAS:

El calcio es un elemento del grupo II del sistema peridico y presenta configuracin electrnica
[Ar] 4s2 y radio inico 0,99 . La geometra de coordinacin es bastante especfica para ndice
de coordinacin seis es aproximadamente octadrica, para siete suele ser bipirmide pentagonal
y para ocho antiprisma cuadrado. En las estructuras de protenas de calcio se sabe que el nico
tipo de tomo dador es el oxgeno, el ndice de coordinacin ms frecuente es el de siete y su
geometra es bipirmide pentagonal, la distancia promedio de Ca-O es de 2,4 ; los ligando del
calcio ms frecuentes son cadenas laterales de aspartato y glutamato, as como grupos carbonilo
de la estructura peptdica. Con menos frecuencia, tambin se encuentran como ligando del
calcio grupos carbonilos de cadenas laterales de glutamina y asparragina, y el grupo hidroxilo
de serina y treonina, en muchas ocasiones se encuentran molculas de agua formando parte de
la esfera de coordinacin del calcio.
CLASIFICACION DE LAS PROTEINAS DE CALCIO

Se organiza en tres grupos atendiendo a la disposicin y localizacin de los centros de

coordinacin del calcio:

Los restos aminocidos que forman parte de la primera esfera de coordinacin del
calcio se encuentran prximos entre s en la cadena polipeptdica.
El Ca (II) se encuentra unido a restos aminocidos distantes en la secuencia pero
dispuestos espacialmente de forma favorable por el plegamiento de la cadena generando
una cavidad bastante rgida donde se ubica el ion metlico.
El calcio se encuentra unido a grupos anionicos superficiales entre los que se puede
mover rpidamente.

El primer grupo estructural es el ms abundante y constituye las denominadas manos EF de

calcio. Las manos EF son un motivo estructural consistente en dos hlices unidas por un lazo
que contiene a los ligandos proteicos del calcio. El nombre mano EF fue propuesto por
Ketsinger por su similitud con la zona de los dedos ndice y pulgar de la mano derecha, que
constituiran las dos hlices, y los restantes dedos doblados corresponderan con la regin del
lazo.

Pertenecen a este grupo la calmodulina (CaM), troponina C (Tnc), parvabulmina y las protenas
S-100. En el segundo grupo un ejemplo es la fosfolipasa A 2. Las diferencias de ambos grupos se
basan tanto en el efecto que tiene la coordinacin de calcio sobre la estructura como en la
velocidad con la que se forma la metaloproteina. Algunos ejemplos del tercer tipo estructural los
constituiran las glucoprotenas anionicos del tejido conectivo y la protena del hueso
osteocalcina.

EL MAGNESIO EN LA BIOLOGA

El Mg2+ presenta casi exclusivamente ndice de coordinacin seis y geometra de coordinacin

octadrica en sus compuestos, y en el caso de los compuestos oxigenados, la distancia Mg-O se
mantiene prcticamente constante. Estas caractersticas contrastan con el Ca 2+ que presenta una
mayor variabilidad en las distancias de enlace as como tendencia a exhibir ndices de
coordinacin ms altos, particularmente siete. La constancia en el ndice de coordinacin de los
compuestos de magnesio, junto con su propensin a interaccionar con tomos de oxgeno,
tambin diferencia al Mg 2+ de otros iones .Desde el punto de vista biolgico el caso ms
significativo de la formacin de complejos de magnesio con ligandos dadores de nitrgeno que
lo constituye la clorofila. En este sentido cabe resaltar la mayor tendencia del Mg 2+, en
comparacin con el Ca2+, a formar compuestos con ligandos con tomos dadores de nitrgeno.
A diferencia del Ca 2+, Na+, K+, el magnesio no presenta no presenta gradientes de concentracin
entre el interior y exterior celulares, lo que denota las funciones biolgicas diferentes que
desempea. De hecho, el magnesio no suele actuar transmitiendo seales elctricas o como
iniciador de procesos.
A parte de su papel en la clorofila , el magnesio presenta una funcin estabilizadora de
carbonato ,tambin est presente en la fijacin fotosinttica del dixido de carbono por el
enzima ms abundante en la tierra , el rubisco y funciones anlogas al calcio en la construccin
de exo- y endoesqueletos y en la estabilizacin de paredes celulares . Mientras que una
deficiencia duradera de magnesio tiene consecuencias sobre el crecimiento, una deficiencia
temporal produce acumulaciones relativas (sobredosis) de iones calcio en el interior celular
debido al carcter antagnico de ambos iones. Otros efectos de la deficiencia de magnesio son
la disminucin de la capacidad mental y fsica debido a una produccin energtica insuficiente
por anomalas en la transferencia de iones fosfato y la inhibicin del metabolismo de las
protenas. Del magnesio depende el metabolismo de los macronutrientes (grasas, azcares y
protenas) y el buen funcionamiento de las clulas hepticas.
Tambin ejerce un papel estructural, ya que el ion de Mg2+ tiene una funcin estabilizadora de
la estructura de cadenas de ADN y ARN. Interviene en la formacin de neurotransmisores y
neuromoduladores y relajacin muscular (siendo muy importante su accin en el msculo
cardaco). La prdida de magnesio se debe a diversas causas, en especial cuando el individuo se
encuentra en circunstancias de estrs fsico o mental. El magnesio que se encuentra en las
clulas, es liberado al torrente sanguneo, en donde posteriormente es eliminado por la orina y/o
las heces fecales.
PROTENAS EXTRACELULARES DE ENLACE A CALCIO
Al ser la concentracin extracelular de calcio mucho mayor que la intracelular, cabe esperar
que los iones de calcio desempeen funciones biolgicas completamente diferentes en el
exterior que en el exterior celular. Debido a la mayor concentracin de calcio extracelular, en
principio una modesta afinidad por el calcio de las macromolculas ser suficiente para que se
produzca un elevado porcentaje de complejacin. Por otra parte, como el calcio extracelular
no desempea funciones sealizadores, no se requieren velocidades muy elevadas de
asociacin o disociacin del calcio a sus sitos de enlace.
El papel calcio extracelular es esencialmente estructural a todos los niveles , desde el
microscopio ( estructuras moleculares ) al macroscpico (estructuras minerales rgidas ) ,
pasando por un nivel intermedio .
En algunos casos las protenas extracelulares que se unen al calcio son enzimas y , aunque en
la mayor parte de los casos el calcio solo contribuye a estabilizar la estructura terciaria del
enzima y en otros puede participar directamente en la catlisis , estos enzimas son siempre
inactivos en ausencia de calcio . Ejemplos importantes son las enzimas digestivas y los
asociados a la coagulacin de la sangre.
Enzimas digestivas: son enzimas que hidrolizan polisacridos, poli nucletidos y protenas a
sus monmeros correspondientes. Son segregados al exterior por ciertas clulas de vesculas
(exocitosis).
Tripsina. Es una proteasa segregada por el pncreas y que se vierte en el estmago al
llegar a los alimentos debido a una seal de calcio en el pncreas. es inactivo en
ausencias de calcio, y el papel de este ltimo es modificar el plegamiento de una parte
de la cadena.

Fosfolipasa. son enzimas digestivas que se encuentran presentes en elevada

concentracin en jugos intestinales, secreciones bacterianas y venosas, y tambin
pueden generar molculas sealizadores de elevada actividad.

El calcio y la coagulacin de la sangre: la coagulacin de la sangre es el resultado de la

polimerizacin del polipptido fibringeno presente en el suero sanguneo para dar fibrina, un
gel insoluble que forma una red de fibrillas entrecruzadas. Esta polimerizacin esta catalizada
por la trombina, que normalmente se encuentra en forma del zimgeno (precursor enzimtico )
reactivo protombina, que es activado por una cascada de procesos en la que participan muchas
enzimas y coenzimas . Se trata de reacciones de hidrolisis y la presencia de iones calcio es
necesario en varias etapas del proceso.
REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
Vallet. M, Gracia. E. (2003). Introduccin a la qumica bioinorganica. Editorial sntesis
S.A. Madrid. (Espaa)PP: 425; 428; 430