Phytothrapie (2011) 9:274-282

Springer-Verlag France 2011

DOI10.1007/s10298-011-0651-4

Article original
Pharmacognosie

Effet antidiabtogne et cytoprotecteur de lextrait butanolique

de Ranunculus repens L. et de la querctine
sur un modle exprimental de diabte alloxanique
M. Kebiche 1, Z. Lakroun 1, Z. Mrahi 2, R. Soulimani 3
1
Phytochemistry and pharmacology laboratory, faculty of science, University of Jijel, 18000, Algeria
2
Department of natural science, faculty of science, University of Constantine, 25000, Algeria
3
Service de neurotoxicologie et bioactivit, (URAFPA), UPVM/INPL/INRA, Metz, BP 4102, F57070 Metz, France
Correspondance : Mkebieche61@yahoo.fr

Rsum : Les effets antidiabtogne et cytoprotecteur des
extraits de flavonodes de Ranunculus repens L. et de la
querctine sont tudis dans le cas du diabte induit par
lalloxane chez les rats Wistar albinos. Ces composs ph
noliques se sont montrs dun potentiel cytoprotecteur des
cellules et dune capacit antidiabtogne dans le diabte
alloxanique qui dsquilibre le statut redox des cellules
pancratiques au profit du stress oxydatif. Lactivit de ces
flavonodes se traduit par un effet significativement posi
tif sur linsulinoscrtion des cellules et la glycmie. Cet
effet est d au pouvoir antioxydant et cytoprotecteur des
composs phnoliques port sur les cellules intoxiques
par lalloxane se traduisant par la rduction de la produc
tion du MDA en empchant donc la lipoperoxydation et la
normalisation du niveau cytosolique des systmes antioxy
dants (SOD, CAT et GSH). Ces effets sont susceptibles de
maintenir, par consquent, un statut redox cellulaire en
quilibre aprs ladministration de lalloxane en association
aux flavonodes.
Mots cls : Alloxane Flavonodes Ranunculus repens L.
Querctine Effet antidiabtogne Stress oxydant
Antidiabetogenic and cytoprotective effect
of butanolic extract of Ranunculus repens L.
and quercetin on an experimental model
of alloxanic diabetes
Abstract: The antidiabetogenic and cytoprotective effects of
flavonoid extracts of Ranunculus repens L. and quercetin are
studied in the case of diabetes induced by alloxan in Wistar
Albino rats. These phenolic compounds have shown cyto
protective potential for cells and antidiabetogenic capa
cities for alloxanic diabetes that unbalance the redox status
of pancreatic cells for the benefit of oxidant stress. The
activity of these flavonoids translates into a significantly
positive effect on insulin secretion for cells and glycaemia.
This effect is due to the antioxidant and chemoprotective
powers of phenolic compounds brought to bear on cells
intoxicated by alloxan, which thus translates into a reduc
tion in production of MDA by inhibiting lipid peroxidation
and normalization of cytosolic levels in antioxidant systems
(SOD, CAT and GSH). These effects are hence likely to
maintain a balanced cell redox status following administra
tion of alloxan in association with flavonoids.
Keywords: Alloxan Flavonoids Ranunculus repens L.
Quercetin Antidiabetogenic effect Oxidant stress
Introduction
Le diabte sucr est aujourdhui une maladie mtabo
lique grave menaant, dune manire croissante, la sant
publique dans le monde. Elle touche environ 4 % de la
population mondiale et on sattend une augmentation de
5,4 % en 2025 [4]. Plusieurs axes de recherches antrieures
ont examin le rle du stress oxydatif sur lapparition
et le dveloppement des troubles diabtiques ventuel
lement via la formation des radicaux libres oxygns
[6,21,37,38]. Ces radicaux libres sont susceptibles de provo
quer des changements mtaboliques induisant lappari
tion ou lvolution de cette maladie chronique tels que le
superoxyde (O20), le radical hydroxyde (OH0), le peroxyde
dhydrogne (H2O2) [18,52]. Ces radicaux libres et les
espces non radicalaires ragissent avec plusieurs rsidus
dacides amins en modifiant leurs structures et, par exten
sion, les structures tertiaires des molcules de protines.
En outre, ces intermdiaires ractifs contribuent galement
dans la dgradation des phospholipides membranaires par
lintermdiaire du processus de peroxydation lipidique.

Lalloxane a t propos dagir comme un agent diabto de la plante RRL et de la QE chez le rat travers lvaluation
gne en raison de sa capacit dtruire les cellules des lots
de Langerhans ventuellement par le biais de la formation
excessive des radicaux libres [48]. Les cellules du pancras
sont susceptibles dtre altres par les dommages oxyda
tifs gnrs par les radicaux libres, en raison dun faible
niveau des enzymes pigeurs de radicaux libres [41].
Lun des aspects prometteurs de la comprhension du
rle du stress oxydatif dans le diabte est la capacit de
la supplmentation en antioxydants pour attnuer linci
dence et les effets nfastes du diabte, alors que les scienti
fiques sont la recherche des principes actifs bon march,
adapts et susceptibles de contrarier les effets dltres des
toxiques prooxydants et leur pouvoir diabtogne.
Les plantes mdicinales sont actuellement ltude pour
leurs proprits pharmacologiques dans la rgulation du
stress oxydatif induit par des niveaux levs de glucose
dans le sang et lapoptose des cellules [25,40,44]. En
effet, des produits phytochimiques aux proprits anti
oxydantes et pigeurs de radicaux libres ont prsent une
qualit prventive contre les effets toxiques de strepto
zotocine et lalloxane, comme tant agents diabtognes
[48]. Ranunculus repens L. (RRL) est une plante mdici
nale importante utilise par la population campagnarde
(Jijel, Est dAlgrie) dans le traitement des hpatites et du
diabte. Les flavonodes sont un groupe de composs dori
gine naturelle largement diffus sous forme de mtabolites
secondaires dans le rgne vgtal. Ils ont t reconnus pour
avoir des proprits cliniques intressantes, telles que les
antiinflammatoires, les antiallergiques, les activits antivi
rales, antibactriennes et antitumorales [35,41]. Un de ces
flavonodes, la querctine (QE) qui possde un pouvoir
prventif contre les effets oxydants et la mort programme
des cellules par plusieurs mcanismes, tels que le scavenging
des radicaux doxygne [8,22,33], la protection contre la
peroxydation lipidique [28] et la chlation des ions mtal
liques [3]. Le statut antioxydant cellulaire dtermine la
susceptibilit aux dommages oxydatifs et est gnralement
altr en rponse au stress oxydatif. En consquence, lutili aqueuse ainsi obtenue est conserve 48 heures 40 C
sation dantioxydants naturels comme moyens de prvenir
les dommages oxydatifs et leur impact sur linduction du
diabte savrent de grande importance lheure actuelle
pour rduire lincidence du diabte qui ne cesse daugmenter.
Les antioxydants comme les vitamines C et E, les enzymes
superoxyde dismutase (SOD) et catalase (CAT) ainsi que le
glutathion (GSH) ont permis de protger les cellules contre
la peroxydation lipidique, la premire tape de nombreux
processus pathologiques [26,42]. La rduction des niveaux
dantioxydants la suite dune production accrue de radi
caux libres dans le diabte exprimental a t signale par de
nombreux auteurs [9,41]. La prsente tude a t entreprise
pour dterminer si le pancras a t soumis des dommages
oxydatifs au cours du diabte alloxanique ainsi que dexa
miner les modifications qui en rsultent sur le statut anti
oxydant. En outre, nous avons tudi leffet antioxydant,
cytoprotecteur et antidiabtogne des composs phnoliques
275
de lactivit des enzymes antioxydantes (SOD et CAT), de
GSH, de la peroxydation lipidique via le malondialdhyde
(MDA), dinsulinmie et de glycmie.
Matriel et mthodes
Prparation des extraits phnoliques
Les jeunes pousses de feuilles de RRL ont t rcoltes au
mois davril 2008 dans la rgion de Chekfa (Wilaya de Jijel,
Est Algrie) au cours de la priode de floraison. Aprs leur
identification par le laboratoire de phytopharmacologie de
luniversit de Jijel, les chantillons de feuilles sont nettoys
puis mis scher temprature ambiante dans un endroit
ar lombre pour mieux conserver les molcules sensi
bles la chaleur et la lumire. Le broyat va constituer la
matire sche qui va servir lextraction des flavonodes.
Extraction des flavonodes
Lextraction des flavonodes est ralise selon la mthode
de Markham [34], avec modification inspire selon la
mthode de Bruneton [10]. Elle est base sur le degr de
solubilit des flavonodes dans les solvants organiques.
Cette mthode comprend deux grandes tapes : la premire
phase dextraction se fait avec le mthanol pour solubiliser
les flavonodes et la seconde est ralise avec lther dithy
lique (extraction des gnines libres) et lactate dthyle
(extraction des monoglycosides) et le nbutanol (pour
solubiliser les di et les triglycosides).
Lextraction des flavonodes est effectue partir de
la matire sche finement broye par du mthanol 85 %
(10 % W/v). Le macrt est filtr sur Bchner sous pres
sion rduite puis soumis une vaporation basse pres
sion 35 C (Rotavapor, Bchi 461, Allemagne). La phase
pour acclrer la diffusion des molcules dans les solvants
puis filtre. Le filtrat est dbarrass des cires, des lipides et
de la chlorophylle par trois lavages successifs avec lther
de ptrole (v/v) pour donner une phase aqueuse. Afin de
sparer les flavonodes en fractions aglycones, monoglyco
sides et di et triglycosides, la phase aqueuse est mlange
avec lther dithylique (v/v) pour obtenir une phase orga
nique contenant les flavonodes aglycones et les aglycones
mthoxyls. La phase aqueuse restante subit son tour
trois extractions avec lactate dthyle afin de rcuprer
dans la phase organique certains flavonodes aglycones
mais surtout les monoglycosides. La phase aqueuse restante
est mlange avec le nbutanol pour rcuprer notamment
les flavonodes di et triglycosides. La phase aqueuse finale
contient surtout les flavonodes glycosyls plus polaires. Les
quatre fractions rcoltes sont concentres par vaporation
basse pression 35 C puis lyophilises pendant 24 heures
276

(Alpha 12 LD, Fisher Bioblock). La lyophilisation permet
dobtenir un produit facilement soluble dans leau et qui,
aprs addition deau, prsente les mmes caractristiques
que le produit dorigine. Chaque lyophilisat est pes pour
calculer le rendement de lextraction, exprim en gramme
de lyophilisat par 100 g de matire sche.
Dosage des polyphnols
et 0,039 mg dquivalent en QE en considrant leur
pourcentage dans le lyophilisat) sont ajouts 1,5 ml
dune solution thanolique de DPPH (100 M). Un tube
standard est prpar avec la vitamine C (0,158 mg/ml).
Labsorbance est lue chaque 30 secondes durant cinq
minutes 515 nm. Leffet boueur des flavonodes est
exprim en pourcentage de DPPH rduit en partant du
100 % du tmoin (DPPH seul).

Lvaluation des polyphnols totaux est ralise selon la

mthode du bleu de Pruce de Price et Butler, 1977 [11], Effet prventif des extraits de flavonodes
modifie par Graham et Szabo [19] pour donner une sur le diabte induit par lalloxane
meilleure stabilit de la couleur.
Une gamme talon est tablie sparment avec lacide Lactivit antioxydante des flavonodes est tudie in vivo
gallique (25200 g/ml) pour calculer la concentration des cinq heures aprs linjection de lalloxane. Deux groupes
polyphnols dans chaque extrait. Les rsultats du dosage prtraits par les flavonodes ou la QE sont compars un
sont exprims en milligramme dquivalent dacide gallique groupe tmoin. Aprs le traitement, les rats sont sacrifis
par gramme de lyophilisat. par dislocation cervicale et les pancras sont prlevs.
Le premier groupe reoit, par voie orale, deux doses
Dosage des flavonodes de 200 mg de lyophilisat/kg (0,794 mg quivalent de QE)
avant et aprs deux heures de linjection de lalloxane ;
Lvaluation quantitative des flavonodes dans les diff le deuxime groupe est trait par la QE pure la mme
rentes fractions est ralise selon la mthode du trichlorure dose (tmoin positif) ;
daluminium [5]. le troisime groupe (tmoin ngatif) a reu la solu
Une gamme talon est tablie sparment avec la QE tion physiologique en plus de linjection de lalloxane. La
(125 g/ml) (Fig. 1) pour calculer la concentration des glycmie et linsulinmie sont mesures avant et aprs
flavonodes dans chaque extrait. Les rsultats du dosage dix jours de traitement (injection de lalloxane et/ou de
sont exprims en milligramme dquivalent de QE par flavonodes).
gramme de lyophilisat.

valuation du pouvoir antioxydant des flavonodes

Recherche des mcanismes de prvention
La capacit antiradicalaire des flavonodes di et triglycosydes
(EB) est value in vitro par la mthode de DPPH
des extraits butanoliques de RRL
(2,2diphnyl1picrylhydrazyl) rapporte par Wahllandir Peroxydation lipidique
et al. [50]. Brivement, 15 l de diffrentes concentra
tions de flavonodes 0,1, 0,2 et 0,4 mg/ml (0,158, 0,079 La peroxydation lipidique dans le pancras est value par
le dosage de MDA selon la mthode dOhkawa et al. [39].
Le MDA est lun des produits terminaux de la dcompo
sition des acides gras polyinsaturs (AGPI) sous leffet des
* radicaux libres librs au cours du stress.
2,5 *
* Pour le dosage du MDA, 1 g de pancras est additionn
Tmoin normal 3 ml de solution de KCl (1,15 M) puis broyage par un
2 homogniseur de Dounce (Kontes, Glass companyan
[ nm ol/g de pancras]

Tmoin+ allox.
ISO9001 steered firm, New Jersey, tatsUnis). 0,5 ml
Prtrait allox.+ flav.
1,5 de lhomognat, 0,5 ml dacide trichloractique 20 % et 1 ml
Prtrait allox.+ QR dacide thiobarbiturique (TBA) 0,67 % sont additionns. Le
ns mlange est chauff 100 C pendant 15 minutes, refroidi
1 ns puis additionn de 4 ml de nbutanol. Aprs centrifugation
de 15 minutes 3 000 tours/minute, labsorbance est dter
0,5 mine sur le surnageant au spectrophotomtre (LKB II)
532 nm.
0 La concentration de MDA est dduite partir dune
MDA gamme talon tablie dans les mmes conditions avec
Fig. 1. Effet des flavonodes sur la production du MDA dans les cellules pancratiques
1,1,3,3ttratoxypropane qui donne le MDA aprs son
Les valeurs sont donnes en moyenne carttype. Test de Student : ***p < 0,001 : groupes compars hydrolyse en solution (Fig. 2). Les rsultats du dosage sont
au groupe tmoin NaCl 0,9 %. exprims en nmol/g de pancras.

0,7
y = 0,8393x - 0,0029
R = 0,98
0,6
0,5
Densit optique
0,4
0,3
0,2
0,1
0 Lvaluation de la SOD est ralise sur le cytosol par la mthode
0 0,2 0,4 0,6
MDA [nmol/ml]
Fig. 2. Courbe dtalonnage du MDA avec le ractif TBA (moyenne de 3 essais)
Dosage de glutathion pancratique (GSH)
Le dosage du GSH est bas sur la mthode colorimtrique
dEllman [17]. Pour ce dosage, un gramme de pancras (frais
ou congel) est homognis dans trois volumes de TCA 5 %
laide dun broyeur de Dounce puis centrifug 2 000 rpm.
Cinquante microlitres de surnageant sont dilus dans 10 ml
de tampon phosphate (0,1 M ; pH 8). 3 ml du mlange de
dilution, 20 l de DTNB (0,01 M) sont additionns. Labsor
bance est lue 412 nm contre un blanc prpar dans les mmes
conditions avec le TCA 5 %. Les concentrations sont exprimes
en nmol/g de foie. Elles sont dduites partir dune gamme
talon tablie dans les mmes conditions avec le glutathion.
valuation de lactivit enzymatique de la CAT
Lactivit enzymatique de la CAT est dtermine par la
mthode de Clairborne [12].
Avant lvaluation de lactivit enzymatique de la CAT, une
fraction enzymatique est prpare selon la mthode dIqbal
et al. [23], comme suit : 2 g de pancras sont coups et homo
gniss dans trois volumes de tampon phosphate (0,1 M ;
pH 7,4) contenant du KCl (1,17 %) par un homognisateur
de Dounce. Lhomognat est centrifug 2 000 rpm durant
15 minutes 4 C. Le surnageant obtenu est centrifug
9 600 rpm durant 30 minutes 4 C (Centrifugeuse Sigma
6k15), et le surnageant final reprsente la source utilise pour
lvaluation de lactivit des enzymes (CAT et SOD).
Pour cela, un mlange est constitu de 1 ml de tampon
phosphate (KH2PO4 ; 0,1 M ; pH 7,2), 0,975 ml de H2O2
frachement prpar (0,091 M) et de 0,025 ml de la source
Tableau 1. valuation quantitative des polyphnols totaux et des flavondes des extraits de Ranunculus repens L.
Extrait Rendement moyen (%)
ther dithylique 1 60
Actate dthyle 6 270
Butanol 18
Eau 20
277
denzyme (le cytosol). Labsorbance est lue 560 nm chaque
minute pendant deux minutes, et lactivit enzymatique est
calcule en termes dunit internationale par minute et par
gramme de protine (UI/min par gramme de protine).
La concentration cytosolique des protines est value
par la mthode de Lowry [32] dans les mmes conditions,
une gamme talon est tablie en utilisant le srum albumine
bovine (BSA) avec le ractif phnolique de Folin. Labsor
bance est lue 750 nm.
valuation de lactivit enzymatique de la SOD
0,8 de Beauchamp et Fridovich [7]. Un mlange est constitu de
2 ml du milieu ractif (cyanide de sodium : 102 M, solution
de NBT [nitroblue de tetrazolium] 1,76 104 M, EDTA :
66 mmol, mthionine : 102 M, riboflavine : 2 mol, pH 7,8)
et 5 l de cytosol. Ce mlange est expos la lumire dune
lampe de 15 W pendant dix minutes pour induire la photo
raction de la riboflavine et de lO2. La rduction de NBT par
les anions superoxydes en formazan est suivie par le spectro
photomtre 560 nm. Lactivit enzymatique est calcule en
termes dUI/mg de protines.
valuation statistique
Les rsultats sont donns sous forme de moyennes et
dcartstypes. Lvaluation statistique est effectue en
utilisant le test t de Student. La valeur trouve par le calcul
du t peut affirmer que les populations sont diffrentes avec
un risque derreur p tel que :
p > 0,05 = la diffrence nest pas significative ns ;
0,05 > p > 0,01 = la diffrence est significative* ;
0,05 > p > 0,001 = la diffrence est hautement signifi
cative** ;
p < 0,001 = la diffrence est trs hautement significative***.
Le calcul statistique est ralis par Statview 4.5 Statis
tical Package (Abacus Conceps, Int.).
Rsultats
Extraction et dosage des composs phnoliques
Lextraction des flavonodes montre que lextrait aqueux
reprsente le rendement le plus lev (20 %), suivi de lextrait
butanolique (18 %) puis de lextrait dactate dthyle (6 %).
Le rendement le plus faible (1 %) est obtenu par lextrait
dther thylique (Tableau 1).
Polyphnols (mg quivalent Flavonodes (mg quivalent
dacide gallique/g de lyophilisat) de querctine/g de lyophilisat)
50
160
516 397
150 25
278

Le dosage des polyphnols totaux par la mthode modi 1

fie de bleu de Prusse montre, en plus de sa sensibilit, 0,9 Tmoin+ ED
une reproductivit, puisque labsorbance est troitement 0,8

Absorbance du DPPH
Tmoin+
corrle la concentration de lacide gallique utilis dans 0,7 Vit.C(0,4mg/ml)
la gamme talon, r = 0,96 (Fig. 2). 0,6
Tmoin+
flav.(0,4mg/ml)
Les rsultats de dosage de polyphnols rvlent que les extraits 0,5 Tmoin+
butanolique/actate dthyle contiennent respectivement 516 et 0,4
flav.(0.2mg/ml)
Tmoin+
270 mg dquivalent dacide gallique par gramme de lyophilisat. 0,3 flav.(0.1mg/ml)

Les extraits aqueux/dther dithylique en contiennent moins 0,2

avec des concentrations successives de 150 et 60 mg/g. 0,1
Lvaluation quantitative des flavonodes (la QE sert de 0
standard) montre une corrlation positive entre la varia 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
tion de ce flavonode (1 25 g/ml) et labsorbance avec un Temps X30S

coefficient de corrlation r = 0,96 (Fig. 3).
Les teneurs en flavonodes varient dans les mmes propor
tions que celles des polyphnols : lextrait butanolique est plus
riche en flavonodes (397 mg/g), suivi de lextrait dactate
dthyle (160 mg/g). Les extraits dther dithylique et aqueux
ont une teneur moindre (50 et 25 mg/g respectivement).
valuation du pouvoir antiradicalaire des flavonodes
Lactivit antiradicalaire in vitro des flavonodes est value
par la diminution du taux de DPPH dos aprs laddition
des flavonodes diffrentes concentrations (Fig. 4). La lecture
de cette figure montre que leffet antiradicalaire des extraits de
1,2
1
Densit optique
Fig. 4. Pouvoir antiradicalaire des flavonodes (moyenne de trois essais)
flavonodes est dosedpendant, le pouvoir antioxydant des flavo
nodes visvis du DPPH, le plus lev (78,24%) est observ avec
une dose de 0,4 mg/ml, pouvoir antioxydant quivalent celui
quexerce la vitamine C (78,51%) la mme concentration..
Effet prventif des flavonodes
contre le diabte induit lalloxane
Les rsultats de leffet prventif et protecteur des flavonodes
sont rassembls dans le Tableau 2. Nous avons constat des
diffrences significatives (p < 0,01), tant au niveau de linsuli
nmie quau niveau de la glycmie, aprs dix jours du prtrai
tement des animaux alloxaniss par les composs phno
liques. En effet, linsulinmie est reste autour de sa valeur
initiale chez les groupes prtraits par lextrait de flavonodes
ou par la QE (0,238 0,052 et 0,218 0,018 U/ml) ; par

0,8
y = 0,0394x + 0,0778 contre, celle des tmoins non protgs (0,108 0,015 U/ml)
0,6 R = 0,96 a diminu significativement aprs dix jours de linjec
tion de lalloxane (p < 0,01) par rapport sa valeur initiale
0,4 ( j0) [0,228 0,041 U/ml] dans le mme groupe danimaux.
Pour la glycmie, une stabilit est constate au niveau du taux
0,2
sanguin de glucose au dixime jour aprs le prtraitement par
les flavonodes chez les groupes protgs par les flavonodes
0
0 5 10 15 20 25 30
(1,02 0,09 et 0,95 0,12 g/l) par rapport sa valeur initiale
(j0). Par contre, une hyperglycmie significative (p < 0,001)
Querctine (g/ml)
est obtenue chez les rats non protgs contre lalloxane
(2,42 0,15 g/l) par rapport la glycmie initiale du mme
Fig. 3. Courbe talon du dosage des flavonodes (querctine de lAlCl3. Moyenne de 3 essais) groupe (0,94 0,12 g/l).

Tableau 2. Variation de la glycmie et linsulinmie chez les rats prtraits ou non par les flavonodes

Groupes et traitement Insulinmie (U/ml) Glycmie (g/l)

des rats j0 j0 + 10 j0 j0 + 10
Tmoin + allox. + sol. physio. 0,228 0,041 0,108 0,015++ 0,94 0,12 2,42 0,15+++
Trait + allox. + flav. 0,242 0,035 0,238 0,052** 0,92 0,11 1,02 0,09***
Trait + allox. + querctine 0,231 0,022 0,218 0,018** 0,79 0,09 0,95 0,12***
allox. : alloxane ; flav. : flavonode ; sol. Physio. : solution physiologique.
Les valeurs sont donnes en moyenne carttype. Test de Student : **p < 0,01 ; ***p < 0,001 : groupes compars au groupe tmoin
alloxane + NaCl 0,9 % ; ++p < 0,01 ; +++p < 0,001 : groupes compars luimme j0 (avant linjection de lalloxane).
 279

Recherche des mcanismes de prvention
contre le diabte induit par lalloxane
Effet des flavonodes sur la peroxydation lipidique
La Figure 1 illustre leffet des flavonodes sur la variation du
MDA cytosolique dans les cellules pancratiques chez les rats
alloxaniss prtraits ou non par les composs phnoliques.
Nous avons constat une lvation trs hautement signifi
cative (p < 0,001) du MDA chez les rats recevant lalloxane
et non traits (2,132 0,102 nmol) par rapport au groupe
tmoin normal (0,621 0,064 nmol). Par ailleurs, aucune
variation significative du MDA nest constate chez les rats
recevant lalloxane et prtraits par lextrait de flavonodes
et la QE (leurs valeurs respectives : 0,721 0,078 nmol et
0,694 0,099 nmol nont aucune diffrence significative avec
celle obtenue avec le tmoin normal). Ce rsultat explique
probablement la protection des animaux par les flavonodes
contre le stress oxydatif.
Effet des flavonodes sur le niveau cytosolique de GSH
dans le pancras
La Figure 5 illustre leffet des flavonodes sur la variation de
GSH cytosolique dans les cellules pancratiques chez les rats
recevant de lalloxane, prtraits ou non par les composs
phnoliques.
Nous avons remarqu une lvation trs hautement signi
ficative (p < 0,001) de GSH chez les rats recevant lalloxane
et non traits (0,152 0,023 mmol) par rapport au groupe
tmoin normal (0,49 0,057 mmol). Par contre, aucune
variation significative de GSH nest constate chez les rats
recevant lalloxane et prtraits par lextrait de flavonodes et
la QE, car leurs valeurs respectives 0,501 0,092 mmol et
0,484 0,031 mmol nont aucune diffrence significative avec
celle du tmoin normal.
Effet des flavonodes sur la CAT et la SOD
Les rsultats de leffet des flavonodes sur les deux enzymes
sont reports dans le Tableau 3.
Lactivit de la CAT et de la SOD dans lhomognat de
pancras a significativement diminu (p < 0,01 ; p < 0,001) chez
les rats recevant lalloxane seul (0,294 0,042 UI) par rapport
celle mesure chez les tmoins qui ne reoivent que la solution
physiologique (0,582 0,093 UI). Lactivit enzymatique de ce
systme antioxydant est conserve son niveau normal chez
les rats prtraits par lextrait de flavonodes et de la QE, ses
valeurs respectives de 0,492 0,031 UI et 0,543 0,076 UI nont
aucune diffrence significative par rapport celle obtenue avec
les rats tmoins. Lactivit de la CAT et de la SOD est exprime
par milligramme de protines.

0,7
Tmoin normal
Discussion
ns
0,6 ns Tmoin+ allox.
[mmol/g de pancras]

Prtrait allox.+ flav.

0,5 Effet protecteur des flavonodes et mcanismes daction
Prtrait allox.+ QR
0,4 contre le diabte induit par lalloxane
*
0,3
* Le diabte induit lalloxane est un modle bien connu du
0,2
* diabte exprimental [15]. Nous avons constat une hyper
glycmie aprs dix jours de ladministration de lalloxane
0,1
monohydrate aux animaux, dune chute significative de linsu
0 linmie. Ce compos peut causer une ncrose svre des
GSH
cellules pancratiques. Cet effet est expliqu par le fait que
Fig. 5. Effet des flavonodes sur le niveau cytosolique de GSH dans le pancras lalloxane est pourvu dun pouvoir producteur du peroxyde
Les valeurs sont donnes en moyenne carttype. Test de Student : ***p < 0,001 : groupes compars dhydrogne et dautres radicaux libres qui sont lorigine
au groupe tmoin NaCl 0,9 %. de cette ncrose cellulaire des cellules [2,30]. La sensibilit de

Tableau 3. Effet des flavonodes sur lactivit des enzymes antioxydants, CAT et SOD chez les rats recevant lalloxane et traits ou
non par les flavonodes
Traitement des animaux Protine (mg/ml) Activit de la CAT (UI/mg Pr) Activit de la SOD (UI/mg Pr)
Tmoin normal + sol. physio 4,21 0,030 0,582 0,093 17,42 2,13
Tmoin allox. + sol. physio. 3,52 0,045* 0,294 0,042** 6,23 0,78***
Prtrait allox. + flav. 4.85 0,06 ns 0,492 0,031 ns 14,98 1,79 ns
Prtrait allox. + QE 5,12 0,09 ns 0,543 0,076 ns 18,15 3,21 ns
allox. : alloxane ; flav. : flavonode ; sol. physio. : solution physiologique.
Les valeurs sont donnes en moyenne carttype. Test de Student : ns ; **p < 0,01 ; ***p < 0,001 ; *p < 0,05 : groupes compars au
groupe tmoin normal + NaCl.
280
ces cellules au stress oxydatif est attribue galement un taux
faible en antioxydants du pancras par rapport aux autres tissus
[29]. Cet effet prooxydant de lalloxane produit une hyper
glycmie suite la chute de linsulminoscrtion et aggrave le
statut redox par lautooxydation du glucose [1,45].
Les rats prtraits par les flavonodes ont t protgs
contre leffet dltre et diabtogne de lalloxane, ainsi
aucune variation significative nest constate tant pour la
glycmie que pour linsulinmie aprs dix jours du trai
tement alloxanique associ aux flavonodes. Ces rsultats
sont en accord avec des travaux sur des extraits de flavo
nodes ou des formes pures dans le cas de diabte induit
lalloxane [1] ou la streptozotocine [2,13,24].
Action des flavonodes sur la peroxydation des lipides
Lvaluation de la peroxydation lipidique produite dans
les cellules pancratiques a montr la gnration dun
taux significativement lev de MDA cytosolique dans le
pancras, chez les rats alloxaniss et non protgs par les
flavonodes, par rapport aux animaux prtraits par ces
composs phnoliques. Par ailleurs, une telle hyperperoxy
dation pourrait tre le rsultat dune modification impor
tante du statut redox cellulaire dans le pancras en faveur
des prooxydants, car lalloxane sest avr gnrateur de
radicaux libres qui, par leur pouvoir oxydant, sont lori
gine de loxydation de lADN, de lipides et de carbohydrates
aboutissant ainsi la mort des cellules et linstallation du
diabte [20,43]. Par contre, les extraits de flavonodes de
RRL et de la QE se sont avrs des composs chmopro
tecteurs cellulaires, pourvus dun pouvoir antiperoxydant,
jouant un effet cran contre leffet dltre des radicaux
libres, ce qui explique le maintien de MDA son niveau
cytosolique normal dans le pancras des rats traits par
lalloxane en association avec ces composs phnoliques.
Ces rsultats sont en accord avec ceux obtenus par notre
quipe dans le cas dune hpatotoxicit induite par lpiru
bicine et prvenue par la QE [27].
Effet des flavonodes sur la dpltion du GSH
et les enzymes antioxydantes
Les rsultats de la prsente tude ont montr un ds
quilibre dans le statut redox cytosolique en faveur des
prooxydants mettant les cellules pancratiques dans un
tat de stress oxydatif. En effet, la teneur du pancras en
glutathion, dj nativement faible par rapport aux autres
organes [27,29], a subi une baisse significative juste aprs
cinq heures de traitement chez les rats alloxaniss et non
protgs par les flavonodes.
Parmi les systmes antioxydants enzymatiques cellulaires
figurent en premire ligne la SOD et la CAT. Lanion super
oxyde, premire espce toxique forme partir de loxy
gne, est limin et maintenu un niveau de concentration
assez bas par la SOD qui catalyse sa desmutation en H2O2.
Ce dernier est transform en H2O et O2 par la CAT. Lva
luation biochimique de lactivit des systmes enzymati
ques antioxydants (la CAT et la SOD) a mis en vidence
une rduction significative de lactivit cytosolique de ces
enzymes dans le pancras des mmes animaux. Au mme
moment, le prtraitement des rats administrs dalloxane
par les flavonodes a pu maintenir les systmes de dfense
cellulaire antioxydants (GSH, CAT et SOD) leur niveau
cellulaire normal pour empcher ainsi la perte de lqui
libre redox prooxydants/antioxydants constate avec les
animaux non protgs par les flavonodes.
La cellule dispose pour sa protection au GSH porteur
dune fonction thiol qui constitue un systme antioxydant
de la premire dfense en se liant par sa fonction SH aux
mtabolites toxiques [36]. Il joue son rle antioxydant gale
ment en synergie avec les enzymes antioxydantes telles la
glutathion peroxydase, la CAT et la SOD [36]. Lors du trai
tement des animaux par lalloxane, les taux de GSH sont
nettement diminus suite leur action de neutralisation des
radicaux libres gnrs par lalloxane [20], ce phnomne
aussi provoque sa dpltion et facilite la peroxydation des
lipides et loxydation des groupements thiols des protines
[31,49]. Cependant, le prtraitement des animaux par les
flavonodes a empch la diminution de GSH observe chez
les rats recevant le diabtogne seul en maintenant le niveau
cellulaire normal de ce tripeptide. Autrement dit, les extraits
de flavonodes et la QE ont un effet scavenger, cestdire
au lieu que les radicaux libres produits par lalloxane [20,43]
se neutralisent par le GSH, ils vont plutt tre capts par les
composs phnoliques en maintenant ainsi le taux normal
de glutathion des cellules pancratiques.
Des tudes scientifiques [13,14,51] ont dmontr leffet
protecteur des flavonodes (extraits bruts ou molcules puri
fies) visvis du diabte provoqu par la streptozotocine
ou lalloxane. Dautres travaux ont montr lvidence de
leffet chmoprotecteur et antiradicalaire des flavonodes
contre la peroxydation lipidique et la formation donc des
radicaux libres chez le rat alloxanis [16,27].
Effet de lalloxane et des flavonodes
sur les cellules du pancras : mcanisme daction
Certes, la toxicit de lalloxane a t tudie par plusieurs
auteurs, nanmoins le mcanisme de son effet prooxydant
sur le statut redox cellulaire reste fractionn. Ce produit
diabtogne induit des dommages pancratiques, notam
ment au niveau des cellules via les radicaux libres produits
lors de sa mtabolisation [29]. Ces derniers sont neutraliss
par le GSH, systme de premire dfense antiradicalaire, ce
qui provoque une dpltion accrue de sa teneur intracel
lulaire [27,47].
Les espces ractives de loxygne sont susceptibles
dpuiser lactivit des systmes enzymatiques antioxy
dants de la cellule (SOD, CAT), aboutissant finalement

un dsquilibre du systme redox cellulaire au profit des
prooxydants. Cet tat de stress oxydatif favorise les rac
tions en cascade des radicaux libres avec les molcules biolo
giques. Une lipoperoxydation (au niveau des biomembranes
cellulaires) est amorce et provoque ainsi laugmentation du
niveau intracellulaire du MDA. Loxydation des acides gras
insaturs des phospholipides membranaires est susceptible
de dformer la structure des membranes et de provoquer en
consquence sa permabilit et la mort cellulaire [15,31,46].
Le constat tir de lobservation des rsultats de la prsente
tude est que les flavonodes de RRL, administrs en association
avec lalloxane la dose de 200 mg/kg, ont maintenu lquilibre
de la balance antioxydant/prooxydant des cellules pancrati
ques. Cet quilibre est maintenu sous leffet de laction anti
oxydante des composs phnoliques contre les ROS gnrs par
lalloxane, pouvoir antiradicalaire dj dmontr au dbut de
ces travaux in vitro avec le DPPH. Les systmes enzymatiques
de dfense antioxydants (SOD, CAT) ne sont pas donc altrs,
et le taux cellulaire du GSH est conserv sous leffet chmopro
tecteur des flavonodes, puisque la variation du MDA cellulaire
reste normale, tmoignant de labsence dune lipoperoxydation
sensible et dune intgrit cellulaire.
Cet effet est confirm par une absence de ncrose des cellules
du pancras des animaux prtraits par les flavonodes.
Conclusion
Les rsultats obtenus de ltude de lactivit prventive des
extraits flavonodiques comme la QE montrent que ces
composs phnoliques sont pourvus dun pouvoir chmo
protecteur contre leffet dltre et diabtogne de lalloxane.
Cet effet se manifeste par le maintien de lquilibre redox
des cellules pancratiques malgr leffet prooxydant et cyto
toxique de lalloxane, ce qui protge ainsi les cellules dune
cytolyse, cest pourquoi le diabte ne sest pas manifest chez
les animaux alloxaniss et protgs par les flavonodes.
Il reste nanmoins que la purification et lidentification des
flavonodes ayant une activit antidiabtique et antioxydante
sont fortement recommandes pour approfondir non seule
ment les connaissances sur les diffrents flavonodes pourvus de
cette activit mais aussi pour cerner dune manire plus fine les
diffrentes actions possibles de ces composs et leur synergie. La
culture des cellules de Langerhans reste galement un moyen
indispensable permettant, dune part, ltude dune cytotoxicit
plus spcifique et, dautre part, une valuation biochimique et
pharmacologique de lactivit antidiabtogne et antioxydante
des flavonodes sur un seul type cellulaire.
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