NDICE

I. RESUMEN .............................................................................................................................. 2
II. INTRODUCCIN ..................................................................................................................... 3
III. PARTE TERICA ................................................................................................................. 4
IV. DETALLES EXPERIMENTALES ............................................................................................. 5
V. CLCULOS EXPERIMENTALES Y RESULTADOS ....................................................................... 6
A. PREPARACIN DEL EXTRACTO DE HOJAS.......................................................................... 6
B. CROMATOGRAFA EN PAPEL ............................................................................................. 7
C. CROMATOGRAFA EN COLUMNA ...................................................................................... 7
VI. DISCUSIN DE RESULTADOS ........................................................................................... 10
VII. CONCLUSIONES ............................................................................................................... 12
VIII. RECOMENDACIONES ....................................................................................................... 13
IX. APNDICE ............................................................................Error! Bookmark not defined.
X. BIBLIOGRAFA ...................................................................................................................... 14

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I. RESUMEN

En esta experiencia se realiz la cromatografa en papel y cromatografa en

columna. Con respecto a la cromatografa en papel la fase estacionaria lo cumple
el papel filtro y como fase mvil el cido actico glacial, se pigment el papel
filtro recortado luego se hallaron las medidas alcanzadas del sobrenadante y el
solvente una vez introducidos en la probeta. Se calcul el Rf que es la relacin
del soluto (sobrenadante) con respecto al frente del disolvente.
En la cromatografa en columna, la fase estacionaria estuvo representada por el
azcar el cual se llen en una columna y la fase mvil por el ter de petrleo aqu
identificaron las pigmentaciones mediante la coloracin en la columna
cromatogrfica las cuales salieron en orden descendente a su peso molecular
estas fueron xantofilas y clorofilas , se observaron que las pigmentaciones verdes
eran, una ms oscura que la otra, eso quiere decir que existi la presencia de
clorofilas A que son ms oscuras que las clorofilas B, que son ms claras.

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II. INTRODUCCIN

En este presente informe se hablara sobre la cromatografa, este nombre

proviene de kromato, color y graphos, escrito. El nombre de la tcnica deriva de
los primeros ensayos hechos por el ruso de origen italiano Tswett cuando separo
diversos pigmentos de las plantas.
La cromatografa es un mtodo fsico de gran importancia basado en el principio
de retencin selectiva y caracterizada por ser sencillo puesto que no necesita
equipamiento complejo adems de ser muy verstil porque presenta distintos
tipos de cromatografa al tomar distintos criterios.
Existen dos objetivos principales en la realizacin de esta tcnica, el preparativo
y analtico. El primero se obtiene con la separacin de los distintos componentes
de una mezcla y el segundo permitiendo identificar y determinar las cantidades
de dicho componente. En toda cromatografa se cumple la ley del reparto de
una muestra dada entre dos fases una estacionaria y otra mvil.

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 III. PARTE TERICA

CROMATOGRAFA

Es la tcnica para separar componentes de una mezcla, y su posterior anlisis, basadas

en que las distintas sustancias que forman los componentes de una mezcla se dejan
arrastrar a diferentes velocidades sobre un soporte. El soporte puede ser papel, un gas,
otro lquido, etc. Es un mtodo fsico de separacin de componentes.
CLASES DE CROMATOGRAFIA
Cromatografa de papel:
Es un proceso donde el absorbente lo constituye un papel de Filtro. Una vez corrido el
disolvente se retira el papel y se deja secar, se trata con un reactivo qumico con el fin
de poder revelar las manchas.

Figura 1: Cromatografa en papel

Cromatografa de columna
Los elementos bsicos en la cromatografa de columna son una son la fase estacionaria
y la fase mvil. La fase estacionaria la forma un slido poroso, el cual queda soportado
en el interior de una columna generalmente fabricada en plstico o vidri.
Cromatografa de intercambio inico
La fase estacionaria es un slido que lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya
carga se puede intercambiar por aquellos iones presentes en la fase mvil.
Cromatografa de afinidad
La cromatografa de afinidad se basa en interacciones no covalentes selectivas entre la
muestra y molculas especficas. Es muy especfica, pero no muy consistente. Se utiliza
mucho en bioqumica para la purificacin de protenas.

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Cromatografa de exclusin
Se basa en la habilidad de materiales de porosidad controlada para separar los
componentes de una mezcla de acuerdo al tamao y forma de las molculas.
Causas del desplazamiento de la fase movil
Capilaridad
La capilaridad es la cualidad que posee una sustancia de absorber a otra. Sucede cuando
las fuerzas intermoleculares adhesivas entre el lquido y el slido son mayores que las
fuerzas intermoleculares cohesivas del lquido. Esto causa que el menisco tenga una
forma cncava cuando el lquido est en contacto con una superficie vertical. En el caso
del tubo delgado, ste succiona un lquido incluso en contra de la fuerza de gravedad.
Este es el mismo efecto que causa que materiales porosos absorban lquidos

Figura N2 Fenomeno de Capilaridad

Evaporacin del solvente

Durante el proceso fsico denominado evaporacin, una sustancia lquida pasa lenta y
gradualmente a un estado gaseoso, una vez que haya adquirido la energa necesaria
para aumentar su superficie

IV. DETALLES EXPERIMENTALES

Cuadro N1: Detalles para la cromatografa en papel

flores de trituradas 2 gramos

cido clorhdrico metanlico 3 ml

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 Papel filtro (fase estacionaria) 14.5cm x2cm

cido actico(fase mvil) 2 ml

Cuadro N2 : Detalles para la cromatografa en columna

Hojas verdes trituradas 2 gramos

ter de petrleo 10 ml

Azcar en polvo 300 gramos

V. CLCULOS EXPERIMENTALES Y RESULTADOS

A. PREPARACIN DEL EXTRACTO DE HOJAS

Se trituraron los ptalos (no necesariamente secas) en el mortero hasta tener

un tamaa muy pequeo, una vez que obtuvimos el tamao adecuado, a la
muestra triturada se le agreg cido clorhdrico metanlico hasta que
obtuvimos suficiente sobrenadante que luego utilizamos en la posterior
experiencia.

Figura N 2. Aqu se observa la manera de

cmo se trituraron los ptalos rojos y
rosados, posterior a esto se le agreg el
cido clorhdrico y as obtuvimos nuestro
sobrenadante.

Figura N 3. Aqu se observa el sobrenadante,

para nuestro grupo se pudo triturar toda la
muestra de ptalos teniendo en su gran mayora
la muestra lquida sin ninguna impureza

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B. CROMATOGRAFA EN PAPEL

Se cort una tira de papel filtro con las dimensiones adecuadas para introducirlo
en una probeta, luego de esto se trazaron con un lpiz 2 lneas, una a 1.5 cm del
borde inferior del papel filtro y otra a 3,0 cm del borde superior, una vez hecho
esto, se agreg una cantidad mnima de la fase mvil en el fondo de la probeta,
se tuvo mucho cuidado con no empapar las paredes de la probeta, se aplic el
sobrenadante en el medio de la lnea a 1.5 cm del borde inferior del papel filtro,
aproximadamente 3 milmetros de dimetro.

Figura N 4. Como vemos en esta imagen, se

coloc la muestra sobrenadante en el punto medio
de la lnea de 1.5 cm sobre el borde inferior del
papel filtro aproximadamente con 3 milmetros de
dimetro.

Se midi la distancia de que alcanz la fase mvil y la distancia que alcanz la

muestra sobrenadante, luego se hall el Rf dividiendo la mitad de la distancia
de la muestra sobrenadante entre la distancia al frente del disolvente.

Figura N 5. Aqu se observa la muestra corrida

en el papel filtro, se procedi a hacer el clculo.
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Fr= 10 =0.4

C. CROMATOGRAFA EN COLUMNA

Se arm una columna cromatogrfica en un soporte universal, luego se tap en

la parte inferior con algodn y se llen la columna con azcar final, para esta
experiencia se trituraron hojas verdes y se le agrego cido clorhdrico
metanlico generando as sobrenadante.

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 Figura N 6. Aqu se observa la trituracin que se
les hizo a las hojas, posteriormente se le agreg
el cido clorhdrico metanlico generando as el
sobrenadante.

Una vez que obtuvimos el sobrenadante, en un vaso de precipitados se disolvi

con suficiente cantidad de ter de petrleo, fue mezclado y se verti en la parte
superior de la columna cromatogrfica.

Figura N 7. En esta imagen vemos como la

coloracin amarilla y verde comenzaron a
descender por la columna, esto indic la
presencia de xantofilas y clorofilas
respectivamente.

Figura N 8. En esta imagen se observa que

tambin se present una coloracin verde ms
oscura que la anterior vista, esto denot la
presencia de la clorofila A que es ms oscura que
la clorofila B.

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Figura N 9. En esta imagen se aprecia con
mucha ms claridad cmo se presentaron las
clorofilas A que son ms oscuras.

Figura N 10. En esta imagen se observa las

xantofilas que cayeron al vaso de precipitados
resultado de la cromatografa en columna.

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 VI. DISCUSIN DE RESULTADOS

*CROMATOGRAFA EN PAPEL

En la experiencia, para esta tcnica se us como fase mvil el cido actico y como fase
estacionaria las molculas de agua contenidas en la celulosa del papel. La separacin surga de
las interacciones mutuas de componentes de la muestra, disolvente (fase mvil) y adsorbente
(fase estacionaria).

Se observ que la distribucin de los componentes de la muestra entre la fase estacionaria y la

fase mvil es determinada por la polaridad propia de cada compuesto, por el grado de actividad
de la fase estacionaria (el cual depende principalmente del grado de hidratacin y de la polaridad
del disolvente).
El principal factor para controlar el movimiento de los diferentes compuestos de la muestra en
el cromatograma es la polaridad del disolvente. Es por eso que se debe eligi un adecuado
disolvente que sea lo suficientemente polar para mover los componentes de la muestra.

Tabla 1. Disolventes comunes para cromatografa de lquidos

Menos polar

Hexano
Tolueno
Cloruro de metileno
Cloroformo
ter
Acetato de etilo
Acetona
Propanol
Etanol
Metanol
Agua
cido actico

Ms polar

DIFERENCIA ENTRE LA CROMATOGRAFA EN PAPEL Y LA CROMATOGRAFA EN COLUMNA

La principal diferencia de las cromatografas en papel con la cromatografa en columna es que,

en estos mtodos, el adsorbente se usa como una capa delgada sobre un soporte (vidrio,
aluminio, plstico, etc. o papel); como resultado, slo puede separase una cantidad
pequesima de mezcla, aunque, por otra parte, la separacin puede ser ms eficaz, ya que la
relacin de cantidad de absorbente/muestra es mucho mayor. Debido a esto, la cromatografa
en columna es preparativa (permite separar cantidades apreciables de los componentes),
mientras que las cromatografas en placa fina y en papel son ms bien mtodos analticos. Otra
diferencia importante es que mientras que la fase mvil desciende por gravedad en la
cromatografa en columna, en las de capa delgada y en papel asciende por capilaridad.

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CROMATOGRAFA EN COLUMNA

En la cromatografa en columna se utiliz un extracto de hojas verdes como muestra, azcar

como fase estacionaria y ter como fase mvil. Se dispuso la fase estacionaria en una columna
que proporciona un medio para la separacin y aislamiento de los componentes. La muestra se
aplica en la parte superior de la columna y se deja pasar solvente a travs de la fase estacionaria.
Este proceso desarrolla el cromatograma en bandas que contienen los compuestos individuales;
estas bandas pueden ser arrastradas en secuencia por adicin de ms solvente y recolectadas
en fracciones separadas.
La columna se prepara y desarrolla usando el solvente menos polar que disuelva a la muestra y
que permita el movimiento de los compuestos a una velocidad prctica. Generalmente es
necesario ir cambiando a solventes ms polares para efectuar la elusin de los compuestos,
dependiendo de los grupos funcionales que tengan los componentes de la mezcla. La facilidad
de ser arrastrado ms rpidamente, depender de la menor polaridad de los grupos funcionales.

VELOCIDAD RAPIDEZ DE ELUSIN GRUPO FUNCIONAL

alcanos
menos polar Ms rpido halogenuros de alquilo
alquenos
dienos
hidrocarburos aromticos
halogenuros aromticos
teres
steres
cetonas
aldehdos
aminas
alcoholes
fenoles
cidos carboxlicos
cidos sulfnicos

ms polar Ms lento

Tabla 2. Velocidades relativas de elucin para diferentes grupos funcionales

LOS DIFERENTES PIGMENTOS DE CLOROFILA OBSERVADAS

En la experiencia se observ dos tipos de clorofila, ello se

diferenci con las diferentes tonalidades del pigmento; por
consiguiente se alude la presencia de la clorofila a y la clorofila b.
La diferencia entre ellas es que la clorofila b tiene un grupo formilo
(-CHO) en lugar de un grupo metilo de la clorofila en uno de los
carbonos del anillo de porfirina. En los vegetales superiores, la ms
abundante es la clorofila a. En cuanto a la pigmentacin la clorofila
a es un verde menos intenso que la clorofila b.

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VII. CONCLUSIONES

En la experiencia se concluy que la fase estacionaria utilizada era favorable para la

separacin de las diferentes clorofilas y la xantofila pero no para el caroteno, esto se
debe a la baja polaridad del caroteno quien requerir un adsorbente ms activo.

Se observ que mientras ms polar sea el disolvente, ms rpido es el movimiento de

los compuestos y menos efectiva la separacin.

Se concluye la utilizacin de la cromatografa en papel es para la separacin de

sustancias muy polares, es mas preparativo que analtico y que su aplicacin es mucho
menos generalizada por lo limitado de los tipos de compuestos que permite separar y
por el tiempo mucho mayor que requiere.

En la cromatografa en columna, la facilidad de ser arrastrado ms rpidamente los

compuestos de la muestra, depender de la menor polaridad de los grupos
funcionales.

Los resultados de la experiencia dependi de variables como la fuente de los

pigmentos, la eficiencia de la extraccin, la actividad del azcar utilizada como
adsorbente, las dimensiones de la columna, los volmenes de cada solvente, ya que
cambios muy pequeos en algunos de estos factores pueden afectar la separacin e
incluso causar cambios en las posiciones individuales de los pigmentos en el
cromatograma.

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VIII. RECOMENDACIONES

Es importante elegir el disolvente adecuado, este debe ser lo suficientemente polar

para mover los componentes de la mezcla y as obtener una exitosa separacin.
Para mezclas poco polares es recomendable usar mezclas de hexano con diferentes
proporciones de tolueno, cloruro de metileno y ter y para los compuestos ms
polares pueden requerir proporciones variables de acetato de etilo, acetona, metanol
y hasta agua.

Al llevar a cabo una cromatografa es importante mantener siempre el nivel de

solvente arriba de la columna de adsorbente.

Es importante tapar la probeta en dnde se est realizando la cromatografa esto

ayudar a la saturacin del sistema y el solvente pueda ascender por capilaridad.

Es recomendable ir cambiando a solventes ms polares para efectuar la elusin de los

compuestos, dependiendo de los grupos funcionales que tengan los componentes de
la mezcla.

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IX. BIBLIOGRAFA

BROWNING, D. R. Cromatografa-Toray-Masson. Espaa. 1971.

DOMINGUEZ, Xorge Alejandro. Cromatografa en Papel y en Capa Delgada,
Organizacin de los Estados Americanos U.S.A. 1975
http://quimica.laguia2000.com/general/cromatografia-en-columna#ixzz3peICYCaf[29
mayo ,2017]
https://es.wikipedia.org/wiki/Geranium[29 mayo ,2017]

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