UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR A

BANATULUI TIMIOARA

FACULTATEA DE MEDICIN VETERINAR

CONTRIBUII LA CUNOATEREA BIOLOGIEI,

EPIDEMIOLOGIEI, DIAGNOSTICULUI I CONTROLULUI
CRIPTOSPORIDIOZEI N VESTUL ROMNIEI

TEZ DE DOCTORAT

Conductor tiinific,
Prof. dr. DRBU GHEORGHE
Titularul Disciplinei de Parazitologie i Boli Parazitare

Doctorand,
IMRE KLMN

2010
UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR A
BANATULUI TIMIOARA

FACULTATEA DE MEDICIN VETERINAR

CONTRIBUII LA CUNOATEREA BIOLOGIEI,

EPIDEMIOLOGIEI, DIAGNOSTICULUI I CONTROLULUI
CRIPTOSPORIDIOZEI N VESTUL ROMNIEI

Tez pentru obinerea titlului de

doctor n medicin veterinar

Conductor tiinific,
Prof. dr. DRBU GHEORGHE
Titularul Disciplinei de Parazitologie i Boli Parazitare

Doctorand,
Dr. med. vet. IMRE KLMN
Disciplina de Parazitologie i Boli Parazitare

2010
Prezenta tez conine:

Rezumate (romn, englez)

Abrevieri
Introducere
Partea general extins pe 68 de pagini;
Partea special extins pe 128 de pagini;
Tabele: 49;
Figuri full color: 91;
Bibliografie: 570 de titluri bibliografice.

REZUMATUL
Tezei de doctorat cu titlul

CONTRIBUII LA CUNOATEREA BIOLOGIEI, EPIDEMIOLOGIEI,

DIAGNOSTICULUI I CONTROLULUI CRIPTOSPORIDIOZEI N VESTUL
ROMNIEI

Lucrarea este structurat n dou pri: prima Studiu bibliografic i a doua Cercetri
proprii.

Prima parte conine o scurt introducere i dou capitole:

CAP.1 Etiologia i biologia genului Cryptosporidium
CAP.2 Aspecte epidemiologice n criptosporidioz

n primul capitol sunt actualizate informaiile din literatura de specialitate cu privire la

etiologia i biologia genului Cryptosporidium. n prim plan sunt prezentate noiuni despre istoricul
taxonomiei criptosporidiilor i ncadrarea taxonomic urmat de trecerea n revist a celor 19 specii
valide de criptosporidii de la mamifere, psri, reptile i peti. De asemenea, aici sunt oferite
informaii despre coevoluia gazd parazit i adaptarea la gazd a criptosporidiilor, implicaii pentru
taxonomie i criterii folosite pentru denumirea speciilor de criptosporidii. Tot n acest capitol sunt
trecute n revist date referitoare la ciclul biologic al criptosporidiilor la mamifere, reptile, peti i
psri, precum i rezistena acestora la agenii fizici i chimici.
n al doilea capitol sunt menionate date epidemiologice privind sursele i cile de infecie,
modalitile de transmitere i posibilitile de diseminare a criptosporidiilor la animale i om. Pe lng
aceste noiuni, sunt descrii factorii care determin receptivitatea n criptosporidioz i noiuni de
epidemiologie molecular. Acest ultim subcapitol cuprinde date referitoare la evoluiile recente ale
metodelor epidemiologice moleculare n criptosporidioz i distribuia speciilor, genotipurilor i
subtipurilor genului Cryptosporidium la animalele de ferm i om.

A doua parte conine 8 capitole n care se fac referiri experimentale la cele descrise n prima
parte:

CAP.3 Determinarea prevalenei prin ELISA, cartarea criptosporidiozei la animale n vestul

Romniei i stabilirea asociaiilor cu ali enteropatogeni;
CAP.4 Investigaii epidemiologice prin ELISA asupra parazitismului cu criptosporidii la om
n partea de vest a Romniei;
CAP.5 Studii morfometrice asupra oochisturilor de criptosporidii, n preparatul nativ, izolate
de la viei;
CAP.6 Identificarea imunohistochimic a infeciei naturale cu Cryptosporidium spp. la viei;
CAP.7 Caracterizarea unor specii de Cryptosporidium la animale i om prin tehnici de
biologie molecular;
CAP.8 Evaluarea eficacitii unor metode de diagnostic n criptosporidioz;
 CAP.9 Testarea eficacitii profilactice i/sau terapeutice a unor suplimente nutriionale i
medicamente n infecia natural i experimental cu Cryptosporidium spp.
CAP.10 Concluzii generale

n capitolul 3 sunt redate rezultatele investigaiilor epidemiologice efectuate prin tehnica

ELISA cu privire la prevalena criptosporidiozei n asociere cu ali enteropatogeni n cteva judee din
vestul rii, la mai multe specii de animale. Acest capitol constituie scheletul tezei i cuprinde, la
rndul su, alte patru subcapitole:

- Determinarea prevalenei criptosporidiozei bovine n asociere cu ali enteropatogeni prin

ELISA n partea de vest a Romniei;
- Determinarea prevalenei criptosporidiozei suine n asociere cu ali enteropatogeni prin
ELISA n cteva judee vestice ale rii;
- Studiu epidemiologic prin ELISA asupra parazitismului cu Cryptosporidium spp. n asociere
cu ali enteropatogeni la miei;
- Determinarea prevalenei criptosporidiozei prin ELISA la alte specii de animale.

n primul subcapitol sunt oferite informaii despre prevalena criptosporidiozei bovine

n asociere cu ali trei enteropatogeni majori (rotavirus, coronavirus i E. coli) n judeele: Arad, Bihor,
Cara-Severin i Timi.
Studiul intitulat prevalena criptosporidiozei n asociere cu ali enteropatogeni la viei n
judeul Arad a fost efectuat n perioada iulie 2007 - ianuarie 2009, pe un efectiv de 130 de viei, cu
vrste cuprinse ntre trei zile i un an, din nou localiti ale judeului Arad. Vieii au provenit din cinci
ferme mari de vaci de lapte (localitile: Utvini, Fntnele, Zimandu Nou, Curtici i Sebe) i din alte
patru microferme (localitile: Ndlac, Pncota, Vrdia de Mure i Chiinu Cri), din diferite zone
ale judeului Arad. Probele recoltate au fost examinate prin tehnica ELISA n Laboratorul de
Imunodiagnostic ELISA la Disciplina de Parazitologie i Boli Parazitare din cadrul Facultii de
Medicin Veterinar din Timioara. S-a utilizat kit-ul BIO-X EASY-DIGEST (BIO K 151) (Bio-X
Diagnostics, Belgia) care este un kit de diagnostic antigenic in vitro din fecale de bovine i respect
principiile tehnicii ELISA dublu sandwich.
Pe ansamblu, studiul materiilor fecale prin tehnica ELISA, cu privire la ponderea agenilor
enteropatogeni implicai n producerea diareilor la viei n judeul Arad, a artat c:
- Cryptosporidium spp. a fost identificat la un numr de 74 probe din 130 analizate (54 de
cazuri ca agent patogen unic i 20 cazuri asociat);
- coronavirusurile au fost ntlnite n fecalele a 20 viei din 130 examinate (dou cazuri ca
agent patogen unic i 18 cazuri asociat);
- rotavirusurile au fost gsite la 19 probe din 130 analizate (opt cazuri ca agent patogen unic
i 11 cazuri asociat);
- E. coli F5 enteropatogen nu a fost identificat.
Vrsta cea mai receptiv la infecia cu criptosporidii, ca unici agenti patogeni, s-a dovedit a fi
cea cuprins ntre 5 i 7 zile, respectiv 8 i 14 zile.
Acest studiu a artat c la bovinele cu vrsta cuprins ntre trei zile i un an, criptosporidioza,
evaluat prin ELISA n premier naional, a evoluat n toate cele 9 uniti de cretere ale judeului
Arad, avnd o prevalen de 56,9% (41,5% ca agent patogen unic i 15,4% n asociaie cu ali ageni
patogeni).
La aceeai categorie de vrst, coronaviroza a avut o prevalen de 12,3% (2% ca agent
patogen unic i 10,3% n asociaie cu ali ageni patogeni). Prevalena rotavirozei la tineretul bovin
examinat a fost de 14,6% (6,1% ca agent patogen unic i 8,5% n asociaie cu ali ageni patogeni).
Infecia cu E. coli F5 enteropatogen nu a fost semnalat.
De asemenea s-a remarcat c, coronavirusurile implicate n etiologia diareei la categoria de
vrst cinci zile 5 luni evolueaz, de obicei, asociate cu criptosporidii. Nu s-au semnalat diferene
semnificative n ceea ce privete distribuia rota- i coronavirusurilor la categoriile de vrste
investigate.
Un alt studiu efectuat n cadrul acestui subcapitol a fost determinarea prevalenei
criptosporidiozei n asociere cu ali enteropatogeni la viei n judeul Bihor. n perioada aprilie 2007 -
ianuarie 2009 au fost investigai 110 viei, cu vrste cuprinse ntre o zi i 60 de zile, din apte localiti
ale judeului Bihor. Probele au fost examinate prin tehnica ELISA utiliznd kit-ul BIO-X EASY-
DIGEST (BIO K 151) (Bio-X Diagnostics, Belgia).
Pe ansamblu, studiul materiilor fecale prin tehnica ELISA, cu privire la ponderea agenilor
enteropatogeni implicai n producerea diareilor la viei n judeul Bihor, a artat c:
- Cryptosporidium spp. a fost identificat la un numr de 34 probe din 110 analizate (23 de
cazuri ca agent patogen unic i 11 cazuri asociat);
- coronavirusurile au fost ntlnite n fecalele a opt viei din 110 probe examinate (cinci cazuri
ca agent patogen unic i trei cazuri asociat);
- rotavirusurile au fost gsite la 23 de probe din 110 analizate (15 cazuri ca agent patogen
unic i opt cazuri asociat).
Vrsta cea mai receptiv la infecia cu criptosporidii, ca unici agenti patogeni, s-a dovedit a fi
cea cuprins ntre 8 i 14 zile (30,4%), urmat de categoria de 5-7 zile respectiv 15-21 de zile n
procente egale (25).
La tineretul bovin n primele dou luni de via, criptosporidioza a evoluat n toate cele apte
uniti de cretere ale judeului Bihor, avnd o prevalen de 31,9%.
La aceeai categorie de vrst, coronaviroza a avut o prevalen de 7,2% (4,5% ca agent
patogen unic i 2,7% n asociaie cu ali ageni patogeni).
Prevalena rotavirozei la tineretul bovin examinat a fost de 20,9% (13,6% ca agent patogen
unic i 7,3% n asociaie cu ali ageni patogeni).
Nu au fost identificate infecii cu E. coli F5.
Infecia cu Cryptosporidium spp., ca agent patogen unic, a variat ntre 0% i 30%.
Extensivitatea i intensivitatea infeciei la taurinele din judeul Bihor a fost mai ridicat la
categoria de vrst 8-14 zile. Nu s-au semnalat diferene semnificative n ceea ce privete distribuia
rota- i coronavirusurilor la categoriile de vrste investigate.
Frecvena rotavirusurilor a fost mai mare n fecalele diareice cu aspect apos iar C. parvum a
fost diagnosticat cu preponderen n fecalele diareice cremoase.
Studiul intitulat prevalena criptosporidiozei n asociere cu ali enteropatogeni la viei n
judeul Cara-Severin prezint rezultatul investigaiilor prin ELISA efectuate pe un numr de 70 de
viei cu vrste cuprinse ntre dou zile i patru luni n patru localiti al acestui jude. S-a utilizat
acelai kit (BIO K 151 - Bio-X Diagnostics, Belgia). Pe ansamblu, studiul materiilor fecale prin
tehnica ELISA, cu privire la ponderea agenilor enteropatogeni implicai n producerea diareilor la
viei, arat c:
- Cryptosporidium spp. a fost identificat la un numr de 20 probe din 70 analizate (17 de
cazuri ca agent patogen unic i 3 cazuri asociat);
- rotavirusurile au fost semnalate n 8 probe din 70 analizate (5 cazuri ca agent patogen unic i
3 cazuri asociat).
Vrsta cea mai receptiv la infecia cu criptosporidii, ca unici agenti patogeni, s-a dovedit a fi
cea cuprins ntre 8 i 14 zile (46,6%), respectiv 2 i 7 zile (40%).
n urma investigaiilor s-a ajuns la concluzia c la vieii n primele patru luni de via, n patru
ferme de bovine din judeul Cara-Severin cauza major a diareilor a fost infecia cu Cryptosporidium
spp. n cele patru ferme cu cretere de tip industrial criptosporidioza a avut o prevalen de 28,6%.
Pe lng infecia cu Cryptosporidium spp., rotavirusurile contribuie, de asemenea, la
morbiditate, singure sau n infecii asociate. Infecia cu Cryptosporidium spp. ca unic agent patogen a
variat ntre 5,5% i 50%. Extensivitatea i intensivitatea infeciei la taurinele din judeul Cara-Severin
a fost mai ridicat la categoria de vrst 8-14 zile.
Prevalena rotavirozei la tineretul bovin examinat a fost de 11,4% (7,1% ca agent patogen
unic i 4,3% n asociaie cu ali ageni patogeni).
Nu au fost identificate infecii cu E. coli F5 i coronavirusuri.
Determinarea prevalenei criptosporidiozei n asociere cu ali enteropatogeni la viei n
judeul Timi s-a efectuat n perioada iulie 2007 - noiembrie 2008 pe un efectiv de 110 viei, cu vrste
cuprinse ntre o zi i ase luni, n diferite zone ale judeului Timi. Metoda de diagnostic utilizat a fost
tehnica ELISA folosindu-se kit-ul BIO K 151 (Bio-X Diagnostics, Belgia).
Pe ansamblu, studiul materiilor fecale prin tehnica ELISA, cu privire la ponderea agenilor
enteropatogeni implicai n producerea diareilor la viei n judeul Timi, a artat c:
 - Cryptosporidium spp. a fost identificat la un numr de 47 probe din 110 analizate (27 de
cazuri ca agent patogen unic i 20 de cazuri asociat);
- coronavirusurile au fost ntlnite n fecalele a zece viei din 110 probe examinate, n toate
cazurile n infecii mixte;
- rotavirusurile au fost gsite la 17 probe din 110 analizate (ase cazuri ca agent patogen unic
i 11 cazuri asociat);
- E. coli F5 enteropatogen a fost semnalat n dou situaii (ntr-un singur caz ca monoinfecie
iar ntr-o singur situaie, asociat cu ali trei enteropatogeni testai).
Vrsta cea mai receptiv la infecia cu criptosporidii, ca unici agenti patogeni, s-a dovedit a fi
cea cuprins ntre opt i 14 zile (33,3%) urmat de categoria 22-30 zile (29,1%). Rezultatele obinute
au artat c, la tineretul bovin n primele ase luni de via, criptosporidioza a evoluat n toate cele
cinci uniti de cretere ale judeului Timi, avnd o prevalen de 42,7%. La aceeai categorie de
vrst, coronaviroza a avut o prevalen de 9,1% evolund n toate cazurile asociat. Prevalena
rotavirozei la tineretul bovin examinat a fost de 15,4% (5,4% ca agent patogen unic i 10% n
asociaie cu ali ageni patogeni). Prevalena colibacilozei bovine, determinat de E. coli F5
enterotoxigen, a fost de 3,6% (0,9% ca agent patogen unic i 2,7% n asociaie cu rotavirusuri,
coronavirusuri i Cryptosporidium spp.).
Extensivitatea i intensivitatea infeciei cu Cryptosporidium spp. la taurinele din judeul Timi
este mai ridicat la categoria de vrst 8-14 zile.
Primul subcapitol se finalizeaz cu screeningul epidemiologic asupra evoluiei criptosporidiozei
n asociere cu ali enteropatogeni la viei, n partea de vest a Romniei.
Studiul materiilor fecale prin tehnica ELISA, cu privire la ponderea agenilor enteropatogeni
implicai n producerea diareilor la viei n judeele vestice ale Romniei, a artat c:
- Cryptosporidium spp. a fost identificat la un numr de 175 probe din 420 analizate (121 de
cazuri ca agent patogen unic i 54 de cazuri asociat);
- coronavirusurile au fost ntlnite n fecalele a 38 de viei din 420 examinate (apte cazuri ca
agent patogen unic i 31 de cazuri asociat);
-rotavirusurile au fost gsite la 67 probe din 420 analizate (34 de cazuri ca agent patogen unic
i 33 de cazuri asociat);
- E. coli F5 enteropatogen a fost identificat n fecalele a patru viei din 420 examinate (ntr-un
singur caz ca agent patogen unic i trei cazuri asociat).
Investigaiile epidemiologice efectuate la tineretul bovin n primele ase luni de via din
patru judee vestice ale Romniei scot n eviden o prevalen a criptosporidiozei de 41,6% (28,8%
ca agent patogen unic i 12,8% n asociaie cu ali enteropatogeni).
La aceeai categorie de vrst, coronaviroza a avut o prevalen de 9% (1,6% ca unic agent
patogen i 7,4% n asociaie cu ali ageni infecioi sau parazitari).
Prevalena rotavirozei la tineretul bovin examinat a fost de 15,9% (8% ca agent patogen unic
i 7,9% n asociaie cu ali ageni patogeni).
Prevalena colibacilozei bovine, determinat de E. coli F5 enterotoxigen, a fost de 0,9%
(0,23% ca agent patogen unic i 0,67% n asociaie cu rotavirusuri, coronavirusuri i Cryptosporidium
spp.).
Un procent de 32,6 din fecalele analizate au fost negative pentru cei patru enteropatogeni.
Extensivitatea i intensivitatea infeciei cu Cryptosporidium spp. la taurinele din judeul Timi
este mai ridicat la categoria de 8-14 zile.
Categoria de vrst cuprins ntre 15 i 21 de zile s-a dovedit a fi cea mai receptiv la infecia
cu rotavirusuri.
Evoluia coronavirozei a fost maxim la categoria de 15-21 de zile.

n cel de al doilea subcapitol sunt prezentate rezultatele investigaiilor epidemiologice

privind prevalena criptosporidiozei suine n asociere cu ali enteropatogeni, determinat prin ELISA
n judeele Arad i Timi.
n judeul Timi studiul a fost realizat n perioada iulie-decembrie anul 2008, pe un numr de
104 de tineret suin cu vrste cuprinse ntre o zi i 47 de zile, provenii din opt ferme cu cretere de tip
industrial. Pentru prelucrarea materiilor fecale diareice s-a utilizat kit-ul BIO K 151 (Bio-X
Diagnostics, Belgia).
 Pe ansamblu, studiul materiilor fecale prin tehnica ELISA, privind ponderea agenilor
enteropatogeni implicai n producerea diareelor la tineretul suin, arat c:
- Cryptosporidium spp. a fost identificat la un numr de 32 probe din 104 analizate (27 de
cazuri ca agent patogen unic i cinci cazuri asociat);
- rotavirusurile au fost ntlnite la 16 probe din 104 analizate (12 cazuri ca agent patogen unic
i patru cazuri asociat);
- coronavirusurile au fost puse n eviden ntr-o singur prob, asociate cu criptosporidii;
- E. coli F5 enteropatogen nu a fost identificat.
Vrsta cea mai receptiv la infecia cu criptosporidii, ca unici ageni patogeni, s-a dovedit a fi
cea cuprins ntre 29 i 47 zile. Aceste investigaii au demonstrat c, la tineretul suin cu vrsta
cuprins ntre 0 i 47 de zile, criptosporidioza, evaluat prin ELISA n premier naional, a evoluat
n toate cele 8 uniti de cretere ale judeului Timi, avnd o prevalen de 31% (26,2% ca agent
patogen unic i 4,8% n asociaie cu ali ageni patogeni).
La aceeai categorie de vrst, coronaviroza a avut o prevalen de 0,9%, evolund asociat
cu Cryptosporidium spp. ntr-un singur caz.
Prevalena rotavirozei la tineretul suin examinat a fost de 15,5% (11,6% ca agent patogen
unic i 3,9% n asociaie cu criptosporidii).
Infecia cu E.coli F5 enteropatogen nu a fost semnalat.
n judeul Arad au fost prelucrate un numr de 29 de probe de fecale diareice de la suine cu
vrste cuprinse ntre 110 i 133 de zile, provenii din trei ferme cu cretere de tip industrial, utilizndu-
se acelai kit de diagnostic ELISA.
Pe ansamblu se poate spune c, prin analiza a 29 probe de fecale de suine cu vrste cuprinse
ntre 110 i 133 de zile, infecii cu criptosporidii s-au semnalat ntr-un procent de 17,2. Un procent de
82,8 din fecalele analizate au fost negative pentru cei patru enteropatogeni testai (rotavirus,
coronavirus, E. coli F5).
Screeningul epidemiologic sintetic asupra evoluiei criptosporidiozei, n asociere cu ali
enteropatogeni, la suine, n dou judee vestice din Romnia a artat c infecia cu Cryptosporidum
spp. a fost cel mai prevalent agent enteropatogen (27,7%).
Prevalena rotavirozei suine a fost de 12%.
Coronaviroza suin a fost diagnosticat la 0,7% din efectiv iar colibaciloza purceilor
determinat de E. coli F5 enteropatogen nu a fost semnalat.
Extensivitatea i intensivitatea infeciei la suinele din judeele Timi i Arad este mai ridicat
la categoria de vrst 29-47 zile.

Subcapitolul trei al primului capitol de cercetri proprii cuprinde date referitoare la

prevalena criptosporidiozei mieilor n asociere cu ali enteropatogeni, determinat prin ELISA pe un
efectiv de 66 de miei n primele trei sptmni de via cu provenien din cinci localiti a patru
judee vestice (Arad, Bihor, Satu-Mare i Timi) ale rii.
n urma investigaiilor prevalena infeciei criptosporidiene la tineretul ovin a fost de 9,09 %.
Prevalena infeciei cu rotavirusuri la tineretul ovin investigat a fost de 7,57 %. Prevalena infeciei
cu E. coli F5 la mieii investigai a fost de 1,51 %.
Nu s-au diagnosticat infecii cu coronavirusuri sau asociaii ntre enteropatogeni.

n ultimul subcapitol sunt trecute n revist date privind determinarea

criptosporidiozei prin ELISA la alte specii de animale.
Au fost investigai 63 de cini cu vrste de pn la 10 ani cu provenien din diferite medii
(urban i rural) ale judeelor: Arad, Bihor, Cara-Severin, Hunedoara i Timi. De la acetia s-au
prelevat fecale diareice care au fost prelucrate prin tehnica ELISA folosind kit-ul (BIO K 346 - Bio-X
Diagnostics, Belgia). Pentru confirmare sau infirmare, fiecare prob examinat ELISA a fost
prelucrat i prin colorare Ziehl-Neelsen modificat de Henricksen. n urma prelucrrii ELISA i Ziehl-
Neelsen, modificat de Henricksen, a celor 63 de probe de fecale de la cini, nu s-au diagnosticat
infecii cu Cryptosporidium.
Acelai rezultat s-a obinut i n cazul investigaiilor efectuate pe un efectiv de 184 de pui
broiler n primele apte sptmni de via din patru localiti ale judeelor Hunedoara, Satu Mare i
Timi. Psrile au fost ntreinute n sistem intensiv (localitile: Satu-Mare, Giarmata i Deva) i
extensiv (Conacul Iosif).

n capitolul 4 sunt menionate date epidemiologice obinute prin investigaii ELISA asupra
parazitismului cu Cryptosporidium spp. la om n partea de vest a Romniei.
Studiul a fost efectuat n perioada ianuarie 2007 - august 2008 pe un lot de 421 de persoane
format din copii i aduli provenind din diferite medii (urban i rural) ale judeelor Arad, Cara-
Severin i Timi. De la fiecare individ s-au recoltat probe de fecale care au fost prelucrate cu ajutorul
kit-ului ELISA BIO-X EASY-DIGEST (BIO K 070 - Bio-X Diagnostics, Belgia) care este un kit de
diagnostic antigenic in vitro a oochisturilor de Cryptosporidium spp.
Rezultatele obinute n urma examinrii unui numr de 421 de probe coprologice, recoltate din
judeele Arad, Cara-Severin i Timi, de la copii i de la aduli, din mediul urban i rural, relev o
prevalen a criptosporidiozei de 4,03%.
Prevalena criptosporidiozei umane pe judeele investigate se prezint astfel: 7,14% n judeul
Arad, 11,1% n judeul Cara-Severin respectiv 3,08% n judeul Timi.
n intervalul de vrst o lun-80 ani, cruia i aparine eantionul de pacieni, criptosporidioza
s-a diagnosticat coprologic la: grupa 0-1 an (4 cazuri); grupa 2-15 ani (7 cazuri); grupa 16-80 ani (6
cazuri).
Din 17 cazuri diagnosticate cu criptosporidioz, apte au prezentat, ca etiologie primar,
infecia HIV.

Al 5-lea capitol ofer informaii despre msurtorile morfometrice asupra oochisturilor de

criptosporidii n preparatul nativ izolate de la viei.
Identificarea oochisturilor de criptosporidii s-a fcut n cinci ferme de vaci de lapte i ntr-o
microferm n perioada iunie 2007 aprilie 2008. Aceste uniti de cretere au provenit din tot attea
localiti ale judeelor Arad, Bihor i Timi. Au fost recoltate probe diareice de la un efectiv de 29 de
viei cu criptosporidioz direct din rect. Punerea n eviden a oochisturilor s-a fcut prin examenul
microscopic al preparatelor native, examinndu-se zece oochisturi de la fiecare animal n parte.
Oochisturile identificate au fost apreciate privind forma, lungimea, limea i indicele de form cu
ajutorul microscopului Motic cu extensie video.
n preparatele native oochisturile de criptosporidii au un aspect caracteristic prin care pot fi
deosebite de alte forme parazitare cu dimensiuni i forme apropiate, sau de ali ageni patogeni.
Aspectul oochisturilor n preparatele native poate reprezenta un criteriu de identificare a lor,
refringena fiind specific. De asemenea, caracteristice sunt punctul negru situat n masa intern i
liniile de sutur, identificabile la foarte multe oochisturi.
n 28 din 29 de probe analizate, pe baza criteriilor morfologice, s-a identificat un parazitism
cu Cryptosporidium parvum.
Pe baza msurtorilor efectuate ntr-o prob a fost gsit specia C. andersoni.

n capitolul 6 sunt trecute n revist cteva observaii asupra modificrilor anatomopatologice

n infecia natural cu Cryptosporidium spp., respectiv identificarea imunohistochimic a acestei
infecii la viei. Studiul include un numr de patru viei n vrst de apte zile, decedai n urma unui
sindrom de diaree profuz i diagnosticai cu infecii cu Cryptosporidium spp. n primele ase ore dup
decesul vieilor s-au prelevat poriuni de intestin din ileon pentru examenul histopatologic. Preparatele
au fost prelucrate prin tehnica colorrii hematoxilin-eozin (H. E.). Adiional, seciunile au fost
colorate imunohistochimic cu anticorpi monoclonali de Cryptosporidum parvum utiliznd chitul
Cryptosporidum parvum (BDI370): sc-57693 (Santa Cruz Biotechnology, INC) conform
instruciunilor din prospect.
La examenul microscopic al ileonului infectat cu Cryptosporidium spp., principalele leziuni
anatomo-patologice au fost: hiperemia vaselor i edemul submucoasei, denudri epiteliale i ulcer,
chistizarea unor glande, infiltraii masive de leucocite polimorfonucleare. La identificarea
imunohistochimic criptosporidiile apar ca nite formaiuni sferice sau ovale de diverse dimensiuni, n
funcie de locul de secionare al lor, nglobate n marginea n perie a enterocitelor.
 De asemenea aceast tehnic de identificare a infeciei naturale cu Cryptosporidium spp. la
viei este una modern i de mare precizie care ofer importante date anatomopatologice despre
puterea patogen a criptosporidiilor.

Capitolul 7 intitulat Caracterizarea unor specii de Cryptosporidium la animale i om prin

tehnici de biologie molecular cuprinde la rndul su alte trei subcapitole n care sunt oferite
informaii despre speciile i subtipurile familiale de Cryptosporidium care paraziteaz la vieii din
prima lun de via i oameni.
Aceste subcapitole sunt:

- Identificarea molecular prin tehnica reaciei polimerazei n lan (PCR) a speciilor de

criptosporidii la tineretul bovin n zona de vest a Romniei;
- Subtipizarea speciei Cryptosporidium parvum de la vieii din vestul Romniei, prin analiza
secvenial a genei gp60;
- Identificarea molecular (PCR) a speciilor de criptosporidii la oameni n zona de vest a
Romniei.

n primul subcapitol se abordeaz un domeniu de mare actualitate cu privire la

caracterizarea molecular (PCR) speciilor de Cryptosporidium la vieii din prima lun de via n
cteva ferme din vestul rii.
Studiul a fost realizat n perioada februarie - mai 2008, pe un numr de 76 de viei cu vrste
cuprinse ntre o zi i 30 de zile. Vieii nenrcai de ras Holstein-Friz au provenit din patru efective
de vaci de lapte (20-50 de viei/efectiv), din patru localiti ale judeelor Bihor, Arad i Timi, cu
antecedente diareice i prezena protozoarului Cryptosporidium spp. n efectiv. Probele de fecale
diareice recoltate au fost examinate prin colorarea Ziehl-Neelsen modificat de Henricksen. Probele
pozitive (n numr de 22 din 76 examinate) au fost prelucrate prin tehnica PCR-RFLP n vederea
determinrii speciilor de Cryptosporidium. Gena int i caracterizat a fost SSU rRNA (18S).
Prin analiza molecular a genei SSU-rRNA (18S) a oochisturilor de Cryptosporidium, de la
vieii din prima lun de via n zona de vest a Romniei, s-a identificat un parazitism cu specia
Cryptosporidium parvum.
Gena SSU-rRNA (18S), inta primar a acestor metode de cercetare, s-a dovedit a fi uor
amplificabil cu o grosime consistent i o strlucire evident a benzilor de migrare, ceea ce indic o
cantitate i o calitate bun a ADN-ului testat.
Parazitismul cu specia C. parvum demonstreaz existena unei specii zoonotice la vieii din
prima lun de via, cu un potenial patogen crescut pentru oameni, mai ales pentru ngrijitori i
medicii veterinari direct implicai n epidemiologia bolii.
Aceste tehnici de biologie molecular n criptosporidioza vieilor au fost efectuate pentru
prima dat n Romnia.

Al doilea subcapitol cuprinde date referitoare la subtipizarea speciei Cryptosporidium

parvum de la vieii din vestul Romniei, prin analiza secvenial a genei gp60. Studiul a fost realizat n
perioada februarie - mai anul 2008, pe un numr de 12 izolate de Cryptosporidium parvum de origine
bovin de la viei din prima lun de via de ras Holstein-Friz i care au provenit din dou efective
de vaci de lapte din dou localiti ale judeelor Bihor i Arad. Gena int i caracterizat a fost gp60.
Secvenarea produsului PCR amplificat a genei gp60 a artat c, cele 12 izolate de C. parvum
de origine bovin din zona de vest a Romniei, aparin unui singur subtip familial IIa.
n cadrul acestui subtip familial, subtipul IIaA15G2R1 a fost ntlnit n proporie de 66,6% din
totalul de 12 probe care au fost supuse secvenrii, fiind considerat subtipul dominant.
Cel de al doilea subtip familial identificat a constituit subtipul IIaA16G1R1 ntr-un procent de
33,3.
Semnalarea subtipului familial IIa la vieii din prima lun de via n partea de vest a
Romniei semnific parazitismul cu un subtip zoonotic cu un potenial crescut de infectare. Aceste
tehnici de biologie molecular n criptosporidioza vieilor au fost efectuate pentru prima dat n
Romnia i aduc contribuii majore la cunoaterea criptosporidiozei i pe plan mondial.

Ultimul subcapitol ofer informaii despre identificarea molecular (PCR) a speciilor
de criptosporidii, la oameni n zona de vest a Romniei. n scopul evidenierii oochisturilor de
criptosporidii fecalele a 107 de persoane au fost examinate prin metoda colorrii Ziehl-Neelsen
modificat de Henricksen. Oochisturile din probele pozitive (n numr de dou din 107 examinate) au
fost caracterizate molecular pe baza analizei genei SSU rRNA (18S) prin tehnica PCR RFLP.
Prin analiza molecular a genei SSU-rRNA (18S) a oochisturilor de Cryptosporidium, izolate
de la oameni din zona de vest a Romniei, s-a identificat un parazitism cu specia Cryptosporidium
parvum.
Parazitismul cu specia C. parvum la oameni demonstreaz existena unei specii zoonotice,
avnd ca posibile surse de infecie rumegtoarele.
Aceste tehnici de biologie molecular n criptosporidioza uman au fost efectuate pentru
prima dat n Romnia.

Capitolul 8 prezint evaluarea eficacitii unor metode de diagnostic n criptosporidioz.

Investigaia a urmrit evaluarea eficacitii a cinci metode de diagnostic uzuale respectiv
imunologice n criptosporidioz. Materiile fecale diareice i nediareice recoltate de la 35 de viei au
fost prelucrate i examinate n vederea evidenierii criptosporidiilor prin urmtoarele metode:
examenul etalatului direct, colorarea Ziehl-Neelsen modificat de Henricksen, testul de detectare
rapid a speciei C. parvum (BIO K 155 -Bio-X Diagnostics, Belgia), imunofluorescen direct i prin
testul ELISA dublu sandwich (BIO K 070 - Bio-X Diagnostics, Belgia). Pe de alt parte scopul acestei
lucrri a fost de a uura alegerea clinicianului sau a medicilor epidemiologi cu referire la aplicarea
metodei de diagnostic n criptosporidioz, n funcie de circumstane i scopul urmrit.
Pentru a caracteriza eficacitatea acestor metode s-a considerat ca metod standard de
identificare a oochisturilor de Cryptosporidium spp. colorarea fecalelor prin tehnica Ziehl-Neelsen
modificat de Henricksen.
S-a ajuns la concluzia c toate cele cinci metode folosite permit identificarea oochisturilor de
Cryptosporidium spp.
Cele mai sensibile metode au fost imunofluorescena direct i testul ELISA (100%), iar cea
mai puin sensibil s-a dovedit a fi metoda etalatului direct (73%). Testul rapid a demonstrat o
sensibilitate mediocr (80%).
Cea mai bun specificitate a fost gsit la testul rapid (95%) iar cea mai slab la testul ELISA
(70%). Metodele etalrii directe i imunofluorescena direct au prezentat o specificitate de 90%.
La metodele Ziehl-Neelsen modificat de Henricksen i examenul etalatului direct pe lam
pentru identificarea parazitului este necesar o oarecare experien, cunoaterea aspectului
oochisturilor, precum i a altor elemente asemntoare ce pot fi gsite n cmpul microscopic.
Pe baza rezultatelor obinute, n cazul unor infecii clinice indicat de aspectul diareic al
fecalelor, recomandm metodele etalatului direct n caz de urgen, respectiv colorarea Ziehl-Neelsen
modificat de Henricksen pentru un diagnostic mai elocvent i sigur.
n cazul prelucrrii unui numr mare de probe ntr-un timp ct mai scurt sau pentru
epidemiosupraveghere recomandm utilizarea testului ELISA. Totodat metoda ELISA poate oferi
date importante despre cazurile asimptomatice cu eliminri de oochisturi.

n capitolul 9 sunt descrise rezultatele testrii eficacitii terapeutice a unor suplimente

nutriionale i medicamente n infecia natural i experimental cu Cryptosporidium spp. la viei.
Acest capitol cuprinde dou subcapitole n care se fac referiri la:

- Testarea eficacitii produsului Diakur PLUS (Boehringer Ingelheim) n infecia natural cu

Cryptosporidium spp. la viei;
- Testarea eficacitii profilactice i terapeutice a produsului Scourban PLUS (Bomac) n
infecia experimental cu Cryptosporidium spp. la viei.

n primul subcapitol s-a urmrit determinarea eficacitii produsului Diakur PLUS

(Boehringer Ingelheim) n infecia natural cu Cryptosporidium spp. la viei. n vederea realizrii
scopului propus au fost inclui n studiu trei efective de viei de ras Holstein-Friz, din trei localiti
ale judeelor Arad i Timi. Din cele trei efective s-au format dou grupuri de viei cu sindrom de
diaree i care au fost tratai pe cale oral timp de apte zile. Animalelor din grupul I (grupul placebo)
n numr de ase li s-a administrat 100 ml de ap de robinet amestecat cu 2 litri de lapte praf de dou
ori/zi. Grupul II de viei, (grupul Diakur) n numr de nou, a beneficiat de un tratament cu 2 litri de
lapte praf amestecat cu aproximativ 100 grame produs Diakur PLUS (Boehringer Ingelheim) praf.
n urma investigaiilor efectuate s-a ajuns la concluzia c produsul Diakur PLUS (Boehringer
Ingelheim) nu are nicio eficacitate asupra eliminrii oochisturilor de Cryptosporidium spp.
n schimb, produsul Diakur PLUS (Boehringer Ingelheim) produce ameliorri clinice evidente
n criptosporidioz prin reducerea numrului de viei excretori de fecale diareice, nsoit de o
nbuntire a strii generale.
n lipsa unui tratament specific, n criptosporidioz, terapia cu o mixtur de substane
energizante, sruri minerale i substane cu aciune antimicrobian este foarte important. Aceast
afirmaie se bazeaz pe scderea procentului de viei excretori de fecale diareice nsoit de o
nbuntire a strii generale la grupul Diakur.

Cel de al doilea subcapitol include rezultatele obinute n urma testrii eficacitii

profilactice i terapeutice a produsului Scourban PLUS (Bomac) n infecia experimental cu
Cryptosporidium spp. la viei.
Studiul a fost efectuat pe un efectiv de 12 viei nou-nscui de rase Holstein-Friz care au fost
mprii randomic i n mod egal n trei grupuri diferite. Primul grup (grupul vieilor infectai i
netratai) a constituit grupul martor. Vieii din grupul II (grupul vieilor infectai i tratai preventiv) au
fost tratai preventiv cu ase ore nainte de inocularea de oochisturi de Cryptosporidium spp. cu 0,5
ml/kg produs i nc timp de apte zile dup acesta de dou ori pe zi (dimineaa i seara). Al III-lea
grup a fost constituit din viei infectai i tratai terapeutic cu 1ml/kg Scourban Plus PLUS (Bomac)
timp de apte zile dup apariia oochisturilor n fecale. Vieii au fost infectai experimental cu 106
oochisturi de Cryptosporidium spp. suspendate n 20 ml de ap distilat steril. Criteriile de evaluare a
eficacitii tratamentului au fost: eliminarea de oochisturi, perioada prepatent, perioada patent i
prezena diareei pe timpul tratamentului.
Rezultatul tratamentului a artat c administrarea produsului Scourban Plus (Bomac), cu
scop preventiv, n doz de 0,5 ml/kg, reduce semnificativ excreia numrului de oochisturi de
Cryptosporidium spp. ct i perioada prepatent i patent, comparativ cu lotul martor infectat dar
netratat.
Administrarea terapeutic a produsului Scourban Plus (Bomac) la vieii excretori de
oochisturi de Cryptosporidium spp. a condus la reduceri modeste, ns demonstrabile, a numrului de
parazii n comparaie cu lotul control.
Activitatea anticriptosporidian a produsului Scourban Plus (Bomac), demonstrat n acest
studiu, sugereaz c acest medicament poate fi utilizat cu succes n controlul criptosporidiozei vieilor
nou-nscui att preventiv ct i terapeutic.

n capitolul 10 sunt redate cele 25 de concluzii generale i recomandri care au reieit din
aceast tez. Acestea sunt:

 Lucrarea de fa este primul screening epidemiologic prin ELISA n partea de vest a Romniei
asupra evoluiei criptosporidiozei n asociere cu ali enteropatogeni la viei, suine i miei.

 Din cele cinci specii de animale (bovine, suine, ovine, canide i psri) luate n ancheta
epidemiologic, n partea de vest a Romniei (judeele: Arad, Bihor, Cara-Severin,
Hunedoara, Satu Mare i Timi), infecii naturale cu Cryptosporidium spp. au fost identificate
la: bovine, suine i ovine.

 Diagnosticul criptosporidiozei mieilor este prima semnalare n partea de vest a rii.

 Investigaiile epidemiologice efectuate la tineretul bovin n partea de vest a Romniei au scos

n eviden faptul c, Cryptosporidium spp. a fost principalul enteropatogen dintre cei patru
investigai (rotavirus, coronavirus, E. coli F5).
 Screeningul epidemiologic efectuat prin tehnica ELISA dublu-sandwich la tineretul bovin, n
primele ase luni de via, n patru judee vestice ale Romniei a scos n eviden o prevalen
de 41,6% pentru criptosporidioz, 9% pentru coronaviroz, 15,9% pentru rotaviroz respectiv
0,9% pentru infecii cu E. coli F5 enterotoxigen. Un procent de 32,6 din fecalele analizate au
fost negative pentru cei patru enteropatogeni.

 Prevalena criptosporidiozei n judeele investigate a fost de: 56,9% n judeul Arad, 31,9% n
judeul Bihor, 28,6% n judeul Cara-Severin, respectiv 42,7% n judeul Timi.

 Rotaviroza bovin a fost semnalat n toate cele patru judee investigate, avnd o prevalen de
14,6% n judeul Arad, 20,9% n judeul Bihor, 11,4% n judeul Cara-Severin i 15,4% n
judeul Timi.

 Coronaviroza enteric bovin s-a regsit n trei din patru judee cu urmtoarele prevalene:
12,3% n judeul Arad, 7,2% n judeul Bihor, respectiv 9,1% n judeul Timi.

 Infecii cu E. coli F5 au fost semnalate doar n judeul Timi ntr-un procent de 3,6.

 La taurinele investigate n cele patru judee vestice ale rii, extensivitatea i intensivitatea
infeciei cu Cryptosporidium spp. a fost mai ridicat la categoria de 8-14 zile. n schimb,
categoria de vrst cuprins ntre 15-21 de zile s-a dovedit a fi mai receptiv pentru infecia cu
rotavirusuri i coronavirusuri.

 Investigaiile epidemiologice efectuate la suinele din dou judee vestice ale Romniei au scos
n eviden o prevalen de 27,7% pentru criptosporidioz, 12% pentru rotaviroz i 0,7%
pentru coronaviroz. Colibaciloza purceilor determinat de E. coli F5 enteropatogen nu a fost
semnalat.

 Extensivitatea i intensivitatea infeciei la suinele din judeele investigate (Timi i Arad) este
mai ridicat la categoria de vrst 29-47 zile.

 n fermele i microfermele de ovine din patru judee vestice, mieii examinai au avut o
prevalen de 9,09% pentru criptosporidioz, 7,8% pentru rotaviroz i 1,51% pentru E. coli
F5 enterotoxigen. Nu s-au diagnosticat infecii cu coronavirusuri sau asociaii ntre
enteropatogeni.

 La cini, cu vrste de pn la 10 ani, i puii broiler n primele apte sptmni de via, nu s-

au diagnosticat infecii cu Cryptosporidium spp.

 Rezultatele investigaiilor epidemiologice prin tehnica ELISA, obinute n urma examinrii

unui numr de 421 de probe coprologice de origine uman, cu provenien din trei judee
vestice ale rii, relev o prevalen a criptosporidiozei de 4,03%.

 Prevalena criptosporidiozei umane pe judeele investigate se prezint astfel: 7,14% n judeul

Arad, 11,1% n judeul Cara-Severin respectiv 3,08% n judeul Timi. Din 17 cazuri
diagnosticate cu criptosporidioz, apte au prezentat, ca etiologie primar, infecia HIV.
Aceast monitorizare a criptosporidiozei umane n vestul Romniei este primul studiu mai
amplu efectuat n aceast zon.

 n urma efecturii de msurtori asupra oochisturilor de Cryptosporidium spp. de la viei, pe

baza criteriilor morfologice, s-a identificat un parazitism cu Cryptosporidium parvum n
proporie de 96,6%. La un viel de ase luni s-a semnalat un parazitism cu specia C. andersoni.

 La examenul microscopic al ileonului infectat cu Cryptosporidium spp. principalele leziuni

anatomo-patologice au fost: hiperemia vaselor i edemul submucoasei, denudri epiteliale i
 ulcer, chistizarea unor glande i infiltraii masive de leucocite polimorfonucleare. Tehnica
imunohistochimic de identificare a infeciei cu Cryptosporidium spp. relev faptul c,
criptosporidiile apar ca nite formaiuni sferice sau ovale de diverse dimensiuni, n funcie de
locul de secionare al lor, nglobate n marginea n perie a enterocitelor.

 Prin analiza molecular a genei SSU-rRNA (18S) a oochisturilor de Cryptosporidium, de la

vieii din prima lun de via n zona de vest a Romniei, s-a identificat un parazitism cu
specia Cryptosporidium parvum. Prin aceast tehnic de biologie molecular efectuat n
premier naional s-a demonstrat existena unei specii zoonotice i cu un potenial patogen
crescut pentru oameni.

 Secvenarea produsului PCR amplificat a genei gp60 a artat c cele 12 izolate de

Cryptosporidium parvum de origine bovin din zona de vest a Romniei, aparin unui singur
subtip familial IIa. n cadrul acestui subtip familial, subtipul IIaA15G2R1 a fost ntlnit n
proporiede 66,6% iar subtipul IIaA16G1R1 ntr-un procent de 33,3. Aplicarea acestor tehnici
de biologie molecular de a doua generaie aduc contribuii majore n cunoaterea i
implementarea unor tehnici de epidemiologie molecular n ara noastr.

 n urma analizei genei SSU - rRNA (18S) a oochisturilor de Cryptosporidium, izolate de la

oameni din zona de vest a Romniei, tehnica PCR RFLP a identificat un parazitism cu
specia zoonotic Cryptosporidium parvum.

 Metodele de diagnostic: Ziehl-Neelsen modificat de Henricksen, examenul direct al

frotiurilor de fecale, imunofluorescena direct, testul imunoenzimatic rapid pe substrat de
nitroceluloz i testul ELISA dublu - sandwich permit identificarea oochisturilor de
Cryptosporidium spp.

 Evaluarea eficacitii a cinci metode de diagnostic a demonstrat o sensibilitate excelent

pentru imunofluorescena direct i testul ELISA (100%) i una mediocr pentru testul rapid
(80%) i etalatul direct (73%). Cea mai bun specificitate a fost gsit la testul rapid (95%) iar
cea mai slab la testul ELISA (70%). Metodele etalrii directe i imunofluorescena direct au
prezentat o specificitate de 90%.

 Pe baza rezultatelor obinute, n cazul unor infecii clinice indicat de aspectul diareic al
fecalelor, recomandm metodele etalatului direct n caz de urgen respectiv, colorarea Ziehl-
Neelsen modificat de Henricksen pentru un diagnostic mai elocvent i sigur. n cazul
prelucrrii unui numr mare de probe ntr-un timp ct mai scurt sau pentru
epidemiosupraveghere recomandm utilizarea testului ELISA.

 Rezultatele testrii eficacitii produsului Diakur PLUS (Boehringer Ingelheim) n

criptosporidioza vieilor au artat c acest produs nu are nicio eficacitate asupra eliminrii
oochisturilor de Cryptosporidium spp. n schimb, produce ameliorri clinice evidente prin
reducerea numrului de viei excretori de fecale diareice, nsoit de o nbuntire a strii
generale.

 Pe baza rezultatelor obinute recomandm administrarea produsului Diakur PLUS (Boehringer

Ingelheim) n tratamentul simptomatic al criptosporidiozei.

 Administrarea produsului Scourban Plus (Bomac), cu scop preventiv n doz de 0,5 ml/kg,
reduce semnificativ excreia numrului de oochisturi de Cryptosporidium spp. ct i perioada
prepatent i patent, comparativ cu lotul martor infectat dar netratat. Folosirea acestui produs
n scop terapeutic la vieii excretori de oochisturi de Cryptosporidium spp. a condus la
reduceri modeste, ns demonstrabile, a numrului de parazii n comparaie cu lotul control.
  Rezultatele obinute n urma administrrii produsului Scourban Plus (Bomac) recomand
acest medicament n tratamentul profilactic i terapeutic al criptosporidiozei.

Prezenta tez se sprijin pe 570 de titluri bibliografice din care titluri web 16 i respectiv 12
titluri de lucrri originale publicate din topicul tezei.