Casos a estudiar:

1. El director del curso Organismos Transgnicos pidi a sus

estudiantes que hicieran el siguiente anlisis:

I. Piensen en una planta como una fbrica que produce

protenas y almidn. En el patrimonio gentico de la planta
(genoma) se encuentra el cdigo para la produccin de
estas molculas.

Manipulacin gentica de las plantas: cmo se hace

Para transferir ADN a una planta se utilizan diversos vectores, que sirven de
vehculo transmisor, burlando los mecanismos celulares que normalmente
impediran la incorporacin de una informacin gentica extraa. Los vectores
ms utilizados son plsmidos bacterianos, pequeas molculas circulares de
ADN presentes en muchas bacterias, que tienen gran facilidad para migrar y
recombinarse y que las bacterias utilizan para intercambiar informacin
gentica. Tambin se utilizan virus mutilados (en los que se ha eliminado la
informacin gentica potencialmente daina), que tienen una gran capacidad
invasora y pueden incorporar su propia informacin gentica al ADN de la
planta.

El gen extrao que interesa transferir se inserta en el virus mutilado o en

plsmidos, generalmente de la bacteria Agrobacterium tumefaciens, que en la
Naturaleza coloniza una amplia gama de plantas y transfiere su propio ADN a
las clulas vegetales husped, formando tumores que conocemos con el
nombre de agallas. A continuacin se infecta un cultivo de clulas vegetales
con el virus recombinante o con cepas mutiladas de A. tumefaciens portadoras
del plsmido con el transgen. Tambin se puede introducir el ADN extrao en
las clulas mediante microinyeccin, mediante electroporosis o mediante el
bombardeo con microproyectiles recubiertos de plsmidos recombinantes.

En todos los casos, el ADN extrao transferido ha de ir acompaado de una

secuencia gentica promotora que active su expresin en la clula husped.
El promotor es el interruptor de encendido y apagado que controla cundo y
dnde se expresar el gen en la planta. Los promotores ms utilizados en
ingeniera gentica proceden de virus y son promotores muy potentes, dado
que su funcin es activar el gen extrao, que ha de burlar los mecanismos de
regulacin de la clula husped. Hasta la fecha la mayora de los promotores
son constitutivos, que activan el gen durante todo el ciclo biolgico de la planta
y en la mayora de los tejidos.

Adems de la informacin gentica que interesa transferir a la planta, y dado

que las tecnologas de ingeniera gentica tienen un amplio margen de error,
para poder seleccionar las clulas vegetales transformadas se inserta en el
vector un gen marcador. En la mayora de las variedades transgnicas
desarrolladas hasta la fecha, el marcador utilizado ha sido un gen de
resistencia a los antibiticos, que hace que determinadas bacterias sean
resistentes a la accin de los antibiticos. La incorporacin de este gen
marcador permite eliminar las clulas que no han adquirido el ADN extrao
mediante el sencillo procedimiento de tratar con el antibitico el cultivo celular
sometido al proceso de manipulacin gentica. Se supone que todas las clulas
que sobreviven a este tratamiento han incorporado la informacin gentica
deseada.

Una vez seleccionadas, las clulas transformadas se desarrollan en un cultivo

in vitro para regenerar plantas completas, que en teora habrn incorporado el
gen extrao y lo llevarn en todas sus clulas.

Sin embargo, ninguno de estos procedimientos es capaz en la prctica de

controlar con exactitud en qu parte del genoma de la clula husped se
inserta el gen extrao, o el nmero de genes insertados, o si la insercin ser
estable. Esta incertidumbre es an mayor en el caso de transformacin
mediante la tcnica de bombardeo de microproyectiles, que pueden recoger
otros materiales genticos en el trayecto hacia el ncleo de la clula,
incorporndolo al genoma. En este caso es habitual que ocurran
reordenaciones del vector de transformacin y del propio gen extrao
insertado, y que se inserten copias mltiples y fragmentos de estas copias al
azar en todo el genoma. Si un fragmento gentico se inserta en medio de una
secuencia gentica funcional, puede alterar la produccin de protenas y
perturbar el normal desarrollo y comportamiento de la planta. No es de
extraar, por tanto, que el proceso de manipulacin de los cultivos pueda dar
lugar a efectos indeseados e imprevistos, a veces imperceptibles o que se
manifiestan nicamente en situaciones de stress . De hecho, ms del 99% de
las plantas transformadas mediante ingeniera gentica han de ser eliminadas
dado que al desarrollarse aparecen rasgos aberrantes, no intencionados ni
deseados, segn reconocen las propias compaas biotecnolgicas. La ltima
fase del desarrollo de plantas transgnicas, incluye necesariamente un proceso
de seleccin de las plantas regeneradas a partir de las clulas transformadas,
para eliminar las que exhiben caracteres anmalos o alteraciones no buscadas.

[1] Kiran SK, Pooja BM, Trevor TA. 2005. Genetic transformation
technology: status and problems. In Vitro Cellular and Development
Biology-Plant, March-April 2005, vol. 41, no. 2, pp. 102-112.

[2] European Communities. 2004. Measures Affecting the Approval and

Marketing of Biotech Products. (DS291, DS292, DS293). First Written
Submission. 17 May 2004. pp. 9-15 y referencia 17.Royal Society of
Canada. 2001. Elements of Precaution. Recommendations for the
Regulation of Food Biotechnology in Canada. An Expert Panel Report
on the Future of Food BiotechnologyVentana nueva. Maraketich I,
Svitashev SD, y Somers DA. 2003. Complete sequence analysis of
transgene loci from plants transformed via microprojectile
bombardment. Plant Molecular Biology 2003, 52, 421-32. Para una
descripcin del proceso de transformacin ver, p.ej.: J.F.Carrasco.
Plantas TransgnicasVentana nueva. Butllet Centre dEstudis de la
Natura del Barcelons Nord. IX (3); Sta. Coloma de Gramenet, 1999.

II. Supongan que ustedes quieren que esta planta sea inmune
a los ataques de insectos, pero en el genoma no existe la
informacin para esto. Una salida es consultar los genomas
de otras especies. La bacteria Bacillus thuringiensis (Bt)
contiene un gen que lleva a la produccin de una enzima
capaz de digerir el intestino de los insectos. La ingeniera
gentica tiene herramientas bioqumicas para acceder a
estas secuencias.

Bacillus thuringiensis es una bacteria que vive en el suelo Gram-positiva,

comnmente usado como un pesticida biolgico, como alternativa, la
toxina Cry puede ser extrada y utilizada como un pesticida. B.
thuringiensis tambin se produce de forma natural en el intestino de las
larvas de diversos tipos de polillas y mariposas, as como en superficies
de las hojas, los ambientes acuticos, las heces de animales, ambientes
ricos en insectos, molinos harineros y las instalaciones de
almacenamiento de granos.

Durante la esporulacin, muchas cepas de Bt producen las protenas de

cristal, llamado D-endotoxinas, que tienen accin insecticida. Esto ha
llevado a su uso como insecticidas, y ms recientemente a los cultivos
modificados genticamente con genes de Bt. Muchas cepas de Bt cristal
que producen, sin embargo, no tienen propiedades insecticidas.

Bacillus thuringiensis serovar israelensis, una cepa de B. thuringiensis se

utiliza ampliamente como un larvicida contra las larvas de mosquitos, en
el que tambin se considera un mtodo ecolgico de control de
mosquitos.

B. thuringiensis fue descubierto en 1901 por el bilogo japons Ishiwata

Shigetane. En 1911, B. thuringiensis fue redescubierta en Alemania por
Ernst Berliner, quien aisl como la causa de una enfermedad llamada
Schlaffsucht de orugas de la polilla de harina. En 1976, Robert A.
Zakharyan inform de la presencia de un plsmido en una cepa de B.
thuringiensis y sugiri la implicacin del plsmido en endospora y la
formacin de cristales. B. thuringiensis es estrechamente relacionada
con B. cereus, una bacteria del suelo, y B. anthracis, la causa del
ntrax: los tres organismos difieren principalmente en sus plsmidos. Al
igual que otros miembros del gnero, los tres son aerobios capaces de
producir endosporas. Al esporulacin, B. thuringiensis forma cristales de
d-endotoxinas insecticidas proteicos, que son codificadas por genes cry.
En la mayora de las cepas de B. thuringiensis, los genes cry se
encuentran en un plsmido.

Bacillus thuringiensis, Descubrimiento y mecanismo de accin ...

lasaludfamiliar.com/caja-de-cerebro/conocimiento-1415.html
Bacillus thuringiensis es una bacteria que vive en el suelo Gram-
positiva, ... El uso de genes de Bt en la ingeniera gentica de las
plantas para el control de plagas.
 III. Ahora, es preciso transferir este gen para el genoma de la
planta. La biotecnologa ya encontr bacterias o virus
capaces de hacer esta transferencia, es decir, incluir el gen
en el genoma de la planta.

Las plantas representan un enorme potencial para las aplicaciones de la ingeniera

gentica. Presentan como ventaja que tienen un alto poder regenerativo, en
muchos casos una sola clula puede regenerar la planta completa, y pueden
expresar genes de mamferos, por lo que se pueden utilizar como biorreactores
para producir protenas, carbohidratos o lpidos de origen animal.

La biotecnologa de plantas abarca campos muy variados; se comercializan

plantas resistentes a enfermedades o plagas, reducindose la necesidad del uso
de pesticidas agroqumicos; tambin se han diseado plantas resistentes a
sequas y temperaturas extremas, o aptas para crecer en suelos cidos y/o
salinos, o resistentes a herbicidas, lo que permite eliminar malezas sin afectar el
cultivo; adems, se ha diseado variantes con una capacidad mayor para fijar
nitrgeno, lo que reduce el uso de fertilizantes. Una de las aplicaciones ms
demandada de la biotecnologa vegetal es la mejora de la calidad nutricional,
generando alimentos enriquecidos en aminocidos, vitaminas, minerales o
determinados cidos grasos. Por ltimo, cabe destacar las modificaciones
realizadas para obtener cosechas ms tempranas regulando la velocidad de
maduracin de frutos; esto permite un proceso de postcosecha y transporte de
ms larga duracin sin que lleguen los alimentos al consumidor en estados
avanzados de madurez.

Las cosechas resistentes a plagas ha sido una de las aplicaciones ms exitosas

de la ingeniera gentica en la agricultura, ya que reducen considerablemente los
riesgos y los costes derivados de la utilizacin de pesticidas. Adems, esta
tecnologa ofrece proteccin individual a la planta transgnica, biodegradabilidad
del compuesto e independencia de las condiciones climticas en su efectividad.

Hoy en da se conocen ms de 40 genes, muchos de ellos de origen bacteriano,

que confieren resistencia a insectos. Uno de los ms utilizados es la toxina
producida por Bacillus thuringiensis; cuando esta bacteria esporula en la superficie
de la hoja, produce unos cristales que se convierten en pptidos txicos al ser
atacados por las proteasas del tracto intestinal de las larvas y orugas; las orugas
que ingieren la toxina quedan paralizadas.
La toxina Bt en plantas transgnicas debe expresarse a niveles elevados para
proporcionar la proteccin adecuada contra las plagas. La transformacin del gen
Bt en el genoma nuclear proporciona bajos niveles de expresin, mientras que la
introduccin en el genoma de los cloroplastos proporciona niveles altos. Aunque la
transfeccin en el genoma de los cloroplastos es ms complicada, se ha
conseguido llevar a cabo. Adems, presenta la ventaja de que los plastidios se
heredan por va materna; as pues, el trasgen del polen de los cultivos
transgnicos no se dispersar a plantas no transgnicas, es decir, no se producir
lo que denomina contaminacin gentica de los cultivos transgnicos a los
orgnicos. La especificidad de la toxina Bt contra especies concretas de insectos
presenta la ventaja de que los efectos en otros organismos del ecosistema son
mnimos.

La produccin de plantas transgnicas debe cumplir unos requisitos legales

nacionales que evala, entre otras cosas, la seguridad de los alimentos para el
consumo.

Muchos pases desarrollados se han opuesto a esta tecnologa alegando el

rechazo a la manipulacin gentica; otros, sin embargo, alegan motivos
econmicos, ya que el esfuerzo econmico que se requiere para adquirir estas
plantas transgnicas no se ve recompensado.

En los pases desarrollados se mira ms el aspecto econmico que las ventajas

que puedan ofrecer estas plantas transgnicas en el medio ambiente. Para que
esta tecnologa pueda continuar con su desarrollo, se necesitara un cambio de
actitud en el gobierno del pas, en las empresas que lo mantienen
econmicamente y en la poblacin.

Izquierdo M (2001). Ingeniera Gentica y transferencia gnica. Ed.

Pirmide. Madrid

La granja del doctor Frankenstein I. Video-documental.

http://documentalesatonline.blogspot.com/2008/02/la-granja-del-
drfrankenstein-1-y-22007.html

Gatehouse J. A. (2008) Biotechnological Prospects for Engineering

Insect-Resistant Plants. Plant Psichology 146: 881-887
 IV. Cuando una clula meristemtica sea genticamente
modificada, ella podr transformarse en una planta adulta
que producir la toxina Bt. Existen tcnicas moleculares
que determinan si el gen que produce la toxina Bt se ha
incorporado. El insecto que se alimente de ella morir,
pues la toxina digiere el intestino de estos animales.

Las variedades protegidas contra plagas figuran entre los primeros cultivos
modificados genticamente que se obtuvieron para reducir los costos de
produccin de los agricultores. Se han promovido OMG resistentes a insectos
como forma de combatir ciertas plagas reduciendo a la vez la aplicacin de
insecticidas sintticos convencionales. Durante ms de 50 aos, las formulaciones
de la bacteria Bacillus thuringiensis (Bt), que produce toxinas, se han aplicado
mediante pulverizacin, del mismo modo que los insecticidas agrcolas
convencionales, para combatir los insectos que se alimentan de las hojas.
Estudios sobre la inocuidad de Bt para los seres humanos no han revelado efectos
perjudiciales para la salud.

www.fao.org/docrep/003/X9602S/x9602s05.htm

Dentro del grupo de enemigos naturales, Bacillusthuringiensis (Bt), una bacteria

gram positiva, de la familia Bacillaceae, es tal vez el mejor candidato interno para
el manejo de plagas y vectores de enfermedad. En la actualidad esta especie se
agrupa de acuerdo a suantgeno flagelar en 43 serotipos, distribuidos en 34
subespecies. Esta bacteria se caracteriza fundamentalmente por su habilidad de
producir inclusiones cristalinas de manera simultnea a la produccin de esporas.
Estas inclusiones cristalinas contienen potentes toxinas, que son altamente
especficas para larvas de los rdenes Lepidptera, Coleptera y Dptera (Aronson
et al., 1986; Whitheley y Schnepf, 1986).

Las toxinas de esta bacteria entomopatognica son activadas en el ambiente

alcalino del intestino medio de las larvas de las especies susceptibles, liberando
una o ms protenas insecticidas, tambin llamadas deltaendotoxinas que varan
en su peso molecular entre 27 y 140 kDa. La mayora de las toxinas son
producidas como protoxinas y son proteolticamente convertidas en prolipptidos
ms pequeos.
Histopatologa:

La histopaloga de la accin de la delta-endotoxina de Bt ha sido ampliamente

estudiada de manera principal en Lepidptera. En sntesis, estas investigaciones
(revisadas en detalle por Luthy y Ebersold, 1981; y Gill y col., 1992) indican que de
pronto.

Distribucin:

Aunque en la mayora de los reportes de literatura cientfica se cita a esta bacteria

como un habitante normal del suelo, recientemente se ha reportado como
habitante normal del follaje de las plantas (Smith y Couche, 1991; Karamanlidou et
al., 1991), y a partir de muestras de cereales empleados en la preparacin de
alimentos para animales (Meadows et al., 1992). Nuestro grupo de investigacin,
recientemente lo ha encontrado como habitante normal de los criaderos de las
larvas de mosquito y lo ha aislado a partir de muestras de suelo y de agua
(Gmez, C.L, 1991; Orduz y col., 1992).

FACTORES QUE DETERMINAN ESPECIFICIDAD: Uno de los aspectos ms

interesantes de Bt corresponde a los factores que determinan la alta especificidad
de esta delta-endotoxina. Siendo los factores, tal vez, ms importantes a) las
diferencias en el intestino medio de las larvas que afectan la
solubilizacin/activacin de la protoxina, y b) la presencia de sitios especficos de
unin (receptores) en el epitelio intestinal de los diferentes insectos.

DESARROLLO DE RESISTENCIA: A pesar del amplio uso de Bt durante los

ltimos 20 aos, no se han reportado casos de resistencia en el campo hacia las
toxinas producidas por este insecticida microbial, posiblemente debido a la baja
persistencia de este insecticida en el ambiente. Esta situacin podra cambiar
cuando se empiece a utilizar plantas transgnicas resistentes a los ataques de las
plagas; pues la presencia de la(s) toxina(s) de manera permanente en el ambiente
podra ejercer una presin de seleccin muy importante sobre las poblaciones de
insectos, permitiendo una alta posibilidad de desarrollo de resistencia por parte de
los insectos plaga.
 Adang, M.J., Staver, M.J., Rocheleau, T.A., Leigthon, J., Barker, R.F., and D.V.
Thompson. Characterization of fulllength and truncated plasmid clones of
the crystal protein of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-73 and their
toxicity to Manduca sexta. Gene 36: 289-300.

American Medial Association, Council of Scientific Affairs, 1991.

Biotechnology and the American agriculture. JAMA 265: 1429-1436.

V. Segn los biotecnlogos, la toxina Bt es inofensiva a los

seres humanos.

Hace mucho tiempo que los voceros de la industria argumentan que la toxina Bt,
procedente de una bacteria del suelo conocido como Bacillus thuringiensis, es
inofensiva para los seres humanos, que la protena se descompone en el intestino
humano. Pero la presencia de esta toxina en la sangre humana muestra que esto
no sucede.
Esta toxina, un pesticida que se convierte en sistmica, se integra a determinados
organismos genticamente modificados para repeler las plagas. El maz Bt, por
ejemplo, fue diseado en realidad para que la planta pueda producir la toxina
directamente en los ncleos de todos los tejidos para su posterior consumo por los
animales y los seres humanos.
Tambin se ha detectado la toxina en la sangre fetal, lo que implica que podra
pasar a la siguiente generacin. El trabajo de investigacin ha sido revisado por
expertos y aceptado para su publicacin en la revista de Toxicologa Reproductiva.
www.ecoportal.net/Eco-Noticias/La_toxina_Bt_un...