EL NUCLOLO

En 1781 Fontana descubri una formacin dentro del ncleo que correspondera al
nuclolo.

En 1838 Schleiden y Schwann observaron esta formacin en diversos tipos

celulares, principalmente vegetales, concluyendo que el nuclolo originaba al ncleo.

Cajal utilizando tincin con plata observ el nuclolo como un conjunto de esferas
con zonas claras y oscuras.

En 1950 Stuble y Sotelo observan, al microscopio electrnico, el nuclolo como un

ovillo filamentoso (nucleolonema) entre los que quedan espacios claros (el
nucleoloplasma).

Con el perfeccionamiento tcnico de la microscopia electrnica la ultraestructura del

nuclolo ha quedado establecida distinguindose lo siguientes componentes:

1. Parte amorfa: Corresponde a los espacios de escasa densidad a los electrones

que forman cavidades interconectadas en la parte densa, contiene grnulos de
ADN y equivale al nucleoloplasma.

2. Parte densa: Corresponde a las zonas con una alta y variable densidad a los
electrones y equivale al nucleolonema. En esta se distinguen 3 partes:

a) Parte granular: Formada por agrupaciones de grnulos de unos 25 nm de

dimetro que contienen ribonucleoprotenas.
b) Parte fibrilar: Ms densa que la anterior; constituida por fibras de unos 8-10
nm que contienen ribonucleoprotenas.
c) Centro fibrilar: De densidad inferior a la parte granular y fibrilar. En algunos
nuclolos es muy evidente pudiendo haber varios centros fibrilares. Contiene
finas fibrillas de 7-9 nm compuestas de ADN y algo de ARN. Se considera que
estos centros corresponden a los organizadores nucleolares en fase activa de
transcripcin.

En ovocitos y espermatocitos de muchas especies, durante la profase de la primera

divisin meitica, las partes fibrilar y granular forman estructuras separadas;
fenmeno conocido como segregacin nucleolar. El tratamiento con ClK 1M y
centrifugacin permite aislar y estudiar cada una de estas partes por separado.

Los ovocitos de muchas especies suelen mostrar numerosos nuclolos de gran

tamao de hasta 12 de dimetro.

El nuclolo contiene bsicamente ARN (10-30%) y mayoritariamente protenas

cidas del tipo fosfoprotenas.

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La tincin con plata del nuclolo se debe a una protena denominada nucleolina que
slo se une a transcriptos de ARNr. Otras protenas son las snRNP
(ribonucleoprotenas pequeas nucleolares) que intervienen en la maduracin del
ARNr y ayudan en la construccin del ribosoma.

Existe algo de ADN (1 3%) que corresponde al centro fibrilar. Tambin se

encuentran las enzimas necesarias para la sntesis del ARNr y su procesamiento.

SNTESIS DE RIBOSOMAS

Desde un inicio se ha relacionado al nuclolo con la sntesis de protenas por los

siguientes hechos:

Las clulas que fabrican muchas protenas como las embrionarias, secretoras y
tumorales, poseen varios nuclolos prominentes.
Embriones del sapo africano Xenopus laevis debido a un defecto gentico no
poseen nuclolo y mueren en el estado de gstrula que es el momento en que el
embrin necesita de una activa sntesis proteica. Estos embriones anormales
tenan los ribosomas provenientes de la madre (ovocito) pero durante la
gastrulacin deben iniciar la sntesis de nuevos ribosomas para hacer frente a los
requerimientos de protenas pero estos embriones son incapaces de fabricar
nuevos ribosomas por carecer de nuclolos. La falta de nuclolo se debe a la
ausencia del ADNr que transcribe el ARNr es decir; falta el organizador
nucleolar. En embriones normales, el ARNr se hbridiza con el ADN del ncleo;
especficamente con el organizador nucleolar, en cambio en los embriones sin
nuclolo no se produce la hibridacin.

El nuclolo es una estructura temporal y es la expresin morfolgica de la

transcripcin del organizador nucleolar (ADNr) para formar ARNr. Su presencia,
nmero y actividad est relacionada a la necesidad de ribosomas en la clula y por lo
tanto a la necesidad de sntesis de protenas.

Durante la mitosis el nuclolo desaparece en prometafase. Durante la telofase los

organizadores nucleolares empiezan a transcribir ARNr formando muchos nuclolos
pequeos (nuclolos primarios) que se van fusionando para formar uno o varios
nuclolos prominentes.

TRANSCRIPCIN DEL ADNr EN EL NUCLOLO

En el nuclolo la mayora del ARN es de 45S en la parte fibrilar y 32S en la parte

granular.

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Los ARNr de la sub unidad mayor del ribosoma se localizan en menor cantidad en
la parte fibrilar y no se encuentra ARNr de la sub unidad menor dentro del nuclolo.
Esto indica que los ARNr son sintetizados a partir de un ARN precursor que por
maduracin y empalme da lugar a los diferentes ARNr.

La unidad de transcripcin del ARN precursor es un gen que corresponde al

organizador nucleolar y que existe en mltiples copias. Cada unidad de transcripcin
mide 7-8 de longitud y consta de un segmento que no transcribe de 3-4 y de un
segmento que s transcribe de 4.5 al cual se asocia la ARN polimerasa formando
unos abultamientos de los cuales parte una cadena de ARN asociada a protenas.
Este ARN se dispone perpendicularmente a la cadena de ADN y su longitud va
aumentando conforme la ARN polimerasa llega al final del gen constituyendo el ARN
precursor de 45S.

Al finalizar un organizador nucleolar comienza otro copia del mismo gen pudiendo
existir hasta 800 copias del gen y sobre cada una de ellas hay unas 100 molculas
de ARN polimerasa; de tal forma que un determinado momento se puede estar
formando hasta 80,000 molculas idnticas del ARN preribosmico o precursor 45S.
Este ARN a medida que se va formando se va plegando y unindose a protenas.

La multiplicidad de copias del organizador nucleolar responde a la necesidad de

sintetizar ribosomas en poco tiempo.

El organizador nucleolar puede adems fabricar mltiples copias de s mismo cuando

el slo no se basta para producir el suficiente ARNr. En ovocitos el mecanismo para
fabricar estas copias se denomina amplificacin gnica.

Lo ms probable es que no sea el organizador nucleolar sino sus copias las que se
transcriben evitando as las posibilidades de deterioro del organizador nucleolar.
Para algunos autores estas copias constituyen el centro o centros fibrilares
observados en el nuclolo.

El organizador nucleolar puede fragmentarse y dar lugar a nuclolos pequeos lo

que confirma su estructura repetitiva. Un nuclolo puede tener 3 4 corazones
nucleolares (grupos de copias del organizador nucleolar) que transcriben.

TRANSFORMACIN DEL ARN PRECURSOR EN LOS ARN RIBOSMICOS

Todos los ARNr originados en el nuclolo provienen del transcrito primario 45S (ARN
preribosmico o precursor) que sufre un procesamiento.

El ARN 45S se transcribe en el centro fibrilar donde forma la fibrillas

ribonucleoprotecas que constituyen la parte fibrilar del nuclolo.

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Este ARN 45S se asocia a diversas protenas como la nucleolina y las snRNP
formando partculas de 80S (las protenas son importadoras del citoplasma donde se
encuentra el ARNr 5S cuyo origen no es nucleolar.

La partcula 80S permanece unos 15 minutos en la parte fibrilar donde sufre

metilacin activa en la ribosas, prdida de bases no metiladas y ruptura de la hebra
para dar lugar a los otros ARNr.

1) El ARN 45S pierde parte de la cadena y se transforma en ARN 41S; parte del
RNA 41S se transforma en ARN 20S y finalmente en ARN 18S. Este ARN 18S se
asocia con 33 diferentes protenas procedentes del citoplasma formando la
partcula RNP 40S que constituye la sub unidad menor del ribosoma.

2) La otra parte del ARN 41S se transforma en ARN 32S que permanece 40
minutos en la parte granular del nuclolo formando las partculas RNP de 65S.
Esta partcula se transforma en un ARN de 28S y otro de 5.8S que se asocian
con el ARN 5S y 49 diferentes protenas, procedentes del citoplasma, formando
la partcula RNP de 60S que constituye la subunidad mayor del ribosoma
permaneciendo 30 minutos en el nuclolo.

Al terminar el proceso de maduracin del ARN preribosomal se obtienen los sub

unidades ribosmicas 60S y 40S terminadas y libres en el nuclolo para luego
migrar, a travs de los poros nucleares, al citoplasma donde se ensamblan
constituyendo los ribosomas.

Los diferentes tipos de ARNr slo son transportados al citoplasma bajo la forma de
sub unidades ribosmicas maduras. En el citoplasma, en presencia del ARNm y los
factores de transcripcin, ambas sub unidades se ensamblan formando los
ribosomas funcionales e iniciando la sntesis proteica.

El nuclolo es la expresin morfolgica de la transcripcin del ARN preribosmico por

los organizadores nucleolares o sus copias y la subsecuente maduracin de ese
ARN para convertirse en los ARNr, por esto el nuclolo slo es visible en los
momentos de mayor sntesis de ribosomas y cuando no hay transcripcin, como en
la mitosis, desaparece.

AMPLIFICACIN GNICA

Durante la ovognesis, los ovocitos en paquiteno replican muchas veces el ADN de

sus organizadores nucleolares (ADNr) por el mecanismo del anillo rodante,
fenmeno conocido como amplificacin gnica.
Se forman hasta 1000 nuclolos llegando a existir 10 veces ms cromatina
organizadora nucleolar que cromatina del resto del cariotipo. Estos nuclolos
pueden fusionarse para originar otros mayores. El ADN del organizador nucleolar

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amplificado (copias) es liberado al citoplasma en metafase I donde se degrada y
desaparece. Al final de la ovognesis termina la transcripcin y los nuclolos
desaparecen.

MODIFICACIONES NUCLEOLARES

Existen una serie de qumicos que afectan partes del ciclo nucleolar los cuales se
han utilizado para descifrar la fisiologa del nuclolo.
La Actinomicina D y el Bromuro de etidio inhiben la transcripcin del ARN 45S
originando una separacin neta de la parte granular y fibrilar (segregacin nucleolar).
Esto mismo se consigue con un tratamiento con KCl 1M y centrifugacin.
La 8-Aza guanina y la Toyocanamicina bloquean el paso del ARN 45S al ARN 32S
produciendo hipertrofia de la parte fibrilar y disminucin de la parte granular.
La Tiocetamida bloquea el paso del ARN 32S al RNA 28S produciendo acumulacin
del ARN 32S e hipertrofia de la parte granular.
Temperaturas mayores a 45 C producen la prdida de la parte granular.

CICLO DEL NUCLOLO

Al igual que ocurre con la cromatina, el comportamiento del nuclolo es muy

diferente segn la etapa del ciclo celular en que se encuentre.

En la interfase el nuclolo aumenta de tamao y hay tendencia a la fusin. Durante la

divisin celular el nuclolo muestra una serie de cambios:

a) Desorganizacin profsica: Durante la profase el nuclolo disminuye de tamao,

su forma se hace irregular y aparecen pequeas masas de material nucleolar
libres entre los cromosomas profsicos que se estn condensando.
b) Transporte metafsico y anafsico: Durante la metafase y la anafase, el nuclolo
desaparece, ya no se observa como un cuerpo, pero sus materiales se han
dispersado en el citoplasma unindose a los cromosomas metafsicos.
c) Reorganizacin telofsica: Durante la telofase, aparecen pequeos cuerpos
esfricos, entre los cromosomas que se estn condensando. Estos cuerpos
prenucleolares se fusionan hasta formar 1 o ms nuclolos maduros.