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purificacin
hidrofobicidad
carga
Propiedades de las protenas utilizadas
para caracterizar y purificar
Carga
Tamao
Forma
Actividad biologica
Hidrofobicidad
PM
Estabilidad relativa
Solubilidad
Punto isoelectrico
Fraccionamiento por campo elctrico
(electroforesis)
Movilidad electrofortica =
f = coeficiente de friccin = A
Vesp = V/PM
Electroforesis en papel
Proteinograma
Electroforesis en gel de poliacrilamida
(PAGE)
A PH = 8 - 9
Tipos de Electroforesis
PAGE Nativa
PAGE Desnaturalizante (SDS , SDS+ condiciones reductoras, urea)
Isoelectroenfoque
Bidimensional
Electroforesis nativa
1 2 3 4
q/m = q/m = q/m = q/m
Kr
Kr
PM nativo
Efecto colador
t
t = tiempo de
incubacin a
75C
PAGE SDS
SDS
Movilidad = 1/PM
Determinacin de PM
Isoelectroenfoque
Resolucin:
diferencia protenas
que difieren en 0.02
unidades de pH en
sus pI
Bidimensional
Fraccionamiento basado en el coeficiente de
reparto
Fase estacionaria:
Partculas de slidos
Partculas de slidos con lquido
Elucin
Contnua
Batch
Gradiente
Fases slidas y estacionarias
Tipos de cromatografas
Intercambio inico
ve
Cromatografa de fase reversa
Reconocimiento de ligandos
Alta resolucin y especificidad ( disminuye mucho el numero de pasos
en la purificacin)
Alto tiempo de preparacin
Fraccionamiento basado en propiedades
dinmicas
Sedimentacin
T. Svedverg
1884-1971
Equilibrium centrigugation:
Sirve para separar molculas que difieran en su densidad
(isopycnic centrifugation) Cl2Cs.
DNA, lipoproteinas. Tambin Ficoll, Percoll para clulas
Difusin
Viscocidad
Tcnicas de desalado
Ultracentrifugacin
Dilisis
Columnas de desalado