12 de septiembre 2016

PROTOCOLO
ENSAYO CON MTT

OBJETIVO

DETERMINAR SUPERVIVENCIA DE MICROALGAS EN MEDIO LIQUIDO

POR MEDIO DE ESPECTROFOTOMETRIA

MATERILES

i. Lector de microplaca multimode Varioskan

ii. Microplaca de 92 pocillos
iii. Incubadora con agitador orbital
iv. Tubos Eppendorf estriles de 1.5mL
v. Parafilm
vi. Micropipeta de 1000L
vii. Micropipeta de 100 L
viii. Gradilla
ix. Kit de MTT
x. Isopropanol (si no se cuenta con el solvente del kit)
xi. Centrifuga Eppendorf
xii.

2. PROCEDIMIENTO
1. Acondicionar la concentracin celular a la ms alta posible en fase
exponencial temprana
2. Agregar 100 L de la solucin con microalgas a los tubos eppendorf
3. Agregar 10 L de MTT a cada tubo
4. Incubar a temperatura ambiente (18 20 C) por 1 hora
 5. Agregar 100 L de solvente o isopropanol
6. Incubar por 30 minutos a temperatura ambiente (18 - 20C)
7. Centrifugar a 2500 rpm por 5 minutos a temperatura ambiente
8. Colocar volumen de cada tubo en cada pocillo de la microplaca ( 150 L)
9. Leer absorbancias a 570nm y 690nm
10. Restar la absorbancia de 690nm a 570nm