La estimulacin de la produccin de colgeno

en los fibroblastos humanos

Authors: Dr Jane Tiedtke and Dr Olaf Marks, Cosmetochem International, Switzerland Dr
Jacques Morel, Cosmetochem, France

Resumen
El colgeno es producido en los fibroblastos de la dermis humana y es esencial para la salud,
una piel firme. Tanto la calidad como la cantidad de colgeno disminucin en el
envejecimiento de la piel, a menudo debido a los efectos de factores externos como la
exposicin al sol, especialmente la radiacin UVA. El resultado de esta vinculacin cruzada es
que la piel pierde su elasticidad. En el pasado, la aplicacin tpica de colgeno animal soluble
se utiliz en un intento de estimular la formacin de colgeno en la piel. Sin embargo, estas
pruebas no fueron exitosas, como el colgeno no puede penetrar en la epidermis.

La vitamina C es conocida por estimular la formacin de colgeno, pero tiene la desventaja de

ser inestable en cosmetologa. Este artculo analiza un encapsulado forma estabilizada de
vitamina C*, la cual no slo estimula la produccin de colgeno en los fibroblastos humanos in
vitro, pero tambin estimula la regeneracin celular sin muerte celular acelerada.

Introduccin
El Colgeno desempea un papel fundamental en el mantenimiento de la estructura de la piel
y representa tanto como el 70% del peso de la piel. La formulacin de nuevas fibras de
colgeno, por lo tanto, es fundamental para una piel firme, sana1. Tipo I y III COLGENO estn
presentes en los ms altos niveles en la piel, formando el 80% y el 15% del total de colgeno
presente respectivamente1. Colgeno tipo IV es el componente principal de la lmina densa,
50nm capa gruesa en la membrana basal y tipo VII El colgeno es un componente importante
de las fibrillas de anclaje bajo la lmina densa, en la interfaz drmico-epidrmico. Colgeno
tipo V se encuentra pericellularly. Durante el envejecimiento, los fibroblastos de la piel no
producen mucho colgeno. Generalmente se cree que el colgeno tipo III se encuentra en
niveles mucho ms altos en la piel joven, pero disminuye significativamente con la edad . Su
papel se ha correlacionado con la extensibilidad de tejido , siendo sustituido en primera
instancia por el colgeno de tipo I que forma una estructura ms rgida. Sin embargo ha habido
investigaciones ms recientes que sugieren que esto Relacin no es tan claras5. Durante el
envejecimiento, los niveles de colgeno no slo disminuir pero las fibras de colgeno
comienzan a cross-link y esto es a menudo debido a los efectos de factores externos como la
exposicin al sol, especialmente la radiacin UVA. El resultado de esta vinculacin cruzada es
que la piel pierde su elasticidad. En el envejecimiento de la piel una mayor proporcin de
cross-linked insolubles de colgeno es encontrado, mientras ms joven, saludable, tersa piel
posee un mayor nivel de fresco-formado, colgeno soluble. En el pasado, la aplicacin tpica
de colgeno animal soluble se utiliz en un intento de estimular la formacin de colgeno en la
piel. Sin embargo, estas pruebas fueron infructuosos ya que el colgeno no puede penetrar en
la epidermis.

El colgeno es formado en la piel por ciertas clulas de fibroblastos. Es posible estimular la

proliferacin de estos fibroblastos e inducirlas a lo largo de un tiempo limitado para producir
ms colgeno. Este procedimiento generalmente no es factible durante un largo perodo
debido a la proliferacin de las clulas fibroblastos est estrechamente vinculado con la
aceleracin de la muerte celular. Este artculo analiza un encapsulado* activa que no slo
estimula la produccin de colgena en los fibroblastos humanos in vitro , pero tambin
estimula la regeneracin celular sin muerte celular acelerada.

DESCRIPCIN DE PRODUCTO DE PRUEBA

el producto de prueba es un nano-encapsulado, estabilizado, vitamina C-derivativo*

(magnesio-L-ascorbil fosfato) en forma de las denominadas "-booster intracelular", que es un
suero que contiene una alta concentracin de portadores claramente definidos o cpsulas de
entrega. El nano-cpsulas tienen un tamao medio de partculas de 150-200 nm,
permitindoles alcanzar las capas adecuadas de la dermis, lo que les permite interactuar en el
proceso de la sntesis de colgeno. Como un fuerte agente reductor acta sobre los sistemas
redox para la hidroxilacin de prolina a hidroxiprolina, un elemento caracterstico de la
estructura del colgeno.

Durante el desarrollo del producto se ha prestado una atencin particular a los siguientes
parmetros del sistema de encapsulamiento utilizado para

el derivado de la vitamina C encapsulada* :

Estabilidad

Tamao

Superficie activa

Concentracin de transportistas

Sistema de encapsulacin y estabilidad

El encapsulado de la nano-cpsulas es muy estables, incluso bajo condiciones extremas como

ultra centrifugacin durante 5 minutos a 20.000 g. Son estables en la mayora de los tipos de
producto, excepto los aceites y aquellos que contienen altos niveles de surfactantes como
productos de bao y ducha, champs y jabones lquidos. La estabilidad y la presencia de la
vitamina C encapsulada

* derivado en el acabado de la preparacin puede comprobarse midiendo el potencial zeta.

Eficacia de un derivado de la vitamina C encapsulada

* como un estimulador del colgeno.

Mtodos de
Medicin del ensayo MTT estimulacin celular de proliferacin celular se realiz por el
mtodo del MTT25. MTT ahora es un mtodo ampliamente aceptado que utiliza la
reduccin de sales de tetrazolio en la evaluacin tanto de la proliferacin celular y la
muerte celular . El amarillo de tetrazolio MTT (3-(4,5- dimethylthiazolyl-2)-2, 5-
diphenyltetrazolium metilo) es reducida por las clulas metablicamente activas, en
parte por la accin de enzimas deshidrogenasa para generar la reduccin de NADH y
NADHP equivalentes.
El resultante de formazan intracelular puede ser solubilizadas y cuantificadas por
medios espectroscpicos. Despus de la eliminacin de medio de cultivo y la disolucin
de los cristales por el DMSO (sulfxido de dimetilo), se ley la densidad ptica a 570
nm; esta lectura de ser directamente proporcional al nmero de clulas presentes en
directo.

La estimulacin de colgeno
Una prueba de cultivo celular in vitro fue llevado a cabo para demostrar la actividad de
la vitamina C encapsulada* de derivados sobre el crecimiento de fibroblastos
humanos. Las clulas fueron cultivadas en un 10% de suero de ternera fetal. Cultivos
de ensayo fueron preparados con una solucin de un encapsulated y Encapsula*
derivados de vitamina C y punto de referencia o control culturas fueron preparados
con liposomas vacos.
La sntesis de colgeno se midi en un cultivo de fibroblastos humanos por un inmuno-
tcnica de fluorescencia utilizando anticuerpos monoclonales anti-colgeno. Los
anticuerpos anti-colgeno fueron obtenidos por la reaccin de esplenocitos de ratones
inmunizados con clulas de colgeno humano. Un anticuerpo anti-colgeno se
etiqueta con un marcador fluorescente y se utiliza para localizar los sitios de sntesis de
colgeno. Los resultados de la prueba se evalu comparando la referencia sin materia
activa con la fluorescencia en las clulas tratadas con el
encapsulado de derivado s de vitamina C* y midiendo la intensidad de la fluorescencia.

Fig. Control 1: la cultura de los

fibroblastos humanos desarrollado con
anticuerpo monoclonal anti-colgeno
anticuerpos fluorescentes

Fig. Prueba 2 : cultivo de fibroblastos

humanos tratados con un 4% de la
vitamina C encapsulada derivativo*,
desarrollado con anticuerpo monoclonal
anti-colgeno anticuerpos fluorescentes

Resultados
De estimulacin celular los resultados de la prueba de MTT confirm que el producto
de prueba no es citotxico y estimulado el crecimiento celular en comparacin con el
control.
 Fig. 3. Un derivado de la vitamina C encapsulada* :ensayos de cultivo celular en
fibroblastos humanos.
LA ESTIMULACIN DE COLGENO
Las clulas tratadas con el derivado de la vitamina C encapsulada*demostr un
aumento de la fluorescencia y as la produccin de colgeno (Fig. 2) en comparacin
con el control (Fig. 1).
El mtodo de fluorescencia muestra una multiplicacin por el factor de la densidad
ptica del cultivo celular causado por la sntesis de colgeno de una cultura de 105
clulas/ml en 48 horas.Los resultados de la medicin son fluorescentes se muestra
enforma de grfico en la Fig. 3. Fosfato de ascorbil magnesio (MAPA) en su forma no
encapsulado en solucin, estimula la sntesis de colgeno 2,8 veces con relacin al
punto de referencia o control con liposomas vacos. Fosfato de ascorbil magnesio en su
forma encapsulada* estimula la sntesis de colgeno 25,8 veces en relacin con la
referencia.
Los resultados de la medicin de fluorescencia dio un valor de aproximadamente 63 ng
colgenos de la referencia cultura y 1500 ng colgenos de la cultura estimulada por el
4% de los encapsulados de derivados de vitamina C*.
SEGURIDAD
El producto de prueba* ha demostrado no ser citotxicas
pruebas toxicolgicas adicionales mostraron el producto de prueba* a no ser
irritante para los ojos y la piel
Un CIR INFORME8 concluy que "la experiencia clnica en la que el cido ascrbico se
utiliza sobre la piel daada sin efectos adversos y la repeticin de la prueba de parche
de injuria (RIPT) usando un 5% de cido ascrbico con resultados negativos apoya el
hecho de que este grupo de ingredientes (fosfato de ascorbil magnesio incluidos) no
presenta el riesgo de sensibilizacin de la piel"
Discusin La
Vitamina C ha sido documentado en la literatura como habiendo antioxidante/borrado
de los radicales libres, estimulando el colgeno blanquea la piel propiedades. Sin
embargo, la incorporacin de la vitamina C en los productos cosmticos es
problemtico, porque no es muy estable.
Fosfato de ascorbil magnesio es un derivado de la vitamina C, que tiene mucha mejor
estabilidad11,13 y esto tambin ha informado haber aclaradoras de la piel,
estimulando el colgeno y antioxidante sin embargo en el formulario unencapsulated
es bien absorbido por la piel, desde una aplicacin tpica . Para abordarlos problemas
de estabilidad exhibida por la vitamina C y la escasa penetracin de MAP, una forma
de vitamina C estabilizada, una forma de encapsulado MAPA, fue desarrollado y
probado contra la unen capsula formulario para la capacidad de estimular la
formacin de colgeno.

Conclusin
Los resultados muestran que el nano-encapsulacin de fosfato de ascorbil magnesio
(MAPA)* incrementa tanto el crecimiento de clulas nuevas y la capacidad de mapa
para estimular la sntesis de colgeno en los fibroblastos.
* La vitamina C encapsulada derivado utilizado en este estudio es vendido bajo el
nombre comercial Cosmetochem Factor de estimulacin de colgeno MAPA