MATERII PRIME VEGETALE I

ANIMALE MODIFICATE GENETIC

- Proiect -
Modul de reproducere al virusurilor
 Modul de reproducere al virusurilor
n biologie, un virus este un agent patogen inframicrobian, invizibil la microscopul optic,
care se reproduce numai n interiorul celulelor vii i provoac diverse boli infecioase numite
viroze.
Virusurile reprezint cea mai simpl form de via, acelular, ocupnd o poziie limitrof
ntre viu i neviu. Sunt considerate fiine vii ntruct dispun de material genetic i se
autoreproduc. Spre deosebire de celelalte forme de via, nu consuma hran i nu produc energie.
Ca structur, virusul este o particul submicroscopic, alctuit dintr-o parte central
numit genom viral, format din material genetic, care poate fi ADN sau ARN, i o teac sau
nveli protector de natur proteic, numit capsid. Capsida i genomul viral
alctuiesc nucleocapsida. La virusurile mai complexe mai apare un nveli exterior de natur
proteic numit pericapsid, peplos sau anvelop viral. Din punct de vedere al prezenei
nveliului pericapsidal, virusurile se mpart n dou categorii: nude i nvelite n peplos.

REPRODUCEREA VIRUSURILOR

Pentru virusuri, termenul de multiplicare nu reflect de fapt realitatea fenomenelor care au

loc n celula gazd, n interiorul creia virusurile nu se multiplic, ci sunt sintetizate de celul
prin activitatea metabolic a acesteia, deviat de la normal n urma substituirii informaiei
genetice a celulei cu cea a virusului. innd seama de faptul c nu s-a gsit un termen cu o
semnificaie semantic mai adecvat pentru reflectarea realitii fenomenelor care au loc n
cursul producerii de ctre celul a materialului viral se menine deocamdat n uz termenul de
multiplicare.

Multiplicarea virusurilor implic patru etape principale:

1. adsorbia sau fixarea virionului pe celula gazd;
2. ptrunderea n celul a virionului (la virusurile zoopatogene) sau numai a genomului viral
(la virusurile bacteriofagice);
3. multiplicarea intracelular propriu-zis a virusului n cadrul creia se pot deosebi trei
categorii de procese:
- replicarea aicidului nucleic viral;

1
 - biosinteza materialului viral;
- asamblarea (morfogeneza) noilor virioni.
4. eliberarea virionilor nou formai din celul.

n desfurarea acestor etape se constat unele diferene ntre virusurile zoopatogene i

bacteriofagi care se refer mai ales la primele dou i la ultima, multiplicarea intracelular
prorpiu-zis realizndu-se n esen identic la toate categoriile de virusuri.

Multiplicarea virusurilor zoopatogene

Prima etap a multiplicrii virusurilor se caracterizeaz printr-un grad relativ redus de
specificitate. Responsabilitatea fixrii o poart complementaritile de tip stereo, de natur
chimic, electrostatic i geometric dintre capsida sau pericapsida virionului i membrana
celulei gazda. Gruprile chimice de pe suprafaa membranei celulare care intervin n
determinismul afinitii dintre celul i virion, poarta numele de receptori. n general, receptorii
actioneaz complementar fa de gruprile aminice ale capsidei virale. La unele virusuri, ca de
exemplu virusurile gripale, au fost identificate cu precizie proteinele receptor de pe suprafaa
celulelor. Acestea sunt de natur glicoproteic, complementare neuraminidazei - enzima din
pericapsida virusurilor gripale care, din punct de vedere al activitii ei biologice este o
glucidaz.
Datorit specificittii relativ reduse a atraciei dintre majoritatea virusurilor zoopatogene i
celulele animale, fixarea virionilor este de cele mai multe ori precedat de un numr mai mic sau
mai mare de ciocniri ntmpltoare dintre virus i celul. De aceea, dintr-o multitudine de
particule virale care ptrund n organism, un numr mult mai redus ajung s se fixeze i apoi s
strbat nveliul celulei gazd. Rata de fixare a fost stabilit n cazul unor virusuri zoopatogene,
ca fiind 3-5x109.

Ptrunderea virionilor n celul

n cazul virusurilor zoopatogene, spre deosebire de bacteriofagi, virionul ptrunde n
ntregime n celula sensibil printr-un proces activ asemntor cu fenomenele de fagocitoz sau
pinocitoz. Membrana celular se invagineaz i se adncete progresiv n dreptul virionului
pn cnd acesta este complet nglobat n celul. Fenomenul poart i numele de viropexie. Dup
nglobare, marginile opuse ale membranei celulare invaginate fuzioneaz, restabilindu-se astfel
integritatea suprafeei celulare. Virusul ptruns n celul este inclus ntr-o vacuol ai crei perei
se dezintegreaz treptat.

Decapsidarea
Decapsidarea este un proces specific numai virusurilor zoo i fitopatogene, absent la
bacteriofagii a cror capsid nu ptrunde n celul. Ea const n liza capsidei sub aciunea
enzimelor de tip lizozomal numite decapsidaze produse de celula gazd. Pentru desemnarea
fenomenului de decapsidare mai sunt utilizai i termenii deproteinare sau dezbrcare, acesta din
urm mprumutat din literatura englez de specialitate (uncoating). Sinteza decapsidazelor este
sub determinismul genetic al genomului viral.
La poxvirusuri s-a emis ipoteza ca ADN-ul viral, chiar nainte de decapsidare, este capabil
s codifice i s transcrie pe ARNm o secven responsabil de sinteza decapsidazei. Aceast
ipotez i gsete confirmarea ntr-o experien cunoscut sub numele de fenomenul Berry-
Dedrick:

2
 - n celulele infectate cu un poxvirus A nclzit la 560C nu are loc sinteza materialului viral;
- acelai lucru este valabil i pentru o populaie de celule infectate cu un virus B iradiat cu
ultraviolete;
- n celulele infectate ns, simultan cu virusul nclzit A i virusul iradiat B, se constat
sinteza de material viral.
Explicaia fenomenului este urmatoarea: virusul A, a carui ARN polimeraz este inactivat
nu este decapsidat, n timp ce genomul virusului B decapsidat nu se poate replica datorit
alterrilor produse de radiaiile ultraviolete; dac cele dou virusuri se amestec, ATN
polimeraz eliberat din virusul B nealterat cu ultraviolete va determina sinteza ARNm precoce,
din care un segment este responsabil de sinteza decapsidazei, acesta va decapsida virusul B care
se va replica declannd multiplicarea normal a virusului.
Momentul decapsidrii difer la diferitele grupe de virusuri . n cazul virusurilor picorna, el
ncepe din momentul contactului cu membrana celular. La altele, decapsidarea poate sa nu aibe
loc, fr ca aceasta s mpiedice replicarea acidului nucleic i transcrierea informaiei genetice.
Cu privire la dinamica procesului decapsidrii s-a putut stabili, n cazul adenovirusurilor,
c ruperea capsidei are loc la nivelul pentamerelor constituiente ale colurilor icozaedrului care
reprezint punctele cele mai fragile ale acestuia.
Odat cu decapsidarea, virusul pierde infectivitatea n condiii naturale i trece din forma
de virion n cea de virus vegetativ, dependena sa de celul devenind total.

Multiplicarea propriu-zis
Multiplicarea propriu-zis este un proces complex bazat pe substituirea informaiei
genetice a genomului celular cu cea a genomului viral. Acesta prin mecanisme care nc nu sunt
pe deplin clarificate, scoate din funcie ADN-ul celular n momentul copierii informaiei de pe
ADN pe ARNm de o calitate nou transcris de pe genomul viral care va transmite la nivelul
ribozomilor un mesaj genetic nou care va obliga celula ca n locul enzimelor i a celorlalte
proteine proprii s sintetizeze material viral.
Paralel cu replicarea acidului nucleic viral are loc nhibarea sintezei proteinelor celulare. n
cazul mai multor virusuri ARN se constat ncetinirea sintezei proteinelor celulare n proporie

3
de 70-90% nc din prima oara de la ptrunderea virusului n celul. Un alt fenomen caracteristic
celulelor infectate cu virus const n nlocuirea treptat a poliribozomilor celulari de tip 200 S cu
poliribozomi virali de tip 350 S.
Acestia din urm sunt incapabili s recepioneze informaia genetic de la
ARNm celulari recepionnd informaia genetic numai de la ARN-ul viral.
n transmiterea informaiei genetice nscrise n programul viral se pot deosebi mecanisme
diferite determinate de acidul nucleic, constituient al genomului viral (ADN sau ARN) structura
acestuia (mono sau dublu catenar) capacitatea i modul de codificare al diferiilor acizi
ribonucleici i de unele particulariti ale complexului virus- celul. n funcie de aceti factori au
putut fi identificate pn n prezent, la virusurile animalelor, mai multe scheme sau strategii de
multiplicare. Indiferent de detaliile schemei de multiplicare, acesta implic totdeauna trei
procese:
- replicarea genomului viral;
- biosinteza materiualului viral;
- asamblarea sau morfogeneza noilor virioni.

Replicarea genomului viral

Acest proces are loc n mod diferit, n funcie de structura mono sau bicatenar a acidului
nucleic, dup cum urmeaz:
o ADN dublu catenar prezent la majoritatea virusurilor ADN se replic
semiconservativ, cele dou catene despletindu-se dup modelul clasic al
fermoarului (literei Y). La Adenovirusuri s-a demonstrat c replicarea ncepe de
regul la extremitatea catenei care este mai bogat n perechi de baze Adenina-
Timina.
o ADN monocatenar caracteristic Parvovirusurilor i construiete sub aciunea unei
enzime (replicaza) lanul complementar, devine astfel ADN dublu catenar
replicativ, dup care se replic conform modelului menionat mai sus, caracteristic
pentru ADN dublu catenar. Unele Parvovirusuri sunt defective, genomul fiind
incapabil de replicare. Ele se multiplic numai cu ajutorul unui Adenovirus helper
al crui genom este ADN dublu catenar din replicarea creia rezult i lanurile
necesare Parvovirusurilor adenoasociate.
o ARN-ul monocatenar care constituie genomul majoritii virusurilor ARN
determin prin enzime (replicaze) sinteza de noi lanuri de ARN prin dou feluri
(tipuri) de mecanisme de replicare:
- Tipul semiconservativ, precedat de transformarea ARN-ului monocatenar n bicatenar prin
sinteza unei catene complementare. Transformat n bicatenar, ARN-ul devine
replicativ i se replic dup modelul semisconservativ clasic prin despletirea celor
dou catene n form de fermoar sau litera Y. Cele doua catene fiice sunt una pozitiv
(+) i alta negativa (-).
- Tipul asimetric caracterizat prin replicarea de pe aceeai caten paralel devenit matrice a
mai multor catene complementare; catenelor noi care se formeaz treptat pe masura
deplasrii catenei parentale rmn ataate ctva timp de aceasta. n acest fel se
formeaz o molecul mare numit intermediar de replicare, ramificat n form de
brad, cu un numar de ramuri care variaz de la 1 la 7 i sunt catene pozitive (+).
Formarea intermediarilor de replicare este totdeauna precedat de replicarea de tip
semiconservativ.

4
 Indiferent de tipul de replicare, catenele pozitive (+) devin viitoare genomuri virale sau
dirijeaz sinteza de material viral, n timp ce catenele, dup ce i-au ndeplinit rolul de suport
(matrice) pentru procesul de replicare, se dezintegreaz.
o ARN-ul bicatenar constituie o excepie n cadrul virusurilor ARN, fiind prezent
numai la reovirusuri. n celulele infectate cu reovirusuri au putut fi evideniate trei
categorii de ARN monocatenari: mari de 24 S, mijlocii de 18 S i mici de 14 S.
Fiecare ARN monocatenar este o copie fidel transcris de pe un ARN bicatenar.
n multiplicarea reovirusurilor intervin dou feluri de enzime: una responsabil de
transcrierea ARN-ului monocatenar de pe ARN-ul bicatenar, iar a doua
respondabil de replicarea ARN-ului bicatenar. Prima este o protein virus
specific, fiind identificat n interiorul capsidei virionilor. Aceast enzima este
activat n cursul decapsidrii. n nucleocapsida reovirusurilor au fost identificate
i lanuri de ARN monocatenar, reprezentnd a 10-a parte din genom, dar rolul
acestuia nu a putut fi stabilit.
n cursul replicrii semiconservative a acidului nucleic viral se produce substituirea total
sau partial a ADN-ului din genomul celular, ncepnd transcrierea informaiei genetice nscrise
n genomul viral de ARN mesager care urmeaz s transmit informaia pentru sinteza
constitienilor virali la nivelul ribozomilor celulei gazd. n acest fel se iniiaz cel de-al doilea
proces esenial al multiplicrii virusurilor biosinteza de material viral.

BIOSINTEZA MATERIALULUI VIRAL

n biosinteza materialului viral se disting dou faze. Studiul acestora la virusurile ARN a
permis stabilirea urmtoarei dinamici de desfurare a urmtoarelor caracteristici pentru fiecare
faz:
o Faza exponential de sintez ncepe la 30 minute de la ptrunderea virusului n
celul i dureaz 2,5-3 ore, timpul de dublare a cantitii de ARN din celul este
de aproximativ 15 minute.
o Faza lineara de sinteza se caracterizeaza printr-un ritm constant de acumulare de
ARN viral; in celula se sintetizeaza in jur de 3000 molecule de ARN pe minut,
mentinandu-se n stare activ 500-800 de matrici. O molecul de ARN se
sintetizeaz n 50 secunde, ritmul de polimerizare al nucleotidelor fiind de 130 pe
secund. n aceast faz ncepe i se desfoar cu o vitez crescnd
morfogeneza noilor virioni prin ncapsidarea genomurilor. Biosinteza materialului
viral decurge la diferitele grupe de virusuri dup urmatoarea schema:

Virusurile ADN sunt sintetizate de celula gazd n dou faze:

o Faza precoce: ADN-ul viral determin, n cursul replicrii, prin intermediul unei
ARN polimeraze ADN dependente sinteza unui ARNm precoce. Originea ARN
polimerazelor variaz de la o grup (familie) de virusuri la alta. La unele grupe de
virusuri ARN polimeraza preexist n interiorul virionului, fiind o protein virus
specific. Majoritatea virusurilor ADN codific ns utiliznd ARN polimeraze
celulare. n virionul poxvirusurilor, pe lng ARN polimeraz, se gsete i o
dezoxiribonucleaz i o nucleotidfosfohidrolaz. Acestea intervin n biosinteza
materialului viral ca enzime tardive. ARNm precoce codific sinteza de genomuri
virale progene i de proteine virale precoce, majoritatea de natur enzimatic.

5
 Genomurile progene au aceeai capacitate de codificare ca genomul viral parental.
Proteinele precoce produc nhibarea replicrii ADN-ului, ARN-ului i a
proteinelor specifice celulei gazd i catalizeaz sinteza unor precursori ai
proteinelor virale structurale.
o Faza tardiv: n momentul cnd n urma replicrii ADN-ului viral s-a ajuns la un
anumit numr de genomuri virale patogene este nhibat sinteza proteinelor
precoce, declanndu-se prin intermediul unui ARNm tardiv sinteza proteinelor
tardive n marea lor majoritate proteine structurale, virus specifice care urmeaz
s fie asamblate n procesul de morfogenez a noilor virioni.

Echipamentul enzimatic evideniat n celulele n care are loc biosinteza virusurilor ADN
este reprezentat cu precdere de enzime corelate cu metabolismul ADN. Astfel, n celule care
multiplic un herpesvirus au fost identificate urmatoarele enzime: timidinkinaza,
timidinmonofosfatkinaza, ADN polimeraza i deoxiribonucleaza. Timpul n care decurg cele
dou etape ale biosintezei este n funcie de grupa (familia) de virusuri. La adenovirusuri, faza
precoce dureaz 6-8 ore, sinteza proteinelor tardive ncepand din a 8-a or.

Virusurile ARN determin biosinteza metabolismului viral de ctre celula gazd prin
mecanisme variate, dar ncadrabile n trei scheme (strategii) mai importante:
a) ARN-ul viral ndeplinete direct rolul de ARNm precoce i poate transmite informaia
genetic direct la nivelul ribozomilor printr-un proces de substituire direct sau
scurtcircuitare a ARNm celular, acest mecanism este caracteristic pentru picornavirusuri;
b)ARN-ul viral nu poate fi citit la nivelul ribozomilor celulei i nu poate deci transmite direct
informaia nscris n genomul viral. De aceea, el va determina sinteza unui
ARNm precoce de neoformaie care va declana sinteza proteinelor virale precoce, dup
care procesul continu ca la celelalte grupe de virusuri. Unele virusuri ARN care se
multiplic n acest mod pot conine n virion transcriptaze structurale. Dup aceast
schema se sintetizeaz mixo i rhabdovirusurile.
c) ARN-ul viral, printr-un proces de transcriere invers cu ajutorul unor enzime numite invers
sau reverstranscriptaze determin formarea unui ADN proviral. Invers transcriptaza pare
a nu fi o singur enzim, ci un complex format din 3 enzime:
o ADN polimeraza ARN instruit;
o ADN polimeraza hibrid instruit;
o ADN polimeraza ADN instruit.
Separarea celor trei enzime nu a reuit pn n prezent. Transcrierea invers este un
fenomen unic n biologie. Prin acest proces enzimatic se formeaz un ADN proviral care
preia conducerea sintezelor celulare dup modelul descris la virusurile ADN. Prin
intermediul unui ARN polimeraze ADN dependente el determin sinteza proteinelor
virale precoce, restul proceselor fiind aproximativ identice cu ale celorlalte scheme de
biosintez. ADN-ul proviral se poate, n unele cazuri, integra n genomul celular sub
form de provirus. Multiplicarea dup acest mecanism a fost identificat la unele virusuri
tumorale ARN.

Asamblarea (morfogeneza) virionului

La sfritul fazei de biosintez, dup ce n celul s-au acumulat cantiti mari de acid
nucleic i proteine virale, are loc asamblarea noilor virioni.

6
 La virusurile mici, asezarea componentelor n jurul genomurilor virale, fenomen numit i
ncapsidare, se petrece spontan printr-un proces de autoasamblare. La cele mai multe virusuri,
asamblarea mplic ns intervenia unor enzime. La virusurile complexe intervin i gene
morfogenetice care codific arhitectura proteinelor structurale ale virionului.
ncapsidarea se realizeaz prin asocierea unor proteine precursoare n uniti formate mai
nti din 3 subuniti, constituind o protein 5 S, iar apoi din subuniti rezultnd o pentamer 14
S.
Din asamblarea a 12 pentamere rezult o procapsid 80 S constituit din 60 subuniti
aranjate dup tipul de simetrie icozaedral. Asamblarea capsidelor are loc independent de
prezena genomurilor virale, fenomenul demonstrat prin experiena lui Jacobson si Baltimore
(1967) care, n urma nhibrii replicrii ARN a virusului poliomielitei n prezena guanidinei au
constatat acumularea n celul de capside goale.
ncorporarea acidului nucleic are loc prin sciziunea ntr-un anumit punct a unei proteine
gigante precapsidale. Proteina gigant are masa molecular 40x103, iar proteinele care rezult din
scindarea ei n momentul adiionrii ARN-ului au masele moleculare de 28x103 i respectiv
12x103.
Timpul de ncapsidare a unui genom ARN este de dou minute. ntre sinteza proteinelor
capsidale i apariia lor n structura virionilor nou formai exist ns un interval de 20 minute.
Aceasta pledeaza pentru admiterea formrii unui depozit (Pool) intracelular de proteine capsidale
care crete cu timpul n volum, depozit din care emisia de proteine capsidale pare a avea loc la
ntamplare pe parcursul morfogenezei virionilor.
Morfogeneza, ca regul general, are loc pentru virusurile ARN intracitoplasmatic, iar
pentru virusurile ADN intranuclear. Materialul viral, dup sinteza lui n citoplasm, migreaz n
cazul virusurilor ADN n nucleul celulei gazd asamblandu-se aici. Exceptii de la aceast
caracteristic general o reprezint poxvirusurile care, fiind virusuri ADN, se asambleaz n
citoplasm si myxovirusurile care, fiind virusuri ARN, se ncapsideaza n nucleu. Diferene ntre
grupele (familiile) de virusuri exist i n ce privete locul i structurile intracelulare din
citoplasm i nucleu unde are loc asamblarea lor. Astfel, poxvirusurile i picornavirusurile se pot
asambla n diverse zone ale citoplasmei, rhabdovirusurile de obicei pe membranele marginale ale
vacuolelor intracitoplasmatice, iar myxovirusurile dup ncapsidarea lor n nucleu i desvresc
faza de maturare la periferia celulei, limitrof membranei.

Eliberarea virionilor din celul

Virionii nou formai pot fi eliberai din celul prin mai multe procese dup cum urmeaz:
nmugurirea sau burjonarea este modul cel mai frecvent de eliberare a virusurilor din
celul. El a fost observat i studiat mai nti la virusurile a cror maturare are loc n apropierea
membranei celulare, mai trziu s-a constatat c este n realitate mult mai extins.
Modelul general se caracterizeaz prin includerea ntr-o prim faz a virionilor nou
asamblai n vezicule (cisterne) care se ataeaz de faa intern a membranei celulare la suprafaa
creia proemin i o bombeaz asemntor unor muguri. Apoi, acetia se detaeaz de celul prin
mici aperturi care apar n membran.
Intensitatea fenomenului i aspectul poate mbrca o gam destul de variat de forme.
Uneori, eliberarea virionilor are loc exploziv sub form de vacuole care se degaj la suprafaa
celulei simultan i asincron.
Alteori, la suprafaa celulelor se formeaz nite viloziti, iar virionii ies n mediul
extracelular prin extremitile acestora. n urma procesului de nmugurire virusul pstreaz n

7
componenta nveliului sau mai ales al pericapsidei anumii compui specific celulei care l-a
sintetizat, provenind din membrana intern a cisternei (veziculei) n care fusese inclus n cursul
nmuguririi, fapt care determin prezena la aceti virioni a dou categorii de proteine:
- proteine virus specifice elaborate de celul conform informaiei genetice a acidului nucleic
viral;
- proteine cu specificitate de gazd care fac parte din compuii obinuii ai celulei i care
sunt antrenai n structura nveliului particulei virale (a pericapsidei) n cursul
eliberrii virusului din celul.
Liza celulei gazd sub aciunea unor enzime produse n celul n ultima faz a
morfogenezei, acest mecanism caracteristic bacteriofagilor se ntlnete rar la virusurile animale.
Eliberarea virionilor consecutiv morii celulei i dezintegrrii acesteia, aceste virusuri apar
cel mai tarziu, iar punerea lor n libertate se caracterizeaz printr-o frecven moderat.
Trecerea virionilor direct la celula adiacent celei n care a avut loc multiplicarea prin porii
membranei celulare.

8
 Bibliografie:

https://ro.wikipedia.org/wiki/Virus
http://www.creeaza.com/familie/medicina/VIRUSOLOGIE-GENERALA-Caractere343.php
http://microbio.ucoz.com/Prelegeri/Romana/BIOLOGIA_VIRUSURILOR_10.pdf