EXTRACCION DE ADN VEGETAL

Yenny Alexandra Herrera.

Mara Isabel Montoya.
Daniela Mara Valencia.

Informe:
Laboratorio Biotecnologa

Ingenieria de Alimentos
Facultad de Ciencias Farmaceuticas y Alimentarias
Universidad de Antioquia
Seccional Oriente
2017
 INTRODUCCIN

La extraccin de ADN tiene como objetivo principal obtener la mayor cantidad

posible del ADN de alto peso molecular, libre de protenas, carbohidratos y
otros inhibidores de enzimas. Diferentes mtodos de extraccin han sido descritos
para el aislamiento de cidos nucleicos, aqu se trabajara especficamente con la
extraccin de ADN vegetal, la presencia de algunos metabolitos secundarios y como
interfieren estos en el aislamiento del ADN.

En plantas y hongos la pared celular es la primera barreras para la extraccin,

es necesario degradarla empleando mtodos fsicos o qumicos. Los mtodos
fsicos son los ms empleados, especialmente la congelacin y la maceracin.
Para bacterias y clulas desprovistas de pared, se emplean soluciones ricas
en detergentes o enzimas, para destruir las membranas celulares.
Una vez se ha destruido la membrana celular debe emplearse detergentes y
soluciones de alta (o baja) fuerza inica para permitir que el ADN se libere en
el buffer.

La inhibicin de nucleasas es un factor crtico, esta se alcanza empleando

buffer1 con pH poco ptimos para accin de estas enzimas y adicionando
agentes quelantes de iones como el EDTA (Etilendiamina tetra acetato).
Posteriormente se utilizan sustancias que desnaturalicen y separen las
protenas del ADN como fenol y cloroformo. Finalmente en ADN es
precipitado con alcohol y centrifugacin. El ADN libre de protenas y otros
compuestos celulares se disuelve en un buffer 2.

Algunos tejidos pueden poseer altas concentraciones de polisacridos, para

separarlos de los cidos nucleicos se puede emplear mayor cantidad de buffer
extraccin o sustancias como CTAB (cetil trimetil amonio) que colabora
en la precipitacin del ADN. El pH durante el proceso de extraccin debe ser ptimo,
que evite la accin de enzimas degradativas del cido nucleico. La mayora de los
procedimientos de extraccin de ADN emplean soluciones taponadas con pH 7.0-
9.0.

Para cuantificacin del ADN se hace uso de la espectrofotometra

(absorbancia a una longitud de onda de 260nm), o la observacin directa con
fluorescencia despus de teir el gel de extraccin con bromuro (mtodo de saram
wrap, mtodo del plato de agarosa, mtodo del minigel) o por fluorometria.
 OBJETIVOS

Comprender los procedimientos necesarios para extraer ADN de buena

calidad y alta pureza.
Identificar la composicin de los diferentes reactivos usados durante la
prctica, los cuales tienen funciones especiales en la extraccin del ADN
vegetal.
Reconocer el ADN extrado luego del procedimiento aplicado a las arvejas.
Analizar los procesos necesarios para la extraccin del ADN de una arveja
logrando as determinar la importancia de cada proceso.
Conocer la utilidad y el manejo del equipo bsico, instrumentos y
herramientas del laboratorio de biotecnologa.

OBSERVACIONES

Para la extraccin del ADN se realiz una leve maceracin de las arvejas con el fin
de incrementar el rea superficial de las arvejas y ayudar a disolver la pared celular
ms fcil.
La precipitacin se realiza con etanol helado ya que el ADN es soluble en alcohol,
pero se torna insoluble en presencia de NaCl porque el sodio neutraliza la carga
negativa de los grupos fosfatos. El etanol formar una capa en la superficie por ser
menos denso que la solucin acuosa. Para lograr la disolucin de la pared se
emplearon detergente anionicos y catinicos estos ayudaban a la extraccin del
material vegetal ya que la pared de las clulas est formada por dos capas de lpidos
unidas a protenas, el detergente ayuda a romper la bicapa de fosfolpidos de las
membranas plasmticas y la envoltura nuclear. Los lpidos de la pared se
descomponen debido a que el detergente deshace las uniones que mantienen la
pared junta. Cuando el detergente se pone en contacto con los lpidos stos se
separan de la pared rompindola. La estructura de los lpidos es similar a la del
detergente y eso hace que se combinen, formando una burbuja de detergente y
lpidos. Los detergentes usados estaban adicionados en las dos soluciones buffer
empleadas. Se homogenizo continuamente con el fin de conseguir que las
soluciones buffer las cuales contenan los detergentes pueda actuar sobre las
arvejas maceradas.

Se somete a centrifugacin con el fin de separar el material gentico de los

solventes empleados para su extraccin y se separan las dos fases resultantes,
desechando el sobrenadante, adems este paso permite separar los restos de los
tejidos de las arvejas de las clulas a las cuales se les realizo lisis celular en los
pasos anteriores.
 CONCLUSIONES

El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En l estn escritas

las instrucciones que deben seguir las clulas para construir un organismo y
mantenerlo vivo. Todas las clulas que forman un individuo contienen una
copia idntica de ADN. Su extraccin es la base del conocimiento de este y
su posible modificacin.
La soluciones buffer empleadas estn compuestas por un grupo de reactivos
que cumplen funciones especficas para permitir la obtencin del materia
vegetal (EDTA secuestra iones Mg2+, los detergentes anionicos y catinicos
ayudan a realizar la lisis de la pared celular, el Sodio sarkosyl separa
protenas no objetivo del material celular).
El ADN es la huella gentica de cada ser vivo, y su extraccin,
caracterizacin e identificacin es fundamental en mltiples procedimientos,
entre ellos la identificacin del ADN humano en aplicaciones, mdicas,
diagnstico de enfermedades, conocimiento del genoma humano, pruebas
de paternidad, investigacin criminalstica, caracterizacin de nuevas
especies botnicas entre otras.

BIBLIOGRAFIA

- MADDEN D. Discovering DNA. Science in School 1: Spring 2006.

http://www.scienceinschool.org.
- GENETIC SCIENCE LEARNING CENTER. How to extract DNA from
anything living. En http://learn.genetics.utah.edu
- Extraccin de ADN. Disponible en:
http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/
la_ciencia_a_tu_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_a
dn.html
- Manual de laboratorio de Biotecnologa. Practica N 12. Extraccin de ADN
vegetal.