Sunteți pe pagina 1din 38

CURS 2

GENETICA

UMAN
U.M.F IAI

B. STRUCTURA GENOMULUI
UMAN

Genomul uman (GU) =


coninutul ADN celular sau
ansamblul integrat al celor 25 de molecule diferite de ADN (24 n
nucleu: 22 autosomi+X+Y i 1 n mitocondrii), = 3,2 miliarde de pb
GU = un genom nuclear (complex, 99,5% ADN) + un
genom mitocondrial (simplu i mic, 0,5%).
U.M.F IAI

2.1. GENOMUL NUCLEAR

Enorm (3,2 miliarde pb),


Fragmentat: (22A+X+Y) molecule de ADN + proteine
cromozomi
Complex, heterogen:
ADN nerepetitiv
ADN moderat repetitiv
ADN nalt repetitiv
ADN genic (25%) + ADN extragenic (75%)
U.M.F IAI
2.1. Genomul nuclear
a) ADN GENIC (25%)

Gena = unitatea de
informaie genetic
codific un produs
primar specific
(proteine sau ARN)

Structura genelor este


foarte complex - ADN
genic:
ADN codant = exoni
(10%)
ADN necodant (90%) =
introni, secvene reglare,
gene nefuncionale
(pseudogene) sau - Gene ce codific proteine (1,5%),
fragmente de gene
- Gene ce codific ARN
U.M.F IAI

b) ADN EXTRAGENIC (75%)

Secvene netrasncrise
(necodante);

Funcii puin cunoscute:


- rol tampon a mutaiilor;
- mperecherea corect a
cromozomilor omologi n meioz i
schimbul egal (CO) de segmente
cromozomiale recombinare
genic surs de variabilitate !!!.
Alctuit din:
ADN nerepetitiv = secvene
unice sau un nr mic de copii
(60%)
ADN repetitiv (40%).
U.M.F IAI

(1) ADN EXTRAGENIC NEREPETITIV (60%)


SECVENELE UNICE sau
SECVENE NTR-UN NR MIC
DE COPII

DUPLICAII
SEGMENTALE (5% GU) Duplicaie genic
blocuri (~10Kb) ce
flancheaz genele (pe
acelai cromozom) ;
Deleie genic
rol n sinapsa corect a
omologilor in meioz * .
CO
Importan: inegal
fiind identice - pot genera HMSN = neuropatie ereditar motorie i
erori de mperechere a senzorial
cromozomilor omologi HLPP = neuropatie ereditar cu
CO inegal mutaii: predispoziie la pareze presionale
duplicaii /deleii genice
BOLI GENOMICE
U.M.F IAI

(2) ADN EXTRAGENIC REPETITIV (40%)

ADN moderat repetitiv (~30%):


secvene scurte repetate de sute
de mii de ori, dispersate n genom
(ex SINEs i LINEs)

ADN nalt repetitiv (~10%):


secvene foarte scurte, repetate n
tandem , de milioane de ori;
3 tipuri:
ADN satelit
(blocuri HCRT la centromer,
telomere, CS) = rol structural;
ADN minisatelit
(minisatelii hipervariabili),
dispersat n toi cromozomii =
markeri genetici individuali =
folosii n amprenta genetic
ADN microsatelit AMPRENTA GENETIC
(DNA fingerprint)
U.M.F IAI

3. GENOMUL MITOCONDRIAL

ADNmt cteva mii de copii


per celul = 0,5%
Genomul mitocondrial difer
de genomul nuclear:
mic (16.569 pb);
circular;
neasociat cu proteine;
fr ADN repetitiv;
compact: 97%=secvene
codante
37 de gene:
contigue,
fr introni.
Codul genetic mitocondrial
difer puin de cel nuclear
U.M.F IAI

GENOMUL MITOCONDRIAL

Genomul mitocondrial al
zigotului provine, prin ovul,
exclusiv de la mam.
ADNmt poate suferi mutaii
germinale sau somatice
Mutaiile germinale produc o
serie de boli degenerative n
SNC, SNP, muchi, etc,
care se transmit maternal:
de la mam la toi descendenii;
brbaii bolnavi nu transmit boala
U.M.F IAI

ADNmt poate suferi mutaii somatice, dup


natere:
produse de radicalii liberi de O2
(generai n mitocondrii);
favorizate de structura ADNmit
(absena histonelor; densitate mare de gene; etc)
Mutaiile se acumuleaz rapid datorit absenei
mecanismelor de reparare
Determin scderea produciei de energie boli
degenerative, cancer i senescen
U.M.F IAI

1. APARATUL GENETIC AL CELULEI


(v. LP 1)

APARATUL GENETIC:
structurile celulare care conin ADN:
nucleul + mitocondriile

(1). NUCLEUL 99,5% ADN

ADN + proteine (fibre) CROMATIN



CROMOZOMI.
Cromatina i cromozomii = dou modaliti diferite
de organizare morfo - funcionl a materialului
genetic n inetrfaz i diviziune.

(2). MITOCONDRIILE 0.5% ADN,


origine exclusiv matern.
U.M.F IAI

2. CROMATINA (v. LP )
2.1. EUCROMATINA I
HETEROCROMATINA

CROMATINA = ADN + proteine


Caracteristici EUCROMATINA HETEROCROMATINA
Exclusiv n nucleu! Condensare Fin dispersat Puternic condensat
(cromocentri)
Dou tipuri morfo-funcionale Colorare Slab Intens
distincte: Replicare n faza Precoce Tardiv
S
- EUCROMATINA Activitate Activ Inactiv
activ genetic genetic
Compoziie Predomin p.b. C - G; Predomin p.b. A - T; ADN
dispersat chimic ADN nerepetitiv; proteine repetitiv;
nehistonice proteine histonice
- HETEROCROMATINA Rol morfologic Alctuiete benzile Alctuiete benzile
R pozitive (sau G R negative (sau G pozitive)
inactiv genetic negative)

condensat
(cromocentri)
U.M.F IAI

EUCROMATINA I HETEROCROMATINA (v. LP )

HETEROCROMATINA:

constitutiv constant n structura cromozomilor:


benzi G, benzi C (cen, Yq, p A, CS)

facultativ diferit n celule / organisme diferite


(hetrocromatinizarea o form de reglaj genic)
ex., cromatina sexual
U.M.F IAI

2.2. CROMATINA SEXUAL (v. LP )

CROMATINA SEXUAL - definiie:


un corpuscul de HCRT, = cromocentru poziie, mrime,
form ali
cu particulariti morfologice bine definite, cromocentri
care permite identificare NR cromozomilor sexuali
- determinarea sexului genetic (XX sau XY);
- anomaliile cromozomilor sexuali (XO, XXX, XXY).
La femeie: cromatina X (corpusculul Barr)
Morfologie v.LP
La brbat: cromatina Y (corpusculul F)
U.M.F IAI

ORIGINEA CROMATINEI SEXUALE

CROMATINA X:
rezult prin inactivarea unui cromozom X (la femeile XX) va forma
(prin heterocromatinizare) corpusculul Barr

Ipoteza Lyon (1961):


(1) inactivarea cromozomului X este total; ambele sexe
un singur X activ.
(corect = parial* regiuni/gene active n ambii cromozomi X)
(2) se produce precoce (i.u) i este definitiv;
(posibil = uneori reversibil)
(3) are loc la ntmplare (XM sau XP) i independent n fiecare celul
(posibil = uneori ne ntmpltoare)
U.M.F IAI
Inactivarea ntmpltoare (XM sau XP) i
independent
n fiecare celul femeile sunt un MOZAIC
celular*
Femeile
heterozigote
XN Xa
sntoase?

a = displazie ectodermal anhidrotic


U.M.F IAI

Numrul c. Barr = suma cromozomilor X


(numrul cromozomilor X = nr. c. Barr + 1)

DIAGNOSTIC Femeie Brbat


Nr. C. Barr 0 1 2 0 1 2

Sex genetic XX XY
(n stri intersex)
Anomalii de numr XO XXX XXY XXXY
cromozomi sexuali XXYY
n obs. clinice de
disgenezii gonadice
U.M.F IAI

CROMATINA SEXUAL

CROMATINA Y:
reprezint heterocromatina de pe 2/3 distale bra lung
cromozom Y
(colorat cu flurocromi ex., quinacrin i vizibil
la microscop UV ca un corpuscul fluorescent )
corpuscul F)
exclusiv la barbati
Nr. corpusculi F = nr. cromozomi Y
ex., brbaii XYY au 2 corpusculi F
U.M.F IAI

2.3. STRUCTURA SUPRAMOLECULAR A


CROMATINEI

Analiza cromatinei la
microscopul electronic
evideniaz un sistem
ierarhizat de
compactare a
moleculei de ADN
fibre de cromatin,
de dimensiuni diferite,
alctuite din ADN,
histone i proteine
nehistonice.
U.M.F IAI

1) Filamentul cu nucleozomi (10nm)

Un segment de ADN (146 pb)


- se nfoar (1 tur i 3/4)
- n jurul unui "miez" histonic,
cilindric (8 mol.) un
NUCLEOZOM.
Nucleosomii legai printr-un
segment de ADN liniar (60
p.b.) FILAMENTUL CU
NUCLEOZOMI
(~ "irag de mrgele").
FN - meninut mpachetat de
ctre histona H1, ce leag doi
nucleozomi vecini.
Rat de "compactare" a ADN
nativ este de circa 10:1
U.M.F IAI

2) Fibra de cromatin (30nm)


Filamentul cu nucleozomi se spiralizeaz n
solenoid fibra de cromatin (FC) (30 nm)
Rat de "compactare" a filamentului cu nucleozomi
este de circa 5:1
3)
U.M.FFibra
IAI pliat n bucle laterale (300
nm)
FC (30 nm) se pliaz n
bucle laterale ataate la
un schelet de proteine
nonhistoince FPBL =
300nm
O bucl (domeniu crs)
de ~75Kb cteva gene =
unitate funcional (de
transcripie i replicare).
Rat de "compactare" este
de circa 10:1
U.M.F IAI

4) Cromozomul metafazic (300 nm)

n profaz fibra de
cromatin se
condenseaz (20:1)
cromatida (700 nm)
unui cromozom
Cromozomii grad
maxim de condensare
n metafaza diviziunii
U.M.F IAI

STRUCTURA SUPRAMOLECULAR A CROMATINEI


sintez

ADN FILAMENT FIBRA FIBRA CROMATIDA


CU DE PLIAT UNUI
NUCLEOSOMI CROMATIN N BUCLE CROMOZOM

INTERFAZA DIVIZIUNE

Fiecare cromatid are o singur molecul de ADN


organizat n mai multe structuri succesive i ierarhizate,
compactat de ~ 10.000 ori, pentru a face posibil:
localizarea n nucleu
distribuia corect a materialului genetic n diviziune
U.M.F IAI

STRUCTURA SUPRAMOLECULAR A CROMATINEI


Sintez

Buclele fibrei de 300 nm se


fixeaz neregulat de scheletul
proteic:
zone cu mici aglomerri =
cromomere
zone mai laxe

Prin condensarea cromatidei n


profaz,
cromomerele se unesc i
formeaz benzi intens
condensate i colorate (benzi
G + = heterocromatin)
care alterneaz cu benzi mai
puin condensate i mai clare
(benzi R + = eucromatin).
U.M.F IAI

STRUCTURA SUPRAMOLECULAR A CROMATINEI

Sintez

Fiecare cromozom are o


structur intern
eterogen
caracteristic
(permite identificarea
lui
precis)
U.M.F IAI

3. CROMOZOMII UMANI

CROMOZOMI = organite
nucleare care fixeaz
intens colorani bazici
(chroma + soma)

Funcii:
Transport + distribuie
materialul genetic n cursul
diviziunii stabilitatea
proceselor ereditare.
Asigur recombinarea
genetic n meioz
U.M.F IAI

3.1. MORFOLOGIA CROMOZOMILOR UMANI


a). Elemente comune tuturor cromozomilor: Cromatidele
Centromerul
(1) COMATIDELE Telomerele

- Crz = bicromatidian dup


replicare;
- Cromatidele surori 1
molecul de ADN + Pr
U.M.F IAI

a). Elemente comune tuturor cromozomilor

(2) CENTROMERUL

locul de ataare a cromatidele p


surori (prin proteina ISS)
unic constricie primar
mparte cromatidele n braele q
p i q
poziie fix determinat de o
secven ADN repetitiv (ADN
satelit) identic la toi
cromozomii) + ADN specific
fiecrui cromozom;
cromozomi M, SM, A
U.M.F IAI

a). Elemente comune tuturor cromozomilor

(2) CENTROMERUL

Rol esenial pentru


SEGREGAREA
cromozomilor din
cursul diviziunii
celulare:

La ADN cen se
fixeaz proteine
CENP = kinetocorii
locul de fixare a
filamentelor fus de
diviziune ce vor
tracta cromatidele la
poli (n anafaz)
M A T
U.M.F IAI

a). Elemente comune tuturor cromozomilor

(3) TELOMERELE = structuri


specializate, formate din ADN
repetitiv + proteine asociate,
care acoper i protejeaz
capetele cromozomilor.

Funcii:
meninerea integritii structurale;
asigurarea replicrii complete;
poziionare cromozomilor omologi n
nucleu
U.M.F IAI
b). Elemente caracteristice unor cromozomi

(1) SATELIII = mase mici de


heterocromatin ataate pe braele
scurte ale cromozomilor acrocentrici
(exceptnd Y) = variante normale

(2) CONSTRICIILE SECUNDARE= blocuri


de heterocromatin situate pe 1q, 9q,
16q lng centromer = variante
normale

(3) SITUSURILE FRAGILE = lacune


necolorate pe cromatidele unor
cromozomi. Majoritatea = variante
normale; excepie fra Xq27 asociat cu
retard mintal
= Sdr. X fragil (RMLX-1:4000 nn)
U.M.F IAI

c). Elemente specifice fiecrui cromozom: BENZILE

Prin diferite tratament


se observ pe
cromozomii metafazici o
serie continu de benzi
longitudinale,
- unele intens colorate
(benzi G)
- ce alterneaz cu benzi
slab colorate (benzi R)
U.M.F IAI

c). Elemente specifice fiecrui cromozom: BENZILE

Benzile reflect
structura
intern,
heterogen, a
cromozomilor.
Fiecare
cromozom are
un model
caracteristic de
benzi
identificarea sa
precis.
U.M.F IAI

3.2. TEHNICI DE ANALIZ CROMOZOMIAL


(v LP)

a). Principiile metodelor (!!!)


(1) Obinerea de celule n diviziune:
Culturi celulare: limfocite, fibroblaste, celule fetale (
amniocentez);
- 0,5 ml snge periferic (recoltat steril, pe heparin) mediu
cultur cu PHA (stimuleaz diviziunile) 72 ore
esuturi care se divid activ: mduv osoas ( punvie
medular), trofoblast ( placentocentez);
(2) Obinerea de celule n metafaz: blocare cu colchicin
(3) Obinerea preparatelor: hipotonizare, fixare, etalare
pe lame, colorare, tehici de marcaj n benzi.
(4) Analiza preparatelor* cariotip
U.M.F IAI

EVOLUIA
TEHNICILOR DE ANALIZ CROMOZOMIAL
(v LP)
(1) TEHNICI DE GENERAIA I
(1956)
- cromozomi uniform
colorai;
- identificare imprecis*

(2) TEHNICI DE GENERAIA II


(1970)
- marcaj n benzi G sau R
cromozomi metafazici
(400 benzi);
- identificare precis
U.M.F IAI

TEHNICI DE ANALIZ CROMOZOMIAL (v LP)

(3) TEHNICI DE
GENERAIA III (1977)
- nalt rezoluie:
cromozomi M PM P

pro-matafazici
(550 benzi) sau
profazici
(850 benzi)
- o band = 3-5 Mb
U.M.F IAI
TEHNICI DE ANALIZ CROMOZOMIAL
(v LP)

(4) TEHNICI DE GENERAIA IV


(1991)
- citogenetic molecular
- FISH metafazic t(1q;2q)

- se pot identifica f. precis


remanierile cromozomiale i
microdeleiile
- FISH interfazic

Trisomie 21 Del 15q