Departamentul de Inginerie Chimic i Biochimic,

Universitatea Politehnica din Bucureti

Biotehnologii

conf. dr. ing. Iuliana Jipa

iulia.jipa@yahoo.com

2016 - 2017
Structura cursului:
Capitolul 1 Elemente introductive
Capitolul 2 Microorganisme de importan industrial
Capitolul 3 Materii prime n biotehnologii
Capitolul 4 Consideraii asupra realizrii industriale a proceselor biochimice
Capitolul 5 Procedee de sterilizare n biotehnologie
Capitolul 6 Fermentaia de regim
Capitolul 7 Reactoare biochimice
Capitolul 8 Separarea i purificarea produselor de biosintez
Capitolul 9 Aplicaii ale biotehnologiei n domeniul proteciei mediului
Sterilizarea

Alegerea metodei de sterilizare se face n funcie de proprietile fizico-chimice ale materialului

supus sterilizrii, pentru a evita degradarea sau modificarea compoziional.
Sterilizarea cu abur:
- este cel mai cunoscut mod de sterilizare;
- presupune ca aburul s ptrund pe toate prile i pe toat suprafaa materialului care trebuie
sterilizat;
- procesul se desfoar, de regul, n utilaje folosind abur saturat de 121 C sau de temperatur mai
mare;
- uneori se poate folosi i abur de temperatur mai mic dect 115 C;
- trebuie acordat o atenie deosebit timpului necesar nclzirii, ct i timpului de expunere;
- pentru ca aburul s ptrund n materialul supus sterilizrii, eliminarea aerului din incit este
esenial.

Se urmrete n funcie de:

punctul termic mortal - valoarea temperaturii la care sunt omorte toate celulele unei specii
n timp de 10 minute;

timpul termic mortal - valoarea timpului de expunere la o anumit temperatur, necesar

distrugerii tuturor celulelor sporulante; scade semnificativ cu creterea temperaturii.
Procedee de sterilizare:
Sterilizarea cu cldur uscat:
- se realizeaz la 160 - 200 0C;
- durat mai mare de 2 ore:
n funcie de numrul de microorganisme prezente;
n funcie de tolerana la temperatur a produsului;
- echipamente utilizate:
cuptoare cu funcionare n regim de aer forat, cu dispozitive de nregistrare i reglare a temperaturii.

Sterilizarea cu gaz:
- sterilizarea cu gaz se poate face la temperaturi mai sczute;
- gazul trebuie:
s fie uor de manipulat;
s nu prezinte pericol de explozie sau alte pericole pentru utilizator;
n cazul n care gazul a fost absorbit de material trebuie s se volatilizeze repede.
- cel mai utilizat:
etilenoxidul - este foarte inflamabil i se folosete alturi de gaze inerte cum ar fi dioxid de carbon.

Sterilizarea prin ionizare

- utilizeaz fie electroni accelerai, fie izotopi radioactivi;
- sterilizarea cu radiaii (gamma):
folosete ca surse de izotopi radioactivi 60Co sau 137Cs;
au o capacitate mare de penetrare;
pentru materialele supuse unui astfel de tratament este necesar s se evalueze modificrile chimice care
ar putea avea loc.
- conduce la modificri importante n textura, culoarea, gustul i mirosul substanelor.
Sterilizarea mediilor de cultur
se realizeaz practic prin metode termice, datorit:
- simplitii procedeului;
- uurinei n exploatare;
- siguranei gradului de sterilizare.
Cu toate acestea, sterilizarea termic prezint i o serie de neajunsuri cum ar fi:
degradarea i inactivarea proteinelor;
denaturarea vitaminelor i a unor factori de cretere;
apariia unor supranclziri locale, care produc declanarea unor reacii de oxidare,
polimerizare, condensare, caramelizare a componentelor mediului.
Durata procesului de sterilizare a mediului de cultur influeneaz randamentul reaciei
biochimice, datorit posibilitii apariiei unor reacii secundare fie ntre componenii
mediului de cultur, fie de degradare ale acestora.
Sterilizarea mediilor de cultur
Cinetica sterilizrii:
pentru scopurile practice, distrugerea microorganismelor cu abur (cldur
umed) poate fi descris ca o reacie chimic de ordinul I i poate fi
reprezentat de urmtoarea ecuaie:
dN
kN
d
N - numrul de microorganisme vii prezente / mL;
- timpul de sterilizare, min;
k - constanta vitezei de reacie sau viteza specific a morii microorganismelor,
min-1.
Nt
ln k
N0

N0 este numrul microorganismelor viabile la nceputul sterilizrii / mL;

Nt este numrul microorganismelor vii prezente / mL dup o perioad de tratament .
Nt
e k
N0
Sterilizarea mediilor de cultur
Cinetica sterilizrii:
Viteza de distrugere:
depinde de temperatur - este att mai mare cu ct temperatura crete.

Reprezentri ale raportului microorganismelor supravieuitoare pentru o populaie

de microorganisme supus unei temperaturi letale pentru o anumit perioad de
timp.
Sterilizarea mediilor de cultur
Cinetica sterilizrii:
Observaie:
Relaiile anterioare permit determinarea duratei procesului de sterilizare pentru
orice valoare a gradului de sterilizare. Pentru acelai grad de sterilizare, timpul
de expunere variaz semnificativ la diferene mici de temperatur.

spori de Escherichia coli spori de Bacillus stearothermophilus

Sterilizarea mediilor de cultur
Cinetica sterilizrii - sterilizarea discontinu:

Se produce n perioada de nclzire, meninere i rcire, iar efectul total este

rezultatul cumulat al efectelor obinute n fiecare din aceste etape.
Ecuaia vitezei de distrucie termic a microorganismelor n sterilizarea
discontinu are forma:

Ea
dN
kN k 0 e RT N
d
sau
Ea
N0
ln k 0 e RT d
N 0

Rezolvarea ecuaiilor se face utiliznd relaii dintre timp i temperatur,

specifice procedeului aplicat vezi tabel.
Sterilizarea mediilor de cultur
Sterilizarea discontinu:
Diagrama timp-temperatur
t,0C

ts

tf

ti

incalzire mentinere racire

ti temperatura iniial; tf temperatura final;

ts- temperatura de sterilizare
Sterilizarea mediilor de cultur
Sterilizarea continu a mediilor de cultur:
Avantaje:
conservarea mai bun a calitii materialului supus sterilizrii;
aparatur cu gabarit redus;
capacitate necesar mai mic a instalaiei de producere a aburului;
uor de adaptat la capaciti mai mari;
reducerea duratei de sterilizare;
control automat;
realizarea unor randamente superioare n faza de fermentaie.

Dezavantaje:
costuri de investiie mai mari;
risc mai mare de contaminare;
control manual greu de realizat;
eficien mai sczut n cazul mediilor cu viscozitate mare (coninut mare
de solide).
Instalaii de sterilizare direct (prin injecie de abur):
Sistemul de nclzire direct:
- presupune amestecarea produsului cu abur sub presiune;
- aburul, prin condensare, cedeaz foarte rapid cldura;
- este asociat cu un sistem de rcire direct, care se realizeaz prin detenta
produsului sub vid, operaie care decurge rapid;
Avantaj: - timpul foarte scurt de nclzire i rcire.
- poate fi aplicat att pentru tratamente termice de pasteurizare, ct i de
sterilizare, i n special pentru sterilizare UHT.
Dezavantaje:
- poate genera fenomenul de spumare;
- produce diluarea mediului prin condensarea aburului.

Caracteristici:
aburul este injectat n produs la presiune ridicat - pn la 9.7 bar;
temperaturi cuprinse ntre 95180 C;
vscoziti ale produselor de pn la 100 Pas.
Instalaii de sterilizare direct prin injecie de abur:
Instalaie de sterilizare la 135 - 140 0C prin injecie de abur

1.- ventil; 2.- serpentina de meninere; Diagrama timp-temperatur

3.- valv de expansiune; 4.- vas de detent

- aburul este introdus n instalaie n mod continuu printr-un injector, pentru o nclzire rapid;
- dup atingerea palierului de temperatur (de ex. dup un timp de 2.5 s), produsul este rcit
prin detent (de ex. ntr-o incint n care depresiunea este 0.3 bar pentru a corespunde unei
temperaturi de 70 C).
Instalaii de sterilizare direct prin infuzie de abur
Caracteristici:
produsul este introdus ntr-o camer cu atmosfer de abur sub presiune;
proces de nclzire foarte rapid, fr supranclziri locale;
presiunea de lucru este de pn la 5.5 bar;
capacitatea de 100 - 18000 l/h;
temperatura tratamentului termic este 95 -150 0C;
se poate folosi pentru produse cu vscozitate de pn la 100 Pa s;

Avantaje:
nclzire blnd a produsului;
absena fenomenului de cavitaie;
posibilitatea de dezaerare n timpul nclziri;
evitarea arderii produsului;
lipsa contactului ntre oel i produs n timpul nclzirii (pericol de degradare a
proteinelor);
posibilitatea regenerrii energiei;
flexibilitate.

Dezavantaje:
poate genera fenomenul de spumare;
produce diluarea mediului prin condensarea aburului.
Instalaii de sterilizare direct prin infuzie de abur:
Instalaie de sterilizare continu la 120 - 125 0C:

1.- coloana de sterilizare; 2.- menintor; 3.- rcitor Diagrama timp-temperatur

Instalaii de sterilizare cu sistem de nclzire indirect
cu schimbtoare de cldur cu plci:

Avantaje:
posibilitatea realizrii unor coeficieni de transfer mari;
posibilitatea recuperrii cldurii prin nclzirea produsului netratat cu cel care
a fost deja pasteurizat, n acelai echipament;
compacte;
pot fi construite din materiale rezistente la coroziune;
rezist la presiune ridicat, se pot asambla i dezasambla uor.
lucreaz cu o eficien regenerativ de 90 - 93%;
realizeaz tratamentul termic HTST (High Temperature Short Time) sau UHT
(Ultra High Temperature).
Instalaii de sterilizare cu sistem de nclzire indirect
Instalaie de sterilizare la 1400C prin schimbtoare de
cldur cu plci

1.- rcitor; 2.- prenclzitor; Diagrama timp-temperatur

3.- sterilizator; 4.- serpentin de meninere
Sterilizarea aparaturii de biosintez
- sterilizarea cu abur saturat, introdus direct n aparat, prin toate tuurile, cu
excepia celui de evacuare a aerului, prin care se evacueaz lent;

- se menine o suprapresiune
n fermentator timp de
aproximativ 20 de minute,
dup care se nlocuiete cu
aer steril, avnd grij s se
menin suprapresiunea
pentru a evita crearea de
vid i aspirarea de aer
nesteril;

- transvazarea mediului
sterilizat, respectiv a
culturii de inocul trebuie
realizat, de asemenea, n http://www.fermentor.co.in/fermentor-bioreactor.html
condiii sterile.
Sterilizarea aerului
Majoritatea proceselor fermentative sunt procese aerobe, n care necesarul de aer
variaz ntre 60 i 120 m3 aer/ m3mediu h.
Numrul mare de microorganisme prezente n aer, precum i debitele mari de aer
creeaz serioase probleme n asigurarea unei steriliti corespunztoare.
n cazul sterilizrii aerului, cele mai utilizate procedee sunt cele bazate pe filtrare pe
medii poroase ca:
- fibre de sticl cu diametrul de 5-18;
- membrane de nitrat de celuloz;
- folii de teflon, singur sau n amestec cu polietilen, cu un caracter hidrofob i
rezisten termic ridicat;
- poliamid, avnd un caracter hidrofob, rezisten termic mare, elasticitate i
durabilitate.

Cele mai utilizate filtre n practica industrial sunt:

filtrul cu fibr de sticl;
filtrul disc cu membran;
filtrele lumnare.
Sterilizarea aerului
Filtru cu fibr de sticl:

Avantaje:
debite mari de aer;
grad avansat de purificare;
durat lung de
funcionare;

Dezavantaje:
manoper complicat;
pierderea aciunii de
sterilizare dup umezirea
materialului filtrant.
1.- plac perforat; 2.- plas de srm;
3.- garnitur; 4.- material filtrant; 5.-
ram
Sterilizarea aerului
Filtru disc cu membran:
Avantaje:
membranele utilizate sunt
confecionate din materiale
microporoase (diametru
pori sub 0,2);
dac materialul membranei
are caracter hidrofob,
umiditatea nu deranjeaz;
permite utilizarea i ca filtru
de ieire.
Dezavantaje:
1.- sit suport; 2.-
productivitate redus,
membran; 3.- carcas
datorit suprafeei mici de
filtrare;
durat relativ scurt de via
a membranei.
Sterilizarea aerului
Filtru lumnare:

Avantaje:
durat mare de funcionare
(pn la 200 de sterilizri
termice n timp de 3,5-4 ani);

Dezavantaje:
costuri ridicate.

1.- carcas; 2.- membran; 3.-

ventil de aerisire; 4.- garnituri
de etanare
 Performanele sterilizrii aerului prin filtrare

Caracteristicile filtrrii Strat de fibre de Membrane de

sticl 0,2-0,45
Reinerea absolut a contaminanilor Nu Da
Capacitatea de ndeprtare a impuritilor nalt Sczut
Eficacitatea reinerii particulelor mici nalt nalt
Eficacitatea reinerii depinde de viteza de Da Nu
curgere i presiune
Posibiliti de strpungere Da Nu

Schema de purificare i sterilizare a aerului

1.- filtru; 2.- compresor; 3.- rcitor; 4.- separator de picturi; 5 i 6.- filtre cu material fibros