LDH-L
C Para la determinacin de lactato deshidrogenasa en
SIGNIFICACION CLINICA
La determinacin de la actividad lactato deshidrogenasa
(LDH) tiene una gran variedad de aplicaciones clnicas. Por
ser una enzima intracelular, su elevacin es ndice de dao
tisular con la consecuente liberacin de sta a la circula-
cin. El dao puede variar desde una simple anoxia con
ligero dao celular y prdida de citoplasma hasta necrosis
celular severa generando diversos grados de elevacin de
la actividad enzimtica.
En el infarto agudo de miocardio, la actividad de LDH total
(junto con las CK y AST), constituye un elemento importante
de diagnstico. La misma comienza a elevarse 12-24 horas
despus de producido el infarto; alcanza un pico entre las 48-
72 horas y permanece elevada hasta el sptimo o dcimo da.
Tambin se registra un aumento de actividad de LDH total
en pacientes con necrosis heptica (producida por agentes
txicos o por infeccin aguda como la hepatitis viral) e incluso
acompaando a necrosis tubular renal, pielonefritis, etc. En
los tumores sanguneos como leucemias y linfomas tambin
se observan valores aumentados de la LDH.
En el lquido cefalorraqudeo (LCR) el valor normal es de
aproximadamente el 10% de su valor en suero, aumentando
marcadamente su valor en meningitis bacterianas. En las
meningitis virales la LDH aumenta su valor solo en el 10%
de los casos.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El mtodo se basa en el siguiente esquema de reac-
cin:
LDH
L-lactato + NAD+ piruvato + NADH + H+
La velocidad de formacin de NADH es directamente pro-
porcional a la actividad cataltica de la LDH y se determina
midiendo el aumento de la absorbancia a 340 nm.
Las concentraciones del ensayo estn optimizadas de
acuerdo a los procedimientos de referencia para la me-
dicin de la actividad cataltica de las enzimas a 37oC
descriptos por la Federacin Internacional de Qumica
Clnica (IFCC)
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: solucin de metilglucamina (MEG) 400 mM
y lactato 61 mM; pH 9,4 a 37oC.
B. Reactivo B: solucin conteniendo NAD 61 mM.
REACTIVOS NO PROVISTOS
- Calibrador A plus de Wiener lab.
- Solucin fisiolgica (NaCl 9 g/l).
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suero, plasma y lquido cefalorraqudeo
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivos Provistos: listos para usar.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro".
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de qumica clnica.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
acuerdo a la normativa local vigente.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Una vez
abiertos, no deben permanecer destapados ni fuera del refri-
gerador por perodos prolongados. Evitar contaminaciones.
Proteger de la luz directa.
MUESTRA
Suero, plasma o LCR
a) Recoleccin: obtener el suero de la manera habitual, libre
de hemlisis. Tambin pueden usarse plasma o LCR. El plas-
ma debe estar libre de hemlisis y de clulas ya que las pla-
quetas poseen elevadas concentraciones de LDH. El plasma
recogido en tubos primarios de acuerdo a las instrucciones del
fabricante puede contener clulas en suspensin, generando
resultados falsamente aumentados. Se recomienda transferir
el plasma a un tubo secundario y centrifugar.
b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plas-
ma, se recomienda el uso de heparina como anticoagulante.
Tambin puede utilizarse EDTA o citrato. En caso de utilizar
EDTA, se ha demostrado que puede disminuir la actividad
de la LDH hasta un 10%.
c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan
interferencias por triglicridos hasta 1400 mg/dl, bilirrubina
hasta 30 mg/dl. La hemoglobina interfiere significativamente
en todo su rango de concentraciones por lo que se recomien-
da usar muestras libres de hemlisis.
Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las
drogas en el presente mtodo.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento:
separar el suero o el plasma del cogulo o de las clulas y
efectuar el test inmediatamente. En caso de no procesarse
en el momento, puede conservarse 7 das a 20-25oC, 4 das
a 2-10oC o 6 semanas a -20oC.
MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
- Micropipetas para medir los volmenes indicados
- Analizador automtico

PROCEDIMIENTO
(Analizador automtico)
A continuacin se detalla un procedimiento general para
LDH-L en un analizador automtico. Cuando se imple-
mente la tcnica en un analizador en particular, siga
las instrucciones de trabajo del mismo. En una cubeta
mantenida a la temperatura elegida, colocar:
Muestra o Calibrador 4 ul
Reactivo A 100 ul
Incubacin durante 300 segundos a 37oC
Reactivo B 20 ul
Incubacin durante 120 segundos a 37 C. o
[LDH] = (A/min) x factor; NAD/NADH = 6230 M-1 cm-1
Los analizadores Wiener lab. calculan automticamente
la actividad de LDH de cada muestra.
CALIBRACION
El mtodo LDH-L fue estandarizado frente a la frmula
original del IFCC usada como referencia.
El Calibrador A plus es procesado de la misma manera
que las muestras y a partir de l se calcula el factor corres-
pondiente.
Se recomienda usar calibracin a dos puntos despus de
cambiar lote de reactivo y cuando el control de calidad lo
requiera.
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Procesar 2 niveles de un material de control de calidad
(Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas de
lactato deshidrogenasa, con cada determinacin.
VALORES DE REFERENCIA
Adultos 135 -240 U/l
Nios (2 - 15 aos) 120 -300 U/l
Recin nacidos (4 a 20 das) 240 - 600 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia, teniendo en cuenta sexo, edad, hbitos
alimenticios, medicacin y otros factores de su poblacin.
CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI
LDH (U/l) x 0,0167 = LDH (ukat/l)
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Las muestras de plasma deben ser centrifugadas previa-
mente a realizar el ensayo.
Para preservar la integridad de los reactivos deben evitarse
todo tipo de contaminaciones, empleando para la medicin
nicamente micropipetas perfectamente limpias y secas.
Se recomienda utilizar Standatrol S-E 2 niveles de Wiener
lab, como material de control de calidad, ya que con controles
de otras marcas comerciales pueden obtenerse valores dife-
rentes al rango especificado, dado que los mismos dependen
del mtodo o sistema utilizado.
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PERFORMANCE
a) Reproducibilidad: procesando simultneamente repli-
cados de una misma muestra, se obtienen los siguientes
valores:
Nivel D.S. C.V.
150 U/l 2,69 U/l 1,8 %
250 U/l 3,75 U/l 1,5 %
b) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 1000 U/l. Para
valores superiores, diluir la muestra 1+4 partes con solucin
fisiolgica (NaCl 9 g/l), repetir la determinacin y multiplicar
el resultado por el factor de dilucin.
c) Lmite de deteccin: 4 U/l.
d) Lmite de cuantificacin: 20 U/l.
PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
Para las instrucciones de programacin consultar las adap-
taciones correspondientes a los analizadores de la lnea
Wiener lab para el mtodo LDH-L. Para la calibracin debe
utilizarse Calibrador A plus de Wiener lab.
PRESENTACION
120 ml: - 1 x 100 ml Reactivo A
- 1 x 20 ml Reactivo B
(Cd. 1999726)
120 ml: - 2 x 50 ml Reactivo A
- 2 x 10 ml Reactivo B
(Cd. 1009213)
150 ml: - 2 x 60 ml Reactivo A
- 2 x 15 ml Reactivo B
(Cd. 1009364)
150 ml: - 2 x 60 ml Reactivo A
- 2 x 15 ml Reactivo B
(Cd. 1009625)
BIBLIOGRAFIA
- Conmutable Calibrador with Value Assigned by the IFCC
Reference Procedure. Clinical Chemistry 54/8:1349-1355,
2008.
- IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement
of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37oC.
Clin. Chem. Lab. Med. 40/6:643-648, 2002.
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 4th ed., 2001.
- Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement
Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline.
CLSI EP6-A Vol. 23 N 16, 2003.
- Method Comparison and Bias estimation Using Patient
Samples; Approved Guideline - Second Edition. CLSI
EP9-A2 Vol. 22 N 19, 2002.
- Protocols for Determination of Limits of Detection and
Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI EP17-A
Vol. 24 N 34, 2004.
- J. Vzquez, M. Adducci, D. Monzn, K. Iserson - Journal
of Emergency Medicine, 37/1:93-97, 2009.
Smbolos
Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnstico "in vitro"
M Elaborado por:

P
Xn

Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnstico "in vitro"

Corrosivo / Castico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Xi

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Lmite de temperatura (conservar a)

No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biolgico

Volumen despus de la reconstitucin

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Nmero de lote h Nmero de catlogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944

Wiener lab.
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Tc.: Viviana E. Ctola
Bioqumica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
PM-1102-70 2000 Rosario - Argentina
864107100 / 02 p. 3/6 UR130916