MTODOS PARA LA DETERMINACIN

DE COMPUESTOS FENLICOS Y
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
1. DETERMINACIN DE COMPUESTOS FENLICOS

1.1 PREPARACIN DE LA CURVA ESTNDAR

A) PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE CIDO GLICO 0.5g/L

Sal de Acido glico

0.5 g Pesar Balanza analtica

Agua:
1L Disolucin Fiola de 1L

B) PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE CARBONATO DE SODIO AL

20%

Na2CO3

100 gr Pesar Balanza analtica

Agua: 500mL Disolucin Fiola de 500 mL

 Sol Madre. Ac. glico 0.5g/L
Tomar alcuotas de mL

10 20 30 50

Enrazar hasta 100mL con agua Fiola 100mL

destilada por alcuota

50 100 150 250

Diluciones Finales
mg/L mg/L mg/L mg/L

Toma de alcuota por dilucin Fiola 100mL

1mL
5mL de Folin 2N,
Adicin de reactivos para
20mL de Na2CO3 al Fiola 100mL
lectura de polifenoles
20% enrazar con
agua destilada

Reaccin 30 min

Lectura de la Absorbancia 725 nm espectrofotmetro

USAR COMO BLANCO 5ml de folin, 20ml de Na2CO3 al 20% y

completar con agua hasta 100mL
 1.2 DETERMINACIN DE COMPUESTOS FENLICOS EN EL ACEITE

1.2.1 Tratamiento de la muestra de aceite.

Aceite

Pesar

Hexano 20ml Mescla 1 beacker

Metanol: Agua 40:60 Pera de decantacin

Mescla 2
50ml en tres
fracciones: 15,15 y 20

M21 M22 M23

Enrazar con Metanol:

Mescla final Fiola 50 mL
Agua 40:60

Toma de alcuota

1mL
5mL de Folin 2N,
Adicin de reactivos para
20mL de Na2CO3 al Fiola 100mL
lectura de polifenoles
20% enrazar con
agua destilada

Reaccin 30 min en oscuridad

Los resultados se harn por triplicado

y se expresaran en mg AGE/Kg Lectura de la Absorbancia 725 nm espectrofotmetro

USAR COMO BLANCO 5ml de folin, 20ml de Na2CO3 al 20% y

completar con agua hasta 100mL
2. DETERMINACIN DE CAPACIDAD ANTIOXIDANTE MTODO DPPH

2.1 PREPARACIN DE REACTIVOS PARA EL ANLISIS

A) Preparacin de la disolucin madre y trabajo del radical DPPH 7.4mg/ml

DPPH

Pesar Balanza analtica

7.4 mg

100 mL de metanol Disolucin Fiola 100ml

Logra estabilidad
despus de 12 h

Preparacin de la disolucin de trabajo DPPH: Para ello

se tomar aproximadamente entre 30mL de DPPH y 5
mL de Me OH, lo cual deber dar una absorbancia de
1.8 a 520nm, si esta es mayor an se adicionar ms Me
OH y si es mayor disolucin madre DPPH.
 2.2 PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRACIN

Trolox 10 mg en fiola de 10 mL enrazado con metanol. SOLUCIN MADRE

SOLUCIN MADRE
1mL

Solucin Diluida Diluir en una fiola de 10 mL con metanol

Se toman alcuotas

0.5 1 2 4 6 8 10 mL

Diluir en una fiola de 10 mL con metanol

Tomar alcuotas
por concentracin

400L Tubo de ensayo

3mL de dilucin
Reaccin 60 min
de trabajo DPPH

Lectura de la Absorbancia. Se 520 nm espectrofotmetro

usar metanol como blanco, min
2.3 DETERMINACIN DE CAPACIDAD ANTIOXIDANTE EN EL
ACEITE
2.3.1 Tratamiento del aceite.

Aceite de uva 2g

2
.
3
.
2

L
e
c
t
u
r
a

d
e

l
a

c
a
p
a
c
i
d
a
d

antioxidante.

De la fase metanlica se tomar 400 L y se colocar en un tubo de ensayo luego se

adicionar 3mL de la disolucin de trabajo DPPH, se vortear por 30 segundos y luego
se dejara reposar en oscuridad por 60 min, luego se har la lectura respectiva de su
absorbancia a 520nm . Se usar como blanco metanol.

Los resultados se harn por triplicado

y se expresaran en mmoles trolox/Kg
3. DETERMINACIN DE CAPACIDAD ANTIOXIDANTE MTODO DPPH

3.1 PREPARACIN DE REACTIVOS PARA EL ANLISIS

A) Disolucin ABTS

Sal ABTS

Pesar Balanza analtica

0.096g

Agua:
25mL Disolucin Fiola de 25mL

B) Disolucin de Persulfato de potasio 140mM

Sal K2S2O8

Pesar Balanza analtica

0.945g

Agua:
25mL Disolucin Fiola de 25mL

C) Preparacin del radical ABTS

ABTS 7mM K2S2O8 140mM

5mL 88L

Reaccin. La estabilidad lo
alcanza de 12-16 h a temperatura
ambiente y en oscuridad
 D) Preparacin de la disolucin de trabajo del radical ABTS

Del radical o solucin madre de ABTS, se tomar 1mL de

esta ms 60 mL de etanol, llegando a una absorbancia de
0.70 0.02 a 734nm, si estuviera alta la absorbancia de
adicionar ms etanol o si estuviera baja ms solucin madre
ABTS.

3.2 PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRACIN

Preparacin de Trolox a 5mM

Trolox 12.5 mg en fiola de 10 mL enrazado con metanol. SOLUCIN MADRE

Formacin de la curva

SOLUCIN MADRE
1mL

Solucin Diluida Diluir en una fiola de 10 mL con metanol

Se toman alcuotas

0.5 1 2 4 6 8 mL

Diluir en una fiola de 10 mL con metanol

Tomar alcuotas
por concentracin

100L Tubo de ensayo

2mL de dilucin
Reaccin 30 min en oscuridad
de trabajo ABTS

Lectura de la Absorbancia. Se 734 nm espectrofotmetro

usar etanol como blanco,
3.3 DETERMINACIN DE CAPACIDAD ANTIOXIDANTE EN EL ACEITE

3.3.1 Tratamiento de la muestra

El aceite se diluir en hexano en una relacin 1:4. Es decir 20L de aceite en

80L de hexano.

3.3.2 Lectura de la capacidad antioxidante de la muestra

Aceite + hexano (1:4)

100L

2mL de Reaccin Tubo de ensayo

30 min, oscuridad
ABTS

Lectura de la absorbancia 734nm espectrofotmetro

se usar el etanol como
blanco.

Los resultados se harn por triplicado

y se expresaran en mmoles trolox/Kg