Universidad central
Biorremediacin asistida de hidrocarburos procedentes de petrleo mediante
scenedesmus obstusus
Julieth Andrea patino 1
Resumen
Mediante este estudio se pretende Degradar
hidrocarburos procedentes de petrleo
mediante Scenedesmus obtusus. La presente
invencin se refiere a una cepa de microalga
de la especie Scenedesmus obtusus, que
degrada hidrocarburos como los procedentes
del crudo de petrleo y sus derivados. La
presente invencin proporciona una cepa
microalgal, aislada en la naturaleza y
biolgicamente pura, capaz de eliminar
mezclas complejas de hidrocarburos
procedentes del petrleo y sus derivados.
Dicha cepa degrada de manera eficaz, entre
otros, hidrocarburos altamente txicos
procedentes del petrleo como los
hidrocarburos aromticos tipo BTEX.
Tambin es objeto de la presente invencin,
proporcionar un procedimiento de
biorremediacin para la degradacin del
crudo de petrleo, de los hidrocarburos
presentes en ste y sus derivados en el agua,
basado en el empleo de dicha cepa
microalgal. (ESPAA Patente n 2 356 950,
2011)
Introduccin
El manejo inadecuado de los materiales y
residuos peligrosos ha generado a escala
mundial, un problema de contaminacin de
suelos, aire y agua. En el suelo los
hidrocarburos impiden el intercambio
gaseoso con la atmsfera, iniciando una serie
de procesos fisicoqumicos simultneos
como evaporacin y penetracin, que
dependiendo del tipo de hidrocarburo,
temperatura, humedad, textura del suelo y
cantidad vertida puede ser ms o menos
lentos, ocasionando una mayor toxicidad,
1
adems de tener una moderada, alta o
extrema salinidad, dificultando su
tratamiento. Altos gradientes de salinidad
pueden destruir la estructura terciaria de las
protenas, desnaturalizar enzimas y
deshidratar clulas, lo cual es letal para
muchos microorganismos usados para el
tratamiento de aguas y suelos contaminados.
En los ltimos aos se han desarrollado
tecnologas que emplean microorganismos
para la eliminacin de contaminantes en el
medio ambiente. Estas tecnologas,
englobadas en el campo de la
biorremediacin, buscan preferentemente la
degradacin completa de los contaminantes,
bien mediante la estimulacin de las cepas
de microorganismos presentes en medio
receptor del vertido, o bien mediante el
inoculo de cepas de microorganismos con
capacidad para biodegradar los
contaminantes. Los microorganismos, ya
sean aislados directamente de la naturaleza,
u obtenidos mediante biotecnologa, juegan
un papel central en la biorremediacin de los
contaminantes, y por ello existe un gran
inters en disponer de nuevos
microorganismos con capacidad para
eliminar y degradar los contaminantes del
petrleo y sus derivados. (Ronald Ferrera-
Cerrato, 2006)
La biorremediacin asistida con microalgas
resulta particularmente atractiva debido a su
capacidad fotosinttica, que les permite
convertir la energa solar en biomasa, misma
que incorpora nutrientes como nitrgeno y
fsforo causantes de la eutroficacin. Los
procesos que utilizan microalgas y
cianobacterias, estn enfocados
principalmente a la remocin de nutrientes y
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de metales pesados presentes en las aguas industriales. La presente invencin se refiere
residuales. a una nueva cepa de microalga,
perteneciente al genero Scenedesmus, y
La invencin se encuadra en el sector de las
concretamente de la especie Scenedesmus
tecnologas ambientales para el control,
obtusus, como se puede apreciar en la
tratamiento y prevencin de la
siguiente imagen N1.
contaminacin, y ms concretamente en el
sector de la biorremediacin y la
degradacin biolgica de hidrocarburos y
derivados del crudo de petrleo.

APECTOS PRINCIPALES

Tratamiento, utilizacin de cepa microalgal

Esta intervencin pretende contribuir en la

disminucin de problemas Imagen N1, Scenedesmus obtusus
medioambientales asociados con el vertido
Tambin denominada So3P, y caracterizada
incontrolado o accidental de petrleo y el
por una elevada capacidad de tolerancia y
tratamiento de efluentes de plantas
degradacin de petrleo y los hidrocarburos
industriales que contienen hidrocarburos,
presentes en el mismo y sus derivados.
principalmente en medios acuosos, mediante
la utilizacin de una cepa microalgal que Dicha cepa de microalga supone un
elimina hidrocarburos procedentes de importante avance respecto a los
petrleo. (Ronald Ferrera-Cerrato, 2006) microorganismos degradadores de petrleo
conocidos y, por tanto, una considerable
Esta invencin se basa en el hallazgo
mejora tcnica para la biorremediacin de
inesperado de un peculiar afloramiento
crudo de petrleo e hidrocarburos
natural de crudo de petrleo, que
principalmente en medios acuticos. Las
permanece inalterado al menos desde el ao
microalgas del gnero Scenedesmus son
1915. Se da la circunstancia de que dicho
organismos fotoauttrofos facultativos, con
afloramiento se ha mantenido hasta fechas
caractersticas ventajosas tpicas de este
recientes vertiendo continuamente crudo
gnero como son: su ubicuidad, versatilidad
sobre un pequeo arroyo llamado Arroyo
metablica, elevada capacidad adaptativa y,
Minero. Los inventores observaron que dicho
sobre todo, su facilidad de cultivo. Por otro
arroyo presentaba una singular capacidad de
lado, la cepa So3P de S. obtusus presenta
autodepuracin, de forma que en cuestin
algunas caractersticas adicionales muy
de unos 250 metros, la totalidad del crudo
interesantes en relacin con su capacidad de
vertido en el punto de entrada al arroyo
biorremediacin de hidrocarburos, como su
haba desaparecido. Los inventores piensan
capacidad para crecer, tolerar y degradar
que la autodepuracin natural que ocurre en
petrleo en condiciones heterotrficas
el Arroyo Minero tiene un origen biolgico,
utilizando los hidrocarburos del petrleo
mediado por microorganismos,
como fuente de carbono, y su capacidad para
concretamente microalgas, que pudieran
degradar hidrocarburos petrolferos
aplicarse en la biorremediacin de
completamente has CO2. (ESPAA Patente n
contaminantes tales como los vertidos de
2 356 950, 2011)
petrleo en aguas y suelos o los vertidos

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Se entiende por hidrocarburos petrolferos
una mezcla heterognea de compuestos
orgnicos que constituyen el crudo de
petrleo y sus derivados, tales como la
gasolina, queroseno, gasoil, etc.
Mayoritariamente son hidrocarburos
insolubles en agua, formados nicamente
por carbono e hidrgeno con distinto grado
de saturacin y conformacin (lineal o
cclica), aunque tambin incluye una fraccin
de hidrocarburos con oxgeno, azufre,
nitrgeno y otros elementos. En el contexto
de la presente invencin se entiende por
BTEX la mezcla de hidrocarburos petrolferos
que comprende principalmente benceno,
tolueno, etilbenceno y xileno. Por
biorremediacin se entiende un conjunto de
tcnicas basadas en el empleo de organismos
vivos para la eliminacin de contaminantes.
En el contexto de la presente invencin, la
biorremediacin se refiere al empleo de
microorganismos acuticos como las
microalgas, mientras que la eliminacin de
contaminantes est dirigida
preferentemente a la degradacin de los
hidrocarburos petrolferos. En el sector de la
tcnica, una muestra de crudo de petrleo o
de cualquiera de los derivados del petrleo
se caracteriza por su contenido en
hidrocarburos totales, siendo ste el
parmetro que habitualmente se determina
para monitorizar la biorremediacin de
vertidos y efluentes contaminados por
petrleo y sus derivados.
Localizacin
Se pretende realizar, en los ros, Caunap,
Rosario (Colombia) ya que han reportado
afectaciones debido a contaminacin
causada por ataques contra la
infraestructura petrolera y la instalacin de
vlvulas ilegales en el Oleoducto Trasandino.
(sala humanitaria.com, 2015)La cepa So3P de
S. obtusus objeto de la presente invencin
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presenta una enorme tolerancia y una gran
capacidad de degradacin de hidrocarburos
tales como los presentes en el petrleo o
efluentes industriales contaminados con
petrleo. Por ello, esta cepa puede ser de
enorme inters comercial para su aplicacin
industrial, ya que pueden obtenerse y
dispensarse inculos de clones de la cepa
para su empleo directamente sobre entornos
naturales contaminados por un vertido
incontrolado o accidental de crudo de
petrleo y cualquiera de sus derivados, o
para su empleo en dispositivos tales como
biorreactores o biofiltros en los que la cepa
queda confinada en un espacio o soporte por
el que se hace fluir el medio o efluente
contaminado con hidrocarburos
Aspectos principales para invencin
Se entiende por cepa o clon, un conjunto de
microalgas genticamente idnticas
obtenidos como resultado de reproduccin
asexual; y por inoculo, un pequeo conjunto
de clulas de un clon, empleadas para fundar
un cultivo mayor.
La presente invencin se refiere a una cepa
de microalga para la biorremediacin de
medios contaminados por hidrocarburos
procedentes de crudo de petrleo y sus
derivados, caracterizada porque pertenece a
la especie Scenedesmus obtusus (imagen
N1), y porque presenta la capacidad de
degradar hidrocarburos presentes en el
petrleo y sus derivados; Un aspecto
particular de la presente invencin se refiere
a un clon biolgicamente puro y
genticamente idntico de la cepa de S.
obtusus, que se encuentra depositada en el
Banco Nacional de Algas con nmero de
acceso BNA D33_09, fecha de aceptacin de
16 de abril de 2009, y bajo la denominacin
de cepa So3P. Otro aspecto particular de la
presente invencin se refiere a cualquier
cepa mejorada genticamente obtenida a
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partir de un clon de la cepa So3P de S.
obtusus.
El principal aspecto caracterizador de la cepa
So3P de S. obtusus es su capacidad para
tolerar y degradar petrleo en amplios
rangos de concentracin en el medio. En
condiciones de laboratorio, So3P de S.
obtusus es capaz de degradar petrleo en
porcentaje superior al 30% v/v de la muestra.
En un medio con un 5% v/v de petrleo,
So3P de S. obtusus es capaz de degradar ms
del 50% del petrleo en 13 das como se
observa en la imagen N2;
Imagen N2 (ESPAA Patente n 2 356 950,
2011)
Caractersticas morfolgicas
Se caracteriza por la formacin de cenobios
de 2, 4 u 8 clulas conectadas entre s ,a
distancias cortas y formando fascculos .Los
ncleos de las clulas no coinciden con el eje
del cenobio, y algunas clulas estn
ligeramente desplazadas en los fascculos.
Son clulas ovaladas con dimetros mayores
de 7,5 y dimetros menores de hasta 6,5
, usualmente de 4 . En condiciones
idneas de cultivo, dicha cepa se caracteriza
por velocidades de crecimiento de hasta 1
divisin por da. Dicha cepa tambin se
caracteriza por su facilidad de cultivo, siendo
cultivable en una gran variedad de medios
lquidos que contengan un aporte mnimo de
nutrientes, y por su tolerancia a amplios
rangos de pH (entre 4 y 9), temperatura
(entre 10 y 30 C) e iluminacin (entre 30 y
700 pmol/m2s), siendo las condiciones ms
adecuadas para su crecimiento una
temperatura de 22 C, un pH de 8.2, y una
intensidad luminosa de 60 pmol/m s.
Un clon de S. obtusus se ha obtenido por un
procedimiento de aislamiento que
comprende:
- Dilucin de una muestra recogida en un
medio acutico que durante un tiempo
prolongado ha recibido un vertido contino
de petrleo;
- Aislamiento de clulas seleccionadas una a
una, mediante aspiracin con un
micromanipulador-microinyector;
- Crecimiento activo de estas clulas en un
medio con un 10% v/v de petrleo en medio
BG- 1 hasta constituir una serie de cultivos
clnicos; (ESPAA Patente n 2 356 950,
2011)
- Seleccin del clon ms eficiente en cuanto a
degradacin de petrleo y capacidad de
crecimiento. Por dicho procedimiento se ha
obtenido un clon puro de la cepa So3P
objeto de patente. Tambin es objeto de la
presente invencin un dispositivo para la
degradacin de petrleo, o alguno de los
hidrocarburos presentes en el petrleo, o en
efluentes industriales, que contenga un
inoculo de la cepa So3P de S. obtusus
confinado en un espacio o soporte fsico. En
una realizacin particular de la presente
invencin, el inoculo se encuentra
inmovilizado en dicho soporte fsico. En una
realizacin an ms particular de la presente
invencin, dicho soporte fsico comprende al
menos un material silceo, celulsico,
plstico, material sinttico o material
orgnico. En una realizacin an ms
particular de la presente invencin, dicho
material comprende al menos un compuesto
de entre silicona, poliuretano, polister,
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polisulfonato, polivinilo, poliamida, acetato
de celulosa, resinas epoxy, carrgeno, agar,
alginato, carraginato o colgeno. Tambin es
objeto de la presente invencin un
procedimiento de biorremediacin de
petrleo e hidrocarburos petrolferos
mediante el empleo de la cepa So3P de S.
obtusus
MATERIALES Y METODOS
Para la realizacin particular de la presente
invencin, el procedimiento de degradacin
de petrleo e hidrocarburos procedentes del
petrleo mediante el empleo de la cepa So3P
de S. obtusus comprende las etapas de:
a) Neutralizacin y acondicionamiento del
medio a tratar para ajustar las condiciones
ambientales del medio a los intervalos
favorables de crecimiento de dicha cepa;
b) Inoculacin del medio con clones de dicha
cepa;
c) Cultivo de dichos clones
d) Monitorizacin de la degradacin de los
hidrocarburos procedentes del petrleo.
En una realizacin particular de la presente
invencin el medio a tratar no se inocula
directamente, si no que se pone en contacto
con un dispositivo que contiene un inoculo
de la cepa So3P de S. obtusus confinado en
un espacio o soporte fsico. En una
realizacin particular de la presente
invencin, la etapa de neutralizacin y
acondicionamiento del medio a tratar en el
procedimiento de degradacin de petrleo e
hidrocarburos petrolferos mediante el
empleo de la cepa So3P de S. obtusus,
comprende uno o varios parmetros de
entre el pH, la temperatura, la concentracin
de oxigeno disuelto, la presin de flujo o la
velocidad de flujo. En una realizacin
particular, dicha etapa comprende el ajuste
del pH en un rango entre 7 y 8,5, y
5
preferentemente 8,2, la temperatura entre
10 y 30 C, y preferentemente 22, y la
iluminacin entre 30 y 700 pmol/m2s, y
preferentemente 60 pmol/m2s. En una
realizacin particular de la presente
invencin, el inoculo de la cepa So3P de S.
obtusus en el procedimiento de degradacin
de petrleo e hidrocarburos petrolferos
mediante el empleo de dicha cepa, contiene
al menos 103 clulas por mililitro. En una
realizacin an ms particular de dicha
invencin, dicho inoculo contiene al menos
106 clulas de So3P por mililitro.
En una realizacin preferente de la presente
invencin, el cultivo de los clones inoculados
en el procedimiento de degradacin de
petrleo e hidrocarburos petrolferos
mediante el empleo de la cepa So3P de S.
obtusus, incluye uno o varios ciclos
consistentes en la retirada de la biomasa
microalgal generada en el cultivo y la
inoculacin de nuevos clones de dicha cepa.
De esta forma se puede mantener el cultivo
de la cepa en crecimiento exponencial
durante el procedimiento de degradacin.
(ESPAA Patente n 2 356 950, 2011)
Mtodo a tratar
Para los ensayos de degradacin de petrleo
se emple un estndar de petrleo
certificado (Fluka Analytical Petroleum
Special; Fluka Chemie AG, Buchs, Swizerland;
ref: 77370) sonicado y diluido al 5% v/v en
medio de cultivo BG-11 (Sigma Aldrich
Chemie, Taufkirchen, Germany). Los ensayos
se prologaron durante 13 das. El da 0 se
prepararon 10 frascos de 100 ml de los
cuales 5 de ellos, (controles) contenan una
mezcla sonicada de 5 ml de Petrleo Fluka
Analytical Petroleum Special (Fluka Chemie
AG, Buchs, Swizerland; ref: 77370). + 95 mi
de BG11 , mientras que los otros 5 contenan
una mezcla sonicada de 5ml de Petrleo
Fluka Analytical Petroleum Special (Fluka
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Chemie AG, Buchs, Swizerland; ref: 77370). + http://www.medigraphic.com/pdfs/l
45ml de BG 1 y 50 mi de cultivo de algas amicro/mi-2006/mi062s.pdf
(inoculo de la cepa So3P de S. obtusus
mantenida en fase exponencial de
crecimiento para obtener una concentracin
inicial de 5 x 106 clulas por mililitro). Los
frascos se introdujeron durante 13 das en
una cmara de cultivo en las siguientes
condiciones: iluminacin continua de 60-
pmol/m2s de una longitud de onda de 400-
700 nm proporcionada por un tubo
fluorescente tipo daylight (Phillips TLD
36W/33, France), a 20 C en cmaras de
cultivo (Cmaras de Crecimiento de Plantas,
Modelo AGP, Ing. Climas, C/ Industria 498-
500, Badalona 08918, Barcelona, Espaa). A
los 13 das se sacaron los frascos, filtrndose
su contenido mediante filtros de jeringa de
0,22 . De cada frasco se realizaron
extracciones sucesivas con CCU; los extractos
orgnicos fueron filtrados con sulfato sdico
anhidro para eliminar posibles restos de
agua, y se registr el espectro IR de la
muestra obtenida despus de este proceso,
para la medida de los hidrocarburos totales
remanentes en la muestra y el clculo de la
cantidad de petrleo degradada. (Lpez,
2014)

Bibliografa
COSTAS COSTAS, E. (2011). ESPAA Patente
n 2 356 950. Obtenido de
http://www.oepm.es/pdf/ES/0000/0
00/02/35/69/ES-2356950_B1.pdf

Lpez, J. R. (2014). Adaptacin de microalgas

a contaminantes.

Ronald Ferrera-Cerrato, N. G.-A. (2006).

Procesos de biorremediacin de
suelo y agua contaminados por
hidrocarburos del petrleo y. revista
latinoamericana microbiologia , 179-
187. Obtenido de