Quim. Nova, Vol. 27, No.

4, 655-660, 2004

PRODUTOS NATURAIS COMO CANDIDATOS A FRMACOS TEIS NO TRATAMENTO DO MAL DE

Divulgao
ALZHEIMER

Cludio Viegas Junior, Vanderlan da Silva Bolzani e Maysa Furlan

Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, CP 355, 14801-970 Araraquara - SP
Carlos Alberto Manssour Fraga* e Eliezer J. Barreiro
Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, CP 68006, 21941-590 Rio de Janeiro - RJ

Recebido em 28/7/03; aceito em 20/10/03; publicado na web em 27/05/04

NATURAL PRODUCTS AS CANDIDATES FOR USEFUL DRUGS IN THE TREATMENT OF ALZHEIMERS DISEASE.
Alzheimers disease (AD) is a progressive neurodegenerative pathology with severe economic and social impact. There is currently
no cure, although cholinesterase inhibitors provide effective temporary relief of symptoms in some patients. Nowadays drug
research and development are based on the cholinergic hypothesis that supports the cognition improvement by regulation of the
synthesis and release of acetylcholine in the brain. There are only four commercial medicines approved for treatment of AD and
natural products have played an important role in the research for new acetylcholinesterase inhibitors.

Keywords: Alzheimers disease; acetylcholinesterase; natural products.

INTRODUO associadas s funes mentais superiores, particularmente o crtex

A doena de Alzheimer: impacto social e fisiopatologia da
doena
A doena de Alzheimer (DA) uma desordem neurodegenerativa,
de grande impacto scio-econmico, responsvel por ca. 50-60% do
nmero total de casos de demncia dentre pessoas acima dos 65 anos1.
Esta patologia afeta cerca de 1,5% da populao em idade entre 65-
69 anos, 21% entre 85-86 e 39% acima dos 90 anos, acometendo
aproximadamente 15 milhes de pessoas em todo o mundo.
Nos Estados Unidos, considerada um dos principais proble-
mas de sade devido ao enorme impacto causado ao indivduo, fa-
mlias, sistema de sade e sociedade como um todo, uma vez que
metade dos pacientes so internados em instituies de sade. O res-
tante recebe tratamento em casa, envolvendo em seu cuidado, fami-
liares, parentes e amigos. Invariavelmente, o acompanhamento do
paciente traz um enorme stress emocional, psicolgico e financeiro
s famlias, uma vez que o tratamento caro e o paciente perde gra-
dualmente suas funes motoras e de aprendizado, passando a
no reconhecer os familiares mais prximos2.
Cientistas estimam que cerca de 4 milhes de pessoas possuem
esta doena e que sua incidncia duplica a cada 5 anos, aps os 65
anos de idade2. Alm disso, 4 milhes de americanos possuem 85
anos ou mais e, no pas mais industrializado do mundo, este grupo
etrio um dos segmentos da populao que mais cresce, devendo
atingir pelo menos 19 milhes de indivduos no ano de 2050, dos
quais metade poder desenvolver alguma forma de DA2. Um estudo
recente estima que o custo anual do tratamento de um paciente com
DA leve de U$ 18.408,00, U$ 30.096,00 para DA moderada e
U$ 36.132,00 para um paciente com DA severa2.
O processo degenerativo progressivo das funes psicomotoras
e cognitivas, descrito inicialmente pelo patologista alemo Alois
Alzheimer em 1907, dura cerca de 8,5-10 anos, desde o aparecimen-
to dos primeiros sintomas clnicos at a morte. As regies cerebrais
frontal e o hipocampo, so aquelas mais comprometidas pelas alte-
raes bioqumicas decorrentes de DA1,3,4. Dentre as causas mais
evidentes da gnese da doena esto a ocorrncia de deposio
extracelular de peptdeo -amilide (derivado do precursor amilide
de protena APP) em plaquetas senis e a formao errtica de
neurofibrilas intracelulares (contendo uma forma anormal,
fosforilada, de uma protena associada a microtbulos - TAU)1,4. Todo
este processo resulta em perda da funo neuronal e dano sinptico,
com subseqente comprometimento da memria, da coordenao
motora e do raciocnio, alm de perda da capacidade cognitiva e
demncia.
Em nvel celular, a DA est associada reduo das taxas de
acetilcolina (ACh) no processo sinptico, diminuindo a neuro-
transmisso colinrgica cortical, alm de outros neurotransmissores
como noradrenalina, dopamina, serotonina, glutamato e substncia
P em menor extenso5,6. Estudos mais recentes demonstraram ocor-
rncia de reduo do nmero de receptores nicotnicos e muscarnicos
(M 2) de ACh, muitos dos quais localizados nas terminaes
colinrgicas pr-sinpticas, havendo preservao dos receptores
muscarnicos (M1 e M2) ps-sinpticos1,2.
Biossntese, hidrlise e funo da acetilcolinesterase
A acetilcolina biossintetizada a partir da acetil-coenzima A
(acetil-CoA) e colina por ao da enzima colina-acetiltransferase
(Esquema 1)7 .
Esquema 1. Reao de biossntese de acetilcolina (ACh)

Este neurotransmissor encontrado no crebro e nas junes

*e-mail: cmfraga@pharma.ufrj.br, URL: http://www.farmacia.ufrj.br/lassbio neuromusculares, compondo parte do sistema nervoso parassimptico.
656 Viegas Jr. et al.
Seus efeitos incluem a contrao dos msculos lisos, dilatao dos
vasos sanguneos e regulao da taxa de batimentos cardacos; no c-
rebro est envolvido nas sinapses associadas ao controle motor, me-
mria e cognio7. Sua atividade e permanncia na fenda sinptica so
reguladas por hidrlise catalisada pela acetilcolinesterase (AChE), que
regenera a colina, seu precursor. O stio ativo da AChE composto por
uma trade cataltica composta por resduos de aminocidos serina (Ser-
200), histidina (His-440) e glutamato (Glu-327) (Figura 1). O meca-
nismo de hidrlise de AChE envolve o ataque nucleoflico da serina ao
carbono carbonlico da ACh, gerando um intermedirio tetradrico
estabilizado por ligaes de hidrognio, o qual produz colina livre e
serina acetilada. Ao final, a hidrlise do grupo acetila da serina pela
gua recupera o stio cataltico da enzima8 .
Figura 1. Viso do stio ativo da AChE e dos resduos de aminocidos que
constituem a trade cataltica
Terapia Colinomimtica da doena de Alzheimer
O fundamento da hiptese colinrgica est relacionado capaci-
dade de frmacos potencializadores da funo colinrgica central
induzirem melhora do perfil cognitivo e, tambm, de alguns efeitos
comportamentais oriundos pela doena. Vrias alternativas terapu-
ticas foram avaliadas no intuito de corrigir o dficit colinrgico em
portadores de DA. Algumas estratgias inicialmente empregadas
envolveram a utilizao ou substituio de precursores de ACh, e.g.
colina ou lecitina, as quais entretanto no se mostraram eficientes no
incremento da atividade colinrgica central1. Outros estudos investi-
garam o uso de inibidores de acetilcolinesterase (AChE) que redu-
zam a hidrlise de AChE aumentando, conseqentemente, seu tem-
po de vida-mdia, e.g. fisostigmina. Recentemente, tm sido explo-
radas abordagens teraputicas envolvendo agonistas especficos de
receptores muscarnicos (M1) e nicotnicos ou antagonistas musca-
rnicos M21,4. Os avanos obtidos na compreenso da evoluo e das
razes moleculares da gnese de DA tm demonstrado que o uso de
inibidores de AChE deve ser a forma mais eficiente de controle da
evoluo da doena1,5,6,10,11.
Outra abordagem teraputica para DA o desenvolvimento de
agonistas diretos de receptores muscarnicos ps-sinpticos M1 (Fi-
gura 2). A estimulao destes receptores demonstrou efeitos de au-
mento da cognio em animais. Entretanto, apesar dos esforos no
desenvolvimento de ligantes agonistas de receptores M1, muitos dos
compostos testados mostraram baixa seletividade, alm de vrios
efeitos colaterais devidos ativao de iso-receptores muscarnicos
M3 nos intestinos, bexiga e pulmo (Figura 2). Agonistas de recepto-
res M1 no-seletivos podem, tambm, interagir com receptores M4 e
M5 no SNC, com conseqncias ainda desconhecidas12 (Figura 2).
Quim. Nova
Alternativamente, dados farmacolgicos em modelos animais de-
monstraram que o bloqueio dos auto-receptores M2 ps-sinpticos
(Figura 2) acarreta o aumento dos nveis de ACh, e a conseqente
melhora do dficit cognitivo. Entretanto, a despeito de um grande
nmero de antagonistas M2 terem sido relatados, poucos mostraram
seletividade frente a outros subtipos de receptores muscarnicos12.
Figura 2. Viso esquemtica da hiptese colinrgica e localizao dos
receptores muscarnicos. Adaptada da Ref. 12
A observao inicial de que os antagonistas muscarnicos tipo
escopolamina produziam dficits na memria de curta durao levou
proposta de que o dficit colinrgico na DA era predominantemen-
te de natureza muscarnica. Entretanto, este ponto de vista foi altera-
do por uma srie de evidncias, incluindo estudos autoradiogrficos
e histoqumicos de autpsia de tecido cerebral, alm de estudos em
imagens cerebrais em pacientes, que demonstraram a perda especfi-
ca de receptores nicotnicos em maior extenso que de muscarnicos
na DA 10,13,14.
Atualmente, existem muitas evidncias indicando que substn-
cias moduladoras de receptores nicotnicos afetam o aprendizado e a
memria. A nicotina e outros agonistas nicotnicos podem melhorar
as funes cognitiva e psicomotora, enquanto que antagonistas nico-
tnicos causam deficincia na cognio. Alm disso, a incidncia da
DA em fumantes menor que em no-fumantes, o que pode se rela-
cionar ao aumento dos nveis de expresso dos receptores nicotnicos
da ACh (nAChRs) observados no crebro de fumantes. Assim sen-
do, moduladores nicotnicos podem apresentar efeitos agudos e cr-
nicos na funo cognitiva, dentre os quais pode-se incluir a
neuroproteo13.
Os receptores nicotnicos neuronais (nAChR) so expressos sob
vrios subtipos nos mamferos, sendo que os subtipos 42 e 7 so
os mais proeminentes e esto presentes em regies ps-, pr-, peri e
extrasinpticas. Os nAChR 7 exercem funes pouco diferencia-
das daquelas dos subtipos 42, com maior permeabilidade para
ons Ca++, dessensibilizao muito mais rpida e diferente perfil
farmacolgico, o qual inclui ativao por colina (Ch) e bloqueio pela
-bungarotoxina (uma toxina de cobra)14. Devido a sua sensibilida-
de Ch, os receptores nicotnicos 7 podem ser quimicamente exci-
tados mesmo aps o agonista natural, i.e. ACh, ter sido hidrolisado
pela AChE. Alm disso, devido a sua alta permeabilidade a ons Ca++,
a ativao dos receptores 7 pode produzir respostas metabotrpicas
nas clulas excitadas, incluindo a liberao de transmissores contro-
lada por Ca++ e estimulao da transcripo gentica e biossntese
protica10,13,14.
Modernamente, h duas estratgias principais sendo aplicadas
para equilibrar o dficit colinrgico em portadores de DA: inibio
da degradao da ACh e administrao de agonistas de receptores
nicotnicos10,13,14 (Figura 3). Os frmacos inibidores de acetilcolines-
terase vm sendo, atualmente, a alternativa teraputica mais comu-
Vol. 27, No. 4 Produtos Naturais como Candidatos a Frmacos
mente empregada por apresentarem melhores resultados no controle
da doena10 sem, entretanto, serem capazes de impedir sua progres-
so em nenhum de seus nveis13,14.
Vrios agonistas de receptores nicotnicos encontram-se em fase
de ensaios pr-clnicos e clnicos, embora j se saiba que seja relati-
vamente difcil seu ajuste de dosagem; em nveis elevados, podem
causar dessensibilizao de nAChR em maior extenso que o au-
mento de sua ativao. Outros desafios, ainda insolveis at o pre-
sente momento, consistem no transporte do frmaco at o receptor
nicotnico-alvo no crebro e o incremento da seletividade pelo subtipo
de receptor especfico13.
Os ltimos avanos realizados no estudo dos receptores nicotnicos
permitiram a melhor caracterizao de alguns aspectos relacionados
sua fisiologia, bioqumica e expresso gnica, bem como sua efetiva
participao nos eventos relacionados DA. Adicionalmente, estes
estudos com nAChR permitiram caracterizar uma nova estratgia pos-
svel para o tratamento de DA, atravs de sua modulao alostrica10,13,14.
Moduladores alostricos so substncias que interagem com o recep-
tor atravs de stios de ligao distintos daqueles utilizados pela ACh e
pelos agonistas e antagonistas nicotnicos14. Como DA est associada
com a reduo da neurotransmisso nicotnica, os moduladores
alostricos so potencializadores da atividade da ACh sobre os canais
inicos dos receptores nicotnicos. Estas propriedades deram origem
a uma nova classe de ligantes de nAChR, os ligantes potencializadores
alostricos (APL)10,14.
Figura 3. Resumo do processo e das formas de interveno desde a liberao
at a degradao da ACh. Adaptada da Ref. 10
Frmacos comerciais para o tratamento da DA
A tacrina (THA, Cognex, 1) foi o primeiro frmaco sinttico
aprovado pelo FDA (Food and Drug Administration) nos Estados
Unidos para uso teraputico, demonstrando efeito moderado, mas
significativo no alvio dos sintomas de DA de intensidade, mdia e
leve. Entretanto, sua aplicao tem sido limitada devido aos srios
efeitos colaterais, como a hepatotoxicidade, que tm forado os pa-
cientes a descontinuarem o tratamento5. Alm da tacrina, atualmente
outros trs frmacos esto sendo comercializados nos EUA e Euro-
pa: donepezil (2, Aricept), rivastigmina (3, Exelon) e, por ltimo,
a galantamina (4, Reminyl). Dentre estes, as substncias 1, 2 e 4
so inibidores reversveis da AChE, sendo que a galantamina (4)
um produto natural, recentemente aprovado pelo FDA, que est ser-
vindo de prottipo para desenvolvimento de novos frmacos
anticolinestersicos3,5.
Busca por novos candidatos de origem natural para o
tratamento da DA
A diversidade estrutural dos IAChEs conhecidos e a possibilida-
de de se explorar modos de ao distintos tm estimulado o estudo
657
fitoqumico de vrias espcies vegetais e de microorganismos, que
possam fornecer novos modelos de substncias anticolinestersicas.
Neste sentido, vrias exemplares da biodiversidade tm sido estuda-
dos em decorrncia de sua utilizao popular ou de dados etno-bot-
nicos. Um dos exemplos mais difundidos como fitomedicamentos
so os extratos de Ginkgo.
A Ginkgo biloba (Ginkgoaceae) uma rvore fssil utilizada h
sculos na medicina tradicional chinesa para melhoria do estado de
alerta. Hoje em dia, a ginkco , talvez, o extrato vegetal mais difun-
dido especificamente para aumento da funo cognitiva, sendo seu
uso prevalente especialmente na Europa onde, recentemente, o
German Bundesgesundheit Association aprovou sua utilizao para
tratamento de demncia15. A maioria das evidncias sugere que a
capacidade de aumento da funo cognitiva est associada ao uso de
um extrato padronizado, o EGb 761. A medida dos efeitos cognitivos
vem sendo realizada em testes de ateno, aprendizado, memria de
tempo-curto e tempo de reao e escolha, mas os resultados no so
reprodutivos interpopulaes. Alm disso, muitos estudos esto pu-
blicados em peridicos de circulao restrita, o que dificulta o aces-
so s informaes; na maior parte dos casos, os experimentos in vivo,
tanto em animais como em humanos, restringem-se a pequeno n-
mero de indivduos, o que compromete uma avaliao conclusiva e
abrangente dos resultados15.
Alguns estudos utilizando pacientes tratados com o extrato pa-
dronizado de Ginkgo biloba e com placebo revelaram que os efeitos
foram comparveis aos obtidos com o donepezil (2), que atualmente
um dos frmacos de escolha para o tratamento da DA15. Aparente-
mente, muitos dos efeitos protetores do SNC associados ao uso cr-
nico de extratos de Ginkgo esto relacionados presena de consti-
tuintes terpnicos e flavonides com propriedades antioxidantes e
antiinflamatrias. Estas substncias podem atuar de diferentes for-
mas, contribuindo para a integridade do tecido neuronal: a) inibindo
a atividade das enzimas superxido-dismutase e monoamina-oxidase,
que contribuem para a gerao de radicais livres no crebro e no
corpo; b) seqestrando radicais livres que poderiam causar dano aos
neurnios e, conseqentemente, retardar as mudanas associadas
idade no crebro e c) reduzindo a liberao de cido araquidnico,
um co-produto txico do metabolismo lipdico, que aparece no cre-
bro logo aps o episdio isqumico15.
A necessidade de tornar mais objetivas e menos dispendiosas as
pesquisas por constituintes qumicos de plantas, animais e
microorganismos levou ao desenvolvimento de numerosas tcnicas
de ensaios qumicos e bioqumicos para monitoramento e seleo de
extratos, fraes de extratos e substncias puras bio/farmacologica-
mente teis. Quanto busca de inibidores de AChE, dois testes
bioautogrficos em cromatografia em camada delgada foram recen-
temente desenvolvidos16. Marston e colaboradores17 utilizaram um
corante azico para identificar a atividade da AChE sobre o acetato
de 1-naftila; no outro caso, Rhee et al.18 preconizaram a utilizao
de 5,5-ditiobis-(cido 2-nitrobenzico) (reagente de Ellmann) para
a visualizao da atividade enzimtica. Aparentemente, o nico in-
conveniente da utilizao do reagente de Ellmann o limite de
deteco visual pois, em ambos os casos, formam-se halos de inibi-
o brancos sobre placa corada de azul (teste de Marston et al.17) e
amarelo (teste de Rhee et al.)16.
Um estudo recente com plantas brasileiras19 utilizou o ensaio
bioautogrfico de Rhee et al. e o ensaio de Ellmann em micro-
placa18,20, para identificar extratos que poderiam conter substncias
inibidoras da AChE. Foram estudados 58 extratos de 30 espcies de
diversos gneros vegetais, dos quais os autores consideraram os re-
sultados de inibio maior ou igual a 50% como critrio de seleo
para o fracionamento qumico. A partir do trabalho de triagem,
Paullinia cupana (guaran), Amburana cearensis (cumaru) e Lippia
658 Viegas Jr. et al.
sidoides foram as espcies que demonstraram os melhores resulta-
dos, inibindo de 65-100% da atividade enzimtica, em ambos os
bioensaios. No caso do guaran, foi evidenciado um efeito positivo
de incremento de memria aps a administrao aguda e crnica; o
fracionamento bio-guiado dos extratos de A. cearensis e L. sidoides
levou ao isolamento de 12 cumarinas at o momento19, demonstran-
do a utilidade e praticidade deste tipo de ensaio para a bioprospeco
de novos frmacos anticolinestersicos.
A galantamina (4) um alcalide isolado de vrias espcies ve-
getais da famlia Amaryllidaceae e mostrou-se um inibidor da AChE
de ao longa, seletivo, reversvel e competitivo, cujos efeitos tera-
puticos permanecem mesmo aps o trmino do tratamento9. O ex-
celente perfil teraputico de 4, que caracterizou um grande avano
no planejamento de frmacos para o tratamento de DA, decorrente
de seu mecanismo de ao duplo, como inibidor da AChE e como
APL nos receptores nicotnicos cerebrais10,11. A galantamina (4) atua
ligando-se ao stio ativo da AChE cerebral e ainda estimula os recep-
tores nicotnicos pr- e ps-sinpticos os quais podem, ento, au-
mentar a liberao de neurotransmissores como ACh e glutamato,
estimulando diretamente a funo neuronal21.
Outro alcalide isolado de Eucharis grandiflora
(Amaryllidaceae), a sanguinina (9-O-desmetilgalantamina, 5), mos-
trou-se 10 vezes mais ativo que a prpria galantamina em ensaios in
vitro. A busca por outras substncias inibidoras de AChE (IAChE)
nesse gnero vegetal levou ao isolamento de outros dois derivados
ativos da galantamina, a 11-hidroxigalantamina (6) e a epinorgalan-
tamina (7). Outro padro estrutural de alcalides, tipo-licorina, foi
isolado desse gnero, cujos constituintes mais ativos foram a
oxoassoanina (8), a assoanina (9) e a pseudolicorina (10)9.
O estudo de vrias espcies vegetais de uso corrente na medicina
popular chinesa e do Oriente Mdio levou ao isolamento de vrios
alcalides ativos. Exemplo disso foi Huperzia serrata (sinonmia:
Lycopodium serratum), que fornece um ch prescrito h sculos na
China para o tratamento da febre e inflamao. O estudo fitoqumico
dessa planta levou ao isolamento de huperzina A (11), um candidato
interessante para o tratamento de desordens do SNC e epilepsia, cujo
efeito diminui a morte neuronal causada por altas concentraes de
glutamato. um IAChE seletivo, muito potente e o uso sistmico
aumenta a liberao de ACh, dopamina e norepinefrina, sendo que o
aumento da concentrao de ACh persiste por at 6 h e praticamente
no possui ao sobre a butirilcolinesterase plasmtica (BuChE)22,23.
Dessa mesma planta foi obtida a huperzina P (12), um novo alcalide
tipo-licopodium, entretanto sua atividade foi menor que aquela evi-
denciada para a huperzina A (11).
Quim. Nova
Os resultados obtidos com a huperzina A estimularam Orhan et
al.24 a estudarem outras 5 espcies de Lycopodium, procura de ou-
tro metablitos inibidores de AChE. Aps uma avaliao preliminar
dos extratos pelo ensaio de Ellmann20, o extrato das partes areas de
L. clavatum foi selecionado e o fracionamento bio-guiado resultou
no isolamento da -onocerina (12a). Os resultados da atividade
anticolinestersica demonstraram que a -onocerina (IC50= 5,2 m)
foi melhor que o donepezil (2) nas concentraes de 1 e 3 mg/mL e
praticamente equipotente na concentrao de 5 mg/mL, embora no
tenha atingido a potncia da galantamina em nenhuma dose testada.
Alguns alcalides triterpnicos foram isolados de Buxus hyrcana,
como a homomoenjodaramina (13) e a moenjodaramina (14), os quais
mostraram-se promissores inibidores de AChE25. Desta mesma fa-
mlia, Buxus papillosa forneceu outros trs alcalides esteroidais
inibidores seletivos de AChE: cicloprotobuxina C (15),
ciclovirobuxeina A (16) e ciclomicrofilina A (17) 26.
A zeatina (18), inicialmente descrita como agente indutor de cres-
cimento de plntulas, foi isolada de Fiatoua villosa, cujo extrato
metanlico havia sido selecionado aps triagem para atividade inibi-
tria de AChE27. A substncia pura 18 inibiu a atividade da AChE de
modo dose-dependente com IC50 de 1,09 x 10-4 M 27.
Os glico-alcalides presentes em altas concentraes na casca
da batata (Solanum tuberosum L.) tm sido responsveis por vrios
dos casos de intoxicao alimentar. A observao de pacientes into-
xicados revelou sintomas como confuso mental, depresso e fra-
queza. Estes efeitos foram atribudos inibio da AChE pela -
solanina (19) e -chaconina (20), que correspondem a 95% dos
glicoalcalides presentes em S. tuberosum28.
Culturas de microorganismos, especialmente de fungos de di-
versas famlias e gneros, vm sendo sistematicamente estudadas
como importantes fontes na busca por frmacos teis no tratamento
de doenas graves como cncer, malria e infeces bacterianas,
dentre outras.
Buscando novos candidatos a frmacos capazes de re-estabele-
cer o sistema de neurotransmisso colinrgica, Otoguro, Kuno et
al.29-31 descobriram novos inibidores de AChE atravs da triagem
sistemtica de produtos naturais produzidos por fungos, i.e. arisu-
gacinas. A partir das culturas WK-4164 e FO-4259 de fungos do
Vol. 27, No. 4 Produtos Naturais como Candidatos a Frmacos
solo foram obtidas a ciclofostina (21), a arisugacina A (22) e B (23),
alm das j conhecidas territrems B (24) e C (25) e a ciclopenina
(26). Dentre estes derivados, as arisugacinas A (IC50= 1,0 nM) e B
(IC50= 25,8 nM) no inibiram a BuChE, mesmo em concentraes
20.000 vezes superiores concentrao de inibio de 50% da ativi-
dade da AChE, demonstrando excelente perfil de seletividade.
J os derivados territrems B e C foram muito menos seletivos,
apesar de apresentarem bom perfil de inibio de AChE, i.e. IC50=
7,6 nM e 6,8 nM, respectivamente. A ciclopenina (26) foi a substn-
cia menos ativa desta famlia como inibidor de AChE (IC 50=
2040 nM); entretanto, foi bastante seletiva, no inibindo a BuChE
em concentraes at 2000 vezes maiores que sua IC50. Apesar de
muito potente (IC50= 1,3 nM), a ciclofostina (21) foi a substncia
que apresentou menor seletividade, passando a inibir a BuChE em
doses superiores a 35 vezes sua IC5029-32.
As territrems A (27), B (24) e C (25) j haviam sido isoladas de
culturas de Aspergillus terreus e apesar da baixa seletividade de-
monstrada pelos estudos de Otoguro et al.31, a territrem B foi cerca
de 20 vezes mais potente que a neostigmina na inibio da AChE.
Estes resultados estimularam Peng33 a preparar os derivados dos
territrems 28-33 para estudo da relao estrutura qumica-atividade
biolgica. A avaliao da inibio da atividade enzimtica pelo m-
todo de Ellmann20 no revelou aumento de potncia para nenhum
dos derivados semi-sintticos dos territrems, entretanto permitiu o
reconhecimento da ligao dupla em C-2, da carbonila em C-1 e da
unidade -pirona intacta como os grupos farmacofricos imprescin-
dveis para a atividade anticolinestersica desta srie de compostos.
O interesse por inibidores de AChE em metablitos microbiais
monitorados pelo ensaio de Ellmann20 levou Kim et al.34 a investiga-
rem as culturas de um novo fungo, o Penicillium citrinum 90648. Do
fermentado slido deste microorganismo foram isolados os diaste-
659
reoismeros quinolactacina A1 (34) e quinolactacina A2 (35). A ava-
liao da atividade anticolinestersica destas substncias revelou que
35 apresentou atividade inibitria da AChE 14 vezes superior a seu
diastereoismero 34. Seu efeito foi dose-dependente, apresentando
uma IC50= 19.8 M, enquanto que a IC50 de 35 foi de apenas 280 M.
Alm disso, o diastereoismero bioativo 35 mostrou atividade inibi-
tria competitiva com o substrato e seletiva para a AChE versus
butirilcolinesterase (BuChE, IC50= 650 M), utilizando-se em todos
os ensaios a tacrina como padro positivo (IC50 BuChE = 0.006 M,
IC50 AChE = 0,12 M)34.
Pelo exposto, torna-se evidente a necessidade de se explorar os
produtos naturais oriundos da grande biodiversidade brasileira, como
fonte de inspirao para o planejamento racional de novos candida-
tos a frmacos potentes e seletivos e com baixo perfil de toxicidade,
que permitam o controle da evoluo da doena de Alzheimer.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem a FAPESP, FINEP, CAPES, FAPERJ,
FUJB e ao CNPq pelo apoio financeiro e bolsas concedidas.
REFERNCIAS
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