UNIVERSIDAD NACIONAL DE JAEN

CARRERA PROFESIONAL DE
TECNOLOGA MDICA IV

DOCENTE: CESAR MEDINA

INTEGRANTES:

JAEN PERU

INTRODUCCIN
Con el fin de estudiar satisfactoriamente los frotis sanguneos, es necesario
colorearlos. En la mayora de los laboratorios los colorantes ms empleados para
la tincin hematolgica se basan en el de Romanowsky constituido
fundamentalmente con la mezcla de eosina (cido) y azul de metileno (bsico).
Adems se han incorporado el empleo de derivados por oxidacin del azul de
metileno que se conoce con el nombre de azures (A, B, C). Son los azures los
responsables de la coloracin prpura o roja de ciertas estructuras. Tanto la
eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de pH de las
diferentes estructuras celulares, de forma que las que tienen carcter bsico fijan
la eosina mientras que las que poseen propiedades cidas fijan principalmente el
azul de metileno. Esto explica que las estructuras basfilos se tian de color azul
mientras que los competente acidfilas adquieren un color rosado. La diferente
afinidad de ciertas granulaciones citoplasmticas por dichos colorantes permite
clasificar a los leucocitos polimorfos nucleares en 3 grupos:
Granulocitos eosinfilos , en los que la granulacin especfica contiene
sustancias de carcter bsicos que fijan los colorantes cidos y se tien de
color rojo-naranja.
Granulocitos basfilos , en los que la granulacin especfica posee
sustancias de carcter cido que fijan los colorantes bsicos y se tien de
color azul oscuro.
Granulocitos neutrfilos , en los que la granulacin especfica posee
compuestos de carcter neutro por lo que fijan ambos colorantes
simultneamente, de ah que se tien de color pardo.
Dentro del grupo de colorante tipo Romanowsky los ms utilizados son el de
Wright, Giemsa y May- Grnwald-Giemsa, entre otras.

OBJETIVOS
Repasar y conocer mejor las tcnicas ms importantes en el curso de
hematologa.

Conocer sus beneficios y su importancia que tiene cada preparado, como

por ejemplo para detectar enfermedades.

PREPARACIN DE ANTICOAGULANTES
 A. PREPARACION DE E.D.T.A. AL 10%
MATERIALES
- matraz de 50 a 100 ml
- EDTA deshidratado
- Balanza gramera
- Tubos plsticos nuevos de 12 x 75
- Pipeta automtica graduada de 5- 10ul y de
10- 20 o ms ul
- Estufa de 37 40 grados
- Agitador y barrilla

PREPARACIN
10g ----- 1000ml ------------------ 0.5 ml de sangre
----- 10ml ------------------ 3.ml sangre

Preparacin de la solucin al 100%: pesar 10g de EDTA y aforar a 100ml con

agua destilada, mezclar. El EDTA en cada tubo no debe evaporarse, debe usarse
en estado lquido.

FUNDAMENTO
Las sales de sodio o potasio del cido etilen diamino tetractico (EDTA) son
poderosos anticoagulantes y son los que suelen elegirse para el trabajo
hematolgico normal. La cantidad requerida para 10cc o menos de sangre es de
0.1ml (100l) de una solucin al 10%.
El exceso de EDTA afecta eritrocito y leucocitos, y produce encogimientos y
cambios degenerativos.
En ste caso hay disminucin en el Hematocrito e incremento en la concentracin
de hemoglobina capsular media. El EDTA es un agente quelante, es decir, se une
al calcio impidiendo la coagulacin.

B. PREPARACION CITRATO DE SODIO

MATERIALES
- matraz de 100 ml
- Citrato de sodio deshidratado
- Tubos plsticos nuevos de 12 x 75
- Pipeta automtica graduada de 5- 10ul y de 10- 20 o ms ul
- Estufa de 37 40 grados
- Agitador y barrilla

PREPARACIN:

Preparar una solucin acuosa de cido ctrico al poner cido ctrico

anhidro en un vaso de agua. Medir 74,44 g (0,387 moles) de cido ctrico
anhidro, utilizando una balanza Mettler, y se disuelven en agua 100 ml.

Medida 61,61 g (0,581 moles) de carbonato de sodio con una balanza

Mettler.

Aadir el carbonato de sodio a esta solucin lentamente. La reaccin

crear un sonido burbujeante vigoroso como una indicacin de que se
est produciendo dixido de carbono.
Mantenga la adicin de carbonato de sodio hasta que la solucin se
detiene efervescencia. Esta es una seal de que la neutralizacin
completa ha tenido lugar. Esto producir 100 g (0,387 moles) de citrato de
sodio (en forma de citrato trisdico, C6H5Na3O7).
Publicar un plato de evaporacin en un trpode. Calentar la solucin con
un mechero Bunsen hasta que hierva (hervir en una cpsula de
evaporacin para que el agua se evapora).
Recoger la sal de citrato de sodio que queda en el plato de evaporacin.

FUNDAMENTO

El citrato de sodio es una sal producida mediante la reaccin de carbonato de

sodio con cido ctrico que sirve como un anticoagulante para la sangre o plasma
fraccionado o para la sangre destinada a ser almacenado. Desde 1914, esta sal
de sodio se ha utilizado para preservar la sangre en bancos de sangre. Los iones
de calcio presentes en la sangre son quelados por el ion citrato de citrato de sodio.
La quelacin es un proceso en el que los compuestos orgnicos se forman
enlaces mltiples con un nico ion de metal, resultando en la formacin de
molculas complejas que son altamente soluble, con lo que los iones inactiva por
lo que no van a reaccionar con otros elementos o iones para producir precipitados
o coagulados fluido. La quelacin de los iones de calcio por los iones citrato
resulta en la formacin de complejos de citrato de calcio que, en consecuencia
interrumpen la tendencia natural de la sangre para coagularse.

C. PREPARACION COLORACION WRIGHT

MATERIALES
frasco de 5000ml de color mbar
balanza gramara
agitador elctrico con temperatura y tiempo
opcional bao maria a 56
barillla magntica
colorante Wright

PROCEDIMIENTO
Una vez obtenido el frotis sanguneo, se le dejar secar entre 15 y 20
minutos.
Luego se coloca la preparacin en un soporte y se cubre con el colorante
de Wright, dejndolo por espacio de 5 minutos.
Posteriormente se aade solucin amortiguada tamponada en partes
iguales hasta obtener un brillo metlico, dejando 6 minutos adicionales.

Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.

Se coloca en el microscopio y, con pequeo aumento, se revisa la calidad

de la coloracin, la cantidad aproximada de glbulos blancos y se escoge el
sitio para iniciar el recuento. Se coloca una gota de aceite de inmersin y
se enfoca a un aumento de 100x La forma de los glbulos rojos se
examinar detenidamente observando adems del color (cantidad de
hemoglobina), presencia de plaquetas, su agrupacin y distribucin.
FUNDAMENTO
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y
determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamao de los
eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de coloracin. La
informacin obtenida de un frotis de sangre perifrica depende en gran parte de la
calidad del extendido y la coloracin.

D. PREPARACION DE COLORANTE AZUL BRILLANTE DE CRECILO

MATERIALES

- matraz de 100 ml
- azul brillante de crecilo
- Balanza gramera
- Tubos plsticos nuevos de 12 x 75
- Pipeta automtica graduada de 5- 10ul y de 10- 20 o ms ul
- Estufa de 37 40 grados
- Agitador y barrilla
PROCEDIMIENTO
El proceso ha sido el siguiente:

Se han mezclado 80ml de suero salino con 20ml de de citrato sdico al 3%.
Con una balanza de precisin, han pesado 1g de azul cresil brillante.
A la mezcla anterior se le ha aadido el gramo de azul cresil brillante
pesado.
Se ha filtrado el colorante con papel de filtro, para evitar precipitados que
puedan alterar la tincin.
Tincin de la muestra

Echamos tres gotas de colorante en un

tubo de hemlisis con otras tres gotas de
sangre.
 Mezclamos con suavidad y tapamos con
parafilm.

Lo dejamos al bao mara durante 5 minutos.

Una vez pasados los 5 minutos, movemos

suavemente de nuevo, y aadimos una gota
de la mezcla para hacer una extensin

Extensiones realizadas

Aadimos aceite de inmersin

FUNDAMENTO
Este tipo de anlisis se suele realizar para:

Evaluar la capacidad de la mdula sea de generar hemates nuevos

Diferenciar entre las causas de anemia
Monitorizar la respuesta de la mdula sea y su recuperacin funcional, tras
quimioterapia o transplante de mdula sea.
Seguimiento despus de un tratamiento de anemia por deficiencia de
ferropnica, Vit. B12, folato o insuficiencia renal.
El anlisis se suele indicar cuando se observa:

Descenso de los hemates

Descenso de la Hb
Descenso del HTO y/o sntomas de anemia.
Para evaluacin de la funcionalidad de la mdula sea
Para la visualizacin de los reticulocitos utilizamos colorantes vitales, como el azul
de metileno o azul cresil brillante, que dan lugar a precipitados de restos de ARN,
los cuales se observan como filamentos azul intenso en el interior celular.
 CONCLUCIONES

- La preparacin de los colorantes son fundamentales para realizar las

observaciones microscpicas.

- Las coloraciones y tinciones permiten conservar las clulas para luego ser
Evaluadas y sirven de ayuda para el determino de un problema de salud.