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Marilyn Falcon, Ximena Ramn, Daribeth Rubio, Guadalupe Vivas, Katty Carrera, Rosemary
Urbano
LIMA, PER
2017
INTRODUCCIN
La salinidad es considerada una de las causas ms importantes de estrs abitico,
limitando la produccin de los cultivos en las regiones ridas y semiridas, con un
contenido de sal en el suelo alto y precipitaciones insuficientes para su lixiviacin
(Villavicencio, 2010). Las plantas, al tratarse de seres vivos ssiles no tienen la
capacidad de huir ante la presencia del estrs salino, de modo que, ante la
incapacidad de huir y evitar espacialmente solo les quedan evitarlo o modificarse
para vivir en este medio. Las plantas adaptadas al estrs salino se llaman plantas
halfilas, mientras que se denominan glicfitas a las dems plantas que no estn
adaptadas a vivir en ambientes salinos (Boronat, 2012). Las halfitas son plantas
nativas de suelos salinos y completan su ciclo vital en estos ambientes (Ortola,
2002). En races de tomate, por ejemplo, se ha mostrado activacin de la sntesis de
protenas importantes para la gluclisis, ciclo del citrato, metabolismo de
aminocidos, biosntesis de ATP, fotosntesis, as como sntesis de protenas
relacionadas a la defensa y detoxificacin (Mana y col., 2013).
Dos de los problemas medioambientales ms importantes que influencian sobre la
productividad agrcola en el mundo son la sequa y la salinidad; se estima que un
tercio de las tierras del planeta potencialmente arables sufren por un inadecuado
suministro de agua y cerca del 10% de suelos arables son afectados negativamente
por la salinidad del suelo (Snchez et al., 2000). Aproximadamente el 20% del rea
cultivada y casi la mitad de la tierra irrigada a nivel mundial sufren los efectos de la
salinidad, generando una reduccin del crecimiento de la planta por dficit de agua,
toxicidad por iones, desbalance por iones o por combinacin de estos factores
(Sairam, R & Tyagi A, 2004). Este problema ha llevado a algunos campesinos a la
bsqueda de alternativas ms eficientes. En Cabo Verde, por ejemplo, los
agricultores han estado pasando de la caa de azcar, que consume mucha agua, a
cultivos hortcolas de gran valor, como los tomates, que se riegan por goteo. La
produccin hortcola nacional se triplic entre 1991 a 1999, con un volumen de 17
mil toneladas (FAO, 2002).
Los objetivos de la presente prctica es determinar cuantitativamente la
concentracin de azcares reductores y la concentracin de protenas totales en
plantas de tomate sometidas a estrs salino.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Espectrofotmetro UV Visible Marca: Thermo Scientific. Modelo Genesys 10S
Una micropipeta de 100 L. AXYGEN
Una micropipeta de 1000 L. AXYGEN
Una centrfuga. Hettich. Mikro 220R
Balanza
Muestra de plantas de Tomate sometidas a estrs salino
Tubos de centrfuga
Un mortero
Embudo de plstico
Agua destilada
NaCl 0.8%
Solucin salina vegetal
Hidrxido de bario 0,1N (100 ml)
Sulfato de Zinc 0,1N (100 ml)
Reactivo enzimtico para glucosa
Reactivo enzimtico para protenas totales
MTODOS
El proyecto se llev a cabo en el invernadero de la Universidad Cientfica del Sur
entre los meses de abril y Junio. Se realiz un cultivo de plantas de tomate cherry
de la variedad Naomi ( Lycopersicon esculentum cv. Naomi F1). Se dise un
arreglo aleatorio de cinco por cinco, es decir, un control con cuatro repeticiones y
cuatro tratamientos con el mismo nmero de repeticiones. Donde los cuatro
tratamientos consistan de niveles de salinidad (NaCl) de 30mM (T1); 60mM (T2);
125mM (T3) y 250mM (T4). Interdiariamente se aadi 5 mL de las soluciones
mencionadas a las macetas correspondientes hasta el ltimo da del tratamiento.
Fuera de dichas concentraciones de sales, las plantas crecieron en condiciones
uniformes de invernadero hasta el da del anlisis.
Para la determinacin de protenas totales se cortaron hojas jvenes incluyendo el
tallo, se lavaron, se secaron y se pes 1 gr. Se colocaron en el mortero y con 10 mL
de solucin salina vegetal se tritur hasta conseguir una muestra lquida, se verti
en un tubo de centrfuga, se coloc en la centrifuga a 5000 rpm por diez minutos,
con su peso equivalente en agua destilada, como contrapeso. Se extrajo 100 L de
la muestra, se verti en un tubo de microcentrfuga y se agreg 1000 L de reactivo
enzimtico. Luego se midi la absorbancia a 505 nm en el espectrofotmetro
Thermo Scientific.
Por otro lado, para la determinacin de azcares reductores se cortaron hojas
jvenes incluyendo el tallo, se pes 1gr, se lavaron y se secaron. Se colocaron en el
mortero y con 10 mL de solucin salina vegetal se tritur hasta conseguir una
muestra lquida, se verti en un tubo de centrfuga, se coloc en la centrfuga a 3000
rpm por quince minutos, con su peso equivalente en agua destilada, como
contrapeso. Se extrajo 100 L de la muestra, se verti en un tubo de
microcentrfuga, se agreg 700 L de agua destilada y 100 L de hidrxido de bario,
se homogeneiz durante treinta segundos. Luego se agreg, 100 L de sulfato de
zinc, se agit y se dej reposar durante cinco minutos, se centrifug a 6000 rpm
durante diez minutos, se tom 100 L del sobrenadante y se coloco en tubos de
microcentrfuga, despus se agreg 1000 L de reactivo enzimtico, se dej reposar
y se midi las absorbancias a 505 nm.
Finalmente, se examin la raz de cada planta con el fin de descartar presencia de
necrosis radicular provocada por el estrs salino e hdrico al que fueron sometidas.
RESULTADOS
Como se observa en la tabla 1, existe diferencia significativa entre los elementos
evaluados (sig=0,000) a nivel de significancia de 0.05, por lo tanto se rechaza la
hiptesis nula de que no existe diferencia de concentraciones de glucosa entre
plantas sometidas a estrs salino y las del bloque control. Al utilizar la prueba de
Dunnett, (tabla 2) se encuentra evidencia suficiente para afirmar que las
concentraciones de glucosa son significativamente diferentes a la media del control.
La tabla indica que todos los tratamientos presentan significancia ya sea (sig=0,001)
o (sig=0,000). Tambin se pudo determinar que el promedio de la concentracin de
azcares de los tratamientos representa el 27% de los azcares presentes en la
media de los controles. Lo que indica que hubo una reduccin de glucosa debido al
estrs que enfrentan.
Con respecto al tratamiento para cuantificar protenas totales, al analizar las medias
del control y los tratamientos se encontr significancia estadstica (sig= 0.033) lo que
indica el rechazo de la hiptesis de nulidad, es decir, lo que indica que al menos
una de las medias de concentracin de protenas es diferente del control (C). Esto
se puede apreciar en la tabla 4, al no encontrar significancia alguna entre los
tratamientos y el control, concluyendo que todas las concentraciones son diferentes
entre s. Debido a ello, se procedi a determinar las medias tanto del control como
de cada uno de los tratamientos, de esto se destaca que el bloque que presenta una
mayor concentracin de protenas es el T2 (456.25 g/mL) seguido del T3 (455.25
g/mL), mientras que se encuentra menor concentracin en T1 (254,75 g/mL) y el
control presenta 349,25 g/mL. Se puede apreciar que existe un factor que induce a
los tratamientos destacados a aumentar sus concentraciones de protenas, lo que
en este informe se le atribuye al estrs salino.
En el caso de las races, no se encontraron casos de necrosis radicular. La raz ms
larga, registrada, present una longitud de 52cm (T1-4) con un ancho de 11cm,
mientras que la ms corta (T3-3) present 25,1cm de largo y 6,4cm de ancho.
DISCUSIN
El cultivo del tomate en reas con problemas de salinidad provoca en las plantas un
sin nmero de efectos fisiolgicos, morfolgicos y bioqumicos, tales como
disminucin de la fotosntesis (Singh y Chatrath, 2001), un menor peso de los frutos
(Del Rosario et al., 1990; Prez-Alfocea et al., 1996) y cambios cuantitativos y
cualitativos en la sntesis de protenas por cambios en la expresin de genes a
causa de la salinidad, entre otros (Singh y Chatrath, 2001).
A nivel de races, las sales alteran la absorcin de agua afectando el crecimiento de
estos rganos; tambin actan produciendo efectos txicos. La magnitud de las
respuestas de las plantas se encuentra estrechamente relacionada a la
concentracin de las sales, a la duracin del estrs a que estn expuestas y a la
especie o cultivar de que se trate. La parte area de las plantas de tomates
igualmente es afectada por la salinidad: las plantas alcanzan una menor altura, las
hojas se presentan en menor nmero y a la vez manifiestan una disminucin en su
densidad estomtica en la cara adaxial (Romero, 2001), presentan clorosis y
necrosis principalmente en los bordes de las hojas. El rea foliar tambin disminuye
(Romero, 2001; Al-Karaki, 2000). Los resultados de la concentracin de otros
trabajos cientficos demostraron que la concentracin de sales no fue afectado en
los cultivos de tomate como: en cuanto a la tolerancia a salinidad entre distintas
especies, investigaciones que evaluaron diferentes muestras especmenes de L.
peruvianum, L. pimpinellifolium y de L. esculentum empleando una solucin de
NaCl, reportaron que L. peruvianum fueron ms tolerantes a la salinidad, al
presentar stas una mejor germinacin y crecimiento de la plmula/radcula hasta
una CE de 10,2 dS/m, mientras que el resto mostraron efectos perjudiciales, y por lo
tanto una menor tolerancia, a niveles de CE superiores a 4,95 dS/m (Srinivas,
2001). Es por eso que las espcimen de L. naomy, tambin demostraron los mismos
resultados, en el crecimiento de las plantas ya que se not una insignificancia en no
ser afectado por la solucin salina.
Los resultados nulos correspondientes al porcentaje de necrosis radicular
demostraron ausencia de dicho parmetro en las muestras en cuestin, pese a que
el efecto de la salinidad est estrechamente relacionada a las condiciones de los
pelos radiculares (Cramer et al.,1985). La necrosis es una situacin irreversible que
se da cuando un determinado tejido pierde su vitalidad (Munns & Temaat, 1986); y
de manera especfica, las ms frecuentes y vulnerables, segn la especie vegetativa
son necrosis apical o marginal en lechuga y necrosis apical en el fruto de tomates
(Sonneveld & Ende, 1975). El poco tiempo de exposicin de las plantas de tomate al
medio salino, fueron, probablemente, el factor que impidi que se vieran afectadas
por la necrosis (Mesa, 2003), sobre todo considerando que la especie trabajada,
Solanum lycopercum L, es medianamente tolerante a la salinidad (Rick, 1982;
Goykovic & Saavedra, 2007), evidenciada, en este caso, respecto a los efectos de la
salinidad en las races. En un tratamiento sometido a 250mM de solucin salina, se
pudo observar necrosis apical, deduciendo que esto se puede deber al estrs salino.
Para identificar la necrosis, primeros se debe observar la clorosis en hojas (Ronen,
2000) u otros mecanismos, previos, de defensa y proteccin como reduccin de
crecimiento, aumento de protenas especficas, entre otros (Nez et al. 2007). En
los tratamientos se observ conforme pasaba el tiempo en el cual fueron tratados
con diferentes concentraciones de solucin salina, cada tratamiento, comenzando
desde el T1 hacia el T5 fueron creciendo menos que el control, y que no
presentaban necrosis.
Para el estudio, se apreci el engrosamiento de races secundarias, causadas por
altas concentraciones de sales que retienen el agua en la solucin suelo y hace
difcil la extraccin de agua por parte de las races, ocasionando la modificacin de
su propia estructura (Santamara- Cesar et al. 2004).
Los frutos se afectan adversamente en su rendimiento (Prez-Alfocea, 1996;
Grainferberg et al., 2000; Faiz-SMA et al., 1994; Carvajal et al., 2006), pero
positivamente en cuanto a algunos atributos organolpticos o de inters para la
agroindustria, puesto que presentan un mayor contenido de compuestos solubles,
slidos totales, acidez titulable y carotenoides. Esto se pudo observar en las
muestras sometidas a estrs, ya que, los controles estaban empezando a dar frutos
mientras que los tratamientos no presentaban dicha condicin.
La salinidad afecta negativamente la germinacin de las semillas de tomates, sean
estas las formas silvestres como las cultivadas. Estos efectos inciden en el
porcentaje de germinacin y el tiempo en que este proceso se lleva a cabo. A la
fecha se han detectado al interior del gnero Lycopersicon varias especies con un
grado de tolerancia a salinidad mayor que otras, incluyendo a L. esculentum, hecho
importante ya que demuestra que no slo al interior de las especies silvestres es
posible detectar germoplasma con mayor tolerancia a salinidad. Estos resultados
dan cuenta de la existencia de variabilidad gentica en tomate y por tanto de
germoplasma importante para el mejoramiento gentico a estrs salino, de modo
que los esfuerzos en identificar germoplasma resistente a este estrs son vlidos,
especialmente en aquellas especies silvestres que presentan compatibilidad
gentica con los cultivares comerciales como L. pimpinellifolium y L. pennellii (Real,
2007).
CONCLUSIN
De esta prctica se puede determinar que el tomate con el que trabajamos, es muy
resistente a los cambios que ocurren en su ambiente de desarrollo; ya que se
observa cambios en el aumento de la proteccin de protenas; ya que como se sabe
es un mecanismo para hacer frente a los cambios en el suelo, adems podemos
afirmar que debido al no constante riego de las plantas, no se pudo obtener mejores
resultados.
Asimismo las plantas estresadas no presentaron necrosis; por lo que, como ya se
dijo son bastantes resistentes.
Toda planta cuenta con un mecanismo de respuesta ante cualquier efecto adverso a
su funcionamiento o metabolismo, en muchos de los casos neutralizando el efecto y
en algunos solo reducindolo, sin embargo de una y otra forma, ya sea positiva o
negativa el intento que esta hace, siempre buscara como nica solucin un
equilibrio funcional. Por lo que las plantas de tomates han sido alteradas por el
estrs salino teniendo como sustento su incremento de cuantificacin de protena.
Una de las formas de poder apreciar los efectos de la salinidad es el crecimiento
interrumpido de la planta, ya que la fotosntesis se ve interrumpida, principalmente
en lo que llamamos el intercambio gaseoso ya que a nivel fisiolgico uno de los
mecanismos fundamentales de tolerancia al estrs por dficit hdrico es el cierre de
estomas, ya que estos son los responsables de la mayor proporcin de prdida de
agua en las plantas los estomas se cierran.
RECOMENDACIONES
Regar a las plantas con las soluciones respectivas, con las cantidades
exactas en los das programados para no tener errores en la prctica.
Tener la misma cantidad de suelo para todas las plantas de tomate puesto
que la variacin de este puede generar errores en los resultados de las
prcticas.
Regar diariamente las plantas para no generar diversos tipos de estrs
Se debe tener cuidado a la preparacin de soluciones para no reducir sus
concentracin.
El cultivo hidropnico favorece a conocer los resultados con mayor velocidad
y en tolerancia mxima de vida a que en comparacin con el cultivo
convencional este es ms rpido.
BIBLIOGRAFA
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CUESTIONARIO
1. Cul es la importancia fundamental de las protenas en el ambiente?
Las protenas juegan un papel esencial en todos los procesos biolgicos por las
distintas funciones que realizan (Navas, 2008), como la:
Funcin enzimtica: que cataliza reacciones qumicas de organismos.
Funcin estructural: que da soporte, como en las membranas celulares.
Funcin transporte: como las tubulinas dentro de la clula.
Funcin hormonal: que ayuda a coordinar las funciones del organismo.
Funcin de proteccin: como los anticuerpos que luchan contra las bacterias y
virus que ingresan al organismo.
Funcin de recepcin de informacin, como las glucoprotenas.
Funcin de movimiento, que se da en los msculos.
tratamientos
Suma de
cuadrados gl Media cuadrtica F Sig.
ANOVA
tratamientos
Suma de
cuadrados gl Media cuadrtica F Sig.
Total 503887,500 24
Tabla 4: Resultados obtenidos mediante la prueba Dunnett para la comparacin
de medias de concentracin de protenas totales.
Comparaciones mltiples
tratamientos
t de Dunnett (>control)a
Intervalo de
confianza al
95%
Diferencia
de medias Lmite
(I) r (J) r (I-J) Error tpico Sig. inferior
a. Las pruebas t de Dunnett tratan un grupo como control y lo comparan con todos los dems grupos.