UNIVERSIDAD POLITCNICA SALESIANA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGA DELOS RECURSOS NATURALES

BIOTECNOLOGA ANIMAL

ANIMALES TRASGNICOS

Desde el principio de los tiempos, el hombre ha intentado modificar las caractersticas de los
animales domsticos intentando incrementar aquellas que mejoraban sus condiciones como
animales de compaa, de produccin, de trabajo o de abasto, mediante la seleccin de los ms
aptos y el cruzamiento de los ejemplares que presentaban mejores caractersticas: mayor
produccin de leche o carne o ms fuerza y resistencia. Se seleccionaban aquellos ejemplares con
caractersticas deseables, aparendolos entre s y con su descendencia, para perpetuar los rasgos
de inters, recurriendo al mestizaje cuando se adverta la aparicin de caractersticas fenotpicas
indeseadas debido a la consanguinidad (Basrur & King, 2005).

Hoy en da, gracias a la reproduccin asistida y a la biotecnologa, se planifican y dirigen los

procesos reproductivos, se transmiten los rasgos deseados y se acelera la mejora gentica. El
intervalo intergeneracional puede reducirse sensiblemente gracias a la combinacin de la
inseminacin artificial, que es la ms antigua y utilizada de las tcnicas de reproduccin asistida,
con las tcnicas ms recientes como son: el estro sincronizado, la superovulacin, la extraccin
de vulos de hembras sexualmente inmaduras aun fuera de la poca de cra, o la produccin de
embriones in vitro y la transferencia de embriones (Park, 2007). Adems, es posible seleccionar
el sexo de la progenie con semen sexado para la inseminacin; se puede realizar la seleccin
gentica de individuos mediante marcadores moleculares asociados a caracteres de inters.
Tambin se puede modificar el genoma de los organismos: introduciendo genes de inters
(organismos transgnicos); modificando los genes (organismos transgnicos knockins); o
eliminando o silenciando genes concretos (organismos transgnicos knockouts). Y se puede
llevar a cabo la clonacin de animales por transferencia nuclear de clulas somticas, germinales
o embrionarias (Smith & Heald, 2014).

HISTORIA

A partir de las experiencias de Gordon, Ruddle y colaboradores iniciadas en 1980 en las que
inyectaron ADN de ratn en uno de los proncleos de un cigoto de la misma especie, se inici
una nueva era en la manipulacin gentica de embriones de mamferos. Al ao siguiente,
demostraban la integracin y transmisin estable a travs de la lnea germinal de genes inyectados
en proncleos de cigotos de ratn obtenidos por fecundacin in vitro (Gordon & Ruddle, 1981).
Eran los primeros ratones transgnicos. El paso siguiente consisti en probar que tambin se
podan obtener ratones transgnicos que incorporaran en su genoma un gen (transgn) de otra
especie. As, obtuvieron ratones transgnicos gigantes al inyectar en el proncleo de un cigoto el
gen de la rata que codifica para la hormona del crecimiernto. Incluso, se obtuvieron tambin
ratones transgnicos gigantes cuando el transgn introducido era el gen humano que codifica para
la hormona de crecimiento (Palmiter & Brinster, 1982).
El ratn transgnico, que lleva incorporado el gen de la hormona de crecimiento de la rata, tiene
un aumento de tamao del 80% en comparacin con un ratn normal. Como era de esperar, a los
ratones transgnicos siguieron los conejos, ovejas y cerdos transgnicos a los que se les haba
introducido por microinyeccin en uno de los proncleos del cigoto el ADN del gen humano que
codifica para la hormona de crecimiento, en un intento de aumentar el tamao de tales animales
(Gordon & Ruddle, 1981)Sin embargo, este avance cientfico no tuvo aplicacin zootcnica
porque la presencia del transgn modifica la fisiologa del animal transgnico, produciendo
efectos colaterales perjudiciales para su desarrollo. De cualquier manera, la era de la trangnesis
animal haba comenzado como una realidad imparable.

Cerdo transgnico que lleva incorporado el gen humano de la hormona del crecimiento. Su
desarrollo presentaba trastornos fisiolgicos importantes (Cummings, 1995).

AO EVENTO
1938 Experimento de transferencia nuclear
1949 Embriones de ratn en cultivo in vitro
1961 Ratones quimricos agregando embriones
1966 Tcnica de microinyeccin de embriones de ratn
Primeros ratones transgnicos por microinyeccin de ADN en
1980
el proncleo de cigotos de ratn
Animales de granja transgnicos (conejos, ovejas, cerdos) con
1985
el transgn de la hormona del crecimiento humano
Ovejas transgnicas con el gen humano del factor IX de
1989 coagulacin de la sangre mediante microinyeccin de ADN en
el proncleo del cigoto
1993 Ratones quimricos por co-cultivo de embriones
Ovejas clnicas por transferencia nuclear de clulas
1997
diferenciadas fetales y adultas en cultivo
1999 Cabras transgnicas por transferencia nuclear

USOS

APLICACIONES EN BIOMEDICINA

Desarrollo de modelos animales para el estudio de enfermedades humanas

La aplicacin de la tecnologa transgnica ha sido particularmente til para el examen de la

importancia de la expresin de determinados genes en la etiopatogenia de gran nmero de
enfermedades (Melo, Cavanavessi, Franco, & Rumpf, 2007).

Utilizacin de animales modificados genticamente como donantes de rganos para

humanos: xenotrasplantes.

La posibilidad de recurrir a especies animales como donantes de rganos se plante hace ya

muchos aos. De hecho, entre los aos 1964 y 1995, se realizaron 32 xenotrasplantes de rin,
corazn, hgado y mdula sea procedentes mayoritariamente de chimpanc y mandril, con un
resultado negativo en todos los casos (Bacci, 2007).

Utilizacin de animales transgnicos en terapia gnica

Los experimentos de terapia gnica que utilizan animales tienen tres objetivos generales:
conocer la fiabilidad y seguridad de los vectores, estudiar la eficacia de la transferencia de los
genes problema y ensayar nuevas terapias para curar la enfermedad (Niemann & Kues, 2007).

APLICACIONES EN INDUSTRIA FARMACUTICA

Realizacin de ensayos farmacolgicos y toxicolgicos utilizando animales modificados
genticamente

Se han diseado roedores transgnicos sensibles a toxinas medioambientales que son capaces de
evaluar la seguridad de medicamentos, productos o materiales mucho ms rpidamente que los
ancestros de los que provienen. Este tipo de pruebas pueden realizarse con un nmero mucho
menor de animales porque la presencia del transgn mejora la eficacia (Wheeler, Walters, &
Clark, 2003).

APLICACIONES EN ZOOTECNIA

Cambios en la composicin de la leche

Los avances en la tecnologa del DNA recombinante han permitido cambiar la composicin de la
leche introduciendo protenas totalmente nuevas. Estos cambios pueden aumentar las
posibilidades de utilizacin de la leche e incrementar su valor (Bacci, 2007).

Modificacin de los ndices de crecimiento y de la composicin de la canal

En cerdos se han realizado esfuerzos para mejorar su crecimiento y variar la composicin de su

carne mediante la adicin de transgenes: un estudio de expresin en msculo de un gen factor de
crecimiento insulina-like exgeno demostr una significativa reduccin de la grasa y un
incremento del msculo magro; en otro estudio, un gen exgeno de la hormona del crecimiento
produjo un incremento de la ganancia de peso, mejor la eficiencia en la alimentacin y redujo el
grosor de la grasa dorsal (Wheeler, Walters, & Clark, 2003).

Animales resistentes a enfermedades

La aplicacin de la transgnesis para regular aspectos definidos del sistema inmunolgico puede
proporcionar oportunidades para disear, por ingeniera gentica, ganado con mayor resistencia a
las enfermedades (Melo, Cavanavessi, Franco, & Rumpf, 2007).

TCNICAS DE OBTENCIN DE ANIMALES TRASGNICOS

Para la obtencin de animales transgnicos se han llevado a cabo varios mtodos, entre los cuales
se pueden citar:

1. MICROINYECCIN DE ADN EN PRONCLEO O EN CITOPLASMA DE

CIGOTO (VULO FECUNDADO)

En esta tcnica, la introduccin del transgn se realiza mediante la microinyeccin de esta

construccin de DNA en el proncleo de un ovocito fertilizado. El procedimiento sera el
siguiente (Pearanda & Asensio, 2014):

1. Se extraen vulos de hembras en las que se ha inducido una superovulacin y han sido
fertilizadas in vivo, o bien se fertilizan posteriormente in vitro.
2. Utilizando un microscopio, con una micropipeta, se inmoviliza el vulo fecundado y se
inyecta en uno de sus proncleos una solucin que contiene muchas copias del transgn.
3. Posteriormente, estos vulos fecundados y microinyectados se introducen en madres
receptoras, previamente sincronizadas hormonalmente, para gestarlos, aplicando la
tcnica de la transferencia de embriones.
4. Finalmente, los recin nacidos son examinados para ver si en ellos se ha producido la
incorporacin del transgn.
La microinyeccin es un mtodo para generar animales transgnicos muy ineficiente, debido a
que conlleva la integracin aleatoria del gen forneo en el genoma receptor con las siguientes
consecuencias (Pearanda & Asensio, 2014):

El transgn se introduce en el genoma receptor de forma aleatoria, por lo que slo en un

pequeo porcentaje se sita en el lugar adecuado para conseguir una buena expresin en
el animal transgnico.
No todos los animales que nacen han incorporado a su genoma el transgn (no son
transgnicos, por tanto).
El gen exgeno puede insertarse en un lugar errneo, por ejemplo en medio de un gen del
genoma receptor, interrumpindolo y causando su mutacin y, con ello, la muerte del
embrin o alteraciones en el animal transgnico nacido.
Se produce un patrn variable de expresin del gen exgeno en la progenie transgnica,
a menudo en mosaico.

2. MICROINYECCIN DEL ADN EN CLULAS EMBRIONARIAS

Esta tcnica requiere de infraestructura, equipamiento y personal debidamente entrenado para su

realizacin, lo cual aumenta significativamente los costos. La microinyeccin de embriones de
especies de mamferos, anfibios y peces se ha constituido en una forma til de probar
construcciones genticas directamente en los embriones y en algunas estirpes celulares derivadas
de ellos (Universidad Nacional Abierta y a Distancia, 2015).

El organismo adulto ser una quimera ya que no todas las clulas incorporan el nuevo gen.
Entonces, se utilizarn solo los animales que tengan el gen en sus gametas y por lo tanto lo
transmitan a su descendencia. Esta tcnica es ms fcil y eficiente que la anterior a pesar de que
se descarten animales (PQBio, 2007).

El gen que se inserta est dentro del plsmido de una bacteria E. coli, se introduce todo el plsmido
(con el gen de inters y con otras secuencias del plsmido) y una vez dentro del ncleo de la clula
el ADN se integra al material gentico del animal (PQBio, 2007).

3. ELECTROPORACIN DE CIGOTO

La electroporacin es una tcnica que se basa en la aplicacin de un elevado voltaje a las clulas
durante un periodo de tiempo muy corto. Durante ese tiempo las clulas (en este caso los cigotos)
despolarizan sus membranas y se forman pequeos orificios por los que penetran las molculas
de ADN que se encuentran alrededor. La ventaja de esta tcnica es que se aplica a varios cigotos
a la vez y habitualmente se obtienen eficiencias de entrada del ADN del 100%. Es una tcnica
que requiere su ajuste fino para cada tipo celular, a fin de determinar las condiciones ptimas de
duracin y potencia del pulso. Se busca siempre el mejor equilibrio entre las condiciones que
aseguran la entrada en la clula y las que maximizan la viabilidad celular. La eficiencia de la
transfeccin por electroporacin esta mediada por una serie de factores como la magnitud del
campo elctrico aplicado, la duracin del pulso elctrico, la temperatura, la concentracin, el tipo
de ADN y la composicin inica del medio (Universidad Nacional Abierta y a Distancia, 2015).

La electroporacin se ha usado para transferir ADN forneo a espermatozoides bovinos para su

uso en transgnesis mediante inseminacin artificial. A partir de 1986, la electroporacin se ha
empleado como el mtodo de eleccin para la transfeccin de clulas embrionarias totipotentes
(embryonic stem cells ES) tanto en experimentos de gene knock-out, como de reemplazamiento
allico y recombinacin de homlogos (Universidad Nacional Abierta y a Distancia, 2015).
En trminos generales la mayor desventaja de la electroporacin es su costo, ya que la mayora
de los equipos comercialmente disponibles (electroporadores) y los accesorios como cubetas y
adaptadores tienen un precio elevado (Universidad Nacional Abierta y a Distancia, 2015).

4. TRANSFECCIN DE CLULAS TOTIPOTENTES

Las clulas Totipotentes son aquellas clulas no germinales pero con capacidad de desarrollarse
en determinadas condiciones, pudiendo dar lugar a la formacin de quimeras, integrando rganos
y tejidos del embrin y del individuo adulto. Hasta hace poco el factor limitante de esta estrategia
era la necesidad de contar con una lnea celular para cada especie cuyo genoma se quisiera
manipular.

La gran ventaja de las clulas totipotentes, es que, como en cualquier lnea celular, la introduccin
de un gen es ms sencilla, as como el saber si el gen se expresa y en qu proporcin.
El transgen puede ser incorporado a la clula por microinyeccin, por electroporacin o por
transfeccin, estos dos ltimos sistemas son algo menos costosas. En todos los casos es posible
aislar a aquellas clulas transformadas utilizando marcadores de resistencia a algn agente
exgeno llegando a obtener una lnea celular transformada y capaz de expresar la nueva
informacin gentica.

La inclusin de clulas de esta lnea en el blastosisto se hace por microinyeccin en el blastocele

de las clulas aisladas del cultivo, dirigiendo la aguja hacia la masa celular interna del embrin.
Es preciso remarcar que el individuo nacido de un blastocisto microinyectado con clulas
totipotentes no es transgnico, es una quimera, su descendencia slo ser transgnica si alguna de
las clulas microinyectadas, al colonizar la masa celular interna del embrin fue capaz de formar
la lnea germinal (Muoz, 2009).

5. TRANSFERENCIA DE DNA EXGENO MEDIADA POR ESPERMA

DURANTE LA FERTILIZACIN (SMGT, SPERMMEDIATED GENE
TRANSFER).

Desde hace casi dos dcadas, el uso de los espermatozoides como vectores de ADN exgeno
(transgnesis mediada por espermatozoides: SMGT) ha centrado la atencin de numerosos
investigadores en un continuo debate sobre la transgnesis animal.
En 1989 se demostr la capacidad que tenan los espermatozoides de ratn, de transportar ADN
exgeno y transferir estas molculas al interior del ovocito en el proceso de la fecundacin, dando
lugar a animales modificados genticamente. De tal manera, la transgnesis mediada por
espermatozoides, debido a su relativa sencillez y bajo costo, podra ser ampliamente utilizada para
la produccin de animales de granja modificados genticamente, representando una potente
herramienta para la biomedicina. Dicha metodologa mejora notablemente la eficiencia que se
alcanza al emplear la microinyeccin pronuclear (0,5-4% de eficiencia), ya que se han obtenido
resultados muy esperanzadores prximos a un 80% de animales transgnicos obtenidos.

Sin embargo, las dificultades en la repetitividad y la baja eficiencia en la integracin de los

transgenes en el genoma del animal obtenida con esta tecnologa, result en una considerable
controversia sobre dicho trabajo durante numerosos aos. No obstante, son varios los estudios
que han sido publicados recientemente en los que se confirma que, los espermatozoides de
mltiples especies pueden ser usados como vectores para introducir transgenes dentro del genoma
del animal.

En la especie porcina (Sus scrofa) domstica, se ha utilizado con xito esta tcnica para producir
cerdos transgnicos mediante el uso de la inseminacin artificial (IA), o mediante el uso de
transferencia de embriones producidos mediante la inyeccin intracitoplsmica de
espermatozoides (ICSI). La aplicacin de IA intrauterina permite el uso de un nmero reducido
de espermatozoides al depositar los espermatozoides prximos al lugar de fecundacin y evitar el
proceso de transporte espermtico que se produce a travs del tracto reproductor femenino cuando
se realiza una IA convencional. La calidad seminal de la muestra determina la capacidad de
fecundar los ovocitos y producir embriones viables, por tanto es necesario asegurar, como paso
previo, que la incubacin de los espermatozoides en presencia de ADN no afecte sustancialmente
la calidad seminal.

Pasos para obtener el transgnico:

Seleccionar al donador de semen de fertilidad probada

Mantenerlo en habitculos con temperatura controlada (25) y bajo condiciones naturales
de luz y humedad
Diluir y lavar los espermatozoides con SFM (Swine Fertilization Medium) y posterior
evaluacin de la calidad seminal
Seleccin y construccin del gen de inters a ser transferido
Transferencia del gen al los espermatozoides
Inseminacin intrauterina a la hembra

6. VECTORES VIRALES

Un mtodo alternativo es la transgnesis viral: el uso de virus recombinantes para introducir genes
en el embrin. Los vectores retrovirales han sido estudiados extensamente para terapia gnica
humana. Estos vectores han demostrado transferir eficientemente genes en embriones murinos,
bovinos y porcinos. Sin embargo, los retrovirus estn sometidos a modificacin epigentica y la
expresin retroviral se corta durante la embriognesis o es breve despus del nacimiento.

En animales de granja, la eficiencia de la transgnesis con vectores lentivirales es 50 veces

superior a la que se consigue con la microinyeccin pronuclear de DNA. Su mayor limitacin es
que no pueden transportar transgenes con ms de 8-9 kb de DNA y, adems, los sitios en los que
se produce su integracin de forma preferente son regiones codificantes de los genes de las clulas
que infectan.

El procedimiento podra ser as: embriones pre-implantacin son expuestos in vitro a soluciones
concentradas de virus recombinantes (virus a los que previamente se les ha introducido el gen de
inters), o son incubados sobre una monocapa de clulas infectadas con estos virus. A
continuacin de la exposicin a los virus, los embriones infectados in vitro son transferidos a
hembras receptoras para completar la gestacin (Narbn, 2008).

Las partculas virales silvestres no se pueden emplear directamente como vectores de expresin,
es necesario convertirlos en virus deficientes en su replicacin dentro de la clula diana. De esta
forma, el vector viral slo se podr multiplicar en las clulas de empaquetamiento, que son lneas
celulares modificadas que tienen la propiedad de ensamblar a los virus y producir partculas
virales que poseen los genes que codifican para las protenas virales y para el gen de inters. Los
virus recombinantes son estructuras capaces de transferir material gentico a una clula diana.

El uso de la tecnologa del ADN recombinante junto con el conocimiento del genoma viral, ha
permitido generar viriones con capacidad de infectar y transferir su material gentico (transfectar),
pero incapaces de replicarse bajo condiciones especificas. Los virus recombinantes son la
herramienta ms eficiente en la transgnesis, permiten sobre expresar protenas en clulas
humanas y como consecuencia se pueden obtener protenas recombinantes con un procesamiento
postraduccional adecuado. Entre los virus recombinantes con aplicaciones en transgnesis se
encuentran los adenovirus, los retrovirus, los virus adeno asociados, los lentivirus, adems de
otros ADN o ARN virus (Narbn, 2008)
Proceso de transgnesis por vectores virales

Seleccionar el virus recombinante

Sustituir los genes que producen la muerte
Genes importantes en el ciclo viral
Extraer los embriones de la hembra de unos 2 das post-coito
Cultivarlos en placas
Incluir en las placas los virus recombinantes
Transferir el embrin infectado a la hembra.
La transmisin del transgn slo es posible si el retrovirus se integra en algunas de las
clulas germinales

7. TRANSFERENCIA NUCLEAR

En la transferencia nuclear (NT) se utiliza el ncleo de una clula procedente del animal que
queremos clonar para introducirlo en un ovocito receptor previamente enucleado. Este ovocito se
activa elctricamente, o por otros mtodos, para que reprograme al ncleo y ste comience la
generacin de un embrin que tendr un 98-99% de la informacin gentica procedente del ncleo
del animal a clonar y un 1-2% procedente del DNA contenido en las mitocondrias y otras
organelas presentes en el citoplasma del vulo receptor. Consecuentemente, el organismo
resultante no ser un clon exacto del animal donante del ncleo. (Pearanda & Asensio, 2014)

Durante el desarrollo, el contenido gentico de cada clula se mantiene, con unas pocas
excepciones, idntico al que tena el cigoto. Por lo tanto, las clulas diferenciadas (adultas) poseen
en su ncleo toda la informacin necesaria para generar un organismo completo. Esto es lo que
se conoce como totipotencia nuclear. En sus inicios, la transferencia nuclear (NT) se desarroll
como un medio de comprobar, de forma experimental, este concepto de totipotencia, mediante la
clonacin de animales a partir de clulas adultas. Los ncleos de estas clulas adultas se
reprograman con la informacin que hay en el citoplasma del ovocito, de manera que se silencian
algunos genes y comienzan a funcionar otros, producindose la parada de la fase adulta para
encenderse la embrionaria. Esta reprogramacin permite que las clulas donantes de los ncleos
para la NT puedan ser fetales, embrionarias o somticas. (Pearanda & Asensio, 2014)
Como es posible obtener un nmero ilimitado de clulas somticas a partir de un animal, la
clonacin constituye una tecnologa que puede ser utilizada para la produccin de un gran nmero
de animales genticamente idnticos entre s (clonacin reproductiva), aunque difieran en algo de
su progenitor donante del ncleo. Muchos animales de granja, tales como vacas, cerdos y ovejas,
han sido clonados de forma satisfactoria utilizando esta tcnica. La oveja Dolly, en 1996, fue el
primer animal clonado a partir de una clula somtica adulta (clula de la glndula mamaria de
una oveja de 6 aos. (Pearanda & Asensio, 2014)

Las lneas celulares obtenidas a partir de clulas somticas permiten la manipulacin de los
genomas de los animales de granja in vitro, lo cual permite crear clulas transgnicas de ovejas,
cerdos y vacas cuyos ncleos, posteriormente, pueden ser transferidos a un ovocito enucleado
para generar un animal transgnico mediante transferencia nuclear: clonacin a partir de una
clula transgnica. Polly es la primera oveja transgnica producida por transferencia nuclear. Fue
generada a partir de fibroblastos fetales que fueron previamente modificados genticamente
mediante la adicin del gen humano que codifica el factor IX de coagulacin, introducido en un
vector que portaba un promotor que diriga la expresin a la glndula mamaria. Polly excretaba
el factor IX de coagulacin humano en su leche.
Por otra parte, si un embrin obtenido por NT de clulas somticas se detiene en fase de
blastocisto y de l se obtienen clulas ES, stas pueden cultivarse in vitro para diferentes usos
potenciales (clonacin teraputica): terapias de reemplazo y regeneracin celular; investigacin
mdica; e, incluso, se puede realizar la modificacin gentica de estas clulas ES para corregir un
defecto gentico del individuo donante. (Pearanda & Asensio, 2014)
 8. TRANSFECCION DE GAMETOS

Se comentan algunos aspectos sobre la transfeccin de gametos y su empleo para la produccin

de animales transgnicos (AT). Para la transfeccin de gametos han sido empleados ADN
desnudo, vectores virales, complejos ADN-Liposomas, electroporacin, o microproyectiles de
alta velocidad. En general, se han obtenido altos porcentajes de transfeccin (hasta del 80% en
espermatozoides) y se ha observado que los transgenes se localizan en el interior del ncleo. Se
ha constatado que los gametos estn naturalmente protegidos frente a la entrada de genes extraos:
en espermatozoides esta funcin la cumplen diversas protenas presentes en los fluidos seminales
o en su membrana plasmtica; mientras que en los gametos femeninos son las envolturas del
huevo (zona pelcida en mamferos o membrana perivitelina en moluscos) las que desarrollan
esta labor. En muchos casos, los gametos transfectados se han utilizado en fecundaciones in vitro
o en inseminaciones a fin de crear AT. En algunos casos, los porcentajes de estos AT han sido
altos, como en el salmn (85%). Pero los AT, as creados, han sido en su mayora quimeras y no
han sido capaces de producir lneas transgnicas. Se sugiere que los AT producidos por gametos
transfectados, son diferentes a los producidos por el mtodo convencional de microinyeccin. Es
probable que los gametos posean mecanismos, an no descritos, capaces de modificar la
integracin/expresin de los transgenes, o que impediran la integracin de los transgenes en la
lnea germinal. (Esponda, 2005)

El procedimiento habitual para transfectar un espermatozoide ha sido el mtodo in vitro. Los

gametos se incuban durante perodos de tiempo cortos en una solucin que contiene las
construcciones de genes y luego se comprueban para la transfeccin, esta tcnica ha sido usada
para las inseminaciones o para procedimientos de fertilizacin in vitro. En varios casos el ADN
desnudo fue empleado con xito, pero complejos ADN-liposoma o electroporacin
procedimientos han sido tambin usados. El mtodo in vivo emplea una inyeccin del transgen
en el conducto deferente del ratn y despus de 6-12 horas los gametos son recogidos y
analizados. En el caso de las transfecciones in vitro de gametos femeninos se han usado liposomas
o retrovirus los cuales han sido aplicados con xito. (Esponda, 2005)

La localizacin del gen forneo en el espermatozoide se lo realiza mediante hibridacin in situ

fluorescente, autorradiografa o inmunocitoqumica. Despus de usar el procedimiento de
transfeccin in vitro o in vivo un alto porcentaje (80%) de espermatozoides aparecieron
transfectados. Generalmente, estos resultados mostraron que el gen extrao apareci en el ncleo
de los espermatozoides y procedimientos moleculares (secuencias de Slot-Blot, PCR, Southern
Blot) han demostrado la presencia del transgen en el ADN de los gametos. (Esponda, 2005)

9. TRANSFERENCIA GNICA CON TRANSPOSONES

Los transposones se definen como elementos transponibles que contienen genes adicionales a
parte de los necesarios para la transposicin y estn dentro de secuencias repetidas. Dentro de esta
categora se encuentran los trasposones compuestos de procariotas, familia Tn3, elemento P de
Drosophila, secuencias Alu de mamferos, retrotrasposones. (Narbn, 2008)

Los trasposones son secuencias de material genmico que tienen la capacidad del saltar fuera y
dentro del genoma. Son capaces de autorreplicarse e integrarse aleatoriamente en nuevos sitios
dentro del genoma (trasponerse o saltar). Pueden entrar en plsmidos y ser propagados por ellos.
Estas propiedades les confieren la capacidad de ser transferidos exitosamente en clulas y
genomas extraos. La ingeniera gentica puede manipular estos trasposones para llevar a cabo
transferencia horizontal de genes. La transferencia horizontal de genes es la transferencia de
material gentico entre clulas y genomas que pertenecen a especies no relacionadas, por procesos
distintos a la reproduccin. Un ejemplo de ello es el uso de los trasposones de salmnidos para la
transferencia gnica en vertebrados. Los trasposones de vertebrados de la familia Tc1/mariner
contienen como mnimo un gen nico que codifica la enzima trasposasa flanqueada por dos
repeticiones terminales invertidas (tir). Cada una de las tir posee uno o varios sitios de 20-30 p.b.
de interaccin con la trasposasa. (Narbn, 2008)

La trasposasa interacciona con estos sitios para cortar el trasposn, luego interacciona con
secuencias presentes en el genoma en otro locus y pega el trasposn en el nuevo locus. En
vertebrados todos los trasposones que se han detectado estn inactivados por mutaciones. Sin
embargo recientemente se ha obtenido un trasposn activo de salmnidos mediante mltiple
mutagnesis dirigida. Dicho transposn denominado Bella durmiente o Sleeping beauty (SB)
se puede usar en todos los vertebrados analizados hasta el momento como vehculo de
incorporacin de nuevos genes y para inactivar genes en el genoma por insercin. (Narbn, 2008)

Referencias
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