Artigo de Reviso

Diagnstico molecular passado, presente e futuro

Molecular diagnosis past, present and future
Gustavo Barcelos Barra, Maria Cecilia Sant Anna Soares Borges Caixeta, Patrcia Godoy Garcia Costa
Claudia Ferreira de Sousa, Lara Franciele Ribeiro Velasco

Resumo: Este artigo consiste em uma descrio dos fatos histricos relacionados ao diagnstico molecular, das tcnicas disponveis
e do que se espera para o futuro do setor. Inicialmente, foram abordados as descobertas e os avanos originados dentro dos
laboratrios de pesquisa das universidades, onde, efetivamente, nasceram as tcnicas de anlise de cidos nucleicos. Posteriormente
foi descrita a evoluo que estas tcnicas vm sofrendo ao longo do tempo at se chegar ao formato atual, passando pela biologia
molecular manual e automatizada, abrangendo, basicamente, a PCR e a PCR tempo real. Alm disso, foram discutidas e descritas
brevemente outras tcnicas de amplificao de cidos nucleicos, amplificao de sinal e microarranjos. Por fim, foi apresentado um
resumo das principais expectativas em relao ao diagnstico molecular, considerando seu crescimento, o mercado de anlises
clnicas e as novas reas e abordagens.
Palavras-chave: Biologia Molecular; PCR; Genotipagem; Sequenciamento

Abstract: This article is a description of historical events related to molecular diagnosis, the techniques used today, and what the
hope for the future of this segment is. First, we turn back to discoveries and advances originated within the research laboratory
inside the universities, where the nucleic acid analysis techniques were born and we describe the progress that they have suffered
until the current format. Otherwise, this is a brief history from manual molecular biology to automated molecular biology covering
mainly PCR, real time PCR. Moreover, we discuss briefly about other techniques for nucleic acid amplification, signal amplification
and microarrays. Finally, we make a summary of the main expectations for the molecular diagnosis covering growth, market, new
areas and approaches.
Keywords: Molecular biology; PCR; Genotyping, Sequencing

INTRODUO sequncia de eventos literrios relacionados com o desenvol-

A biologia molecular um setor emergente na medicina
laboratorial. Suas anlises se baseiam na deteco, identifi-
cao e quantificao de cidos nucleicos (DNA/RNA). Atual-
mente, as principais reas de interesse so a deteco de
doenas genticas (X-Frgil, Fibrose Cstica delta F 507),
deteco, identificao e quantificao de microrganismos
(HIV, HCV, Micobacterium tuberculosis), genotipagem e estu-
dos de vnculo gentico. Tais anlises so as responsveis
pela maior parte da rotina do setor, auxiliam o diagnstico e
prognstico de doenas infecciosas e genticas, alm de
resolver questes familiares. (1,2) Ademais, a anlise da
expresso gnica pela quantificao de RNA, determinao
do nmero de cpias de DNA (dosagem gnica), farmaco-
genmica, tipagem de HLA, testes pr-implantacionais e
anlise das condies fetais pela anlise do sangue mater-
no representam reas de interesse em crescimento.(1-3) Alm
disso, o setor se destaca pela sua capacidade inovadora de
desenvolver e validar seus prprios exames e criar solues
para pesquisas cientficas e clnicas.(2)
Uma breve reviso sobre o passado, presente e futuro
do diagnstico molecular, desde o desenvolvimento das pri-
meiras ferramentas at a automao do setor e suas pers-
pectivas para o futuro, apresentado. A Tabela 1 apresenta a
vimento da biologia molecular
DIAGNSTICO MOLECULAR - PASSADO
Por trs do sucesso do setor de biologia molecular no
laboratrio clnico existem mais de trinta anos de histria
envolvendo inovaes tcnicas para anlise de cidos nuclei-
cos. O descobrimento das enzimas de restrio(4-6) e da trans-
criptase reversa,(7,8) a introduo do "Southern",(9) "Northern"(10)
e "Dot Dlotting",(11) os mtodos de sequenciamento de DNA(12,13)
e uma variedade de outras inovaes tcnicas promoveram o
aparecimento de testes moleculares praticveis no incio dos
anos setenta.
Entretanto, foi a descoberta da reao em cadeia pela
polimerase (PCR) e sua automao(14,15) na metade dos anos
oitenta que realmente revolucionou a biologia e o diagnstico
molecular. Interessantemente, a primeira descrio da PCR
utilizou a tcnica para diagnstico pr-natal dos alelos beta A
e beta S da anemia falciforme. A genotipagem envolvia
amplificao da regio do gene da beta-globina que continha
as mutaes e digesto de uma sonda marcada radioativa-
mente com enzimas de restrio na presena do produto
amplificado. Assim, o gentipo da beta-globina pde ser
determinado em menos de um dia e com menos de um

Laboratrio Sabin, Braslia, DF

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micrograma de DNA genmico.(15) Este tipo de abordagem
modelou a forma com que o diagnstico molecular seria
realizado nas duas dcadas seguintes, revolucionando a
prtica clnica e tornando os cidos nucleicos humanos e
de agentes infecciosos mais acessveis para deteco.
Em seguida, a evoluo metodolgica da PCR clssica
para a PCR em tempo real e o desenvolvimento dos micro-
arranjos de DNA marcaram o incio de uma segunda revolu-
o no diagnstico molecular (iniciada nos anos 90 e que
ainda est em andamento).(3) No se pode deixar de ressaltar
a tcnica de extrao de cidos nucleicos descoberta por
Boom,(16) que compe o princpio da maioria dos kits manuais
de extrao de cidos nucleicos e tambm dos equipamen-
tos automatizados de extrao.(17)
Para ilustrar os fatos relatados acima, pode-se rever o
histrico dos testes de vnculo gentico (paternidade). Inicial-
mente, a anlise de vnculo gentico necessitava de uma
grande quantidade de DNA porque no existia a etapa de
amplificao por PCR. Os perfis genticos, ou seja, as "im-
presses digitais" moleculares eram obtidas por digesto do
DNA genmico com enzimas de restrio, separao por
eletroforese seguida de Southern Blot com uso de sondas
radioativas.(18) Desta forma, um caso de paternidade clssico
com suposto pai, me e filho (trio) poderia ser resolvido em
algumas semanas.(19) Posteriormente, com o advento da PCR,
a quantidade de DNA inicial necessria para o teste diminuiu,
o que permitiu o uso dos "Shorts Tandem Repeats" (STRs),
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Diagnstico molecular passado, presente e futuro
passando a anlise das reaes no formato de singleplex ou
multiplex, a ser feita em gel de acrilamida, corado com prata.(18)
Assim, um caso de paternidade clssico poderia ser resolvido
em alguns dias.(19) Atualmente, os kits comerciais necessitam
de uma quantidade nfima de amostra, alguns at inclusive,
dispensam a extrao de DNA (AmpFlSTR Identifiler Direct
PCR Amplification Kit, Life TechnologiesTM). Vrios STRs so
amplificados simultaneamente em uma nica reao de PCR
(na maioria das vezes quinze), com primers marcados com
diferentes fluorescncias e analisados por eletroforese e
capilar em sequenciadores genticos como o ABI 3500 (Life
tecnologiesTM), equipamento j desenhado prevendo o di-
agnstico molecular (com rastreabilidade de reagentes, por
exemplo), com capacidade de detectar seis fluorescncias
simultaneamente e revelar o perfil gentico dos envolvidos,
em um trio de paternidade, em 35-50 minutos.(18,19)
DIAGNSTICO MOLECULAR - PRESENTE
Os exames que envolvem tcnicas de biologia mole-
cular so divididos em trs etapas (extrao, amplificao e
anlise). Tradicionalmente, no laboratrio clnico os cidos
nucleicos so extrados de amostras como sangue total, l-
quido amnitico, soro, plasma, urina, tecidos parafinados,
raspados bucais, cervicais, e uretrais.(1,17) Ademais, o DNA
fetal circulante no sangue materno uma oportunidade de
anlise no invasiva do feto.(20)
A extrao de DNA/RNA realizada, na grande maioria
das vezes, pela tcnica de Boom utilizando-se de slica con-
vencional ou slica magntica de forma manual ou automa-
tizada.(17) Aps a extrao, a mistura complexa de cidos
nucleicos extrada pesquisada pela sequncia alvo que se
deseja detectar. A sequncia amplificada ento analisada
diretamente por eletroforese em gel de agarose ou acrila-
mida (pesquisa de agentes infecciosos Toxoplasma gondii),
ou nestes mesmos gis aps digesto com enzimas de
restrio (pesquisa de mutaes conhecidas Fator V Leiden),
ou por eletroforese capilar (anlise de fragmentos para pater-
nidade), ou sequenciada (pesquisa de mutaes desconhe-
cidas BRCA 1 e 2), ou hibridizada contra um microarranjo
(genotipagem do HPV), dentre outras.
Na maioria das vezes, estas anlises so manuais ou
semiautomatizadas. Entretanto, vm sendo continuamente
aperfeioadas para que tenham uma melhor performance.
Dentre as melhorias, destacam-se o PCR "Hot-Start", os
primers e sondas modificadas, as novas enzimas e enzimas
geneticamente modificadas e os sistemas de deteco semi-
automatizados e automatizados.(3)
Foi observado, h vrias dcadas, que a PCR geral-
mente resulta em produtos inespecficos. Uma das solues
para este problema foi a abordagem "Hot-Start" da PCR, onde
a polimerase se torna ativa apenas aps alguns minutos
alta temperatura, evitando, assim, a extenso de primers
anelados parcialmente, que so as principais fontes de pro-
dutos inespecficos.(21-23) O PCR "Hot-Start" no s melhora a
sensibilidade e especificidade da reao como tambm re-
sulta em amplificaes mais robustas, permitindo inclusive
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Barra GB, Caixeta MC, Costa PG, Sousa CF, Velasco LF
que a reao seja preparada temperatura ambiente. (3) As
principais estratgias para se obter o "hot-start" atualmente
so a inativao com reagentes qumicos, haptmeros, anti-
corpos e introduo de mutaes na polimerase.(3,24,25)
Com relao aos primers e sondas modificadas, atual-
mente existe uma srie de modificaes disponveis, princi-
palmente, no que diz respeito a fluorforos e atenuadores.
Nas ltimas duas dcadas, diversos tipos de sondas para
deteco e quantificao de cidos nucleicos foram desen-
volvidos; dentre eles destacam-se as sondas de hidrlise
(Taq ManTM), "Beacons" moleculares, os primers "Sunrise",
"Scorpions" e "DzyNA".
Um grande avano tem sido notado na tecnologia das
enzimas utilizadas no diagnstico molecular, principalmente,
em relao s enzimas termoestveis, que desempenham
um papel crtico nos mtodos de amplificao de cidos
nucleicos, que necessitam de desnaturao do DNA e termo-
ciclagem.(3) Diversas polimerases termoestveis j foram
geneticamente modificadas e as principais vantagens que
apresentam so maior fidelidade e velocidade.(29,30) A Tabela 2
apresenta uma lista das principais polimerases utilizadas na
atualidade. Com relao velocidade das reaes, termo-
cicladores capazes de realizar troca de temperaturas ultrarrpidas
(StepOneTM Realtime PCR System - Life tecnologiesTM)(27) e
polimerases ultrarrpidas (Kod DNA polimerase)(31) j esto
disponveis.
O carreamento de produtos pr-amplificados uma das
principais preocupaes de quem excuta a PCR, pois podem
gerar reaes falso-positivas, sendo este o motivo pelo qual
o setor de biologia molecular dividido fisicamente em reas
Pr-PCR, Trans-PCR e Ps-PCR.(32,33) A enzimologia para PCR
avanou tambm no sentido de se evitar este carreamento. A
substituio do deoxitimidina trifosfato (dTTP) pela
deoxiuridina trifosfato (dUTP) e a adio da enzima Uracil
DNA Glicosilase (UDG) na reao de PCR elimina produtos
pr-amplificados que contenham o dUTP, preservando o DNA
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nativo da amostra, devido ao da UDG sobre DNA dupla
fita com dUTP, o que no ocorre com o DNA nativo que con-
tm dTTP.(34) Atualmente, os "master mixes" comerciais para
PCR e PCR em tempo real contemplam o dUTP na sua
composio.
As reaes de RT-PCR em um nico passo (contnua)
tambm outro avano importante, pois evita abertura dos tubos
para transferncia do cDNA para reao de PCR, aps sua
transcrio reversa, a partir do RNA. A RT-PCR contnua tornou-
se vivel com o uso de enzimas que apresentam tanto atividade
transcriptase reversa quanto DNA polimerase (Tth DNA
polimerase) ou com a mistura das duas enzimas envolvidas
no processo, a transcriptase reversa (AMV ou MMLV) com uma
Taq DNA polimerase "Hot-Start".(35) Quando os mtodos de
RT-PCR foram comparados, o mtodo contnuo com duas
enzimas mostrou-se o mais sensvel, seguido pela reao
de RT-PCR em dois passos (no contnua) e, por fim, o mtodo
contnuo com uma nica enzima.(35) A tecnologia de RT-PCR
contnua com duas enzimas foi extremamente importante na
deteco do vrus H1N1, durante a pandemia de 2009.
Para aumentar a utilidade diagnstica de um teste
molecular, existe um forte interesse nas reaes "multiplex"
(onde mais de um DNA/RNA alvo so analisados por reao
simultaneamente), assim, uma variedade de novos desenhos
analticos foram introduzidos na rotina laboratorial, (3) como,
por exemplo, a genotipagem de HPV realizada em micro-
arranjos de DNA e que ser discutida posteriormente.
Uma importante revoluo ocorreu no diagnstico mole-
cular com o advento do PCR em tempo real. Inicialmente, o
funcionamento de uma reao de PCR era semelhante a uma
caixa preta. Os reagentes eram misturados com o DNA molde
a ser avaliado em um tubo, que, em seguida, era colocado no
termociclador. Aps algumas horas, se tudo ocorresse bem,
uma banda de tamanho esperado apareceria no gel aps a
eletroforese. Com o advento da tcnica de PCR em tempo
real, tornou-se possvel olhar para dentro do tubo durante o
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 Diagnstico molecular passado, presente e futuro

processo e "ver" o que est acontecendo com o DNA molde,

medida que ele vai sendo amplificado, ao longo dos ciclos.(24,27)
Assim, a PCR em tempo real a coleta contnua de sinal
fluorescente de uma ou mais reaes de PCR em um intervalo
de ciclos. Esta tcnica pode ser utilizado tanto para anlises
qualitativas quanto quantitativas, pois a PCR quantitativa em
tempo real a converso dos sinais fluorescentes de cada
reao em um valor numrico para cada amostra.(24,27)
O monitoramento em tempo real da reao de PCR
pode ser alcanado por uma variedade de molculas fluo-
rescentes reprteres, como corantes (SYBR Green I) ou son-
das de hidrlise (TaqManTM), "Beacons" moleculares, primers
"Sunrise", "Scorpions" e "DzyNA".(24-27) Algumas dessas mo-
lculas so reprteres DNA-dupla fita especficos (SYBR
Green I), enquanto outros so sequncias especficas
(TaqManTM).(24,27)
Desse modo, o PCR em tempo real considerado
homogneo por combinar a amplificao e anlise em um
nico passo. Anteriormente, discutimos que os testes mole-
culares consistiam de trs etapas (extrao, amplificao e
anlise), o PCR em tempo real combinou as duas ltimas
etapas e, com isso, diminuiu o tempo de liberao de resulta-
dos e aumentou a faixa dinmica de anlise para 107 (faixa
dinmica de anlise do PCR convencional 103), reduzindo o
problema de carreamento de produtos pr-amplificados
devido ao fato de ser desnecessrio abrir o tubo onde houve a
reao de PCR.(3) Alm disso, esta tcnica apresenta outros
benefcios no que diz respeito a ensaios diagnsticos. Dis-
pensa manipulao Ps-PCR e a contaminao do laboratrio
com produtos de PCR diminuda ou eliminada, permitindo, Figura 1. Nmero de publicaes envolvendo as tcnicas de PCR em
tempo real (A) e PCR (B) no Pubmed do NCBI de 1984 a 2010.Pesquisa
inclusive, a unificao das reas Pr-PCR e Ps-PCR. Assim,
para PCR realizada com o termo "Polymerase Chain Reaction" e
ensaios mais rpidos, e mais confiveis podem ser realiza- "PCR". Pesquisa para PCR tempo real realizada com os termos:
dos.(37) "Real-time PCR", "qPCR" "real time PCR", e "quantitative PCR" em
Nos ltimos anos, devido s suas vantagens e grande 19/04/2011.
disperso nos laboratrios, houve um aumento progressivo
no nmero de publicaes a respeito de PCR em tempo real lises simultneas, reduziu os custos com reagentes e manteve
(Figura 1-A), demonstrando o ganho de importncia da tcni- a anlise em tubo fechado, ou seja, um sistema homogneo.
ca. Para comparao, o nmero de publicaes envolvendo Uma nica sonda fluorescente (Simple ProbeTM), ou um coran-
PCR convencional est representado na Figura 1-B. te ligador de DNA fluorescente (LightCycler Green TM), o
O aparecimento dos extratores de DNA automatizados, suficiente para as anlises de HRM.(39,40)
como Nuclisens easyMag (bioMerieux), QIAcube (Qiagen), Com relao aos microarranjos, o impacto desta tecno-
QIAxtractor (Qiagen), bem como as plataformas fechadas para logia na pesquisa biomdica comparvel ao sequencia-
testes moleculares como o m2000 real-time system (Abbott), mento de DNA e a descoberta da PCR. Sua introduo provo-
QIAsymphony RGQ (Qiagen) e Cobas 4800 system (Roche), cou uma minirrevoluo no mundo da cincia e da medici-
onde amostra primria colocada no equipamento e todo na.(41-43) O conceito dos microarranjos muito similar ao das
processo de extrao e amplificao realizado com pouca tcnicas de blottings.(41) Por definio, os sistemas e equipa-
dependncia de um operador, hoje uma realidade no labo- mentos de microarranjos realizam vrias anlises de hibri-
ratrio clnico. dizao de DNA/RNA em paralelo e em um formato miniatu-
Outro avano importante a anlise de variaes na rizado, permitindo assim a anlise da expresso de mRNAs,
sequncia de DNA pela curva de desnaturao de alta resolu- polimorfismos no DNA genmico ou genotipagem de pat-
o (HRM). Uma tcnica relativamente nova como aborda- genos. Estes microarranjos podem ser fabricados sobre
gem diagnstica. Esta anlise baseada na propriedade suportes de vidro, slica, ou plstico e contm centenas de
fundamental do DNA dupla fita em se desnaturar com o aque- stios discretos contendo sondas imobilizadas em sua super-
cimento da amostra. Geralmente, a anlise por HRM tem sido fcie. A anlise das reaes de hibridizao geralmente envolve
utilizada para deteco de mutaes conhecidas e desco- a deteco do sinal gerado pela ligao da sequncia de DNA/
nhecidas. Sua incluso nos equipamentos de PCR em tempo RNA alvo, normalmente um produto de PCR, marcado fluores-
real simplificou o processo, aumentou a capacidade de an- centemente com as sondas dispostas no microarranjo. Na

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Barra GB, Caixeta MC, Costa PG, Sousa CF, Velasco LF
maioria das vezes, um escner de fluorescncia utilizado
para analisar o padro de hibridizao formado.(42) Atualmente,
no Brasil, o principal ensaio envolvendo microarranjos de DNA
realiza a genotipagem de HPV em amostras biolgicas. O
teste conhecido como Papillocheck (Greiner-bio-one) capaz
de genotipar 24 subtipos de HPV, 18 gentipos de alto risco e
seis de baixo, simultaneamente, aps a amplificao do DNA
HPV por PCR, com primers marcados fluorescentemente. Os
produtos de PCR so hibridizados contra um microarranjo
contendo sequncias especficas para os 24 diferentes tipos
de HPV detectados pelo exame. A hibridizao contra determi-
nado local (ou stio) do microarranjo indica o gentipo presen-
te na amostra. Uma das principais vantagens da genotipagem
de HPV ser realizada em microarranjo de DNA o fato de
permitir a deteco de infeces mltiplas, ou seja, aquelas
com mais de um tipo de HPV, que normalmente est asso-
ciada a um maior risco de progresso para o cncer cervical.(44)
A amplificao de cidos nucleicos baseada na sequn-
cia (NASBA) uma tecnologia primer-dependente que pode
ser utilizada para a amplificao contnua de cidos nucleicos
em uma mistura em uma nica temperatura.(45) Imediatamen-
te aps sua inveno, o NASBA foi usado para o diagnstico
rpido e quantificao do HIV-1, no soro de pacientes.(46) Ape-
sar do RNA poder ser amplificado por RT-PCR, a vantagem do
NASBA que se trata de uma reao isotrmica, geralmente
na temperatura constante de 41C, ou seja, dispensa termo-
ciclagem exigida na PCR.
Alm das tcnicas que envolvem amplificao do DNA/
RNA existem aquelas que permitem apenas uma forte ampli-
ficao de sinal da presena do alvo. Diversas aplicaes
diagnsticas atuais so dependentes destas tcnicas. Que
no envolvem amplificao da molcula de DNA/RNA do alvo.
Dentre elas, destaca-se o Branched DNA (bDNA) e a captura
hbrida.
Nos ensaios de bDNA, a amplificao de sinal obtida
pela ligao de uma grande quantidade de molculas da
enzima fosfatase alcalina na molcula de DNA ou RNA alvo via
hibridizao de uma srie de sondas de oligonucleotdeos.
Cada evento de reconhecimento molecular leva formao
de estruturas ramificadas. Estas ramificaes contm a re-
gio de reconhecimento para a sonda subsequente e so as
responsveis pela amplificao do sinal indicativo da presen-
a do DNA/RNA alvo.(47) O bDNA o terceiro maior mtodo
molecular (juntamente com a RT-PCR e o NASBA) para
quantificao da carga viral do vrus da imunodeficincia hu-
mana (HIV) e tambm usado para determinao da carga
viral do HCV e HBV. Para compensar a baixa sensibilidade
apresentada pelas verses iniciais do bDNA, uma variao
foi desenvolvida e a sensibilidade do sistema atingiu a faixa
do zeptomoles, fazendo com que o sistema pudesse rivalizar
com o PCR.(48)
A captura hbrida um ensaio rpido no radioativo, no
qual as molculas de DNA alvo se hibridizam a sondas de
RNA especficas. Aps uma etapa de hibridizao em solu-
o, os hbridos de DNA/RNA formados so capturados por
uma superfcie slida coberta com anticorpos especficos anti-
hbridos e detectados por um sensvel sistema de amplifica-
258
o de sinal quimioluminescente.(49) Ensaios de captura
hbrida esto disponveis comercialmente para deteco de
agentes microbianos. A captura hbrida o principal ensaio
para deteco do Papilomavirus humano (HPV) no Brasil e
vem sendo gradativamente substituda por tcnicas mais
modernas e que incluem a genotipagem do HPV, como o
Papillocheck. Entretanto, tanto a captura hbrida quanto o
bDNA e outras tcnicas de amplificao de sinal, atualmente,
vm sendo gradativamente substitudas pelo PCR tempo real
devido s vantagens de um ensaio homogneo, j descritas
anteriormente.
DIAGNSTICO MOLECULAR - FUTURO
O mercado de diagnstico molecular o segmento que
mais cresce no diagnstico in vitro e est sendo impulsiona-
do por vrios fatores. Isto inclui a necessidade de tcnicas
automatizadas e de fcil manuseio que combinam otimiza-
damente a preparao de amostras, a anlise e a avaliao
de dados. Alm disso, h uma crescente disponibilidade de
testes moleculares para monitorar a eficcia teraputica de
medicamentos de alto custo. Atualmente, o diagnstico
molecular um mercado de 2-3 bilhes de dlares, que cres-
ce a uma taxa 25% anuais, e previsto que atinja 6,4-7 bi-
lhes de dlares em 2012.(2,50)
Atualmente, os imunoensaios representam aproxima-
damente 25% do mercado global e o diagnstico molecular,
cerca de 6%. No entanto, este "novo" segmento est pronto
para assumir uma parcela maior do diagnstico in vitro nos
prximos anos. As doenas infecciosas e a triagem de san-
gue so os maiores segmentos do diagnstico molecular
(>70%) e devero crescer a uma taxa anual de 7-8% nos pr-
ximos anos. Outros segmentos do mercado incluem a gen-
tica tradicional, a medicina personalizada, e o cncer, com
13%, 9% e 8% do mercado nos laboratrios clnicos america-
nos, respectivamente. Como as doenas infecciosas so um
segmento maduro, outras categorias esto crescendo relativa-
mente mais rapido.(50-52)
A introduo de novos testes diagnsticos, principalmen-
te na rea de doenas infecciosas, manter o crescimento do
setor no curto prazo. Nos pases em desenvolvimento, as infec-
es respiratrias, HIV/AIDS, doenas diarreicas, a malria e
tuberculose esto entre as dez principais causas de morte.
Os novos testes moleculares devem contemplar os patgenos
destas doenas.(2,50,51)
Por outro lado, o cncer a segunda causa mais co-
mum de morte, depois das doenas cardiovasculares. E o
envelhecimento da populao favorece que esta estatstica
piore. Assim, os testes moleculares para o cncer tendem a
crescer nos prximos trs a cinco anos. Atualmente, o diag-
nstico do cncer baseado principalmente no imunodiag-
nstico para a deteco de marcadores tumorais. Vrias em-
presas esto desenvolvendo testes de predisposio com
base nas variaes genmicas associadas a fases anteriores
do cncer. Alm disso, o codesenvolvimento do diagnstico
molecular e teraputica alvo associados uma estratgia bem
sucedida no desenvolvimento de drogas anticncer.(2,50,51)
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Os recentes desenvolvimentos no campo da farmaco-
genmica podem fazer uma evoluo rpida entre o diagns-
tico da doena e a terapia adaptada s caractersticas
genticas de um indivduo (muitas vezes referida como a me-
dicina personalizada). Embora ainda esteja em desenvolvi-
mento, este segmento tem imenso potencial para se tornar
um mercado lucrativo.(2,50,51)
Os atuais produtos de diagnstico molecular consis-
tem, principalmente, em testes concebidos em torno de um
nico marcador associado a um estado de doena. A prxi-
ma gerao vai empregar ainda mais plataformas "multiplex".
H indcios de que as prximas tecnologias envolvero a
medio de vrios tipos de biomarcadores simultaneamen-
te (por exemplo, DNA e protenas). Tais inovaes dizem res-
peito a construes, tais como o microarrays DNA/anticorpos,
capazes de dosar cidos nucleicos e protenas simultanea-
mente, ou imunoensaios utilizando marcaes de cidos
nucleicos, onde os resultados so gerados por PCR (Imuno-
PCR). Estes testes devem permitir que os imunoensaios e
os testes de cidos nucleicos sejam realizados em um ni-
co equipamento,(52) o que pode significar a unio dos dois
setores.
A nanobiotecnologia e os "biochips" tambm devem
impulsionar o crescimento futuro e fazer uma contribuio
significativamente notvel para o crescimento do diagnstico
molecular, inclusive com o desenvolvimento de instrumentos
portteis "Point-of-care testing" (POCT) para execuo de testes
moleculares.(2,3)
CONCLUSO
A partir do exposto, possvel concluir que o diagnstico
molecular um setor do laboratrio clnico em crescimento
literalmente exponencial. Adquiriu considervel importncia
clnica e comercial, nas ltimas dcadas. Continuamente,
novas abordagens e ferramentas dependentes da anlise de
cidos nucleicos vm sendo desenvolvidas. Isto tem impul-
sionado o crescimento do segmento. O grande destaque
nesta dcada, sem dvida, a automao do setor, avano
inimaginvel at alguns anos atrs.
AGRADECIMENTOS
Agradecimento especial para Dra. Janete Ana Ribeiro
Vaz e Dra. Sandra Santana Soares Costa por incentivarem a
pesquisa cientfica, desenvolvimento tecnolgico e inovao
na iniciativa privada, disponibilizando recursos do Laboratrio
Sabin para tal finalidade. Um agradecimento especial tam-
bm para os demais colegas do Laboratrio Sabin que de
alguma maneira contriburam para este trabalho.
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Autor correspondente
Gustavo Barcelos Barra
SEPS 710/910 Sul, loja 03, trreo. Ed. Via Brasil.
Asa Sul
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