DETERMINACION DE FRAGILIDAD OSMOTICA

INTRODUCCION
La membrana eritrocitaria es semipermeable, es decir que permite el paso de agua
mientras que restringe el paso de ciertos solutos. De esta manera, si el glbulo rojo es colocado en
un medio hipertnico, pierde agua y se deshidrata. Por otro lado, si es colocado en un medio
hipotnico, es decir en concentraciones decrecientes de NaCl, ingresar agua al eritrocito y este
finalmente terminar por hemolizarse. As, la intensidad de la hemlisis depender del grado de
hipotona del medio.
La capacidad de una poblacin eritrocitaria de resistir el efecto hipotnico del medio
se denomina resistencia osmtica. Esta capacidad est alterada en ciertas patologas como
aquellas existe alteracin de forma eritrocitaria o alteraciones de membrana del glbulo rojo.
La prueba de Fragilidad Osmtica se debe realizar a las 0 y 24 horas de extrada la
muestra.

MATERIALES
Material de vidrio.
Espectrofotmetro .
Solucin stock de NaCl fosfatado pH 7.4
- NaCl 90 grs.
- Na2PO4 x 2 H2O 17.1 grs.
- NaH2PO4 x H2O 2.14 grs.
- Agua destilada csp 1000 ml.
Esta solucin debe guardarse en frasco ambar a 4 C

MUESTRA
Sangre venosa heparinizada.
PROCEDIMIENTO
1. A partir de la solucin madre, preparar 100 ml de solucin de NaCl al 1 %.
2. A partir de la solucin de trabajo preparada realizar diluciones en tubo a las concentraciones
siguientes:0.85, 0.75, 0.65, 0.60, 0.55, 0.50, 0.45, 0.40, 0.35, 0.30, 0.20, 0.10%. El volumen
final de cada tubo debe ser de 10 ml. Mezclar.
3. Adicionar 0.1 ml de muestra a cada tubo y mezclar. Dejar incubando a temperatura ambiente
por 30 minutos.
4. Remezclar y centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos. Extraer el sobrenadante de cada tubo.
5. Leer el grado de hemlisis de cada tubo a 540 mn tomando como blanco el tubo con mayor
concentracin de NaCl..
6. Informar los resultados junto a una curva normal a las 0 y 24 hrs.

CURVA NORMAL DE FRAGILIDAD OSMOTICA A LAS 0 Y 24 HRS

% de NaCl % de lisis 0 hrs. % de lisis 24 hrs

0.10 100 100

0.20 100 95-100

0.30 97-100 85-100

0.35 90-99 75-100

0.40 50-95 65-100

0.45 5-45 55-95

0.50 0-6 40-85

0.55 0 15-70

0.60 0 0-40

0.65 0 0-10

0.75 0 0

0.85 0 0
INTERPRETACION
Si los eritrocitos muestran > FO y por ende < de RO desplazarn la curva hacia la
derecha, es decir presentan una capacidad disminuida para resistir la entrada de agua y la
hemlisis se intensifica a concentraciones mayores de NaCl. Esto se observa en la esferocitosis y
estomatocitosis.
Por otro lado, aquellos con mayor relacin superficie volumen y menor concentracin
de Hb presentan mayor capacidad de resistir la hemlisis hipotnica. Este es el caso de
drepanocitos y dianocitos.
Los reticulocitos por su parte son ms resistentes a la lisis osmtica por lo que un
aumento en su nmero implicar un aumento de la RO.

Aumento de Fragilidad Osmtica:

- Esferocitosis
- Estomatocitosis
- Anemia Hemoltica Microangioptica

Disminucin de Fragilidad Osmtica:

- Drepanocitosis
- Presencia de hipocroma
- Presencia de reticulocitos