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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE ODONTOLOGA
CARRERA DE ODONTOLOGA

"EFECTIVIDAD ANTIMICTICA DEL ACEITE ESENCIAL DE


ORGANO DE LAS PROVINCIAS DE CHIMBORAZO Y SANTA
ELENA AL 100% DE CONCENTRACIN SOBRE CANDIDA
ALBICANS

Proyecto de investigacin presentado como requisito previo a la obtencin


del ttulo Odontlogo.

Autora: Valverde Quinaluisa Patricia Yaquelin

Tutor: PhD Wilfrido Edesmn Palacios Paredes

Quito, Mayo 2017


DERECHOS DE AUTOR

Yo, Valverde Quinaluisa Patricia Yaquelin en calidad de autor del trabajo de


investigacin: EFECTIVIDAD ANTIMICTICA DEL ACEITE ESENCIAL DE
ORGANO DE LAS PROVINCIAS DE CHIMBORAZO Y SANTA ELENA AL
100% DE CONCENTRACIN SOBRE CANDIDA ALBICANS, autorizo a la
Universidad Central del Ecuador a hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen
o parte de los que contiene esta obra, con fines estrictamente acadmicos o de
investigacin.
Los derechos que como autora me corresponden, con excepcin de la presente
autorizacin, seguirn vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los
artculos 5, 6, 8; 19 y dems pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su
Reglamento.
Tambin, autorizo a la Universidad Central del Ecuador a realizar la digitalizacin y
publicacin de este trabajo de investigacin en el repositorio virtual, de conformidad a lo
dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgnica de Educacin Superior.

________________________________
Valverde Quinaluisa Patricia Yaquelin
C.I. 172054019-2

ii
APROBACIN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIN

Yo, PhD Wilfrido Edesmn Palacios Paredes, en mi calidad de tutor del trabajo de
titulacin, modalidad Proyecto de Investigacin, elaborado por Valverde Quinaluisa
Patricia Yaquelin cuyo ttulo es: EFECTIVIDAD ANTIMICTICA DEL ACEITE
ESENCIAL DE ORGANO DE LAS PROVINCIAS DE CHIMBORAZO Y
SANTA ELENA AL 100% DE CONCENTRACIN SOBRE CANDIDA
ALBICANS, previo a la obtencin de grado de ODONTLOGA, considero que el
mismo rene los requisitos y mritos necesarios en el campo metodolgico y
epistemolgico, para ser sometido a la evaluacin por parte del tribunal examinador que
se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo investigativo sea habilitado
para continuar con el proceso de titulacin determinado por la Universidad Central del
Ecuador.

En la ciudad de Quito a los 10 das del mes de Mayo del 2017.

________________________________
PhD Wilfrido Edesmn Palacios Paredes
DOCENTE-TUTOR
C.I. 0502077266

iii
APROBACIN DE LA PRESENTACIN ORAL/TRIBUNAL

El Tribunal constituido por Dra. Andrea Monserrat Gonzlez Bustamante, Dr. Jos Luis
Viteri Garca.

Luego de receptar la presentacin oral del trabajo de titulacin previo a la obtencin del
ttulo de Odontlogo presentado por la seorita Valverde Quinaluisa Patricia Yaquelin.

Con el ttulo:
EFECTIVIDAD ANTIMICTICA DEL ACEITE ESENCIAL DE ORGANO DE
LAS PROVINCIAS DE CHIMBORAZO Y SANTA ELENA AL 100% DE
CONCENTRACIN SOBRE CANDIDA ALBICANS

Emite el siguiente veredicto: APROBADO


Fecha: 10 de Mayo del 2017
Para constancia de lo actuado firman

Nombre Apellido Calificacin Firma

Presidente Dra. Andrea Gonzlez 18 .


Vocal 1 Dr. Jos Luis Viteri 19

iv
DEDICATORIA

El presente trabajo de investigacin est dedicado a Dios quien es


mi gua y mi luz.
A mi familia, quienes han sido mi apoyo para concluir mi carrera.
Especialmente dedicado a mis queridos padres Carlos y Rosario
quienes con su esfuerzo, ejemplo, amor y su apoyo me han alentado
a ser un buen estudiante, profesional y ser humano.
A mis hermanos que mediante sus consejos, han estado siempre
presentes.
Dedico este trabajo tambin a mi tutor PhD Wilfrido Palacios por
su gran ayuda, paciencia, amistad; por compartir sus
conocimientos, para la realizacin y culminacin de esta tesis con
xito.

Patricia Yaquelin Valverde Quinaluisa

v
AGRADECIMIENTO

Le agradezco a Dios y a mi madre Santsima por haberme ser sido mi gua


y mi fortaleza en momentos de debilidad, pero tambin en momentos de
alegra en todo el transcurso de mi carrera.

Gracias infinitas a mis padres Carlos y Rosario por su inagotable apoyo y


paciencia; por darme la oportunidad de estudiar, por inculcarme valores y
su valioso ejemplo de humildad, honestidad y lucha constante.

A mis hermanos Marco y Mnica su ejemplo de buenos profesionales, por


sus consejos que me han ayudado a continuar vencer los obstculos y no
detenerme.

Muy agradecida con mi familia, especialmente mis queridos primos por


ser mis primeros pacientes, me han brindado su confianza, gracias por esa
excelente ayuda, se han convertido en grandes experiencias profesionales.
A mis amigas y amigos, quienes a lo largo de esta carrera hemos
compartido experiencias, gracias por su valiosa amistad.

Gracias a mi tutor PhD. Wilfrido Palacios, por su gran ayuda, por brindar
con paciencia sus conocimientos para el xito de mi trabajo de
investigacin.

Gracias a mis profesores, de mi querida Facultad de Odontologa de la


honorable Universidad Central del Ecuador quienes son los responsables
de formar excelentes profesionales, con slidos conocimientos que nos
hacen capaces de afrontar y solucionar los problemas de salud oral que
existe en nuestro pas. Muy orgullosa de haberme formado en esta
institucin.

Patricia Yaquelin Valverde Quinaluisa

vi
NDICE DE CONTENIDOS

DERECHOS DE AUTOR ................................................................................................ ii


APROBACIN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIN ............................. iii
APROBACIN DE LA PRESENTACIN ORAL/TRIBUNAL ...................................iv
DEDICATORIA ................................................................................................................v
AGRADECIMIENTO ......................................................................................................vi
NDICE DE CONTENIDOS .......................................................................................... vii
LISTA DE TABLAS ........................................................................................................ix
LISTA DE GRAFICOS .....................................................................................................x
LISTA DE ANEXOS .......................................................................................................xi
RESUMEN ..................................................................................................................... xii
ABSTRACT .................................................................................................................. xiii
INTRODUCCIN .............................................................................................................1
CAPITULO I .....................................................................................................................5
1. EL PROBLEMA .................................................................................................5
1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................ 5
1.2. JUSTIFICACIN ................................................................................................ 7
1.3. OBJETIVOS ........................................................................................................8
OBJETIVO GENERAL ....................................................................................................8
OBJETIVOS ESPECFICOS ............................................................................................8
1.4. HIPTESIS .........................................................................................................9
CAPITULO II ..................................................................................................................10
2. MARCO TEORICO .......................................................................................... 10
2.1. MEDICINA NATURAL ...................................................................................10
2.1.1.1. Uso teraputico de las plantas medicinales y fitoterapia ...................................10
2.1.1.2. Plantas medicinales de la costa y sierra ecuatoriana .........................................11
2.1.1.3. Tipos de plantas medicinales de la costa y sierra ecuatoriana. ......................... 12
2.1.1.4. OREGANO .......................................................................................................13
2.1.1.4.1. Tipos de Organo ..................................................................................... 13
2.1.1.4.2. ORGANO TOMILLO (THYMUS VULGARIS L. LABIACEA)
PROVENIENTE DE LA SIERRA ECUATORIANA ....................................... 15

vii
2.1.1.5. ORGANO (PLECTRANTHUS AMBOINICUS LOUR SPRENG)
PROVENIENTE DE SANTA ELENA ............................................................. 17
2.1.1.5.1. ACEITE ESENCIAL DE ORGANO ..................................................... 20
2.2. MICOSIS OPORTUNISTAS ............................................................................25
2.2.1 GNERO CNDIDA.............................................................................................26
2.2.1.1. Descripcin de la cepa ....................................................................................... 26
2.2.1.2. Taxonoma .........................................................................................................27
2.2.1.3. Factores de Virulencia ....................................................................................... 27
2.2.1.4. Antifngicos convencionales para tratar patologas por Candida albicans ......29
CAPITULO III ................................................................................................................31
3. METODOLOGA ............................................................................................. 31
3.1. DISEO DE LA INVESTIGACIN................................................................ 31
3.2. CLASIFICACION DE LAS VARIABLES ..................................................... 32
3.3. POBLACION Y MUESTRA ............................................................................33
3.4. CRITERIOS DE INCLUSIN Y EXCLUSIN ..............................................34
CRITERIOS DE INCLUSIN: ......................................................................................34
3.4.2 CRITERIOS DE EXCLUSIN: ............................................................................35
3.5. INSTRUMENTOS: ........................................................................................... 35
3.6. PROCEDIMIENTO .......................................................................................... 36
3.7. Anlisis de Datos. .............................................................................................. 42
3.8. Aspectos Jurdicos. ............................................................................................ 42
CAPITULO IV ................................................................................................................45
4. ANALISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS .............................................45
4.1. Anlisis Estadstico de los Resultados .............................................................. 45
4.1.1 Anlisis del Conteo de clulas en Cmara de Neubauer. .......................................45
4.2. DISCUSIN ......................................................................................................63
CAPITULO V .................................................................................................................67
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ................................................67
5.1 CONCLUSIONES:....................................................................................................67
5.1. RECOMENDACIONES: ..................................................................................68
BIBLIOGRAFIA .............................................................................................................69
ANEXOS ......................................................................................................................... 75

viii
LISTA DE TABLAS

Tabla A. Pruebas de Normalidad.50


.
Tabla B. Comparacin entre sustancias en volumen 0.3 ml. Descriptivos51

Tabla C. Comparaciones mltiples entre Controles y aceites esenciales en

0.3ml52

Tabla D. Prueba Tukey para subconjuntos homogneos entre aceite esenciales 0.3ml y

controles...53

Tabla E. Descriptivos ANOVA: comparacin entre sustancias en 0,5 ml55

Tabla F. Comparaciones mltiples entre aceites esenciales en volumen de 0.5 ml. Pruebas

post hoc56

Tabla G. Prueba Tukey para subconjuntos homogneos entre aceite esenciales 0.5ml y

controles...57

Tabla 1. Resultados - Promedios del Conteo celular en cmara de Neubauer de aceites

esenciales de organo 0.3 y 0.5 ml y controles.59

TABLA 2. Conteo en cmara de Neubauer Comparacin entre resultados de controles

y aceites62

TABLA 3. Conteo en cmara de Neubauer Comparacin entre resultados de

aceites..64

TABLA 4. Conteo de colonias en Agar Comparacin entre resultados de controles y

aceites...65

TABLA 5. Conteo de colonias en Agar Comparacin entre resultados de

aceites...66

ix
LISTA DE GRAFICOS

Grafico A. Grupos de control 0.3ml54

Grafico B. Grupos de control 0.5mL..58

Grafico 1. Curvas de crecimiento de los promedios del conteo celular de o.3 ml y 0.5 ml

de aceite esencial de organo y controles en Cmara de Neubauer60

GRAFICO 1A. Curva de crecimiento en cmara de Neubauer. Aceite esencial 0.3ml de

Chimborazo y Santa Elena...61

GRAFICO 1B. Curva de crecimiento en cmara de Neubauer. Aceite esencial 0.5ml de

Chimborazo y Santa Elena..62

GRFICO 2. Conteo en cmara de Neubauer Comparacin entre resultados de

controles y aceites63

GRFICO 3 Conteo en cmara de Neubauer Comparacin entre resultados de

aceites..64

GRFICO 4. Conteo de colonias en Agar Comparacin entre resultados de controles

y aceites65

GRFICO 5. Conteo de colonias en Agar Comparacin entre resultados de

aceites...66

x
LISTA DE ANEXOS

ANEXO 1. INFORME DE IDENTIFICACION BIOLGICA..79

ANEXO 2. CONSEJO DE BIOETICA...81

ANEXO 3. CERTIFICADO DE REALIZACION DE LA FASE EXPERIMENTAL EN

EL CENTRO DE BIOLOGIA. UCE. Y DE

RESULTADOS...82

ANEXO 4. CERTIFICADO DE LA REALIZACION DE LA EXTRACCION DE

ACEITES ESENCIALES DE ORGANO EN EL CENTRO DE QUIMICA DE LA

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR..83

ANEXO 5. INSTRUCCIONES PARA ACTIVACION DE LA CEPA CANDIDA

ALBICANS ATCC 10231...84

ANEXO 6. FACTURA DE COMPRA DE CEPA DE CANDIDA ALBICANS ATCC

1023187

ANEXO 7. LICENCIA DE CEPA DE CANDIDA ALBICANS ATCC

10231.88

NEXO8. FOTOGRAFIAS ANEXO... 89

xi
TEMA: Efectividad antimictica del aceite esencial de organo de las provincias de
Chimborazo y Santa Elena al 100% de concentracin sobre Candida albicans

Autora: Valverde Quinaluisa Patricia Yaquelin


Tutor: PhD. Wilfrido Edesmn Palacios Paredes

RESUMEN

Con el objetivo de tratar patologas orales producidas por Candida albicans mediante
sustancias alternativas a base de plantas medicinales, se ha planteado identificar la
efectividad antimictica de los aceites esenciales de Organo de las provincias de
Chimborazo y Santa Elena al 100% de concentracin sobre Candida albicans, cepas que
han sido inoculadas en lminas de acrlico, para lo cual se tom como medicamento
control a Nistatina. Metodologa: una vez seleccionado las plantas de organo, se obtuvo
el aceite esencial de las mismas, al 100% de concentracin a travs de la tcnica de
arrastre de vapor de agua. La activacin de la levadura se realiz con 0,5 en la escala Mc
Farland, posteriormente fueron colocadas en vasos estriles, donde se incorpor 50ml de
agua ms 0,3 y 0.5ml de aceite esencial de Organo. Para determinar la efectividad del
aceite sobre C. albicans se realiz el conteo de las unidades formadoras de colonias
mediante el uso de la cmara de Neubauer, en cuatro tiempos; a la vez se respald los
resultados de esta investigacin con la siembra del inoculo, bajo tcnica de Digralsky, en
dos tiempos: inicial y final. Dando como resultado que ambos aceites esenciales de
organo mostraron diferencias significativas sobre las levaduras en comparacin con
nistatina. Conclusin: El aceite esencial obtenido de los organos provenientes de las
provincias de Chimborazo y Santa Elena revel valores ms altos de efectividad
antimictica frente a Candida albicans.

PALABRAS CLAVES: ACEITE ESENCIAL ORGANO, CANDIDA ALBICANS

xii
TITLE: Anti-mycosis effectiveness of the 100% oregano essential oil from
Chimborazo and Santa Elena on Candida albicans

Author: Valverde Quinaluisa Patricia Yaquelin


Tutor: Phd Wilfrido Edesmn Palacios Paredes

ABSTRACT

In order to treat oral pathologies caused by Candida Albicans, by using alternative


substances taken from medicinal plants, we addressed to identify the anti-mycosis
activity of 100% Oregano essential oils from Chimborazo and Santa Elena provinces on
Candida Albicans, strains that have been inoculated in acrylic plates, for which Nystatin
was used as control medicament and water as a positive control. Procedure: once Oregano
plants were selected, essential oil was obtained from them with a 100% concentration,
by using water steam dragging technics. Yeast activation was conducted with 0.5ml in
the McFarland scale. Afterwards, they were placed in sterile glasses, where 50ml of water
was poured, plus 0.3 and 0.5ml of Oregano essential oil. In order to determine
effectiveness of oil on Candida Albicans, they were counted by using Neubauers camera
in four times. At the same time, results of this investigation were supported by using
inoculum, with Digralskys technics in two times: initial and final. Both Oregano
essential oils showed significant differences on yeasts, in comparison to water and
Nystatin controls. Conclusion: essential oil obtained from Oregano from Chimborazo and
Santa Elena provinces showed higher anti-mycosis effectiveness on Candida Albicans.

KEYWORDS: OREGANO ESSENTIAL OIL / INHIBITORY EFFECT / CANDIDA


ALBICANS

xiii
INTRODUCCIN

De la Torre et al (1) sealaron que las plantas han sido una gran fuente de recursos
materiales y de sustancias importantes como son los fitoqumicos para complementar las
necesidades bsicas vitales del ser humano. As, Chamorro et al (2) explicaron que las
plantas dentro de la medicina natural y fitoterapia han cobrado mucho inters por parte
de investigadores de distintas reas, para la contribucin a los avances de la humanidad.

Segn OMS (3) han indicado que la poblacin en todos los continentes que usa medicina
tradicional para atenuar diferentes patologas est alrededor del 60 al 90%, tomando en
cuenta que la informacin ancestral sobre los beneficios de la medicina natural y
fitoterapia viene de generacin a generacin. Aludieron Chamorro et al (2) que en el
Ecuador el 80% de la poblacin ecuatoriana han utilizado a la medicina tradicional para
conseguir bienestar y mejora de su salud a travs de plantas y productos de origen natural.

Mencion Calixto (4) que ha realizado su investigacin con el objetivo de lograr el uso
adecuado de las plantas en cuanto a sus extractos o aceites esenciales, con el debido
sustento cientfico para tratar y prevenir enfermedades bucales, ya que al implementar
plantas medicinales, no se han visto resultados adversos.

Dentro de los materiales usados cmo medicina natural, encontramos a los aceites
esenciales; Acosta et al (5) explicaron, que la extraccin de estos est encaminado no
solo para uso industrial en el campo de la perfumera, sino que tambin es de gran
importancia su elaboracin para ser usado en el rea de la medicina, debido a sus
propiedades teraputicas. Entonces Marav (6) mencion en su estudio la composicin
qumica del aceite de organo, donde sustancias como timol y carvacrol, le dan
caractersticas bactericidas, bacteriostticas, antifngicas, entre otras, siendo de gran
importancia frente a patgenos que puedan causar algn tipo de dao al organismo
humano.

Segn Muoz (7) y Acevedo et al (8) indicaron que la planta de organo se ha utilizado,
contra afecciones respiratorias, especficamente para la tos ferina; en dolencias
estomacales, como cicatrizante de heridas. Arcila et al (9) explicaron que se han registrado

1
informes sobre el efecto antimutagnico y anticarcinognico del organo sugiriendo que
representan una alternativa potencial como tratamiento o para prevenir del cncer.

Arango et al (10), dijeron que, el aceite esencial de organo present en su estudio


grandes cantidades de timol, a este compuesto se le ha atribuido propiedades que inducen
al control del dolor. Explica adems que tiene afectos antibacterianos, antiinflamatorios,
fungicida e insecticida. Albado (11), Arcila et al., (9) consolidaron la informacin sobre
la actividad antibacteriana del aceite esencial del Origanum vulgare (Organo). El
resultado de su investigacin confirm que el aceite esencial del organo, posee efecto
antimicrobiano frente a bacterias gram positivas como Staphylococcus aureus y Bacillus
cereus y sobre bacterias gram negativas, as como el organo present una buena
capacidad antioxidante y antimicrobiana contra microorganismos patgenos como
Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis, entre otros.

Es importante mencionar el uso del aceite esencial el rea de la salud; en odontologa


tambin se han realizado varios estudios donde Ucar et al (12) indicaron que en su
investigacin se pudo comprobar la inhibicin de Candida albicans inoculadas sobre
placas de acrlico de termocurado, esta inhibicin se realiz con productos qumicos
desinfectantes, entre los cuales se destacan cidos y perxidos, productos con
componentes que pueden ser nocivos o alterantes de las estructuras tratadas bajo estas
sustancias.

La Candidiasis oral o Candidosis son las infecciones micticas orales ms frecuentes


producidas por la levadura Candida, que se encuentra segn Sapp et al (13) presente en
la flora normal de la cavidad bucal y de los intestinos. Mencionaron Otero et al (14) que
la candidiasis es una infeccin oportunista, que ataca cuando el sistema inmunolgico del
paciente se ve disminuida.

Carranza et al (15), manifestaron que entre los factores que inducen a presentar
Candidiasis, estn: la reduccin de las defensas del hospedador, donde encontramos a
personas portadoras del VIH, pacientes con diabetes miellitus, personas que han recibido
tratamientos con radiacin y quimioterapia, as como tambin pacientes geritricos

2
portadores de prtesis dentales, quienes son susceptibles al padecimiento de Candidiasis
atrfica o candidiasis prottica.

Por lo que Aguirre (16) menciona que la incidencia de Candidiasis prottica en la


actualidad est en aumento en los pases desarrollados debido a diferentes factores
facilitadores como la generalizacin del uso de prtesis dentales, la xerostoma, las
mltiples terapias con antibiticos, inmunosupresores, antineoplsicos y por supuesto el
sistema inmunolgico disminuido.

Aguirre (16) y Sapp et al (13) mencionaron existen tratamientos farmacolgicos contra


Candida albicans, con agentes antifngicos, que en su mayora son de uso tpico, dichos
frmacos actan no solo para inhibir estos microorganismos sino tambin interfieren en
el metabolismo de las clulas humanas, causando toxicidad a las mismas.

Por lo que Fernndez (17) indic que persiste la necesidad de determinar si los
antifngicos habituales podran ser remplazados por medicamentos alternativos naturales
que ofrezcan la misma capacidad antimictica con menores efectos adversos que los
medicamentos comnmente utilizados, para ser aplicados a nivel mdico y por supuesto
en odontologa.

Es as que Jackson et al (18) y Srivatstava et al (19) han realizado en sus estudios, la


inhibicin de Candida albicans presentes en acondicionadores de tejidos dentales con el
uso de compuestos naturales, ya que el uso de adhesivos o acondicionadores bucales, est
en auge, sin embargo, por ser una estructura blanda, esta es susceptible a la colonizacin
de microorganismos, como es el hongo Candida albicans; los mencionados autores han
comprobado que el Organo presenta propiedades qumicas antifngicas como son el
Timol y el Carvacrol, presentes en su aceite esencial, demostrando su eficacia como
fungicida ante dicho microorganismo. Es importante mencionar que en este estudio el
aceite esencial de organo fue incluido en el acondicionador de tejidos, sin alterar las
caractersticas fsicas adhesivas del mismo.

Ortega et al (20) y Acevedo et al (8) indicaron que los componentes fenlicos de la planta
como son Timol y Carvacrol, seran los responsables de la accin antimictica del aceite
esencial de organo. Pero Arcila et al (9) expusieron que la cantidad de dichas sustancias

3
pueden modificarse, es decir que no presentan las mismas caractersticas en su
composicin qumica, ya que estas podran variar segn el tiempo de cosecha de la planta,
el clima y altitud en el que crece, y por supuesto de la especie de organo a la que
pertenece.

Se han realizado varias investigaciones con el uso de plantas medicinales, en el mbito


odontolgico, donde Huaman (21), Fernndez (22), (23)Srivatstava A et al (19), Cano
(24), han demostrado la efectividad de dichas plantas sobre microorganismos presentes
en la cavidad bucal, pero no se ha especificado en dichos estudios, si la efectividad
antimicrobiana y antifngica podra varar segn la especie o que los componentes de una
planta de determinada regin, podra variar segn el lugar de origen de dicha planta. Asi
Gonzales (25), compar la accion antibacteriana del organo de diferentes regiones de
Mexico, donde observ que existen diferencias significativas, dentro de su composicin
qumica, por ende denot variacin en su efectividad frente a microorganismos.

Con nuestra investigacin se esperan resultados positivos contra C. albicans, y contribuir


a un posible tratamiento natural, de bajo costo, accesible a personas de bajos recursos
econmicos que no tienen acceso a la salud oral integral, mejorando su calidad de vida.
Siendo entonces un precedente en posteriores estudios y poderlo emplear en productos
antimicticos contra alteraciones buco dentales, que afectan a la poblacin ecuatoriana.

4
CAPITULO I
1. EL PROBLEMA

1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Lindhe (26) mencion que dentro de las enfermedades gingivales de origen mictico con
ms recurrencia e importancia, fueron originadas por Cndida donde el gnero Albicans
denot ser el ms comn. Sapp et al (13) y Aguirre (16) indicaron que Candida albicans,
es un husped comn de la cavidad bucal, que puede mostrarse como oportunista por
deterioro de la inmunidad del husped, causando alteraciones que no se manifiestan solo
en cavidad bucal sino se extienden e involucran a la faringe, laringe y el esfago.

Carranza (15) afirm que las alteraciones de la mucosa bucal originadas por hongos seran
escasas en pacientes inmunocompetentes, pero muy frecuentes en aquellas personas con
deterioro inmunitario, o aquellas que hayan sido sometidas a un tiempo prolongado de
antibioticoterapia. Por lo que Sapp et al (13) mostraron que las personas portadoras de
prtesis son propensos a contaminarse con cndida albicans, ya sea el uso prolongado o
por escasa higiene de la misma, esto favorece a la colonizacin de este microorganismo
en dichas prtesis, llevando a un posterior contaminacin a los tejidos blandos de la
cavidad bucal, provocando Candidiasis de tipo atrfica. Otero et al
(14) aadieron que
la incidencia real de candidiasis se desconoce, se sabe que existe una prevalencia
aumentada en ciertas ocasiones como ocurre en ancianos, en presencia del uso de prtesis
mucosoportadas, xerostoma, polifarmacologa, enfermedades crnicas o en patologas
asociadas frecuentemente en los adultos mayores.

Hay estudios que manifiestan la contaminacin de las prtesis dentales con C. albicans,
pero es escasa la evidencia cientfica, que determine el tiempo de inoculacin de Candida
albicans sobre las placas de acrlico con la que estn fabricadas las prtesis dentales.
Se ha determinado en estudios previos de Acosta et al (5) y Alvado et al (11) la eficacia
del aceite esencial al 100% sobre Cndida albicans, pero no hay evidencia cientfica que
demuestre, si este aceite pierde o no caractersticas qumicas fungicidas contra C. albicans
al ser combinada con agua. Se desconoce el volumen de agua, y de aceite esencial de
organo que se podra utilizar para sumergir una prtesis dental; as como tambin se

5
desconoce el tiempo en que la placa de acrlico deba permanecer sumergida en esta
combinacin para observar el efecto antimictico del aceite esencial de organo.

Calixto (4) indica que hace falta realizar ms estudios con plantas medicinales para tratar
patologas bucales. Por lo mencionado anteriormente, esta investigacin se realizar con
el fin de determinar la efectividad antimictica del aceite esencial de organo al 100%
de concentracin sobre Candida albicans; ya que est comprobado que inhibe su
crecimiento, pero no existe evidencia cientfica, de acuerdo al volumen o cantidad exacta
de aceite esencial de organo para ser usado con este fin, As como tambin no existe
evidencia cientfica de cmo utilizarlo, en productos para uso odontolgico, para la
eliminacin de Candida Albicans.

Por este motivo surge la necesidad de obtener y emplear productos naturales a base de
plantas, que han sido utilizado por nuestros indgenas; para la prevencin y tratamiento
de patologas bucales, as podramos minimizar los efectos secundarios que pueden
producir los frmacos utilizados comnmente

Es as que para definir el problema de esta investigacin formulamos la siguiente


pregunta: El aceite esencial de organo procedente de las provincias de Chimborazo y
Santa Elena; tiene el mismo efecto antimictico sobre Candida albicans inoculada en
lminas de acrlico al ser estos provenientes de diferentes regiones de nuestro pas?

6
1.2. JUSTIFICACIN

Calixto (4) menciona la importancia del uso de plantas dentro de la medicina tradicional,
dicho conocimiento de ciertas especies ha sido escasamente desarrollado, existiendo la
necesidad de fomentar investigaciones acerca de los beneficios de los recursos naturales,
en beneficio de la salud. As Ansaloni et al (27) indicaron la importancia del uso de las
plantas medicinales, dentro del campo de la medicina, para favorecer la salud y el
bienestar de las comunidades rurales del Ecuador, lo que a su vez generara inters en la
investigacin antropolgica de la fitoterapia y su posible colaboracin en la medicina
tradicional.

Por ende Acevedo (8) indic la importancia de desarrollar investigaciones con extractos
de ciertas plantas; dentro de su estudio dijo que el aceite de organo, present sustancias
qumicas que ayudan a detener el crecimiento y desarrollo de microorganismos como
hongos y bacterias. Indicaron Alvado et al (11) y Ardila et al (28) que dichas sustancias
que fueron extradas del aceite de Organo como Timol y Carvacrol, actuaron como
antibacterianos y antifngicos contra microorganismos como el hongo Cndida Albicans.
Calixto (4) mencion la importancia del estudio de dichas sustancias naturales en el
beneficio de la salud bucal, logrando un uso adecuado de las mismas, bajo un sustento
cientfico.

Por lo que es importante realizar este estudio; as como indica Calixto (4), existen pocos
investigaciones y publicaciones acerca del efecto de plantas medicinales sobre
enfermedades bucales, aunque estos estudios hayan demostrado, que no se han referido
efectos o indicaciones adversas por el uso de plantas medicinales. Entonces, se pretende
con esta investigacin que el aceite esencial de la planta de Organo de resultados
positivos contra la levadura Candida albicans, es decir que podamos demostrar inhibicin
de la misma, para que este acte como un agente de limpieza del acrlico inoculado con
esta levadura, con la finalidad de que en un futuro este compuesto a base de una planta
medicinal oriunda del Ecuador, sea empleada como un posible tratamiento natural,
alternativo y de bajo costo, que sea accesible a personas de bajos recursos econmicos
que no tienen acceso a la salud oral integral, mejorando su calidad de vida. Siendo
entonces un precedente en posteriores estudios y poderlo emplear en productos
antimicticos contra alteraciones buco dentales, que afectan a la poblacin ecuatoriana.

7
1.3. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

1.3.1.1 Identificar el efecto antimictico de dos aceites esenciales de organo al


100% de concentracin procedente de las provincias de Chimborazo y Santa
Elena sobre lminas de acrlico de termocurado inoculadas con Candida albicans.

OBJETIVOS ESPECFICOS

1.3.2.1 Identificar el efecto inhibitorio del aceite esencial de organo de la


provincia de Chimborazo en una concentracin al 100% utilizando volmenes de
0.3ml y 0.5ml sobre Candida albicans inoculadas en lminas de acrlico y
sumergidas en agua, mediante contaje celular a travs de la cmara de Neubauer,
midiendo 4 veces en los tiempos: inicial, a las 12 horas, 24 y 48 horas.

1.3.2.2 Determinar el efecto inhibitorio del aceite esencial de organo de la


provincia de Santa Elena en una concentracin al 100% utilizando volmenes de
0.3ml y 0.5ml sobre Candida albicans inoculadas en lminas de acrlico y
sumergidas agua, mediante contaje celular en la cmara de Neubauer, midiendo 4
veces en los tiempos: inicial, a las 12 horas, 24 y 48 horas.

1.3.2.3 Comparar la actividad antimictica entre los dos aceites esenciales de


organo al 100% de concentracin procedentes de las provincias de Chimborazo
y Santa Elena utilizando nistatina como control positivo.

8
1.4. HIPTESIS

Hiptesis de investigacin

H1. El aceite esencial de la planta de organo tiene accin antimictica sobre


las cepas de Candida albicans que se encuentra en el acrlico de
termopolimerizacin de las prtesis dentales.

Hiptesis nula

H0. El aceite esencial de la planta de organo no tiene accin antimictica


sobre las cepas de Candida albicans que se encuentran en el acrlico de
termopolimerizacin de las prtesis dentales.

9
CAPITULO II
2. MARCO TEORICO

2.1. MEDICINA NATURAL

(29)
Dentro de la medicina Jimnez mencion que el uso de medicina natural, se ha
relacionado con la evolucin del hombre y su raciocinio, ya que este ha estado en ntimo
contacto con la naturaleza y mediante la observacin de costumbres de otros animales,
ha logrado tener conocimientos empricos as como tambin experiencia con respecto al
uso de plantas medicinales, dando origen a la medicina natural. Entonces Castro et al (30)
dijo que los productos a base de plantas medicinales pueden ser seguros y efectivos,
aunque no estn sustentados con suficientes bases cientficas.

(29)
Conceptualizando a este tema Jimnez asever que la medicina natural ha sido
descrita como una ciencia que abarca el uso teraputico de las sustancias y elementos
naturales del entorno del ser humano, as como de la aplicacin de los procesos naturales,
para fomentar la capacidad curativa del propio organismo. En este mismo sentido la OMS
(3)
afirm que la medicina tradicional conlleva una acumulacin de conocimientos en
cuanto a usos, tcnicas y procesos con materiales de origen natural as como tambin de
las creencias y experiencias de diferentes culturas, con el fin no solo de tratar sino de
prevenir y diagnosticas enfermedades tanto fsicas como mentales.

2.1.1.1. Uso teraputico de las plantas medicinales y fitoterapia

Caigueral (31) indic que la Fitoterapia ha sido considerada como una ciencia que estudia
el uso de los productos de origen vegetal con un el fin de prevenir, mitigar o tratar los
estados patolgicos del ser humano. As Castro et al (30), aseveraron en su investigacin la
implementacin de la elaboracin de medicamentos con productos de origen natural, que
seran una nueva alternativa contra microorganismos, que actualmente se presentaban
como resistentes a frmacos producidos con materiales sintticos, siendo esta una nueva
alternativa para la teraputica de varias patologas.

10
La OMS (56)
mencion que cerca del `80% de la poblacin mundial usan extractos
vegetales u otros compuestos activos, como los aceites naturales y extractos vegetales
para cuidados primarios de salud, que aquejan a la poblacin.

(32)
Cern nos mencion en su estudio que es comn que en el Ecuador se destine una
gran cantidad de plantas a ser usadas y preparadas como bebidas con la finalidad de
desintoxicar los riones y el hgado, incluso se encuentran formando parte de la cultura
de algunos pueblos que se encuentran al sur del Ecuador, especficamente Azogues,
Cuenca y Loja, donde es muy comn la bebida llamada horchata, que es un lquido de
color rosado preparado con ptalos, races, tallos y hojas de ms de 20 especies vegetales
diferentes. (32)

De acuerdo a Castillo (33) se ha establecido informacin etnobotnica en cuanto a los usos


de las plantas medicinales para tratar ciertas enfermedades muy conocidas y padecidas
por nuestra poblacin, por ejemplo el dolor de estmago, siendo una dolencia tratada con
plantas como el Tomillo, Organo, Hinojo, Hierba Luisa, Flores de geranio, entre otras;
problemas respiratorios, donde se usa salvia, borraja. Para los estados febriles se
recomend el uso de hojas de Ortiga, Borraja como infusin.

2.1.1.2. Plantas medicinales de la costa y sierra ecuatoriana

Las plantas medicinales, segn nos mencion Mazn (34) constituyen la riqueza vegetal de
nuestro entorno, ya sea en los huertos encontrados en las zonas rurales, as como de los
bosques secos de la costa, bosques andinos en nuestra sierra ecuatoriana, tambin los
bosques hmedos y tropicales de la Costa y Amazona. El uso de las plantas medicinales,
han ido evolucionando a travs del tiempo, ya que han sido empleadas de forma emprica,
pero al ir desarrollando nuevas investigaciones, se ha podido estudiar sus propiedades
teraputicas.

El conocimiento en cuanto al uso de la plantas medicinales de los Andes ecuatorianos se


remonta, desde la conquista espaola y su influencia en nuestras culturas, parte de la
influencia de esta cultura colonizadora ha incluido tambin el uso de especies vegetales
ampliamente cultivadas en Europa y en el resto del continente americano como por

11
ejemplo el romero, la manzanilla, el toronjil, entre otras plantas muy conocidas en nuestro
medio; por lo que podemos mencionar que las plantas encontrados en el territorio
ecuatoriano, en su gran mayora seran especies introducidas. (32)

2.1.1.3. Tipos de plantas medicinales de la costa y sierra ecuatoriana.

Entre las especies de nuestra sierra y costa ecuatoriana, se encontr una gran
biodiversidad, por lo que mencionamos solo los ms representativos, que dentro de las
familias ms comunes encontramos a la familia Labiatae que corresponde a 15 especies,
donde encontramos a la menta, yerba buena, toronjil, organo, tomillo, romero, entre
otros. Otro grupo importante mencion a la familia Asteraceae con 18 especies, en las
que se cita a la manzanilla, matico, taraxaco, llantn, borraja, sbila, entre otros (33).

Cern (32) en su investigacin incluye un cuadro con una gran variedad de tipos de plantas
medicinales de Ecuador, entre los ms destacados tenemos:

Nombre Cientfico Nombre Comn Afeccin que trata


Aloe vera (L.) Burm. f. Sbila Inflamacin, cada cabello

Aloysia triphylla (L Hr.) Cedrn Aromtica, dolor


Britton estomacal, presin.
Cymbopogon citratus Hierba Luisa Aromtica, presin,
(DC.) Stapf nervios,

Eucalyptus citriodora Eucalipto Tos, gripe, bronquitis, bao


Hook. f.
Matricaria recutita L. Manzanilla Dolor estomacal,
aromtica, lavado vaginal,
ojos irritados, inflamacin

Origanum vulgare L. Organo Ictericia, estomacal, clico


menstrual
Origanum x majoricum Mejorana Dolor Estomacal, dolor de
Camb. parto

Peperomia peltigera C. Pataconyuyo Inflamacin, antifebril,


DC. problemas cordacos

12
2.1.1.4. OREGANO

Arcila et al (9) expresaron que el organo presenta diferentes especies de plantas, las
mismas que presentan caractersticas tpicas en cuanto a sus hojas, flores y olor
caracterstico. En general, esta planta de organo ha sido utilizada en el mbito culinario,
cosmtico, farmacolgico e industrial

El gnero Origanum pertenece a la familia Lamiaceae, mientras que el Lippia


graveolens, a la familia Verbenacea. (9)

2.1.1.4.1. Tipos de Organo

Nombre Cientfico Nombre Comn Hojas Altura Suelo Luz Color


solar de
las
flores

Origanum syriacum Organo Sirio Perennial 12"- Bien Sol Blanco


24" drenado
Origanum maru

Origanum onites Organo de Creta Perennial 2 Sol Blanco

Origanum dictamus Dittany de Creta Tender 12"- Bien Sol Rosado


perenial 15" drenado

Origanum saso Organo enano Perennial


rosado

Origanum vulgare Mejorama dorada Perennial 3"-8" Bien Sol Blanco


aureum trepadora drenado

Origanum vulgare Organo Griego Perennial 12"- Bien Sol Blanco


hirtum 18" drenado

13
Origanum vulgare Organo Griego 4" Sol
humilen cv enano

Origanum laevigatum Organo Perennial 2 Bien Sol Purpura


"Herrensausen" Herrenhausen drenado

Origanum laevigatum Organo Prpura Perennial 12" Bien Sol Purpura


"Hopleys" 15" drenado

Origanum sipyleum Organo rosados

Origanum majoricum Organo Italiano Perennial 12"- Hmedo, Sol y Blanco


15" bien sombra
drenado

Origanum kaliteri Organo Kaliteri Tender 12"- Bien Sol Blanco


perennial 24" drenado

Origanum rotundifolium Organo


x dictamnus algodonoso

Origanum rotundifolium Organo hermoso 15" Seco a Sol Rosado


cv hmedo

Lippia graveolens Organo Tender 2- 3 Bien Sol Blanco


Mexicano perennial drenado

Origanum majorana Organo Siciliano Tender 8"-10" Hmedo, Sol Blanco


o mejorama dulce perennial bien
drenado

Fuente: Arcila, Loarca, Gonzlez. El organo: propiedades, composicin y actividad biolgica


de sus componentes. ALAN.2004 Enero

Muoz (7) mencion en su aporte que la planta de organo puede crecer en todo tipo de
suelo, ya sea en lugares de clima seco y hmedos, siempre que estn presentes los
suficientes nutrientes, que sirvan para que la planta se desarrolle y realice su proceso
metablico con normalidad. Sin embargo Arcila et al (9) nos mencionan que la diferencia
en cuanto al clima, altitud, suelo, poca de recoleccin de la planta van a influir en los
componentes qumicos de la planta y hacen que estos varen en cuanto a su volumen y
calidad.

14
2.1.1.4.2. ORGANO TOMILLO (THYMUS VULGARIS L. LABIACEA)
PROVENIENTE DE LA SIERRA ECUATORIANA

a) Definicin y origen

Lpez Luengo (35) (p-1) describi a la planta como un frmaco de accin antiespasmdica
expectorante y antisptica. Mientras que Gimeno aadi que el Tomillo corresponda a
un arbusto aromtico, cuyo nombre proviene del griego Thym en mencin a su intenso
y agradable aroma.

Sealaron en su investigacin De la torre et al (1) que el tomillo que encontramos en


territorio ecuatoriano ha sido introducido; Gimeno (36) acot que esta planta es oriunda
de pases mediterrneos occidentales, entre ellos Espaa y Portugal.

b) Descripcin botnica

Lizcano (37) explic que la planta de Organo corresponde a la familia Lamiaceae;


mencion caractersticas que presentaba dicha planta, entre las que se destacan la altura,
esta oscila entre 10 a 40cm; acot tambin que el tamao de sus hojas que van desde 3
a 8mm, de forma lineal y ovaladas; planta muy aromtica, con tallos leosos y
numerosos.

Aade (36) (p-173)


que esta planta corresponde a la denominada clase corolifloras;
gnero Thymus. Arbusto aromtico, de tallos leosos, muy poblado de hojas ovaladas
y lanceoladas, de 1cm aproximadamente. Sus flores son bilabiadas, pequeas de color
rosado.

c) Sinonimia

Gimeno (36) menciona los distintos nombres comunes, con que es conocido esta planta:
en Portugal es conocido como Tomilho
Mientras que De la torre et al (1) alega que en nuestro pas se conoce al tomillo, como:
organo chico, organo de casilla, organo de tierra, organo dulce.

15
Realizado por: Autor

d) Composicin Qumica.

En su estudio Lpez (35) enfatiz en cuanto a la composicin qumica que contena


Thymus vulgaris, donde destac el 1,2% de aceite esencial y 0,5%de flavonoides;
estos ltimos explic Martnez (38) que los correspondan a los pigmentos naturales
de la planta. A ms de los mencionados componentes de Thymus vulgaris, Lpez
luengo (35) menciona que se ha destacado la presencia de cido cafico y
rosmarnico, del grupo de cidos fenlicos.

Agreg Gimeno (36) que los distintos componentes que presenta Thymus vulgaris,
pueden variar, dependiendo de los factores como la altitud, clase de suelo en el que
haya sido sembrada la planta, as como tambin los cuidados con el riego y la poca
de cosecha.

16
e) Propiedades

El denominado tomillo, segn Lpez (35) en su estudio explica, que esta planta
medicinal, presenta propiedades antitusgenas y expectorantes, ya que acta
directamente sobre las clulas musculares lisas de los bronquios pulmonares; siendo
esto un indicativo del uso de esta planta para problemas respiratorios aducidos por los
denominados resfriados comunes.

Enfatiza Gimeno (36) que el tomillo acta como un antimicrobiano, previniendo


infecciones a nivel de los tractos: oral, larngeo, farngeo, pulmonar, intestinal y gnito
- urinario, siendo en este ltimo muy apto para infecciones dadas por Trichomonas
vaginalis. Adujo que este fue utilizado como antifngico contra ciertos tipos de
cndidas; as como tambin usado como antivrico y antihelmntico ante la presencia de
herpes y de Ancylostoma duodenale, respectivamente.

2.1.1.5. ORGANO (PLECTRANTHUS AMBOINICUS LOUR SPRENG)


PROVENIENTE DE SANTA ELENA

a) Definicin y Origen

Acosta et al (5) y Chiriboga et al (39) definen a esta planta como una herbcea perenne,
robusta, de hojas carnosas de forma ovalada y cuyos bordes se presentan dentados, con
pecolos gruesos y flores de tonalidad violceas en espigas terminales; muy olorosas,
cuyo aroma se asemeja mucho al del organo comn.

La planta de organo (Plectranthus amboinicus lour spreng) segn acotaron Araujo di


Oliveira et al (40) se encuentra introducida en toda Amrica que presente un clima clido
o tropical. Acosta et al (5) y Chiriboga et al (39) aseveraron que dicha especie de organo
es oriunda de las regiones tropicales de Asia Oriental y el Sureste de frica.

17
b) Descripcin Botnica

Nos detalla Chiriboga (39) al organo (Plectranthus amboinicus lour spreng) como una
planta herbcea, de ramas abundantes, fragante, con tallos angulosos y frgiles,
pertenecientes al orden Lamiales, de la familia Lamiaceae, sus hojas anchas y ovaladas y
forma acorazonada, de 4 a 12 cm de longitud.
Mientras que Acosta et al (5) aadieron que es una planta leosa en la base, rojiza y
aromtica. De tallos erguidos y ramosos, de 20 a 85 cm, con hojas pecioladas, ovales o
elpticas cuyas flores de color rosado, aglomeradas.

vila et al (41) nos mencionaron la Clasificacin Botnica del Oregann:

Familia: Lamiaceae
Gnero: Plecthranthus
Especie: amboinicus

Realizado por: Autor

18
c) Sinonimia:

Chiriboga et al (39) y Acosta et al (5) mencionaron que esta especie posee varios nombres,
donde comnmente adquieren nombres del sitio en el que se encuentran plantados; as
por ejemplo se lo conoce como: organo francs, menta mexicana, organo indio, organo
brujo, organo, organo de tierra. En nuestro pas se lo conoce como organo de la costa,
as como tambin David (42)es comnmente denominado Oregann.

d) Composicin Qumica

Dentro de la composicin qumica del Oregann, Plecthranthus amboinicus, vila et al


(41) manifestaron en su estudio la presencia de un ndice alto de compuestos aromticos
y oxigenados, con un total de 26 compuestos. Entre estos, mencionaba a los principales
compuestos qumicos fueron el carvacrol 28,65 %, timol 21,66 %.

El componente que encontramos en mayor cantidad es el carvacrol, siendo este


considerado como uno de los componentes responsables de la actividad antibacteriana de
dicha especie de organo, este se encuentra en un valor del 70%, formando parte del aceite
esencial

e) Propiedades y usos teraputicos

Como planta medicinal dijo Arias (43) que dicha planta fue reconocida en afecciones
respiratorias, artritis reumatoide, epilepsia, convulsiones, hipo, dolor de estmago, de
odos, clicos, fiebre, flatulencia, clculos renales y biliares, contra diversas infecciones
causadas por hongos y bacterias, diarrea, parsitos intestinales; protege el hgado y
riones, es antiinflamatoria y sedante.

Es ampliamente utilizado segn aadieron Araujo et al (40) , en la medicina popular para


tratar patologas dermatolgicas, sus hojas se usan de manera tpica para el tratamiento
de infecciones e inflamacin del folculo piloso y micosis superficiales que afectan a la
piel; utilizada popularmente para tratar la denominada gripe o resfro comn, el

19
estreimiento, la cefalea, la tos, la ronquera, la fiebre y las enfermedades del aparato
digestivo.

Manjamalai (44), mencion en sus estudios etnobotnicos que posee actividades


antitumorales y citotxicas. Mencion tambin que es utilizado sobre quemaduras, as
como tambin se ha demostrado su uso y efectividad para expulsar clculos renales.

2.1.1.5.1. ACEITE ESENCIAL DE ORGANO

a. Composicin qumica del aceite esencial de organo.

Tanacov (45) explica en su estudio acerca de aceites esenciales (A.E) vegetales (siendo
productos en estado lquido de las plantas aromticas); estos productos son encontrados
en mayor cantidad en las familias de la planta de organo: Pinaceae, Zingiberaceae,
Umbellifereae, Apiaceae, Myrtaceae, Asteraceae, Rutaceae Laureace y Lamiaceae, esta
ltima la destacamos por ser la familia a la cual pertenecen nuestras plantas utilizadas en
este estudio. El aceite esencial se produce en el protoplasma de las clulas secretoras
denominadas glndulas exgenas o endgenas, encontradas en forma de gotas en tbulos
glandulares u rganos secretores internos de la planta.

Mientras que Arcila et al (46) indicaron que los aceites esenciales han sido identificados
como metabolitos secundarios de las plantas, as se ha relacionado al metabolismo activo
de la planta con la cantidad de aceite, es decir mientras sea mayor el metabolismo, mayor
ser la produccin de aceite esencial. Generalmente se han encontrado en los aceites
esenciales hidrocarburos alicclicos y aromticos; as como tambin derivados
oxigenados como son aldehdos, alcoholes, steres y cetonas; sustancias nitrogenadas y
azufradas.

Arcila et al (46) mencionaron que existen diversos estudios sobre la composicin qumica
del organo, obtenidos usando extractos acuosos y sus aceites esenciales donde se han
identificado o flavonoides como la apigenina y la luteolina, agliconas, alcoholes
alifticos, compuestos terpnicos y derivados del fenilpropano.

20
En cuanto Acevedo et al (8) mostraron los resultados de su investigacin acerca de los
componentes qumicos del organo, donde se ha destacado la presencia de Timol
67.51% como mayoritario, seguido por p-Cimeno 11,66%, Terpineno 5,51%,
cariofileno 5,38%, oxido de cariofileno 2,22%, trans--Bergamoteno con 1,65%',
Eugeno l1,49% y - Bergamoteno 1,32%, que representan ms del 80% del total de
componentes qumicos presentes en el Aceite esencial de la planta de organo.

Arcila et al (46) enfatizaron en la presencia de los monoterpenoides, siendo estos


compuestos voltiles con olores intensamente punzantes, son los responsables de las
fragancias y las sensaciones de olor-sabor que caracteriza a la planta en mencin. Se
destaca tambin el rendimiento del aceite esencial en la hoja seca que vara entre 2% y
6% ; este porcentaje se ve afectado por la altitud del lugar de cultivo, y por la poca de
recoleccin o de cosecha.

a. Actividad biolgica.

Fernndez (17) (p-86) explic en su estudio que la actividad biolgica del aceite esencial de
Organo, donde se observ la presencia de una composicin que presenta variaciones
de acuerdo a la especie de Organo; se indic que es rico en timol y carvacrol, que le
confiere accin estimulante, estomquica y antiespasmdica. Se han identificado cidos
fenlicos cafeico y rosmarnico, as como tambin flavonoides y cido urslico, por lo
que le da caractersticas antiespasmdicas y cicatrizantes.

b. Potencial antimicrobiano

En su publicacin Manjamalai (44), constat mediante un estudio in vitro, donde observ


mediante halos de inhibicin que el aceite de organo present un efecto antimicrobiano
frente a, Staphylococcus aureus, , Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumonia
y Escherichia coli.

Arcila et al (46) (p-13) y Tanackov (45) (p-842), indicaron que el aceite esencial de organo
tiene capacidad antimictica contra varios microorganismos, entre los que se destacan a
los siguiente: Cndida albicans, C tropicalis, Torulopsis, Glabrata, Aspergillus,
Nger, Geotrichum y Rhodotorula; mencionaron tambin que los fenoles carvacrol y

21
timol poseen altos niveles de actividad contra microorganismos gram negativos, excepto
para P. aeruginosa, siendo el timol el que presenta mayor actividad. Existen otros
compuestos, como el terpineno y cimeno que no indicaron actividad contra las bacterias
estudiadas ya mencionadas.

c. Capacidad Antioxidante.

Destacaron Arcila et al (9) en su estudio que una de las principales acciones biolgicas de
la planta de organo es su capacidad antioxidante, esta capacidad oxidativa es importante
tanto, para la prevencin de enfermedades, ya que protege a la clula contra el dao
oxidativo, hecho que se ha comprobado que causa patologas degenerativas como cncer,
diabetes y enfermedades cardiovasculares as como tambin de envejecimiento celular.

Los compuestos encontrados en el aceite esencial de organo se han encontrado ciertos


antioxidantes como los tocofenoles, carotenoides, los compuestos fenlicos y el cido
ascrbico, destacando tambin a los compuestos fenlicos. El poder antioxidante del
organo se ha dado por la presencia de cido cafeico y rosmarnico; tambin se pudo
encontrar a sustancias como los glicsidos, considerados como precursores de las
sustancias antioxidantes en la planta.

d. Mecanismo de accin.

Garca et al (47), realizaron una investigacin bibliogrfica para determinar cul es el


mecanismo de accin del aceite esencial de organo frente a los microorganismos. Entre
las sustancias presentes en el aceite esencial de organo se encuentran diversos
compuestos fenlicos como es el timol y carvacrol, que poseen actividad antimictica y
antibacteriana. Aunque no es factible decir que su actividad antimicrobiana puede ser
atribuida a solo un mecanismo especfico, existen puntos claves donde estos compuestos
hagan efecto, entre estos puntos tenemos dao a la membrana citoplasmtica, dao a la
pared celular, dao a las protenas, coagulacin del citoplasma, filtracin del contenido
celular.

Los sitios de accin del timol y de carvacrol dentro de la clula y dependiendo de la


concentracin, pueden causar inactivacin o inhibicin de los microorganismos.

22
En cuanto al carvacrol, este se halla entre 60 - 70% en el organo y en un 45% en el
tomillo, en cuanto a su mecanismo de accin, este es el responsable de desintegrar la
membrana externa de las paredes de los microorganismos, en este caso de la levadura,
incrementando as la permeabilidad de la membrana citoplasmtica, provocando la salida
de protenas, entre ellas ATP. (47)

En cambio el timol, se encuentra en un 50% en el aceite esencial de tomillo y en de


organo vulgaris. En cuanto a su mecanismo de accin el timol es capaz de desintegrar la
membrana externa de las levaduras, permitiendo la salida de los constituyentes qumicos
esenciales para su metabolismo, es importante mencionar que la accin del timol es
dependiente de factores como el tipo de microorganismo, el pH del medio y la
temperatura de incubacin. (47)

e. Mtodo de extraccin.

Destaca Tanackov (45) que los aceites esenciales se aslan de la planta entera o de algunas
partes especficas, como son las flores, semillas, brotes, ramas, hojas, corteza, races, y
frutos por varios mtodos; as tenemos: destilacin de componentes por vapor,
fermentacin, extraccin supercrtica, compresin a presin, extraccin por disolventes
orgnicos fcilmente voltiles o fitosoles.

Por lo que Gavia (48)explic en su trabajo, que el mejor procedimiento para la


recoleccin del aceite esencial de organo, preservando sus propiedades y pureza,
tenemos al mtodo por arrastre de vapor.

e.1 Mtodo por destilacin por arrastre de vapor

Martnez (49) nos explica sobre el mtodo de la destilacin por arrastre de vapor de agua,
donde se coloc la muestra vegetal, que generalmente en un dispositivo inerte para ser
sometida a una corriente de vapor de agua; en este medio el aceite esencial de la planta
es arrastrada, condensada, recolectada y apartada de la fraccin acuosa. Dicha tcnica se

23
ha utilizado en el campo industrial, especialmente en la perfumera, ya que el material
obtenido se lo ha considerado puro y la tecnologa usada no requiere de un gran equipo
con tecnologa avanzada o sofisticada.

Enfatizan Gavia et al (48) y De la Torre (1) que este mtodo tiene por objetivo la
obtencin del aceite y su rendimiento en relacin a la especie de que procede, su relacin
con el tiempo, as como las condiciones de presin y temperatura a la que es sometida la
planta. Cerpa (50) denomin en su aporte al mtodo de destilacin con el nombre de
hidrodestilacin, el cual fue definido como un proceso para la obtencin de aceite esencial
de una determinada planta aromtica, producto obtenido mediante el uso del vapor
saturado a presin atmosfrica, dicha presin es generada por una fuente externa de calor.

Peredo (51) y Cerpa (50) mencionaron que en este proceso de destilacin, el vapor se ha
generado por calor interno en el mismo recipiente que contiene el material vegetal, el cual
se calienta y va liberando el aceite esencial, este ltimo por presentar alta volatilidad, se
va evaporando hacia el hidrodestilador o tambin llamado refrigerante; donde es
condensado y enfriado a temperatura ambiente, luego es transformado en una emulsin
liquida inestable en densidades, por lo que se van separando dichos componentes, tanto
el agua residual y el aceite esencial a nivel de un extremo lateral del refrigerante donde
este se va acumulando.

Se describi tambin al equipo denominado segn Cerpa (50) como Clevenger, de uso
exclusivo para el laboratorio, considerado en varios estndares internacionales, como el
ms adecuado para la obtencin del aceite esencial de un vegetal. Este equipo est
compuesto por un baln de destilacin, para depositar la materia prima seca, triturada y
agua destilada en las cantidades adecuadas, este proceso se llev a cabo en calor
constante, para evaporar continuamente al agua con el aceite; a este baln se ha acoplado
un condensador y una conexin en forma de letra D, que permite acumular y a la vez
separar el aceite esencial.

24
2.2. MICOSIS OPORTUNISTAS

Ceccoti (52) explica que las infecciones provocadas por hongos han incrementado su
frecuencia y su importancia clnica, en pocas anteriores las micosis bucales estaban
asociadas con condiciones tales que tienen relacin con un sistema inmunolgico
deteriorado, por ejemplo cnceres destructivos, quemaduras, diabetes, mal nutricin,
tratamientos prolongados con corticoides, entre otros. Por otra parte (13) mencion que
la candidiasis oral en la poblacin normal estuvo presente entre un 40 y 60%
considerndose ms frecuente en el paciente geritrico debido a factores generales y
locales.

Sealaron Ortega et al (20) los factores que predisponen para sufrir este tipo de micosis,
denominadas oportunistas, porque aparecen en cuanto el sistema inmunolgico se halla
deteriorado por factores predisponentes generales y locales que favorecen la aparicin de
esta alteracin patolgica como son: los tratamientos prolongados con frmacos entre los
que se destacan los antibiticos; tratamientos agresivos como la radioterapia y
quimioterapia antineoplsicas, las drogas inmunosupresoras y enfermedades complicadas
como el SIDA, entre otros.

As Carranza (15) mencion la existencia de enfermedades gingivales de origen mictico,


escasas en pacientes inmunocompetentes, pero muy frecuentes en aquellas personas
inmunocomprometidas, as como tambin personas que hayan sido sometidas a un tiempo
prolongado de antibioticoterapia, la infeccin ms frecuente es la candidiasis oral,
producida por Cndida albicans, que segn Shafer (53)explic que los sntomas adems
de afectar a la cavidad bucal, lesiona la piel, el aparato digestivo, conducto vaginal,
aparato urinario y pulmones.

25
2.2.1 GNERO CNDIDA

Negroni (54) manifiesta que los hongos del gnero Cndida son levaduras, es decir que
son de talo unicelular, abarcando este gnero ms de 200especies sumamente ubicuas y
con caractersticas muy diversas.

El gnero Candida incluye ocho especies de hongo, donde enfatizaron Sapp et al (13) en
su estudio; de los cuales Candida albicans, se la ha considerado como el microorganismo
que se ha encontrado con ms frecuencia. Comnmente aisladas ante la presencia de una
infeccin

2.2.1.1. Descripcin de la cepa

(13)
Sapp et al indicaron que estos microorganismos se muestran como levaduras en
gemacin o tambin como seudohifas; se observan en cadenas de clulas alargadas
enlazadas entre las clulas. Libana (55) establece que la Cndida se puede presentar como
clulas redondas u ovaladas, con presencia de un metabolismo aerobio siendo Gram
positivas.

Ortega et al (20) han descrito a la levadura del gnero Candida como un hongo comn y
habitual de la mucosa bucal, del sistema gastrointestinal, vagina e incluso ha sido aislada
en la piel; por lo que tambin fue considerado como un agente infeccioso endgeno
especfico. De escasa virulencia, no transmisibles, pero producen infeccin de la mucosa
cuando existe predisposicin local o general, por lo que recibieron el nombre de levaduras
oportunistas.

Aadieron Ortega et al (20) en cuanto al crecimiento de Candida albicans, donde esta


levadura crece en mejores condiciones en superficies hmedas y a temperatura corporal,
es as como se ha mencionado que es causante de patologas gnito-urinarias; a nivel de
la piel, es comn encontrar infecciones epiteliales como dermatitis de paal; y a nivel
bucal, es comn encontrar muguet bucal, especialmente en nios. Candida albicans se ha

26
encontrado en la cavidad bucal en un 40% de la poblacin, siendo escaso en pacientes
sanos en un nmero menos de 200 clulas/ mL de saliva de la muestra poblacional que
ha sido estudiada.

2.2.1.2. Taxonoma

Describi Aguilera (56) la clasificacin taxonmica de Candida albicans:

- Gnero: Candida
- Reino: Fungi
- Phylum: Ascomycota
- Clase: Ascomycetes
- Orden: Saccharomycetales
- Familia: Saccharomycetaceae

2.2.1.3. Factores de Virulencia

(54)
Negroni afirm que este microorganismo posee gran facilidad para crecer y
multiplicarse, siendo el mayor factor de virulencia de este hongo ha sido la capacidad
para adherirse tanto a clulas del hospedador como a otros microorganismos adems de
su capacidad de adherencia a materiales inertes y colonizarlos.

Por lo que Otero (14) afirm que la presencia de especies de gnero Candida, en la mucosa
bucal se halla en forma habitual, en un porcentaje de 7 al 65%, por lo que dicho nmero
no es un factor para predisponer a sufrir infecciones dadas por esta levadura, es decir que,
si una persona que posea un nmero indeterminado de Candida, y se encuentre
inmunodeprimido, ser apto para sufrir de candidiasis, es as que se ha considerado como
un patgeno oportunista, por lo que suele denominarse la enfermedad de enfermos.

La Candidiasis oral o Candidosis son las infecciones micticas orales ms frecuentes


producidas por la levadura Candida, que se encuentra segn Sapp et al (13) presente en
la flora normal de la cavidad bucal y de los intestinos. Mencionaron Otero et al (14) que
la candidiasis es una infeccin oportunista, que ataca cuando el sistema inmunolgico del
paciente se ve disminuida.

27
Carranza et al (15), manifestaron que entre los factores que inducen a presentar
Candidiasis, estn: la reduccin de las defensas del hospedador, donde encontramos a
personas portadoras del VIH, pacientes con diabetes miellitus, personas que han recibido
tratamientos con radiacin y quimioterapia, as como tambin pacientes geritricos
portadores de prtesis dentales, quienes son susceptibles al padecimiento de Candidiasis
atrfica o candidiasis prottica.

Por lo que Aguirre (16) menciona que la incidencia de Candidiasis prottica en la


actualidad est en aumento en los pases desarrollados debido a diferentes factores
facilitadores como la generalizacin del uso de prtesis dentales, la xerostoma, las
mltiples terapias con antibiticos, inmunosupresores, antineoplsicos y por supuesto el
sistema inmunolgico disminuido.

Existen diversos factores potenciales de virulencia, como la morfologa celular, la


actividad enzimtica extracelular, el cambio fenotpico y los factores de adhesin, que
favorecen la formacin de biopelculas (22).

MORFOGNESIS

Catrillon et al (22) manifiestan que Candida albicans crece como levaduras o como hifas.
La hifa es la forma de adaptacin para la adherencia y penetracin de los epitelios y
clulas endoteliales. Se refiere a la transicin entre las levaduras (unicelulares) y la forma
de crecimiento filamentosa del microorganismo, que puede convertirse de forma
reversible a clulas de levadura, con crecimiento de hifa o pseudohifa.

ENZIMAS

Las enzimas pueden proponerse como determinantes de virulencia en Candida, ya que


tienen la capacidad de romper polmeros que proporcionan nutrientes accesibles para el
crecimiento de los hongos, as como de inactivar las molculas tiles en la defensa del

28
organismo. Las principales enzimas extracelulares relacionadas con la patognesis de
Candida son las proteasas, fosfolipasas y lipasas` Castro et al (30)(p-4).

FORMACIN DE BIOPELCULAS

Castro et al (30)(p-4) mencionaron que las especies de Candida se reconocen como los
principales agentes de infecciones adquiridas en el hospital. Son el tercer o cuarto
patgeno aislado de sangre que sobrepasa la frecuencia de los bacilos gramnegativos.

2.2.1.4. Antifngicos convencionales para tratar patologas por Candida albicans

En cuanto al tratamiento aplicado contra Candida albicans, Castellanos et al


(57)
mencionaron que es necesario la evaluacin clnica, distributiva y que estudie la
gravedad de la enfermedad. Una vez hecho el diagnstico minucioso se evala el
procedimiento a usar, si se opta por un mtodo de accin tpica, como el clotrimazol, el
paciente debe mantener el medicamento en boca por 30 minutos aproximadamente, pero
cabe mencionar que su uso prolongado puede ocasionar caries dental, para ello es
indispensable que se alterne el uso de colutorios a base de flor, Clorhexidina al 2%o
tambin se opta por usar Nistatina en suspensin tres veces al da. El tratamiento sistmico
para Candidiasis incluye imidazoles y triazoles, cuando se presenten casos de resistencia
a estos, se opta por el uso de anfoterisina B, que es de manejo intrahospitalario.

Prieto (57) en su investigacin indic la existencia de varios agentes antifngicos, que los
defini como compuestos qumicos que presentaron un grado de toxicidad. Se
mencionar y se har nfasis en el antimictico Nistatina.

Nistatina

Golan (58) indic que Nistatina es un antifngico del grupo polinico el cual posee cierto
mecanismo de accin similar al de la anfotericina B, este frmaco no tiene suficiente
absorcin a travs de las mucosas del cuerpo o la piel, por lo que su uso se limita a
(57)
infecciones micticas exclusivos del aparato digestivo. Prieto menciona que la

29
concentracin mnima inhibitoria de nistatina contra Candida albicans es de 2g/mL;
as mismo presenta accin fungicida en concentraciones elevadas en el sitio de accin,
(19)
mientras que Srivatstava et al mencionaron que su concentracin no es suficiente en
el sitio de accin, ya que la saliva ayuda a su dispersin, por lo que podra ser administrada
(58)
en forma sistmica, en dosis altas y por un tiempo prolongado, que segn Golan
probablemente causara efectos secundarios, tales como alteraciones gastrointestinales.

30
CAPITULO III

3. METODOLOGA

3.1. DISEO DE LA INVESTIGACIN

Experimental.- ya que para esta investigacin utilizaremos medios de cultivo para


la siembra de la cepa Cndida Albicans, con lo que podremos obtener posteriormente
el recuento de dicho microorganismo, despus de ser sometido a la accin del aceite
esencial de organo al 100%. Acciones que se llevarn a cabo en el Laboratorio del
Centro de Biologa de la Universidad Central del Ecuador.

Cualitativo, ya que presentar paulatinamente resultados a medida que se recopile la


informacin.

Bibliogrfico porque es necesario determinar datos o evidencia en libros y artculos


cientificos que respalden la elaboracin del marco terico, anlisis y discucin de la
investigacin.

Comparativo, ya que se analizarn dos tipos aceite esencial de organo, el primero


proveniente de la provincia de Chimborazo; el segundo de la provincia de Santa Elena.
Se tomarn los datos para determinar, cual de los dos extractos tiene mayor poder
inhibitorio contra la cepa Cndida albicans ATCC 10231.

Finalmente aplicar el mtodo Estadstico siendo de vital importancia en este estudio,


ya que permitir reunir, organizar, tabular y analizar en datos numricos la
informacin, cuya interpretacin servir para registrar los resultados donde
observaremos y compararemos segn estos resultados la efectividad antimictica del
aceite esencial de organo al 100%, oriundo de las provincias de Chimborazo y de
Santa Elena, frente a C. albicans.

31
3.2. CLASIFICACION DE LAS VARIABLES

VARIABLE DEFINICIN OPERACIONAL TIPO CLASIFICACION INDICADOR CATEGRICO ESCALA DE


MEDICIN

Efecto antimictico Disminucin o detencin del nmero de clulas Dependiente Cualitativa Curva de crecimiento a Neubauer: nmero
de levadura oportunista/ saprfitico, propio de Nominal travs conteo de clulas en
las mucosas o membranas corporales Interviniente de clulas/ml
cmara de Neubauer.
Conteo de colonias en
Agar
Agar: Ufc/ml.
Aceite esencial de Sustancia qumica proveniente de las Independiente Cuantitativa Volumen a utilizar 0.3 - 0.5ml de
organo de la provincia hojas de planta de organo oriundo de la Intervalo De Aceite esencial de
de Chimborazo al 100% aceite esencial.
de concentracin
provincia de Chimborazo, que se va a organo perteneciente a la
obtener por el mtodo de arrastre de provincia de Chimborazo
vapor. en concentracin de 100%

Aceite esencial de Sustancia qumica proveniente de las hojas de Independiente. Cuantitativa Volumen a utilizar 0.3 - 0.5ml de
organo de la provincia Intervalo De Aceite esencial de
planta de organo oriundo de la provincia de
de Santa Elena al 100% aceite esencial.
de concentracin. Santa Elena, que se va a obtener por el mtodo
organo perteneciente a la
provincia de Chimborazo
de arrastre de vapor.
en concentracin de 100%

32
3.3. POBLACION Y MUESTRA

POBLACIN. La poblacin utilizada para el presente estudio es la cepa de la levadura


Cndida Albicans ATCC 10231, adquirida al Laboratorio Microbiolgico - Clnico
MEDIBAC, estas sern cultivadas en las instalaciones del Centro de Biologa de la
Universidad Central del Ecuador, donde se llevar a cabo la ejecucin de esta
investigacin.

TAMAO DE LA MUESTRA. -

SELECCIN. -

MUESTRA NO PROBABILSTICA. es una tcnica de muestreo que permite


seleccionar los elementos, sujetos a estudio, segn el criterio de la persona que se
encuentra realizando la investigacin, en este estudio tanto la seleccin y el tamao de la
muestra se realizaron en base al estudio de Ucar et al (12), el mismo que se explica ms
adelante.

MUESTREO POR CONVENIENCIA.

Para obtener la muestra, primero se realiz la activacin de la cepa ATCC 10231, para lo
cual se efectu la siembra en agar dextrosa Sabouraud contenida en una caja mono Petri;
incubamos esta siembra por tres das.

Se inocular la cepa de C. Albicans en lminas de acrlico, que a su vez estarn sumergidas


en 100ml de caldo de cultivo de Dextrosa Sabouraud, se incubar a 370C por dos das.
Sern 14 lminas de acrlico de termocurado, donde se pretende obtener la muestra a una
concentracin de 0,5 en la escala de Mac-Farlan (108 ) de colonias de la levadura en
mencin.

Se aplic el mtodo usado por Ucar et al (12), donde se realiza el mismo procedimiento
de inoculacin cepas de Candida albicans sobre lminas de acrlico; para comprobar la
accin de cuatro agentes qumicos para eliminar la levadura; los autores presentaron una

33
muestra de 50 lminas de acrlico, que fueron divididas en cinco grupos, cada uno con 10
muestras de lminas de acrlico. Grupo 1: control, grupo 2: hipoclorito de sodio al 2%,
grupo 3: cido actico al 5%, grupo 4: perxidos alcalinos, grupo 5: gluconato de
clorhexidina al 0.2%.

Para la realizacin de este trabajo, se redujo el nmero a 14 lminas de acrlico, ya que se


evalu el efecto antimictico de dos aceites esenciales de organo proveniente de las
provincias de Chimborazo y Santa Elena; el tamao de las lminas de acrlico de este
estudi fueron hechas bajo los mismos parmetros que utiliz Ucaro et al (12) (25mm de
ancho, 25mm de largo y 3mm de espesor).

Conjunto con el Qumico Andrs Granda, profesional que forma parte del Laboratorio de
Biologa de la Universidad Central del Ecuador se procedi a establecer la muestra que
se va a utilizar, por conveniencia de tiempo y economa de la estudiante; ya que se
presenta costoso, el proceso de extraccin del aceite esencial de organo.

3.4. CRITERIOS DE INCLUSIN Y EXCLUSIN

CRITERIOS DE INCLUSIN:

Plantas que han cumplido con los requisitos mencionados en la seleccin de la


muestra.
Hongo Candida albicans ATCC 10231cultivadas en agar Sabouraud Dextrosa a
36C, en un ambiente aerobio por 24 horas.
Aceite esencial de organo de Chimborazo y Santa Elena al 100%, extrado bajo
tcnica de arrastre de vapor, realizado en la Unidad de Qumica de la Universidad
Central del Ecuador
Nistatina (2 g/mL)
Agua hervida.
Lminas de Acrlico de termocurado estriles, con las dimensiones de 25 mm x
25 mm x 3 mm.

34
3.4.2 CRITERIOS DE EXCLUSIN:

Lminas de acrlico que no se hayan inoculado o contaminado en una medida de


(10)8 en la escala Mc-Farlan.
Hongo Candida Albicans ATCC que no han sido cultivadas bajo las condiciones
adecuadas para su crecimiento.
Colonias de la levadura Candida Albicans ATCC cultivadas en Agar, que no
tengan las caractersticas en cuanto forma, color, espesor y crecimiento
inadecuado.
Aceite esencial de organo con porcentaje inferior al 100%
Lminas de acrlico de termocurado contaminadas o no estriles.

3.5. INSTRUMENTOS:

CAMARA DE NEUBAUER.-

La cmara de conteo es una placa de vidrio ptico especial, de base rectangular y


gruesa de precisin, del tamao de un porta-objetos, en el tercio medio. Se utiliza para
contar clulas u otras partculas en suspensiones bajo el microscopio; presenta
tambin un puente central y los dos puentes exteriores estn rectificados planos y
pulidos. La superficie del puente central es ms profunda que los dos puentes
exteriores. En el puente central (fondo de la cmara) estn grabadas las redes de
conteo. Las cmaras de conteo se utilizan principalmente para el anlisis de sangre
(conteo de leucocitos, eritrocitos, trombocitos). Pero las cmaras de conteo sirven
tambin para el conteo de bacterias, esporas del moho y para cualquier tipo de
recuento citolgico. (59)

METODO DE ARRASTRE DE VAPOR.-

La destilacin por arrastre con vapor ha sido descrita como una tcnica usada para
separar sustancias orgnicas insolubles en agua y ligeramente voltiles, de otras no
voltiles que se encuentran en la mezcla, como resinas o sales inorgnicas, u otros

35
compuestos orgnicos. Esta tcnica es empleada con mucha frecuencia para separar
aceites esenciales de tejidos vegetales. (60)

3.6. PROCEDIMIENTO

El presente estudio est dividido en las siguientes fases:

a) Fase de recoleccin de datos y descriptiva

En esta se recopil toda la informacin pertinente sobre el efecto antifngico del


aceite esencial de organo para inhibir a el microorganismo Candida albicans, su uso
en el mbito odontolgico; dicha informacin abarcar conceptos, teoras estudios e
investigaciones previas, todo con el fin de validar el presente trabajo.

b) Fase experimental:

- En esta se procedi a determinar los criterios para la obtencin de las muestras de


las plantas provenientes de las provincias de Chimborazo (Riobamba) y de Santa
Elena (Santa Elena) y obtener muestras que cumplan con los requisitos necesarios
para el estudio.

- Se realiz los informes taxonmicos de las plantas de organo procedente de las


provincias de Chimborazo y Santa Elena, dicho informe fue realizado por el
Botnico Richard Cabezas, profesional que forma parte del Centro de Biologa de
la Universidad Central del Ecuador (ANEXO1)
- Se ha obtenido por importacin bajo pedido a Laboratorio Microbiolgico -
Clnico MEDIBAC la cepa del hongo Cndida albicans ATCC 10231.

Una vez obtenido las muestras correctas de las plantas de Organo, se procedi a
extraer su aceite esencial. Se obtuvo dicha sustancia a travs del mtodo por arrastre
de vapor, este procedimiento se lo realizar bajo la tutela del Qumico Max Bonilla,
catedrtico del rea de La Unidad de Qumica de la Universidad Central del Ecuador.

36
i. Proceso para la extraccin de aceite esencial de organo

- Se procedi a la recoleccin de las hojas de las plantas de organo de las


provincias de Chimborazo y Santa Elena.
- Para lavar a las hojas de la planta de organo, que son la materia prima para
extraer el aceite esencial; se las sumergi en una combinacin de cido actico
al 10% ms agua por 5 minutos.
- El secado de las hojas se realiz en una estufa a 40C, stas fueron
empaquetados en papel.
- Una vez que las hojas de la planta estn secas, se procedi a pesar 200g de
planta, para su posterior trituracin.
- Ya trituradas las hojas, fueron colocadas en un baln de destilacin, donde se
aadi 30ml de agua destilada.
- Una vez armado el equipo de destilacin, se extrajo el aceite esencial de
organo; por mtodo de arrastre de vapor. Proceso que dura varias horas. El
tiempo que se emple para extraer la cantidad requerida fue de dos meses
aproximadamente.
- El aceite esencial, fue colocado en frascos color mbar, debidamente
rotulados, tapados y se mantuvo almacenados en refrigeracin a una
temperatura de 4 8oC.
- Se logr obtener 10ml de aceite esencial de organo tanto de Chimborazo
como de Santa Elena.
- Se adjunta un certificado por parte del Centro de Qumica para validar el
proceso. (ANEXO 4).

ii. Elaboracin de lminas de acrlico de termocurado.

Se elabor una solicitud previa, para que se me permita trabajar en el


Laboratorio de Prtesis de la Facultad de Odontologa de la Universidad
Central del Ecuador. En estas instalaciones se va a realiz 14 lminas de
acrlico de termocurado, stas tendrn las siguientes dimensiones: 2.5mm de
ancho, 2.5 mm de largo y 3mm de espesor, dimensiones que semejan a una
Prtesis removible, por lo que las lminas sern elaboradas con los mismos
protocolos con las que son fabricadas dichas prtesis.
37
iii. Activacin y Cultivo de la cepa Cndida albicans ATCC 10231

- Una vez que la exportadora MEDIBAC entreg la cepa, est fue tratada bajo
las instrucciones de su empaque; esta viene en estuche KWIK StikTM.
(ANEXO 5)

- Se adjuntan la respectiva factura y licencia de la cepa Cndida albicans ATCC


10231. (ANEXO 6-7).

- Se procedi a realizar la siembra mediante estriaciones con un asa estril de


la cepa cndida albicans ATCC 10231, en 5 cajas petri, que contienen agar
Dextrosa Sabouraud, medio especfico para el crecimiento y mantenimiento
de la espora.

- Se conservaron las cajas petri con la siembra de cepas de esta espora, dentro
de la incubadora en un ambiente aerbico y estril por 24 horas a 36C

iv. Ejecucin del proyecto de investigacin.

Estandarizacin de la Cepa Cndida Albicans ATCC 10231

- Se inocul a la cepas de Candida albicans, donde formaron colonias aisladas


en cajas petri con agar Dextrosa Sabouraud, que realizamos en el proceso
anterior.

- Se prepar 50 ml de caldo de cultivo con dextrosa Sabouraud en el que se


inocularon cepas de Candida albicans mediante un asa estril de las cajas
petri, donde ya se presentan colonias formadas.

- Una vez inoculado el caldo de cultivo con la cepa, se procedi a incubarlo por
48 horas en una temperatura de 360C.

38
- Mediante la Escala de Mc- Farland se procedi a medir la densidad del frasco
que contiene cepas de C. albicans inoculadas, donde obtendremos 0.5 o 108
de nmero de clulas de dicha espora.

- Pasadas las 48 horas de incubacin del caldo de cultivo, se tomaron 10ml del
mismo y se coloc en un tubo de ensayo.

- Se realiz una comparacin visual con la escala Mc-Farlan, donde se


determin que el tubo de ensayo tena una concentracin de 5 en la escala
mencionada.

- Posteriormente se realiz una disolucin, colocando en un tubo de ensayo


estril 4.5 ml de suero fisiolgico + 0.5ml del inculo con 5 Mc-Farlan para
obtener una concentracin de 0.5 en la escala Mc-Farlan. Proceso que se
realiz con la finalidad de poder realizar el conteo de unidades formadoras de
colonias en cmara de Neubauer y en agar.

- En un recipiente grande de vidrio y de boca ancha, se prepar 100ml de caldo


de cultivo dextrosa Sabouraud donde se incorpor 3ml del inculo de 0.5 Mc-
Farlan para contaminar el caldo con la levadura de Candida albicans.

- A continuacin en el frasco con la preparacin anterior se coloc 14 lminas


de acrlico de termocurado, previamente autoclavadas a 1210C por 15 minutos
para que sean inoculadas con C. albicans ATCC 10231 en un tiempo de 24
horas a 360C; por lo que cada lmina tendr inoculado 108 nmero de clulas,
medidas segn la escala de Mc- Farland. Ya que fueron contaminadas con 0.5
Mc-Farlan.

Anlisis del efecto inhibitorio del aceite esencial de organo frente a Cndida
Albicans ATCC10231

Se necesitaron 14 frascos estriles con tapa para colocar las 14 lminas de acrlico
que fueron inoculadas con la cepa mencionada con el proceso anterior.

39
- Frasco #1 control cero.- se colocaron 50ml de agua.
- Frasco #2 control positivo.- 50ml de agua + 2 g/ml de Nistatina.

Frascos parte experimental:

- Frascos #3 4 -5: lmina inoculada (en cada frasco) con la muestra de cndida
albicans ATCC 10231 sumergida en 50 ml de agua + 0,3ml de aceite esencial
de organo de la provincia de Chimborazo.

- Frascos #6-7-8 (en cada frasco) con lmina inoculada con la muestra de
cndida albicans ATCC 10231 sumergida en 50 ml de agua hervida + 0,5 ml
de aceite esencial de organo de la provincia de Chimborazo.

- Frascos #9-10-11 (en cada frasco) con lmina inoculada con la muestra de
cndida albicans ATCC 10231 sumergida en 50 ml de agua + 0,3ml de aceite
esencial de organo de la provincia de Santa Elena.

- Frascos #12-13-14 (en cada frasco) con lmina inoculada con la muestra de
cndida albicans ATCC 10231 sumergida en 50 ml de agua + 0,5ml de aceite
esencial de organo de la provincia de Santa Elena.

Contaje celular

En el presente trabajo de investigacin, se obtuvo los resultados a travs del


uso de la cmara de Neubauer, para ello se tom 0,10 l de cada uno de los
frascos que contenan las lminas contaminadas con la cepa en mencin ms
los aceites esenciales de organo; para que exista unin entre estas sustancias
(agua y aceite) fue necesario la colocacin de TWIN 80 en un tubo de ensayo,
en una proporcin uno a uno (3ml del inculo + 3ml de TWIN), cada tubo fue
sometido a vibracin por 3 minutos antes de extraer la muestra de 0.10l con
la micropipeta para ser colocada en la cmara de Neubauer, donde
posteriormente se procedi a realizar este contaje celular a travs del
microscopio; se efectu un intervalo de tiempos para realizar el contaje celular

40
desde el tiempo inicial (primer conteo), a las 12 horas (segundo conteo), 24
horas (tercer conteo) y 48 horas (cuarto conteo).

Siembra en agar.

Para el respaldo de resultados se decidi realizar el sembrado de cada frasco


que contiene: los controles cero y control positivo; as como tambin los
frascos con la levadura Candida albicans, agua ms los aceites de Chimborazo
y Santa Elena.
Previo a la realizacin de las respectivas siembras, se volvi a realizar la
disolucin a 10-1 de cada uno de los frascos.

- Se prepararon dos cajas petri con agar Dextrosa Sabouraud por cada frasco
de experimentacin, en total fueron 24 cajas petri.

- En tubos de ensayo previamente esterilizados se realiz una disolucin de


10-1 de cada uno de los 14 frascos que contienen las lminas de acrlico +
aceite esencial de organo.

- Se realiz la tcnica de Digralsky para la siembra, donde se tom con una


jeringa 0.10ml de la solucin de cada uno de los tubos de ensayo, a travs
del asa de Digralsky, se distribuy la mezcla en el agar.

- Posteriormente estas cajas petri fueron almacenadas en la incubadora a


360C.

- Este proceso de siembra en agar por duplicado, fue realizado en dos


tiempos: en el tiempo inicial (momento en el cual se coloc la lmina de
acrlico inoculada con la levadura en mencin, el aceite esencial de
organo, agua ms TWIN) y en el tiempo final (48 horas)
- El conteo de colonias que crecieron en el agar Dextrosa Sabouraud, se lo
realiz mediante un lente de aumento, que cuenta con cuadros de
agrupacin de colonias para facilitar la observacin y el conteo.

41
Es importante mencionar que estos procesos fueron realizados siguiendo todas
las normas de bioseguridad, impartidas desde el inicio por nuestro tutor
encargado en el laboratorio, Qumico Andrs Granda.

Por parte del Centro de Biologa de la Universidad Central del Ecuador, se ha


emitido un certificado de resultados, que respaldan la validacin de esta
investigacin. (ANEXO 3).

3.7. Anlisis de Datos.

Se realiz un anlisis cuantitativo, ya que lo que se busca es obtener datos


medibles, estos se los colocara en una escala nominal, as podremos ubicarlos
en diferentes categoras con valores numricos, posteriormente se recopil los
datos en tablas dinmicas y tablas de frecuencia que ayuden a determinar la
proporcin de eficacia de los datos recopilados. Todo esto se realizara
mediante la utilizacin de los paquetes de Microsoft Word y Excel.
Para el anlisis de resultados se utilizara el software estadstico SPSS
(Statistical Package for the Social Sciences, o Paquete Estadstico para las
Ciencias Sociales. Tambin se aplicarn pruebas paramtricas con ANOVA

3.8. Aspectos Jurdicos.

i. Esta investigacin, por ser un estudio in vitro no incluye estudios que


comprometan prcticas que involucren la vulnerabilidad de seres humanos,
por lo que no incumple ninguna ley o normativa vigente tanto nacional como
internacional.

ii. En este estudio no se aplicarn estudios multicntricos.

42
iii. Para la presente investigacin no se cuenta con un promotor del estudio, por
ello, no existe relacin con este y con el sitio clnico en donde se ejecute la
misma.

iv. En este estudio no se solicitar pliza de seguro

Por ende es importante citar la NORMATIVA DE SALUD VIGENTE desde el


ao 2016, citado el 22 de diciembre del mismo, en nuestro pas Fuente especificada no

vlida. .( 3132) , publicada mediante Registro Oficial nmero 423. Artculos:

Art. 189.- Los integrantes del Sistema Nacional de Salud respetarn y


promovern el desarrollo de las medicinas tradicionales, incorporarn el enfoque
intercultural en las polticas, planes, programas, proyectos y modelos de atencin
de salud, e integrarn los conocimientos de las medicinas tradicionales y
alternativas en los procesos de enseanza - aprendizaje.

Art. 190.- La autoridad sanitaria nacional promover e impulsar el intercambio


de conocimientos entre los distintos agentes de las medicinas tradicionales,
fomentar procesos de investigacin de sus recursos diagnsticos y teraputicos
en el marco de los principios establecidos en esta Ley, protegiendo los derechos
colectivos de los pueblos indgenas y negros o afroecuatorianos.

Art. 192.- Los integrantes del Sistema Nacional de Salud respetarn y


promovern el desarrollo de las medicinas alternativas en el marco de la atencin
integral de salud. Las medicinas alternativas deben ser ejercidas por
profesionales de la salud con ttulos reconocidos y certificados por el CONESUP
y registradas ante la autoridad sanitaria nacional. Las terapias alternativas
requieren para su ejercicio, el permiso emitido por la autoridad sanitaria
nacional.
La ley de salud, fomentan las investigaciones que involucran el uso de recursos
naturales, para la creacin y promocin de medicina alternativa; es por eso, que
en este estudio, se ha implementado la planta de organo, para aprovechar sus
43
beneficios, que son mltiples, pero que en nuestro caso, ser para contrarrestar
patologas orales causadas por la levadura Candida albicans, por lo que buscamos
saber su potencial antimicticos a travs del uso de su aceite al 100% de
concentracin.

Se realiz un certificado para el Consejo de Biotica de la Universidad Central del


Ecuador, donde los miembros participantes de esta investigacin, han firmado
para mantener los resultados de la misma bajo los parmetros ticos, dados por la
Universidad. (ANEXO 2).

44
CAPITULO IV

4. ANALISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS

4.1. Anlisis Estadstico de los Resultados


Los resultados obtenidos a travs del Contaje celular en Cmara de Neubauer y del
Conteo en Agar fueron registrados en una hoja de clculo de Microsoft Excel, para
poder organizarlos en tablas, los mismos datos sern analizados tambin en el paquete
estadstico SPSS.

Para el presente estudio se tomaron como muestras 14 lminas de acrlico de termocurado


inoculadas con la cepa de Candida albicans, las mismas que fueron sometidos a dos
sustancias: aceite esencial de las provincias de Chimborazo y Santa Elena.
Las muestras fueron divididas de la siguiente forma:

- 12 muestras de lminas de acrlico para la combinacin de agua + Aceites


esenciales de organo( Grupo experimental)
- 1 muestra de lmina de acrlico para la combinacin de agua + Nistatina (
control positivo)
- 1 muestra de lmina de acrlico para agua. (control cero).

4.1.1 Anlisis del Conteo de clulas en Cmara de Neubauer.

Prueba de Normalidad:

Primeramente se debe verificar que las muestras tomadas provienen de una poblacin con
distribucin Normal, esto se realiza con las pruebas de Kolmogorov - Smirnov o con la
prueba de Shapiro - Wilk (menor a 20 datos).

Si las muestras provienen de poblaciones con distribucin normal entonces se realizan


pruebas paramtricas (media, desviacin estndar): T student, ANOVA.

45
Si las muestras No provienen de poblaciones con distribucin normal entonces se realizan
pruebas no paramtricas (orden, signos): Mann Whitney, Kruskal Wallis, Wilcoxon

Para cada prueba de Hiptesis, se compara el valor de significacin con el 0,05 (95% de
confiabilidad), si el nivel de significacin es superior a 0,05 se acepta Ho (hiptesis
inicial), si es inferior a 0,05 se acepta Ha (hiptesis alterna).

Hiptesis a demostrar

Ho: Las muestras provienen de poblaciones con distribucin Normal


Ha: Las muestras NO provienen de poblaciones con distribucin Normal

Tabla A. Pruebas de Normalidad.


Pruebas de normalidad
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Estadsti gl Sig. Estadsti gl Sig.
co co
Control cero H2O 0,133 4 . 1,000 4 1,000
Control positivo 0,295 4 . 0,857 4 0,250
CHIMBORAZO 0,285 4 . 0,919 4 0,530
0,3 ml
CHIMBORAZO 0,162 4 . 0,989 4 0,952
0,5 ml
SANTA ELENA 0,263 4 . 0,891 4 0,389
0,3 ml
SANTA ELENA 0,212 4 . 0,933 4 0,614
0,5 ml
Fuente: Cmara de Neubauer
Realizado por: Ing. Molina

De la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk los valores de significacin (Sig) son


superiores a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ho, esto es las muestras
provienen de poblaciones con distribucin Normal, por tanto para realizar las
comparaciones se lo hace con pruebas paramtricas: ANOVA.

46
ANOVA: COMPARACIN ENTRE SUSTANCIAS EN 0.3 ML.

Ho: Todas las medias son similares


Ha: Algunas de las medias No son similares

Tabla B. Comparacin entre sustancias en volumen 0.3 ml. Descriptivos

Descriptivos

MEDIDAS 0,3 ml

N Me Desvia Error 95% del intervalo de Mn Mxi


dia cin estnd confianza para la media imo mo
estnda ar
r Lmite Lmite
inferior superior

Control cero H2O 4 5,1 0,0362 0,018 5,131446 5,246904 5,14 5,23
89 1 61 04

Control positivo 4 5,2 0,0371 0,018 5,188955 5,307095 5,20 5,27


NISTATINA 48 5 41 88

CHIMBORAZO 0,3 4 3,7 0,2569 0,128 3,319910 4,137640 3,36 3,97


ml 28 4 79 00

SANTA ELENA 0,3 4 3,5 0,3959 0,197 2,957980 4,218170 3,02 3,92
ml 88 9 78 08

Total 1 4,4 0,8350 0,208 3,993545 4,883480 3,02 5,27


6 38 7 78 88

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Ing. Molina

El nivel de significacin (Sig = 0,000) es inferior a 0,05, luego se acepta Ha, esto es
algunas medias no son similares, para verificar cuales son similares o no se realiza las
pruebas de Tukey que compara las muestras dos a dos:

47
Tabla C. Comparaciones mltiples entre Controles y aceites esenciales en 0.3ml.
PRUEBAS POST HOC

Comparaciones mltiples
Variable dependiente: MEDIDAS 03 ML
HSD Tukey
(I) (J) SUSTANCIAS Diferenci Error Sig 95% de intervalo de
SUSTANCIAS 0,3 ML a de estnd . confianza
0,3 ml medias ar Lmite Lmite
(I-J) inferior superior
Control cero Control positivo - ,1678 0,9 -,557324 ,439624
H2O NISTATINA ,0588500 984 84
CHIMBORAZO 0,3 1,460400 ,1678 0,0 ,961926 1,958874
*
ml 0 984 00
SANTA ELENA 0,3 1,601100 ,1678 0,0 1,102626 2,099574
*
ml 0 984 00
Control positivo Control cero H2O ,0588500 ,1678 0,9 -,439624 ,557324
NISTATINA 984 84
CHIMBORAZO 0,3 1,519250 ,1678 0,0 1,020776 2,017724
*
ml 0 984 00
SANTA ELENA 0,3 1,659950 ,1678 0,0 1,161476 2,158424
*
ml 0 984 00
CHIMBORAZO Control cero H2O - ,1678 0,0 - -,961926
0,3 ml 1,460400 984 00 1,958874
*
0
Control positivo - ,1678 0,0 - -1,020776
NISTATINA 1,519250 984 00 2,017724
*
0
SANTA ELENA 0,3 ,1407000 ,1678 0,8 -,357774 ,639174
ml 984 36
SANTA Control cero H2O - ,1678 0,0 - -1,102626
ELENA 0,3 ml 1,601100 984 00 2,099574
*
0
Control positivo - ,1678 0,0 - -1,161476
NISTATINA 1,659950 984 00 2,158424
*
0
CHIMBORAZO 0,3 - ,1678 ,83 -,639174 ,357774
ml ,1407000 984 6
Fuente: Cmara de Neubauer
Realizado por: Ing. Molina

48
Se forman dos grupos totalmente diferentes, Son similares entre:

SANTA ELENA 0,3 ml y CHIMBORAZO 0,3 ml


Control positivo NISTATINA y Control cero H2O

Tabla D. Prueba Tukey para subconjuntos homogneos entre aceite esenciales 0.3ml
y controles.

MEDIDAS 03 ML
HSD Tukeya
SUSTANCIAS 03 ML N Subconjunto para alfa =
0.05

1 2
SANTA ELENA 0,3 ml 4 3,588075

CHIMBORAZO 0,3 ml 4 3,728775

Control cero H2O 4 5,189175

Control positivo 4 5,248025


NISTATINA

Sig. 0,836 0,984

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Ing. Molina

En la prueba paramtrica ANOVA, el mtodo Tukey ha comparado dos grupos diferentes:


como resultado del primer grupo, se observa que los volmenes de 0.3ml de los aceites
esenciales de Chimborazo y Santa Elena respectivamente son similares. Como segundo
grupo se encuentran los denominados Controles, se obtuvo como resultado la similitud
entre AGUA (Control cero) y AGUA + NISTATINA (control positivo).

49
Fuente: Cmara de Neubauer
Realizado por: Ing. Molina

Grafico A. En la grfica se observa que los dos grupos de control estn muy por encima
de las dos sustancias a probar, y no se tienen puntos atpicos (extremos)

Por ende, con estos resultados, se interpreta a los aceites esenciales de organo de las
provincias de Chimborazo y Santa Elena en el volumen de 0.3ml como EFECTIVO frente
a la levadura Candida albicans, ya que el nmero de clulas observadas a travs del
microscopio en la cmara de Neubauer es menor al nmero del conteo celular del control
positivo (agua + Nistatina) y del control cero (Agua), proceso que indic tambin
decrecimiento de la levadura, al paso de las horas citadas para el respectivo conteo.

50
ANOVA: COMPARACIN ENTRE SUSTANCIAS EN 0,5 ML.

Ho: Todas las medias son similares


Ha: Algunas de las medias No son similares

Tabla E. Descriptivos ANOVA: comparacin entre sustancias en 0,5 ml.

Descriptivos
MEDIDAS 0,5 ml
N Me Desvia Error 95% del intervalo de Mn Mx
dia cin estn confianza para la media imo imo
estnd dar
ar Lmite Lmite
inferior superior

Control cero H2O 4 5,1 0,0362 0,018 5,131446 5,246904 5,14 5,23
89 1 61 04

Control positivo 4 5,2 0,0371 0,018 5,188955 5,307095 5,20 5,27


NISTATINA 48 5 41 88

CHIMBORAZO 0,5 4 3,4 0,2680 0,134 2,987563 3,840537 3,12 3,75


ml 14 0 48 33

SANTA ELENA 0,5 4 3,7 0,2394 0,119 3,370786 4,132964 3,42 3,97
ml 51 7 59 00

Total 16 4,4 0,8691 0,217 3,937628 4,863934 3,12 5,27


00 2 48 88

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Ing. Molina

El nivel de significacin (Sig = 0,000) es inferior a 0,05, luego se acepta Ha, esto es
algunas medias no son similares, para verificar cuales son similares o no se realizan las
pruebas de Tukey que compara las muestras dos a dos:

51
Tabla F. Comparaciones mltiples entre aceites esenciales en volumen de 0.5 ml.
PRUEBAS POST HOC

Comparaciones mltiples
Variable dependiente: MEDIDAS 0,5 ML
HSD Tukey
(I) (J) SUSTANCIAS Diferenci Error Sig 95% de intervalo de
SUSTANCIAS 0,5 ml a de estnd . confianza
0,5 ml medias ar Lmite Lmite
(I-J) inferior superior
Control cero Control positivo - ,1283 0,9 -,440052 ,322352
H2O NISTATINA ,0588500 984 67
CHIMBORAZO 0,5 1,775125 ,1283 0,0 1,393923 2,156327
*
ml 0 984 00
SANTA ELENA 0,5 1,437300 ,1283 0,0 1,056098 1,818502
*
ml 0 984 00
Control positivo Control cero H2O ,0588500 ,1283 0,9 -,322352 ,440052
NISTATINA 984 67
CHIMBORAZO 0,5 1,833975 ,1283 0,0 1,452773 2,215177
*
ml 0 984 00
SANTA ELENA 0,5 1,496150 ,1283 0,0 1,114948 1,877352
*
ml 0 984 00
CHIMBORAZO Control cero H2O - ,1283 0,0 - -1,393923
0,5 ml 1,775125 984 00 2,156327
*
0
Control positivo - ,1283 0,0 - -1,452773
NISTATINA 1,833975 984 00 2,215177
*
0
SANTA ELENA 0,5 - ,1283 0,0 -,719027 ,043377
ml ,3378250 984 89
SANTA Control cero H2O - ,1283 0,0 - -1,056098
ELENA 0,5 ml 1,437300 984 00 1,818502
*
0
Control positivo - ,1283 0,0 - -1,114948
NISTATINA 1,496150 984 00 1,877352
*
0
CHIMBORAZO 0,5 ,3378250 ,1283 0,0 -,043377 ,719027
ml 984 89
Fuente: Cmara de Neubauer
Realizado por: Ing. Molina

52
Tabla G. Prueba Tukey para subconjuntos homogneos entre aceite esenciales 0.5ml
y controles.

Se forman dos grupos totalmente diferentes, Son similares entre:


SANTA ELENA 0,5 ml y CHIMBORAZO 0,5 ml
Control positivo NISTATINA y Control cero H2O

MEDIDAS 05 ML
HSD Tukey
SUSTANCIAS 0,5 ml N Subconjunto para alfa = 0.05

1 2
CHIMBORAZO 0,5 ml 4 3,414050

SANTA ELENA 0,5 ml 4 3,751875

Control cero H2O 4 5,189175


Control positivo 4 5,248025
NISTATINA
Sig. 0,089 0,967
Fuente: Cmara de Neubauer
Realizado por: Ing. Molina

En la prueba paramtrica ANOVA se ha utilizado el mtodo Tukey para comparar dos


grupos diferentes: como resultado del primer grupo, se observa que los volmenes de
0.5ml de los aceites esenciales de Chimborazo y Santa Elena respectivamente son
similares. Como segundo grupo se encuentran los denominados Controles, se obtuvo
como resultado la similitud entre AGUA (Control cero) y AGUA + NISTATINA (control
positivo).

53
Fuente: Cmara de Neubauer
Realizado por: Ing. Molina

Grafico B. En la grfica se observa que los dos grupos de control estn muy por encima
de las dos sustancias a probar, y no se tienen puntos atpicos (extremos)

Por ende, con estos resultados, se interpreta a los aceites esenciales de organo de las
provincias de Chimborazo y Santa Elena en el volumen de 0.5ml como EFECTIVO frente
a la levadura Candida albicans, ya que el nmero de clulas observadas a travs del
microscopio en la cmara de Neubauer es menor al nmero del conteo celular del control
positivo (agua + Nistatina) y del control cero (Agua), proceso que indic tambin
decrecimiento de la levadura, al paso de las horas citadas para el respectivo conteo.

54
CONTEO DE CELULAS EN CMARA DE NEUBAUER

Tabla 1. Resultados - Promedios del Conteo celular en cmara de Neubauer de aceites esenciales de organo 0.3 y 0.5 ml y controles.

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Autora

55
Grafico 1. Curvas de crecimiento de los promedios del conteo celular de o.3 ml y 0.5 ml de aceite esencial de organo y controles en
Cmara de Neubauer.

CMARA DE NEUBAUER
H2O NISTATINA 0,3 mL Aceite
0,5 mL Aceite 0,3 mL Aceite 0,5 mL Aceite

6,00

5,00

4,00

3,00

2,00

1,00

0,00
0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Autora

56
En la presente grfica se observa el comportamiento de las levaduras de Candida albicans
con relacin a los tiempos establecidos en los cuatro conteos realizados. El nmero de
clulas por mililitro que se obtuvo a travs de conteo celular en cmara de Neubauer,
demostrando que al aplicar aceite esencial de organo de las provincias de Chimborazo y
Santa Elena la proliferacin de levadura Candida albicans se ve reducida en comparacin
con los controles cero (agua) y positivo (agua + Nistatina); se evidencia que la curva de
crecimiento celular al paso del tiempo, va decreciendo, siendo ms evidente en los
volmenes de 0.5ml de aceite esencial de ambas provincias.

GRAFICO 1A. Curva de crecimiento en cmara de Neubauer. Aceite esencial 0.3ml de


Chimborazo y Santa Elena.

CAMARA DE NEUBAUER-COMPARACIN A.E.O


0.3ML
9,00
8,00
7,00
6,00
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00 0H 8H 24 H 48H
0,00

CHIMBORAZO cl/mL 0,3 mL Aceite SANTA ELENA cl/mL 0,3 mL Aceite

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Autora

Se observa el decrecimiento del conteo de clulas de Candida albicans con la cmara de


Neubauer, donde se aprecia que los tratamientos de 0.3 ml de los aceites esenciales de
ambas regiones en las 48 horas presentan mayor efecto antimictico, evidenciando que
existe mayor efecto inhibitorio con el aceite proveniente de la provincia de Chimborazo
por el notable decrecimiento de levaduras.
GRAFICO 1B. Curva de crecimiento en cmara de Neubauer. Aceite esencial 0.5ml de
Chimborazo y Santa Elena.

CAMARA DE NEUBAUER CONTEO CELULAR A.E.O


0.5ML
4,50
4,00
3,50
3,00
2,50
2,00
1,50
1,00
0,50
0H 8H 12H 48H
0,00

CHIMBORAZO cl/mL 0,5 mL Aceite SANTA ELENA cl/mL 0,5 mL Aceite

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Autora

Se observa el decrecimiento del conteo de clulas de Candida albicans con la cmara de


Neubauer, donde se aprecia que los tratamientos de 0.5 ml de los aceites esenciales de
ambas regiones en las 48 horas presentan mayor efecto antimictico, evidenciando que
existe mayor efecto inhibitorio con el aceite proveniente de la provincia de Chimborazo
por el notable declinacin en cuanto al crecimiento celular.

TABLA 2. Conteo en cmara de Neubauer Comparacin entre resultados de controles


y aceites
CONCENTRACIONES AGUA NISTATINA Aceite de Aceite de Aceite de Aceite de
Chimborazo Chimborazo Santa Santa
0.3ml 0.5ml Elena Elena
0.3ml 0.5ml

MEDIAS 5,19 5,25 3,73 3,41 3,59 3,75


cel/ml cel/ml cel/ml cel/ml cel/ml cel/ml

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Autora

58
GRFICO 2. Conteo en cmara de Neubauer Comparacin entre resultados de
controles y aceites

CONTEO CAMARA DE NEUBAUER


medias Nmero de

5,25
5,19

3,75
3,73

3,59
3,41

AGUA NISTATINA CHIMBORAZO CHIMBORAZO SANTA ELENA SANTA ELENA


0.3ML 0.5ML 0.3ML 0.5ML

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Autora

En la presente grfica se observa el nmero de clulas por mililitro que se obtuvo a travs
de conteo celular en cmara de Neubauer, indicando que al aplicar aceite esencial de
organo de las provincias de Chimborazo y Santa Elena la proliferacin de levadura
Candida albicans se ve reducida en comparacin con los controles cero (agua) y positivo
(agua + Nistatina); lo que significara que hay un mejor efecto antimictico al utilizar
aceite de organo de ambas provincias, incluso superando al antifngico ms empleado
en Odontologa, como lo es la Nistatina.

59
TABLA 3. Conteo en cmara de Neubauer Comparacin entre resultados de aceites

CONCENTRACIONES Aceite de Aceite de Aceite de Aceite de


Chimborazo Chimborazo Santa Elena Santa Elena
0.3ml 0.5ml 0.3ml 0.5ml
MEDIAS 3,73 3,41 3,59 3,75
cel/ml cel/ml cel/ml cel/ml
Fuente: Cmara de Neubauer
Realizado por: Autora

GRFICO 3. Conteo en cmara de Neubauer Comparacin entre resultados de aceites

Chimborazo

cel/ml cel/ml

cel/ml

cel/ml

Fuente: Cmara de Neubauer


Realizado por: Autora

Si se compara la efectividad antimictica entres los aceites esenciales de organo de las


provincias de Chimborazo y Santa Elena, al realizar el conteo celular con cmara de
Neubauer, se evidencia que la aplicacin de 0.5ml de aceite de Chimborazo ofrece
mejores resultados contra el crecimiento de la levadura Candida albicas, ya que se
evidencia un menor nmero de clulas por mililitro.

60
CONTEO DE COLONIAS EN AGAR
TABLA 4. Conteo de colonias en Agar Comparacin entre resultados de controles y
aceites.

CONTEO EN AGAR
ACEITE ESENCIAL DE OREGANO
CONTROL CONTROL
CERO POSITIVO CHIMBORAZO SANTA ELENA
ufc/mL ufc/mL ufc/mL ufc/mL ufc/mL ufc/mL
0,3 mL 0,5 mL 0,3 mL 0,5 mL
H2O NISTATINA Aceite Aceite Aceite Aceite
3,67 2,00 1,17 1,15 1,20 1,03
Fuente: Conteo Agar
Realizado por: Autora

GRFICO 4. Conteo de colonias en Agar Comparacin entre resultados de controles


y aceites.

Fuente: Conteo Agar


Realizado por: Autora

El promedio de los resultados del conteo de colonias en agar representados en sta grfica,
indican que, al comparar la efectividad antimictica de los distintos tratamientos a los que
fueron sometidas las lminas de acrlico inoculadas con Candida albicans, la
proliferacin de levaduras se ve reducida al utilizar aceites esenciales de organo de las
provincias de Chimborazo y Santa Elena tanto con 0.3ml que con 0.5ml de los mismos:
en comparacin con el control positivo (agua + Nistatina) donde el nmero de unidades

61
formadoras de colonias es evidentemente mayor; lo que indicara que los aceites de
organo de las dos provincias, poseen un eficaz efecto antifngico para eliminar a las
levaduras, destacando por encima de la Nistatina.

TABLA 5. Conteo de colonias en Agar Comparacin entre resultados de aceites.

ACEITE ESENCIAL DE OREGANO


CHIMBORAZO SANTA ELENA
ufc/mL ufc/mL ufc/mL ufc/mL
0,3 mL 0,5 mL 0,3 mL 0,5 mL
Aceite Aceite Aceite Aceite
1,17 1,15 1,20 1,03
Fuente: Conteo Agar
Realizado por: Autora

GRFICO 5. Conteo de colonias en Agar Comparacin entre resultados de aceites.

ufc/ml
ufc/ml ufc/ml

ufc/ml

Fuente: Conteo Agar


Realizado por: Autora

En una comparacin sobre la efectividad antimictica que ofrecen los aceites esenciales
de organo de las provincias de Chimborazo y Santa Elena, aplicando distintos volmenes
de los mismos, se presenta una grfica sealando que el nmero de unidades formadoras
en colonias que se observaron en agar fue menor cuando se utiliz 0.5ml de aceite de
organo de Santa Elena, siendo el mismo quien ofrece un mejor efecto antifngico frente
a la levadura Candida albicans.

62
4.2. DISCUSIN

El inters por incluir a las plantas medicinales como mtodo preventivo y como
tratamiento de diversas patologas, apunta a implementar investigaciones acerca de
medicamentos a base de extractos naturales, para que estos sean una alternativa a la
farmacologa tradicional que comnmente es utilizada.

En el presente estudio se investig a la planta de organo y su aceite esencial, ya que sus


beneficios no solo se encuentran en el mbito de la gastronoma, sino tambin se ha dado
a conocer en la industria de la cosmetologa, farmacologa y, como nos mencionaron
Arcila et al (1), esta planta posee caractersticas qumicas antimicrobianas, antioxidantes,
as como tambin presenta propiedades antifngicas. Pahlow (61), mencion que la planta
de organo ha sido utilizada tambin para aliviar trastornos gastrointestinales y afecciones
de las vas respiratorias.

En la investigacin de Ortega et al (20) utilizaron extractos de Tomillo y Romero al 10%


de concentracin para comprobar la efectividad de inhibicin frente al Streptococcus
mutans. Para ello se procedi a medir halos de inhibicin formados por ambas soluciones
acuosas, adems de la clorhexidina al 2% y agua destilada como grupos de control,
cultivados en el medio Mueller Hinton. Concluyendo que los extractos de Tomillo y
Romero al 10% de concentracin no evidenciaron actividad frente a S. mutans, por lo
que el autor sugiere que esta concentracin no podra ser empleada para prevenir o detener
el crecimiento de la bacteria analizada.

Segn nos menciona Cueto et al (28), en su estudio acerca del aceite esencial de organo,
determinaron la actividad antifngica del aceite esencial del organo mexicano (Lippia
berlandieri) contra Fusarium oxysporum evaluando sus efectos sobre el crecimiento
micelial del hongo utilizando como mtodo las fases de contacto y voltil para evaluar la
capacidad del aceite esencial para desinfectar semillas de tomate infestadas con F.
oxysporum. Dieron como resultado que la concentracin al 0.5 % de aceite esencial de
organo inhibi completamente la colonizacin de las semillas sin afectar su capacidad
de germinacin.

63
Huaman (21) realiz su investigacin utilizando extractos de doce plantas oriundas de
Per, Annona cherimolia Mill, Annona muricata L, Bidens pilosa L, Hypericum
laricifolium L, Juglans neotropica Diels, Piper spp., Plantago major L, Psidium guajava
L, Schinus molle L. y Spartium junceum L. La actividad antifngica fue evaluada
mediante los mtodos de difusin en agar y dilucin en agar. Los microorganismos a
evaluar fueron las levaduras Candida albicans ATCC 10231 y Candida albicans cepa
clnica y Aspergillus niger ATCC 16404. Como resultado se obtuvo que los extractos que
presentaron actividad antimictica frente a Candida albicans ATCC 10231, fue a un
volumen de 250 g/mL para Hypericum, laricifolium L., Juglans neotropica Diels,
Psidium guajava L. y Schinus molle L. y en volumen de 500g/mL para Piper spp.
Mostrando presentaron actividad antifngica consistente con un dimetro de halos de
inhibicin #18mm en Prueba de Difusin en agar frente a Candida albicans ATCC 10231.

As mismo, Chamba (62) bas su estudi en comparar diferentes concentraciones de


aceite esencial de organo y de hierba luisa a diferentes concentraciones (25%, 50%, 75%
y 100%). La autora obtuvo el aceite esencial, mediante el mtodo de extraccin por
arrastre de vapor. Para demostrar el efecto antimictico del aceite esencial de organo a
esas concentraciones, midi halos de inhibicin al colocar discos embebidos con las
sustancias mencionadas en cajas Petri con el medio de cultivo apto para la cepa que es
agar Dextrosa Sabouraud, donde se obtuvo un mayor poder de inhibicin cuando se
utilizaba el aceite esencial de ambas plantas al 100 % de concentracin.

Por lo que en esta investigacin se realiz la extraccin del aceite esencial de organo al
100% de concentracin de las provincias de Chimborazo y Santa Elena, mediante la
misma tcnica de extraccin por arrastre de vapor, para as poder comparar su efectividad
antimictica contra Candida albicans.

Para demostrar el efecto antimictico de los aceites esenciales de organo aplicados en la


presente investigacin, se realiz contaje celular con cmara de Neubauer, procedimiento
que permite contar el nmero de clulas vivas y muertas a travs del lente del
microscopio; se compararon los aceites esenciales de las provincias de Chimborazo y
Santa Elena, utilizando diferentes volmenes de los mismos (0.3ml y 0.5ml).

64
Dentro de los resultados, los aceites esenciales de organo de Chimborazo y Santa Elena
en una concentracin al 100% con los volmenes de 0.5ml y 0.3ml, demostraron mayor
efecto antimictico frente a Candida albicans, ya que en el anlisis de los promedios, al
paso de las horas (0 8-12 y 24 horas) proporcionaron los siguientes resultados: aceite
esencial de organo de la provincia de Chimborazo al 100% de concentracin en un
volumen de 0.3mL obtuvo una media de 3. 73cel /mL, la misma sustancia en el volumen
de 0.5mL result 3.41cel/Ml; en tanto que el aceite esencial de organo de la provincia
de Santa Elena al 100% de concentracin en un volumen de 0.3mL result 3.59cel/mL y
el mismo aceite pero en concentracin de 0.5% dio como resultado 3.75 cel/Ml en cmara
de Neubauer.

En comparacin con el control positivo (agua + Nistatina) que obtuvo un valor de


5.25cel/mL; el control cero (H2O) result 5.19cel/mL. Concluyendo segn estos
resultados al comparar la efectividad antimictica entre los dos aceites y los respectivos
controles, cabe resaltar que al aplicar 0.5ml de aceite de organo de la provincia de
Chimborazo, se obtienen mejores resultados; ya que el nmero de clulas por mililitro
obtenido mediante conteo celular en cmara de Neubauer, es menor.

Dichos resultados se asemejan a los obtenidos en el estudio de Fernndez et al (17) donde


evaluaron el efecto fungicida frente a cepas de Cndida albicans ATCC de los aceites
esenciales de eucalipto, organo, limn y mandarina. La extraccin del aceite esencial se
hizo mediante destilacin por arrastre con vapor de agua a la presin. Se colocaron 20
microlitros del aceite esencial sobre un disco de 6 mm de papel filtro, 20 microlitros de
Clorhexidina y 20 microlitros de H2O como controles. Los dimetros promedio de los
halos de inhibicin fueron: organo 4.2 cm, eucalipto 1.3 cm, mandarina 0.9 cm, limn 2
cm, clorhexidina 1.4 cm y agua 0 cm. Ultimando que, el aceite esencial de organo es el
que present la mayor actividad antimictica frente a la cepa Cndida albicans ATCC
seguido de los aceites de eucalipto, mandarina y limn.

El aceite esencial de organo demostr a travs de un halo de inhibicin de 18mm, ser


efectivo para inhibir el crecimiento de Cndida albicans, dicho efecto antimictico se le
atribuye a la planta ya que dentro de sus componentes qumicos se encuentra timol y
carvacrol, los cuales segn la investigacin mencionada, son los responsables de la
actividad antifngica.

65
De igual manera (19) en su estudio demostr que al adicionar aceite de organo al
acondicionador de tejidos, se redujo la formacin de hifas y la adhesin de Candida
albicans a las prtesis, sin alterar las propiedades qumicas del mismo; por lo tanto el
aceite esencial de organo fue considerado como un antimictico eficaz contra esta
levadura.

66
CAPITULO V

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

5.1 CONCLUSIONES:

5.1.1 En el presente estudio se evidenci que los aceites esenciales de organo


tanto de Chimborazo como de Santa Elena ofrecen un efecto antimictico frente
a Candida albicans inoculadas en lminas de acrlico de termocurado.

5.1.3 Se identific la efectividad inhibitoria del aceite esencial de organo de la


provincia de Chimborazo en una concentracin al 100% utilizando volmenes de
0.3 y 0.5ml sobre cndida albicans inoculadas en lminas de acrlico y sumergidas
en agua, mediante contaje celular a travs de la cmara de Neubauer; midiendo en
cuatro tiempos diferentes: inicial, a las 12 horas, 24 horas y 48 horas.

5.1.4 Se demostr la efectividad inhibitoria de aceite esencial de organo de la


provincia de Santa Elena en una concentracin del 100% utilizando volmenes de
0.3 y 0.5ml sobre Candida albicans inoculadas en lminas de acrlico y
sumergidas en agua, mediante contaje celular, a travs de la cmara de Neubauer;
midiendo en cuatro tiempos diferentes: inicial, a las 12 horas, 24 horas y 48 horas.

5.1.5 Mediante contaje celular a travs de la cmara de Neubauer, se compar la


actividad antimictica entre los dos aceites esenciales de organo al 100% de
concentracin procedentes de las provincias de Chimborazo y Santa Elena, con
los volmenes ya mencionados (0.3 y 0.5ml), midiendo el nmero de clulas a
diferentes tiempos de inmersin del acrlico de termopolimerizacin inoculado
con Candida albicans; y se determin que al utilizar 0.5ml de ambos aceites se
obtiene un mejor efecto antimictico, en relacin a cuando se aplica 0.3ml , y a su
vez los aceites esenciales de organo de las dos provincias son ms efectivos en
comparacin al control positivo (Nistatina).

67
5.1. RECOMENDACIONES:

5.2.1 Se recomienda la continuacin de este estudio, ya que es importante la


implementacin de antimicticos a base de plantas medicinales para tratar
infecciones producidas por la levadura Candida albicans; ya que el aceite
esencial de organo podra ser usado como una alternativa al uso de
medicamentos de la farmacologa tradicional.

5.2.2 Es recomendable realizar comparaciones en cuanto al efecto antimictico


del aceite esencial de organo frente a aceites esenciales provenientes de otras
plantas medicinales.

5.2.3 Se recomienda realizar estudios del efecto antimictico del aceite esencial
de organo frente a otras levaduras.

5.2.4 Es recomendable realizar estudios de la estructura qumica de la planta de


organo, para determinar la cantidad de timol existente en ambas especies.

68
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74
ANEXOS

ANEXO 1. INFORME DE IDENTIFICACION BIOLGICA

75
76
ANEXO 2. CONSEJO DE BIOETICA

77
ANEXO3. CERTIFICADO DE REALIZACION DE LA FASE EXPERIMENTAL
EN EL CENTRO DE BIOLOGIA. UCE. Y DE RESULTADOS.

78
ANEXO 4. CERTIFICADO DE LA REALIZACION DE LA EXTRACCION DE
ACEITES ESENCIALES DE ORGANO EN EL CENTRO DE QUIMICA DE LA
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

79
ANEXO 5. INSTRUCCIONES PARA ACTIVACION DE LA CEPA CANDIDA
ALBICANS ATCC 10231

INSTRUCTIONS FOR USE

INTENDED USE
LYFO DISK, KWIK-STIK and KWIK-STIK Plus microorganisms are intended to
be used as controls to verify the performance of assays, reagents or media that are
intended to be used in microbial testing for the detection and identification of a cultured
microorganism isolate.

SUMMARY AND EXPLANATION


Microorganisms with known and predictable characteristics are used in quality control,
education and proficiency programs.

PRINCIPLE
LYFO DISK, KWIK-STIK and KWIK-STIK Plus microrganismos provide
equivalent results to traditional methods used in preparing, storing and maintaining
reference stock culture collections. The microorganism preparations are traceable to the
American Type Culture Collection (ATCC) or other authentic reference culture
collections.

80
ILLUSTRATED INSTRUCTIONS

Place the pellet in 0.5


mL of sterile fluid
Aseptically remove (water, saline, TSB , or
1 pellet with sterile BHIB).
forceps from the
vial. Do not remove Immediately stopper
Remove the unopened LYFO DISK vial desiccant. and recap vail and
from 2C to 8C storage and allow the return the resealed vail
unopened vial to equilibrate to room to 2C to 8C storage.
temperature.

Inoculate the primary culture plates(s) by


gently rolling the swab over one -third of Using a sterile loop, streak to facilitate
the plate. colony isolation.

Using proper biohazard disposal discard


the remaining hydrated material.

Crush the pellet with a sterile swab until


the suspension is homogenous.

Immediatelyheavily saturate the same Immediatelyincubate the inoculated


swab with the hydrated material and media at temperature and conditions
transfer to agar medium. appropriate to the microorganism.

81
ILLUSTRATED INSTRUCTIONS

Allow the unopened KWIK-STIK pouch Tear off Pull-Tab portion on the label and Pinch (once only) the ampoule at the top of
to equilibrate to room temperature. Tear attach it to the primary culture plate or QC the KWIK-STIK (just below the fluid
open pouch at notch and remove the record. Do not disassemble the device meniscus of the ampoule) found in the cap
KWIK-STIK unit. during hydration. to release the hydrating fluid.

Hold vertically and tap on


a hard surface to facilitate Using a pinching
flow of fluid through shaft action on the
into bottom of unit bottom portion of
containing pellet. Allow the unit, crush
the hydrating fluid to flow the pellet in the
through the swab shaft fluid until the
pellet suspension Immediatelyheavily saturate the swab
and into the bottom
is homogenous. with the hydrated material and transfer
portion of the unit
containing the pellet. to a gar medium, or use according to
the lab oratorys SOP.

Using proper biohazard disposal,


discard the KWIK-STIK

Immediatelyincubate the
inoculated primary culture
Inoculate the primary culture plate(s) by plate(s) at temperature and
gently rolling the swab over one -third of the Using a sterile loop, streak to facilitate conditions appropriate to the
plate. colony isolation. microorganism.

82
ANEXO 6. FACTURA DE COMPRA DE CEPA DE CANDIDA ALBICANS ATCC
10231

83
ANEXO 7. LICENCIA DE CEPA DE CANDIDA ALBICANS ATCC 10231

84
ANEXO 8. FOTOGRAFIAS ANEXO

RECOLECCION DE LAS PLANTAS DE OREGANO

85
EQUIPO PARA EXTRACCIN DE ACEITE ESENCIAL DE ORGANO.
METODO POR ARRASTRE DE VAPOR.

86
ACEITE ESENCIAL DE OREGANO

ACTIVACIN DE LA CEPA

87
INOCULACIN DE LA CEPA

INOCULACION DE LAMINAS DE ACRILICO CON LAMINAS DE ACRILICO.


COLOCACIN DE 0.3 Y 0.5 ML DE ACEITE ESENCIAL DE OREGANO EN 50ML
DE AGUA.

88
89
CONTEO CAMARA DE NEUBAUER Y COLONIAS EN AGAR

90