TEMA 10: RECOMBINACIN GENTICA
Dr. Pedro F. Mateos
I. OBJETIVOS
La recombinacin gentica es un
proceso que lleva a la obtencin de un
nuevo genotipo a travs del
intercambio de material gentico entre
secuencias homlogas de DNA de dos
orgenes diferentes. La informacin
gentica de dos genotipos puede ser
agrupada en un nuevo genotipo
mediante recombinacin gentica. Por
lo tanto la recombinacin gentica es
otra forma efectiva de aumentar la
variabilidad gentica de una poblacin.
Las ventajas de la recombinacin
gentica son:
(i) Diferentes cepas superproductoras
pueden ser reunidas en una sola cepa,
de forma que el efecto acumulativo de
estas mutaciones puede ser mayor que
el efecto de una sola mutacin. Sin
embargo, la esperanza inicial de
obtener un aumento significativo en el
rendimiento por simple recombinacin
de dos mutantes de alta produccin
slo ha sido conseguida en unos pocos
casos. En la mayora de los casos, la
productividad de los recombinantes
generalmente es intermedia entre los
valores de las cepas parentales.
(ii) En el curso del desarrollo de cepas
existe frecuentemente un descenso en
el aumento del rendimiento despus de
cada etapa de mutacin. Adems de los
mutantes que son enriquecidos
selectivamente debido a su aumento en
la productividad, existe un desarrollo
de mutaciones que no se detectan que
impiden un aumento adicional en la
produccin de metabolitos a travs de
influencias pleiotrpicas. Con cruces
genticos, estos alelos mutantes
desfavorables pueden ser reemplazados
por alelos de uno de los padres del
cruce.
(iii) Las cepas de alta produccin
pueden realmente aumentar el coste de
la fermentacin debido al cambio de
las propiedades fisiolgicas (mayor
produccin de espuma, cambio en los
requerimientos del medio de cultivo,
etc.). Cruzando de nuevo la cepa con la
cepa silvestre pueden obtenerse cepas
de alta produccin con propiedades
mejoradas de fermentacin.
II. RECOMBINACION GENTICA
Como ya hemos dicho, la
recombinacin gentica es un proceso
que lleva a la obtencin de un nuevo
genotipo a travs del intercambio de
material gentico entre secuencias
homlogas de DNA de dos orgenes
diferentes. Las secuencias homlogas
de DNA tienen la misma secuencia o
casi la misma; por consiguiente, puede
ocurrir apareamiento de bases en una
longitud extensa de las dos molculas
de DNA. Los cromosomas homlogos
tienen los mismos genes ubicados en el
mismo sitio. Sin embargo, los genes,
aunque similares, pueden no ser
necesariamente idnticos como ocurre
cuando existe una mutacin en un gen.
Para que aparezcan nuevos genotipos
como consecuencia de la
recombinacin, es esencial que las dos
secuencias homlogas sean
genticamente diferentes. Tal es el
caso en una clula eucaritica diploide,
que tiene dos juegos de cromosomas,
uno procedente de cada padre. El punto
donde los cromosomas se cruzan se
denomina kiasma y el proceso de
intercambio se llama entrecruzamiento.
48

Recombinacin gentica en clulas
diploides
En las clulas procariotas slo existe
un nico cromosoma. Por lo tanto,
antes de que pueda ocurrir la
recombinacin, un cromosoma
homlogo (normalmente una parte de
este) debe primero ser transferido
desde una bacteria donadora a una
bacteria receptora. Debido a que el
cromosoma del donador debe ser
homlogo con el receptor, las bacterias
donadoras y receptoras generalmente
pertenecen a la misma especie o a
especies muy relacionadas.
Recombinacin gentica en bacterias
La recombinacin homloga ocurre
despus de la transferencia es decir,
cuando el fragmento de DNA del
donador est en la clula receptora. Si
no se produce recombinacin, el
fragmento de DNA del donador se
perder, debido a que no puede
replicarse independientemente.
III. RECOMBINACIN GENTICA
EN BACTERIAS
La recombinacin gentica en bacterias
tiene lugar cuando se transfieren
fragmentos de DNA homlogo desde
una clula donadora a una clula
receptora por uno de estos tres
procesos:
1.- Transformacin: supone que el
DNA donador se encuentra libre en el
medio.
49
 3.- C o n j u g a c i n : donde la
transferencia implica un contacto
clula-clula y la presencia de un
plsmido conjugativo en la clula
donadora.

Transformacin

2.- T r a n s d u c c i n : donde la
transferencia del DNA donador est
mediada por un virus. Conjugacin

Transduccin Clulas Hfr

50
IV. RECOMBINACION GENETICA
EN HONGOS
Los hongos tienen dos tipos distintos
de procesos de recombinacin gentica
que pueden ser utilizados en un
programa de mejora de cepas. Son
conocidos como ciclos sexual y
parasexual.
A.- Recombinacin sexual
Algunos hongos utilizados
industrialmente (A s p e r g i l l u s ,
Claviceps, Saccharomyces) tienen un
ciclo sexual completo. En estos
organismos la fusin nuclear
(cariogamia) conduce a la mezcla de
ncleos en el organismo diploide.
Despus de la formacin de diploides
tiene lugar la recombinacin durante el
proceso subsecuente de meiosis. Se
produce un nuevo genotipo, bien de la
combinacin de los cromosomas
parentales o mediante el
entrecruzamiento de cromosomas
homlogos.
Ciclo de vida de levaduras
B.- Recombinacin parasexual
Algunos de los hongos
econmicamente tiles como
Penicillium chrysogenum (productor
de penicilina) y C e p h a l o s p o r i u m
acremonium (productor de
cefalosporina) no tienen ciclo sexual.
En la parasexualidad, la fusin de dos
hifas de igual o de diferente polaridad
resulta en un micelio con ncleos de
ambas cepas parentales. Este
heterocarionte es normalmente estable,
con los ncleos mezclados pero no
interaccionan. Sin embargo, en casos
raros (10-7-10-6 en P e n i c i l l i u m
chrysogenum) se produce la fusin
nuclear y se forma un ncleo diploide.
En tales ncleos diploides puede
producirse el entrecruzamiento entre
cromosomas homlogos, lo que origina
la recombinacin gentica. Para
obtener un recombinante debe
producirse la formacin de clulas
haploides o esporas. La haploidizacin
espontnea es relativamente rara (10-3)
pero puede ser inducida con p-
fluorofenilalanina.
Recombinacin parasexual
51

V. FUSION DE PROTOPLASTOS
Los protoplastos son clulas de las que
se ha eliminado la pared celular por
tratamiento con enzimas. Para las
bacterias se utiliza la lisozima,
mientras que para hongos se utiliza
quitinasa o celulasas. Los protoplastos
deben ser estabilizados contra la lisis
por resuspensin en un medio que
contenga un estabilizador osmtico
como la sacarosa. La fusin de
protoplastos normalmente es rara
debido a la fuerte carga negativa de la
superficie del protoplasto, pero en
presencia de polietilenglicol (PEG) los
protoplastos se agregan y se produce la
fusin acompaada por intercambio de
DNA. Despus de la fusin se permite
la regeneracin de la pared celular de
tal manera que en la progenie
regenerada exista un nmero
significativo de recombinantes.
Fusin de protoplastos
Tambin se puede inducir la fusin
mediante la aplicacin de un campo
elctrico lo que se denomina
electrofusin. Cuando las clulas son
colocadas en un campo elctrico con
corriente alterna se desarrollan
orificios pasajeros en la membrana
plasmtica, lo que facilita el proceso de
fusin de membranas y la fusin
celular. La velocidad de fusin es de
aproximadamente el 80-90%, ms alta
que el 60% obtenido con PEG.
Adems de su uso en la fusin de
protoplastos de plantas, la
electrofusin puede ser tambin
utilizada con protoplastos de levaduras
y hongos. Sin embargo, la fusin de los
pequeos protoplastos bacterianos es
ms difcil de conseguir.
La fusin de protoplastos se utiliza con
los siguientes fines:
a.- Recombinacin intraespecfica de
cepas que carecen de sistema sexual o
parasexual, o cuya frecuencia de
recombinacin es demasiado baja.
b.- Hibridacin interespecfica para
obtener organismos completamente
nuevos capaces de sintetizar
metabolitos modificados. El uso de la
fusin de protoplastos para este
objetivo est siendo examinado por
diferentes productores de antibiticos.
Entre los hongos se han intentado
cruces interespecficos entre varios
obtenindose recombinantes en el
cruce entre Penicillium cyaneofulvum
X Penicillium citrimum aunque con
una frecuencia muy baja (10-5). La baja
frecuencia de fusin heteroespecfica
puede ser debida a que la falta de
homologa del genoma impide que
tenga lugar la recombinacin o bien a
la presencia de sistemas de
restriccin/modificacin que llevan a
la incompatibilidad fisiolgica.
52