Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Fundamento
Se sigue un mtodo fluorimtrico descrito por Beckman y cols.(280). Este mtodo
est basado en la monitorizacin fluorimtrica de la formacin de isoxantopterina
a partir de pterina, reaccin catalizada tanto por la forma oxidasa como por la
forma deshidrogenasa. Si en el medio de reaccin no hay azul de metileno (un
aceptor de electrones), estaremos determinando la forma oxidasa, la cual utiliza
al O2 como aceptor de electrones. Si al medio de reaccin le aadimos azul de
metileno, la variacin de fluorescencia se deber tanto a la forma oxidasa como
a la forma deshidrogenasa. La formacin de isoxantopterina se sigue
fluorimtricamente a 345 nm de excitacin y 390 nm de emisin.
Reactivos
- Tampn fosfato potsico 50 mM EDTA 0.1 mM, pH 7.4
- Pterina (2-amino-4-hidroxipteridina) 1 mM.
- Isoxantopterina 1 mM.
- Azul de metileno 1 mM en agua.
- Alopurinol 1 mM en agua.
Clculo de la actividad
Una unidad de actividad se define como la cantidad de enzima que cataliza la
formacin de un mol de isoxantopterina por minuto. En plasma la expresamos
en unidades por litro de plasma..