ASIGNATURA:

Bioqumica Clnica

DOCENTE:

Farmacutico Camones Maldonado Rafael Digenes

ALUMNA:

Cano Horna Cristhian Marvin

Gutirrez Pingo Alexandra Genoveva
Esquivel Ruiz Eliane Edirh
Nicolas Caldern Jaenth Elena

TEMAS:

Fotocolorimetra

FECHA:

15 de Junio del 2017

 Universidad Nacional del Santa E.A.P Medicina Humana

ESPECTOFOTOMETRA

I. RESUMEN

La prctica de laboratorio se realiz con el fin de determinar experimentalmente

la concentracin de una muestra, empleando el factor promedio y la curva de
calibracin. Para ello primero preparamos nuestra solucin a medir que fue
KMN4, a la cual la colocamos en 6 tubos de ensayo de manera que
empezaba de una concentracin pura del reactivo y la bamos disminuyendo
con agua destilada a razn de 0.5ml par as terminar con solo agua destilada,
luego de esto la llevamos al espectrofotmetro para medir sus niveles de
absorbancia a distintas medidas de longitud de onda, empezando con 400nm y
terminado con 525nm , al tener los valores de estos podemos calcular la
concentracin de la solucin por dos procedimientos, uno es por factor de
calibracin y el otro por el mtodo de curva de calibracin.

II. INTRODUCCION

La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas para la

deteccin especfica de molculas. Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y su
aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomolculas, etc) y
estado de agregacin (slido, lquido, gas). Los fundamentos fsico-qumicos de la
espectrofotometra son relativamente sencillos.

En general, las medidas se realizan dentro del espectro comprendido entre 220 y
800nm, y este espectro, a su vez, puede dividirse en dos amplias zonas: la zona de la
radiacin visible, situada por encima de 800nm, y la zona de la radiacin ultra violeta
situada por debajo de estos 800nm. La regin del infrarrojo se sita por encima de los
800nm.

La espectrofotometra tambin se puede definir como la medicin de la cantidad de

energa radiante que absorbe o transmite un sistema qumico en funcin de la longitud
de onda, es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas y

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bioqumicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la

radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia. La teora ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un
flujo de cuantos de energa llamados fotones, la luz de una cierta longitud de onda est
asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de
energa.

Muchos de los mtodos analticos espectrofotomtricos resultan de la aplicacin de la

ley de Lambert-Beer.1

LOG(LO/IT)= E.C.I
DNDE:

IO: INTENSIDAD DE LA LUZ INCIDENTE

IT: INTENSIDAD DE LUZ TRASMITIDA
E: COEFICIENTE DE EXTRACCIN
C: CONCENTRACIN DE SOLUTO
I: DISTANCIA QUE RECORRE LA LUZ A TRAVS DE LA SOLUCIN

LA SELECTIVIDAD EN LA ABSORCIN O EMISIN DE ENERGA POR PARTE DE LA

MATERIA, HA HECHO POSIBLE EL DESARROLLO DE MTODOS ANALTICOS CUYA
FINALIDAD ES LA DETECCIN EN FLUIDOS Y TEJIDOS BIOLGICOS DE:

AUSENCIA O PRESENCIA DE PARMETROS ANALTICOS.

CUANTIFICACIN DE LA CONCENTRACIN DE ESTOS PARMETROS.
LA ACTIVIDAD DE NUMEROSAS ENZIMAS.

ESTOS PARMETROS SON INDICADORES DE DETERMINADOS ESTADOS TANTO

FISIOLGICOS COMO PATOLGICOS Y, JUNTO A OTRAS PRUEBAS, PERMITEN LA
PREVENCIN, EL DIAGNSTICO, EL TRATAMIENTO O LA EVALUACIN DEL
SEGUIMIENTO DEL TRATAMIENTO DE ESTOS ESTADOS DE SALUD.2

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III. MATERIALES

Reactivos:

Materiales:

Equipos:

IV. PROCEDIMIENTO
V. RESULTADOS

RESULATADO DE LA ABSORBANCIA EN EL ESPECTOFOTMETRO DE LAS

SOLUCIONES CON EL REACTIVO KMNO4

I II III IV V VI
SOLUCIN SOLUCIN SOLUCIN SOLUCIN SOLUCIN SOLUCIN
(0) (0.5) (1.0) (1.5) (2.0) (2.5)
400 0.000 0.181 0.339 0.458 0.623 0.799

425 0.000 0.140 0.262 0.346 0.476 0.612

450 0.000 0.127 0.236 0.310 0.429 0.550

475 0.000 0.150 0.299 0.406 0.558 0.710

500 0.000. 0.261 0.500 0.703 0.961 1.216

525 0.000 0.372 0.713 1.008 1.351 1.658

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RESULATADO DE LA ABSORBANCIA EN EL
ESPECTOFOTMETRO DE LAS SOLUCIONES CON EL
REACTIVO KMNO4

0.016

0.014

0.012

0.010

0.008

0.006

0.004 525 nm
500 nm
0.002 475 nm
0.000 450 nm
425 nm
TUBO 1
TUBO 2 400 nm
TUBO 3
TUBO 4
TUBO 5
TUBO 6
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 5 TUBO 6
400 nm 0 0 0 0 0 0
425 nm 0 0 0 0 0 0
450 nm 0 0 0 0 0 0
475 nm 0 0 0 0 0 0
500 nm 0 0 0 0 0 1,216
525 nm 0 0 0 1,008 1,351 1,658

DISCUCIONES:

La intensidad del haz de luz se va atenuando a medida que atraviesa la cubeta debido a la
absorcin de las molculas de la muestra. El ritmo de absorcin depende de la intensidad
inicial de luz y de la concentracin de molculas. De esta manera, cuando un haz de luz de
intensidad I recorre una distancia dL en una muestra con una concentracin de molculas [B],
se produce una atenuacin de intensidad dI dada por: dI = k [B]I dL. lo cual da lugar a la ley
de Beer-Lambert 1 para la absorcin que relaciona la intensidad a la salida e la muestra If , con
la intensidad inicial I0, la concentracin de molculas y la distancia recorrida por la luz en la

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muestra, L: [B] L f 0 I I e = k El espectrofotmetro, en lugar de la intensidad, mide la

absorbancia A que se define por: [B] L I I ln 0 = k f A La utilizacin de la absorbancia al
realizar los espectros tiene la ventaja de ser directamente proporcional a la concentracin de

molculas en la muestra.(1)

Esto nos est dando una idea del porque hay variacin de las absorbancias a distintos niveles
de exposicin de luz. Al estar expuesto a diversas intensidades de luz la absorbancia va a
variar, pero observbamos que la variacin de esta en cada tubo de acuerdo a la intensidad a
la que se le expuso se da en pequeas cantidades; debido a que la luz inicial no sufri grandes
variaciones en su longitud de onda.

La ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia de una disolucin es directamente

proporcional a su concentracin, a la distancia recorrida por la luz y al coeficiente de extincin
molar o especfico (), que es caracterstico para cada y cada sustancia. Para que sea

constante y se cumpla esta ley, las disoluciones han de ser diluidas.(2)

Es por ello que cada tubo de ensayo tubo diversas concentraciones con el fin de ver la
variacin de la absorbancia conforme aumentaba la concentracin. Aunque vara unos cuantos
decimales por cada tubo, podemos observar una diferencia notoria entre el I y VI tubo, puesto
que en el primero solo encontramos agua destilada y en el ltimo solo KMnO 4 con un
porcentahe de concentracin de 2.5 ml

CUESTIONARIO

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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1. https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica4.
pdf
2. https://bachinternacional.wikispaces.com/file/view/DETERMINACI%C3%93
N+ESPECTROFOTOM%C3%89TRICA+de+concentraciones.pdf

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